病原微生物試驗室的分級課件

第3章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

Sterilization&pathogeniclabbiosafetyMedicalMicrobiology第3章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

Sterili1第一節(jié)消毒滅菌等常用術語消毒(disinfection)

利用理化因素殺死物體或環(huán)境中病原微生物的措施。并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物滅菌(sterilization)利用理化因素殺死物體上所有微生物的過程，包括芽胞。滅菌無菌第一節(jié)消毒滅菌等常用術語消毒(disinfection)2第一節(jié)消毒滅菌等常用術語防腐(antisepsis)體外防止或抑制細菌生長繁殖的方法清潔（cleaning）

是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。無菌(asepsis)

不存在任何活菌無菌操作（aseptictechnique)防止細菌進入人體或其他物品的操作技術第一節(jié)消毒滅菌等常用術語防腐(antisepsis)3第二節(jié)消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法二、化學消毒滅菌法

第二節(jié)消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法4物理消毒滅菌法（一）熱力滅菌法干熱滅菌法焚燒；燒灼；干烤；紅外線濕熱滅菌法巴氏消毒法；煮沸法；流動蒸汽消毒法；間歇蒸汽滅菌法；高壓蒸汽滅菌法同一溫度下,濕熱比干熱效果好物理消毒滅菌法（一）熱力滅菌法5熱力滅菌法干熱滅菌焚燒、燒灼、紅外線干烤（160~170℃/2h）熱力滅菌法干熱滅菌6熱力滅菌法濕熱滅菌巴氏消毒法pasteurization用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。62℃30min或72℃30sec煮沸法30min流動蒸氣消毒法間歇蒸氣滅菌法流通蒸汽溫箱過夜流通蒸汽溫箱過夜(反復3次)高壓蒸氣滅菌法熱力滅菌法濕熱滅菌7熱力滅菌法高壓蒸汽滅菌法121℃,1.05Kg/cm2(15個大氣壓),20min熱力滅菌法高壓蒸汽滅菌法8輻射殺菌法1、電離輻射X、β、γ射線原理:通過產(chǎn)生OH－、O2等活性游離基進行殺菌；通過破壞DNA的結構導致菌體死亡2、非電離輻射（1）紫外線

200~300nm(最佳：265~266nm)原理：導致DNA分子構型改變DNA復制出現(xiàn)差錯用途：只用于空氣和物品表面的消毒用時注意防護（2）日光（3）微波常用于對非金屬器械的消毒輻射殺菌法1、電離輻射X、β、γ射線9濾過除菌法1、貝克菲濾器2、蔡氏濾器3、玻璃濾器4、膜濾器孔徑0.22um-0.45um除菌空氣過濾器:無菌棉花、活性炭及細玻璃纖維等可對空氣進行過濾除菌濾過除菌法1、貝克菲濾器10濾器和層流室濾器和層流室11干燥與低溫抑菌法抑菌和滅菌常用冷凍真空干燥法貯藏菌種迅速冷凍加入冷凍保護劑一般-20-70度干燥與低溫抑菌法抑菌和滅菌12化學消毒滅菌法常用消毒劑(disinfectants)的殺菌機制使菌體蛋白變性或凝固干擾微生物酶系統(tǒng)和影響其代謝損傷細胞壁、細胞膜化學消毒滅菌法常用消毒劑(disinfectants)的殺菌13消毒劑的主要類型及應用重金屬鹽類1%硝酸銀氧化劑0.1%高錳酸鉀、3%過氧化氫酚石炭酸醇類70-75%的乙醇醛類37%-40%福爾馬林鹵素類0.2ppm-0.5ppm氯,2.0%-2.5%碘酒酸堿類15%-25%生石灰、50%醋酸蒸發(fā)表面活性劑0.1%新潔爾滅染料菌2%-4%龍膽紫烷化劑50mg/L環(huán)氧乙烷消毒劑的主要類型及應用重金屬鹽類1%硝酸銀14醫(yī)學上常用消毒劑類型作用機制及種類類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫酸堿類破壞膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化劑蛋白質、核酸烷基化環(huán)氧乙烷醛類與氨基結合,蛋白變性甲醛、戊二醛醫(yī)學上常用消毒劑類型作用機制及種類類別作用機制常用種類酚類蛋15二、化學消毒滅菌法高效消毒劑high-level中效消毒劑intermediate-level低效消毒劑

low-level可殺死包括細菌芽胞在內所有微生物不能殺死芽胞，可殺死細菌繁殖體、真菌、大多數(shù)病毒可殺死大多數(shù)細菌繁殖體，對真菌、病毒殺滅力弱1.含氯消毒劑2.過氧化物消毒劑3.醛類消毒劑4.環(huán)氧乙烷1.含碘消毒劑2.醇類消毒劑1.季銨鹽類2.氯已定3.高錳酸鉀二、化學消毒滅菌法高效消毒劑中效消毒劑低效消毒劑可殺死包括16環(huán)氧乙烷消毒設備環(huán)氧乙烷消毒設備17第三節(jié)消毒滅菌的運用一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌二、室內空氣消毒滅菌三、手和皮膚的消毒四、黏膜的消毒五、病人排泄物與分泌物的消毒滅菌六、病人污染物品的消毒七、飲水的消毒八、環(huán)境的消毒第三節(jié)消毒滅菌的運用一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌18一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌高危器械物品

