BCA蛋白濃度測定-酶標(biāo)儀法

BCA法測定蛋白濃度-酶標(biāo)儀一、藥品BCA蛋白濃度測定試劑盒（P0012，500次酶標(biāo)儀，碧云天），含以下成分：BCA試劑A（P0012-1，100ml，碧云天），室溫保存BCA試劑B（P0012-2，3ml，碧云天），室溫保存蛋白標(biāo)準(zhǔn)（5mg/mlBSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存二、儀器和試劑酶標(biāo)儀（測定波長為540-595nm之間，562nm最佳），水浴鍋96孔單條可拆酶標(biāo)板（平底）15ml離心管1個（準(zhǔn)備BCA工作液用）1.5ml離心管1個（準(zhǔn)備蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液用）單道移液器和槍頭，8道移液器（排槍）和槍頭PBS三、操作步驟水浴鍋調(diào)至37℃。蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1mg/ml）的配制：將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/ml）從-20℃冰箱中取出，完全溶解并混勻。取60μl蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/ml），加入240μlPBS，即稀釋5倍，即配成蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1mg/ml）。計(jì)算BCA工作液總量=0.2ml×（樣本數(shù)+8）×2×1.1（標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均需測復(fù)孔）。BCA工作量按50體積的BCA試劑A加上1體積的BCA試劑B配制（即50:1），需充分混勻。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。樣本數(shù)(n)1~56~78~1011~1213~1415~1617~1920~2122~2324~26A（ml）6789101112131415B（ml）0.120.140.160.180.20.220.240.260.280.3總量(ml)6.127.148.169.1810.211.2212.2413.2614.2815.3按下表配制8個蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（S0~S7），充分搖勻。單條酶標(biāo)板蛋白標(biāo)準(zhǔn)品工作液（1mg/ml）(l)PBS(l)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品終濃度(mg/ml)AS001000BS15950.05CS210900.1DS320800.2ES430700.3FS540600.4GS650500.5HS710001.0將96孔酶標(biāo)板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白樣本和標(biāo)準(zhǔn)品。先在第3~4條酶標(biāo)板的蛋白樣本孔（N1~N8）中加入待測蛋白樣本各2μl，再用排槍在蛋白樣本孔中追加PBS液各18μl，使總量達(dá)到20μl。（此時蛋白樣本的稀釋比為10，適用于預(yù)計(jì)蛋白濃度為2~8mg/ml時。如預(yù)計(jì)蛋白濃度太高或太低，可適當(dāng)調(diào)整稀釋比例）再在第1~2條酶標(biāo)板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔（S0~S7）中加入上面配制的8個蛋白標(biāo)準(zhǔn)液各20μl。123456789101112AS0S0N1N1BS1S1N2N2CS2S2N3N3DS3S3N4N4ES4S4N5N5FS5S5N6N6GS6S6N7N7HS7S7N8N8用排槍在各孔中加入200μlBCA工作液，輕輕搖勻，37℃放置30分鐘或室溫放置2小時。（注意：①每次測定時必須都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)锽CA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。②如果濃度較低，可適當(dāng)?shù)匮娱L孵育時間或在較高溫度孵育。）用酶標(biāo)儀測定562nm下標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的吸光度。用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)量為橫座標(biāo)，用吸光度值A(chǔ)562為縱座標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用線形回歸計(jì)算公式Y(jié)=AX+B。根據(jù)樣本的吸光度，計(jì)算待測樣本的蛋白濃度（注意待測樣本的稀釋倍數(shù)）。按WB實(shí)驗(yàn)的要求，稀釋為2.5mg/ml，分裝為每支100μl。內(nèi)容總結(jié)

（1）用排槍在各孔中加入200μlBCA工作液，輕輕搖勻，37℃放置30分鐘或室溫放置2小時

（2）因?yàn)锽CA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線

（3）按WB實(shí)驗(yàn)的要求，稀釋為2.5mg/ml，分裝為每支100μl

附錄資料：不需要的可以自行刪除家庭用藥常識1.課程的目的和意義:隨著我們生活水平的提高，人們?nèi)找骊P(guān)注健康，海量信息和信息渠道的暢通更使人們在保健和生活方式方面有了更多的選擇機(jī)會，社會，經(jīng)濟(jì)和政策上等因素使人們在保持自身健康方面承擔(dān)起更大的責(zé)任，使得自我發(fā)現(xiàn)，自我治療，明確怎樣正確服用藥物在公眾生活中的地位越來越重要。本課程理論性與實(shí)用性相結(jié)合，理論淺顯易懂，更加突出日常實(shí)用性，讓我充分了解人體常見病的發(fā)病原因與預(yù)防、治療方法，結(jié)合各種藥物的臨床做用做到合理用藥，通過健康用藥知識的普及，提高了我合理用藥的意識2.1）藥品:用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適應(yīng)癥、用法、用量和注意事項(xiàng)的物質(zhì)(包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清疫苗血液制品和診斷藥品等)分為處方藥（Ethic）和柜臺藥（ＯＴＣ）兩種。