用時需進入無菌組織的物品。所有這些物品都應該滅菌。

中危器械物品

用時不進入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。低危器械物品

只接觸未損傷皮膚但不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可?？焖僦苻D的醫(yī)療器械一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌高危器械物品19二、室內空氣消毒滅菌1.物理消毒法

紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2μm的高效過濾裝置以除去細菌和帶菌塵埃2．化學消毒法

包括化學消毒劑噴霧和熏蒸過氧乙酸噴霧、熏蒸；過氧化氫噴霧；二氧化氯溶液噴灑；中草藥點燃煙熏二、室內空氣消毒滅菌1.物理消毒法20三、手和皮膚的消毒用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手病原微生物污染時應用消毒劑消毒。三、手和皮膚的消毒用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手21第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、微生物的種類二、微生物的物理狀態(tài)三、微生物的數(shù)量四、消毒劑性質、濃度與作用時間五、溫度六、酸堿度七、有機物第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、微生物的種類22第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全23第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全生物安全（biosafety）是生物技術安全（safetyofbiotechnology）的簡稱狹義的指現(xiàn)代生物技術的研究、開發(fā)、應用及轉基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危害。廣義的指與生物有關的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風險。第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全生物安全（biosafet24病原微生物所致的安全問題，如安全隱患、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等，也是人類社會面臨的最現(xiàn)實的生物安全問題病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染關于病原微生物實驗室生物安全，我國法令包括對病原微生物的分類管理，對實驗室的分級管理，實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任等

病原微生物所致的安全問題，如安全隱患、生物武器、生物恐怖、重25

一、病原微生物的分類根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類：第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。一、病原微生物的分類根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害26第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類是指在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境27二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害，具有有效的預防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或對動植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預防治療措施。四級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預防治療措施。二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)28二、病原微生物實驗室的分級*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版二、病原微生物實驗室的分級*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》29一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。從事高致病性病原微生物相關實驗活動應當有２名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關實驗活動。應有健全安全保衛(wèi)制度。一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級30實驗室工作人員應掌握實驗室技術規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應有符合要求的防護用品，應建立健康檔案；進行預防接種。實驗室應有科學、嚴格的管理制度，定期對實驗室設施設備、材料等進行檢查、維護和更新，應對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。

實驗室工作人員應掌握實驗室技術規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知31*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版32*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版33*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版*摘自《WHO實驗室生物安全手冊》2004年版34學習目標掌握消毒、滅菌、無菌、無菌操作、防腐、生物安全的概念；高壓蒸汽滅菌法、紫外線的使用方法、原理及用途。熟悉熱力滅菌法的種類及應用；紫外線殺菌的原理和應用；常用化學消毒劑的種類、濃度和應用；高致病性病原微生物的分類標準；生物安全的措施。學習目標掌握消毒、滅菌、無菌、無菌操作、防腐、生物安全的概念35思考題1．濕熱消毒滅菌法有哪些？哪幾種方法效果較好？濕熱法與干熱法相比有何優(yōu)點？2．化學消毒劑有何用途？在使用化學消毒劑時應注意哪些事項？3．什么是生物安全？病原微生物實驗室為什么要注意生物安全？思考題1．濕熱消毒滅菌法有哪些？哪幾種方法效果較好？濕熱法與36第3章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

Sterilization&pathogeniclabbiosafetyMedicalMicrobiology第3章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

Sterili37第一節(jié)消毒滅菌等常用術語消毒(disinfection)

利用理化因素殺死物體或環(huán)境中病原微生物的措施。并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物滅菌(sterilization)利用理化因素殺死物體上所有微生物的過程，包括芽胞。滅菌無菌第一節(jié)消毒滅菌等常用術語消毒(disinfection)38第一節(jié)消毒滅菌等常用術語防腐(antisepsis)體外防止或抑制細菌生長繁殖的方法清潔（cleaning）

是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。無菌(asepsis)

不存在任何活菌無菌操作（aseptictechnique)防止細菌進入人體或其他物品的操作技術第一節(jié)消毒滅菌等常用術語防腐(antisepsis)39第二節(jié)消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法二、化學消毒滅菌法