以處方藥（Ethic）的銷售環(huán)節(jié)為例，從藥廠生產(chǎn)出廠——醫(yī)藥商業(yè)公司——醫(yī)院藥劑科——醫(yī)院藥房——醫(yī)生處方——患者購買2）藥品的分類：處方藥和非處方藥處方藥必須經(jīng)醫(yī)生處方，在醫(yī)療專業(yè)人員指導(dǎo)下應(yīng)用的藥品具有一定的毒性及其他潛在的影響，用藥方法和時間都有特殊要求，必須在醫(yī)生指導(dǎo)下使用;國家嚴(yán)格規(guī)定處方藥不得對公眾做廣告宣傳，但允許其產(chǎn)品信息在醫(yī)學(xué)工業(yè)學(xué)術(shù)雜志上傳播非處方藥（OTC）不需要醫(yī)生處方，在藥店或藥房即可買到的根據(jù)患者對病情的自我判斷，或借助藥品說明書，或醫(yī)師對消費(fèi)者所購藥品的性能提供咨詢，自我進(jìn)行治療的藥品（同安堂維C、感康、川貝枇杷露）藥盒上帶綠色OTC標(biāo)識的藥物，即除可在藥店出售外，還可在超市、賓館、百貨商店等處銷售的乙類非處方藥；藥盒上帶紅色OTC標(biāo)識的藥物，即只能在獲得《藥品經(jīng)營許可證》的零售藥店銷售的甲類非處方藥。綠色OTC標(biāo)志的乙類非處方藥的安全性更高。3.國藥準(zhǔn)字藥品生產(chǎn)單位在生產(chǎn)新藥前，經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局嚴(yán)格審批后，取得的藥品生產(chǎn)批準(zhǔn)文號，相當(dāng)于人的身份證。格式：國藥準(zhǔn)字+1位字母+8位數(shù)字；字母包括H、Z、S、B、T、F、J,分別代表藥品不同類別：H：化學(xué)藥品，Z：中成藥，S;生物制品，B:保健藥品，T:體外化學(xué)診斷試劑，F(xiàn):藥用輔料，J:進(jìn)口分包裝藥品。4.保健品具有一般食品的共性，能調(diào)節(jié)人體的機(jī)能，適用于特定人群食用，但不以治療疾病為目的一種食品衛(wèi)生部批準(zhǔn)文號格式：國產(chǎn)：衛(wèi)食健字（年份）第****號進(jìn)口：衛(wèi)進(jìn)食健字（年份）第****號藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)文號格式：國產(chǎn)：國食健字G200*****進(jìn)口：國食健字J200*****保健品不是營養(yǎng)品，營養(yǎng)品一般都富含人體需要的營養(yǎng)素;保健食品是具有特定保健功能、只適宜特定人群的食品，它的營養(yǎng)價值并不一定很高5.衛(wèi)生消毒用品酒精（75%95%）、來蘇水（84消毒知識拓展：消字號的產(chǎn)品）6.化妝品：以涂抹、噴灑或者其他類似方法，散布于人體表面的任何部位，如皮膚、毛發(fā)、指趾甲、唇齒等，以達(dá)到清潔、保養(yǎng)、美容、修飾和改變外觀，或者修正人體氣味，保持良好狀態(tài)為目的的化學(xué)工業(yè)品或精細(xì)化工產(chǎn)品7.正確服用口服藥物目前，80%的藥物是通過口服的，包括片劑、膠囊、顆粒、糖漿、滴丸等。服用方法：1、洗凈雙手，倒一杯溫開水；2、先喝口水，潤濕喉嚨和食管；3、藥物放進(jìn)嘴里，抿一口水咽下藥物，接著多喝幾口水；4、服藥后不要馬上躺下，最好站立或走動一分鐘，以便藥物進(jìn)去胃里。5、服藥后30-60min內(nèi)不能做劇烈運(yùn)動。8.吸收：藥物由給藥部位進(jìn)入血液循環(huán)的過程。除靜脈注射和靜脈滴注給藥外、其它途徑給藥都存在吸收過程。9.給藥方式：口服（po）、肌內(nèi)注射（im）和皮下注射（sc）、舌下給藥和吸入給藥?？诜o藥：通過胃腸道吸收，主要在小腸吸收。胃-腸道-門靜脈-肝臟-血液（體循環(huán)）。藥物劑型：片劑、膠囊、滴丸、口服液內(nèi)注射和皮下注射靜脈注射：肌內(nèi)注射法：將藥液注入肌肉組織；皮下注射法：將小量藥液注入皮下組織。通過毛細(xì)血管吸收，藥物吸收快且完全，且前者快于后者。而靜脈注射直接入血。10.分布：藥物吸收后隨血液循環(huán)被轉(zhuǎn)運(yùn)到個組織器官的過程。體內(nèi)屏障：機(jī)體中有些組織對藥物的通透性具有特殊的屏障作用，主要有血腦屏障、胎盤屏障（形同虛設(shè)）和血眼屏障。11.代謝：機(jī)體對藥物的化學(xué)處理過程。肝臟是最重要的代謝器官，此外還有胃腸道、皮膚、腎。12.排泄：藥物及其代謝物被排除體外的過程。主要排泄器官有腎臟、膽道、腸道、肺唾液、乳腺、汗腺等。13.說明書1.藥名：通?？煞譃樯唐访蛲ㄓ妹?、化學(xué)名。通用名和化學(xué)名世界通用，任何教科書或文章上出現(xiàn)的應(yīng)是同一名稱，一般以英文和譯文表示。商品名，每一家生產(chǎn)藥廠都可為其產(chǎn)品取一個商品名。因此，相同成分的藥品，或是化學(xué)名相同的藥品，可能有多個商品名。不同的商品名，意味不同廠家的產(chǎn)品及不同的品質(zhì)。2.主要成分：單一成分或復(fù)方成分。成藥里復(fù)方產(chǎn)品居多，醫(yī)師處方藥則單方居多。說明書中標(biāo)明的多為主要成分。（感冒清的主要成分為板藍(lán)根、山芝麻、穿心蓮等。）3、適應(yīng)癥:或稱作用與用途。即根據(jù)藥品的藥理作用及臨床應(yīng)用情況，將使用本品確有療效的疾病列入適應(yīng)癥范圍。在一些中成藥的說明書中常用“功能與主治”表示。服藥一定要在適應(yīng)癥范圍內(nèi)，尤其是OTC（非處方藥）藥物，應(yīng)按照適應(yīng)癥服用，避免錯服。4.用法與用量：說明書上的藥品量通常指成人劑量，兒童劑量則要根據(jù)年齡或體重計(jì)算。許多中西藥的重量用克（g）、毫克（mg）等表示，容量用毫升（ml）表示，并按1克＝1000毫克，1升＝1000毫升的比例換算。藥物用量常注明一日幾次，每次多少量；兒童常用每日每公斤體重多少量來表示。藥品的用法需根據(jù)該藥的劑型和特性，注明為口服、肌肉注射、靜脈用藥、外用及飯前服、飯后服、睡前服等。病人應(yīng)嚴(yán)格按照說明書注明的方法用藥。5.不良反應(yīng)：許多藥物在使用過程中會出現(xiàn)各種副作用，除藥物本身的特性外，還與用藥者的身體素質(zhì)、健康狀況有關(guān)。（有過敏體質(zhì)的人使用青霉素、鏈霉素容易發(fā)生過敏反應(yīng)。有些藥品口服后會刺激胃腸道引起惡心、嘔吐等反應(yīng)，有些藥物對肝腎有毒性等）6.注意事項(xiàng)：為了安全使用藥物，必須列出該藥的慎用、忌用和禁用對象。有禁忌癥的人，絕對不能使用相應(yīng)的藥物，慎用的藥物要在醫(yī)生指導(dǎo)下使用，密切監(jiān)測不良反應(yīng)。7.規(guī)格：指該藥每片或每支的含量。8.貯藏：此項(xiàng)為藥品保存中的一些要求，多數(shù)藥品均需避光，密閉并在陰涼干燥處保存。許多生物制品需冷藏或低溫保存。變質(zhì)的藥物絕對不能服用。9.有效期、保質(zhì)期或失效期：許多藥品均注明有效期，藥品超過有效期或達(dá)到失效期后則為過期失效，過期藥物絕對不能服用。10.批號：藥品批號一般表示該藥的生產(chǎn)日期。注意：一些歐洲國家進(jìn)口藥的年月日寫法按日、月、年排列。美國進(jìn)口藥大多按月、日、年排；日本進(jìn)口藥大多按年、月、日排列；俄羅斯等獨(dú)聯(lián)體國家，常用羅馬數(shù)字代表月份。14.藥品說明書要看什么？一、看清“成分”避免重復(fù)用藥二、認(rèn)準(zhǔn)“批準(zhǔn)文號”防假藥三、看準(zhǔn)“批號”和“有效期”四、對不對癥看“適應(yīng)癥（功能主治)”五、對“不良反應(yīng)”要心中有數(shù)六、別拿“禁忌”不當(dāng)回事七、遵循“用法與用量”保證療效八、按“貯藏方法”存藥保證藥品質(zhì)量15.吃藥的注意事項(xiàng)錯誤一：簡單的隨一日三餐服藥“一日三次”:將一天24小時平均分為3段，每8小時服藥一次。按時服藥，保證體內(nèi)穩(wěn)定的血藥濃度，達(dá)到治療的效果。“飯前服用”則是指此藥需要空腹在餐前1小時或餐后2小時服用以利吸收?！帮埡蠓谩眲t是指餐后半小時服藥，利用食物減少藥物對胃腸的刺激或促進(jìn)胃腸對藥物的吸收。錯誤二：躺著服藥躺著服藥，藥物容易粘附于食道壁。不僅影響療效還可能刺激食道，引起咳嗽或局部炎癥；嚴(yán)重的甚至損傷食道壁，埋下患食道癌的隱憂，最好取坐位或站姿服藥。錯誤三：對著瓶口喝藥對著瓶口喝藥的情況多見于喝糖漿或合劑。一方面容易污染藥液，加速其變質(zhì)；另一方面不能準(zhǔn)確控制攝入的藥量。錯誤四：多藥同服多藥同服，藥物之間的相互作用就很難避免，甚至還會引起一些你意想不到的麻煩。（如果你懷疑自己正在或即將服用的幾種藥物可能產(chǎn)生不良相互作用，一定要主動向醫(yī)師或藥師咨詢，切記不可自行隨意停藥或換藥。）錯誤五：喝水過多喝水過多會稀釋胃酸，不利于對藥物的溶解吸收。一般來說送服固體藥物1小杯溫水就足夠了。糖漿這種特殊的制劑，特別是止咳糖漿，需要藥物覆蓋在發(fā)炎的咽部黏膜表面，形成保護(hù)性的薄膜，以減輕黏膜炎癥反應(yīng)、阻斷刺激、緩解咳嗽，所以，建議喝完糖漿5分鐘內(nèi)不要喝水。錯誤六：服藥后馬上運(yùn)動藥物服用后一般需要30~60分鐘才能被胃腸溶解吸收、發(fā)揮作用，其間需要足夠的血液參與循環(huán)。馬上運(yùn)動會導(dǎo)致胃腸等臟器血液供應(yīng)不足，藥物的吸收效果自然大打折扣。16.大學(xué)生中常見疾病及防治：感冒、食物中毒、便秘和痢疾1）普通感冒：由多種病毒引起的呼吸道常見病。流行性感冒：有流感病毒引起的一種呼吸道急性傳染病。(病毒存在于病人的呼吸道中，在病人咳嗽、打噴嚏時經(jīng)飛沫傳染給別人，一般在冬春季流行的機(jī)會較多,病程約為7～10天)預(yù)防:1、勤洗手，用肥皂勤洗手2、打噴嚏或是咳嗽時勿用手遮擋，應(yīng)盡量向地面打噴嚏和咳嗽3、不要用手摸臉4、大量飲用干凈的水，保持室內(nèi)通風(fēng)、一定的濕度，用鼻呼吸，感冒季節(jié)少參加社會活動5、放松心情，保持充足的睡眠6、打預(yù)防流感的預(yù)防針。非藥物防治感冒十二法：1、冷水洗面2、喝雞湯3、多食蘿卜4、糖姜茶合飲5、少吃食鹽6、沖服蜂蜜7、多吃佐料，增強(qiáng)人體的免疫功能8、食醋滴鼻、熏蒸9、搓手感冒期間的禁忌：感冒期間勿鍛煉，防止感冒演變?yōu)椴《拘孕募⊙?、肺炎、風(fēng)濕??；不可隨便使用藥物治療，盲目藥物治療會增強(qiáng)細(xì)菌抗藥性，損害人體免疫系統(tǒng)。不能不服藥，不能亂服藥。2）食物中毒：因進(jìn)食含有毒素的食物所致，以腹痛、嘔瀉等為主要表現(xiàn)的中毒類疾病癥狀：以上吐、下瀉、腹痛為主的急性胃腸炎癥狀，嚴(yán)重者可因脫水、休克、循環(huán)衰竭而危及生命。防治：1、補(bǔ)充液體、補(bǔ)充因上吐下瀉所流失的電解質(zhì)，如鉀、鈉及葡萄糖；飲食要清淡2、腹痛程度嚴(yán)重的病人可適量給予解紊劑，如顛茄合劑或顛茄片。注意事項(xiàng)：1、嘔吐與腹瀉是肌體防御功能起作用的一種表現(xiàn)，不應(yīng)立即用止瀉藥2、如無緩解跡象，甚至出現(xiàn)失水明顯，四肢寒冷，腹痛腹瀉加重，極度衰竭，面色蒼白，大汗，意識模糊，說胡話或抽搐，以至休克，應(yīng)立即送醫(yī)院救治，否則會有生命危險。3）便秘與痢疾原因：不良的飲食習(xí)慣、生活習(xí)慣改變、排便姿式不當(dāng)、精神抑郁或過于激動和睡眠不足。預(yù)防：1）飲食中必須有適量的纖維素2）每天要吃一定量的蔬菜與水果3）主食不要過于精細(xì)要適當(dāng)吃些粗糧4）晨起空腹飲一杯淡鹽水或蜂蜜水5）每晚睡前按摩腹部，養(yǎng)成定時排便的習(xí)6）保持心情舒暢生活要有規(guī)律。腹瀉：感染性腹瀉、消化性腹瀉、炎癥性腸病、激惹性或旅行者腹瀉、菌群失調(diào)性腹瀉、功能性腹瀉防治：1）注意飲食健康，不食生冷食物及不潔凈瓜果2）用餐前先洗手，注意個人衛(wèi)生3）多喝開水及衛(wèi)生達(dá)標(biāo)的飲用水4）不要濫用抗生素5）避免精神浮動過大17.胃病預(yù)防：1）避免長時間精神緊張2）避免過度勞累3）合理飲食4）避免酗酒5）戒嗜煙6）戒濃茶咖啡7）用餐文明8）勿睡前進(jìn)食9）講衛(wèi)生18.睡眠生理心理功能：促進(jìn)腦功能發(fā)育；鞏固記憶；促進(jìn)體力與精力的恢復(fù)；促進(jìn)生長；增強(qiáng)免疫功能失眠原因：1、環(huán)境原因：睡眠環(huán)境的改變2、個體因素：不良的生活習(xí)慣3、軀體原因：軀體不適4、精神因素：因某個特別事件引起興奮，憂慮所至的機(jī)會性失眠5、情緒因素：情緒失控6、心理原因：急性境遇焦慮、心理障礙建議：1)足部保暖2)不開窗3)晚上不打掃衛(wèi)生4）臥室里只能擺放郁金香5）擦掉化妝品6）每天多睡15分鐘治療：1、病因治療，驅(qū)除誘發(fā)因素2、預(yù)防從一過性或短期失眠發(fā)展成慢性失眠3、手段：非藥物治療、藥物治療和綜合治療；認(rèn)知-行為療法.19.運(yùn)動病即暈車、暈船、暈機(jī)和由于各種原因引起的搖擺、顛簸、旋轉(zhuǎn)、加速運(yùn)動等所致疾病的統(tǒng)稱。注意事項(xiàng)：乘車時坐在靠前面的位子，目視前方，不要看車窗外風(fēng)景，可緩解暈車。緩解方法：外用橘子皮、姜片、食醋、風(fēng)油精、風(fēng)濕止痛膏+大蒜等；穴位按摩：內(nèi)關(guān)穴、合谷穴；徹底防暈：在轉(zhuǎn)椅上旋轉(zhuǎn)和在空地上自己旋轉(zhuǎn)、滾輪、蕩秋千、跳繩等強(qiáng)化前庭適應(yīng)能力20.皮膚由表皮層、真皮層、皮下組織三大層及附屬器官所組成影響皮膚的因素：不可控因素：年齡、環(huán)境、溫度與濕度、污染、風(fēng)可控因素：睡眠、水分、營養(yǎng)、壓力、運(yùn)動、飲食習(xí)慣皮膚病分類:1、真菌?。喝珞w股癬及甲癬（灰指甲）2、細(xì)菌性皮膚?。喝绲ざ炯奥轱L(fēng)3、病毒性皮膚?。喝缢?。4、節(jié)肢動物引起的皮膚?。喝缃戬?、性傳播疾?。喝缑范尽⒘懿?、過敏性皮膚?。喝缃佑|性皮炎、濕疹；藥物反應(yīng)，如服用磺胺、肌注青霉素過敏7、物理性皮膚?。喝鐣癜摺⒍嘈托匀展庹罴半u眼8、神經(jīng)功能障礙性皮膚病：如瘙癢癥、神經(jīng)性皮炎及寄生蟲妄想癥9、紅斑丘疹鱗屑性皮膚?。喝玢y屑?。ㄅＦぐ_）10、結(jié)締組織疾?。喝缂t斑狼瘡預(yù)防：1）個人衛(wèi)生：盡量穿純棉的衣服，注意個人衛(wèi)生，防止交叉感染2）天氣：濕雨天要注意預(yù)防的皮膚病3）養(yǎng)成良好的飲食習(xí)慣治療：根據(jù)不同的發(fā)病原因，分別選用抗菌藥、抗真菌藥和抗病毒、抗過敏藥物治療