第二節(jié)消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法40物理消毒滅菌法（一）熱力滅菌法干熱滅菌法焚燒；燒灼；干烤；紅外線濕熱滅菌法巴氏消毒法；煮沸法；流動蒸汽消毒法；間歇蒸汽滅菌法；高壓蒸汽滅菌法同一溫度下,濕熱比干熱效果好物理消毒滅菌法（一）熱力滅菌法41熱力滅菌法干熱滅菌焚燒、燒灼、紅外線干烤（160~170℃/2h）熱力滅菌法干熱滅菌42熱力滅菌法濕熱滅菌巴氏消毒法pasteurization用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。62℃30min或72℃30sec煮沸法30min流動蒸氣消毒法間歇蒸氣滅菌法流通蒸汽溫箱過夜流通蒸汽溫箱過夜(反復3次)高壓蒸氣滅菌法熱力滅菌法濕熱滅菌43熱力滅菌法高壓蒸汽滅菌法121℃,1.05Kg/cm2(15個大氣壓),20min熱力滅菌法高壓蒸汽滅菌法44輻射殺菌法1、電離輻射X、β、γ射線原理:通過產(chǎn)生OH－、O2等活性游離基進行殺菌；通過破壞DNA的結構導致菌體死亡2、非電離輻射（1）紫外線

200~300nm(最佳：265~266nm)原理：導致DNA分子構型改變DNA復制出現(xiàn)差錯用途：只用于空氣和物品表面的消毒用時注意防護（2）日光（3）微波常用于對非金屬器械的消毒輻射殺菌法1、電離輻射X、β、γ射線45濾過除菌法1、貝克菲濾器2、蔡氏濾器3、玻璃濾器4、膜濾器孔徑0.22um-0.45um除菌空氣過濾器:無菌棉花、活性炭及細玻璃纖維等可對空氣進行過濾除菌濾過除菌法1、貝克菲濾器46濾器和層流室濾器和層流室47干燥與低溫抑菌法抑菌和滅菌常用冷凍真空干燥法貯藏菌種迅速冷凍加入冷凍保護劑一般-20-70度干燥與低溫抑菌法抑菌和滅菌48化學消毒滅菌法常用消毒劑(disinfectants)的殺菌機制使菌體蛋白變性或凝固干擾微生物酶系統(tǒng)和影響其代謝損傷細胞壁、細胞膜化學消毒滅菌法常用消毒劑(disinfectants)的殺菌49消毒劑的主要類型及應用重金屬鹽類1%硝酸銀氧化劑0.1%高錳酸鉀、3%過氧化氫酚石炭酸醇類70-75%的乙醇醛類37%-40%福爾馬林鹵素類0.2ppm-0.5ppm氯,2.0%-2.5%碘酒酸堿類15%-25%生石灰、50%醋酸蒸發(fā)表面活性劑0.1%新潔爾滅染料菌2%-4%龍膽紫烷化劑50mg/L環(huán)氧乙烷消毒劑的主要類型及應用重金屬鹽類1%硝酸銀50醫(yī)學上常用消毒劑類型作用機制及種類類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫酸堿類破壞膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化劑蛋白質、核酸烷基化環(huán)氧乙烷醛類與氨基結合,蛋白變性甲醛、戊二醛醫(yī)學上常用消毒劑類型作用機制及種類類別作用機制常用種類酚類蛋51二、化學消毒滅菌法高效消毒劑high-level中效消毒劑intermediate-level低效消毒劑

low-level可殺死包括細菌芽胞在內所有微生物不能殺死芽胞，可殺死細菌繁殖體、真菌、大多數(shù)病毒可殺死大多數(shù)細菌繁殖體，對真菌、病毒殺滅力弱1.含氯消毒劑2.過氧化物消毒劑3.醛類消毒劑4.環(huán)氧乙烷1.含碘消毒劑2.醇類消毒劑1.季銨鹽類2.氯已定3.高錳酸鉀二、化學消毒滅菌法高效消毒劑中效消毒劑低效消毒劑可殺死包括52環(huán)氧乙烷消毒設備環(huán)氧乙烷消毒設備53第三節(jié)消毒滅菌的運用一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌二、室內空氣消毒滅菌三、手和皮膚的消毒四、黏膜的消毒五、病人排泄物與分泌物的消毒滅菌六、病人污染物品的消毒七、飲水的消毒八、環(huán)境的消毒第三節(jié)消毒滅菌的運用一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌54一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌高危器械物品

用時需進入無菌組織的物品。所有這些物品都應該滅菌。

中危器械物品

用時不進入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。低危器械物品

只接觸未損傷皮膚但不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可?？焖僦苻D的醫(yī)療器械一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌高危器械物品55二、室內空氣消毒滅菌1.物理消毒法

紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2μm的高效過濾裝置以除去細菌和帶菌塵埃2．化學消毒法

包括化學消毒劑噴霧和熏蒸過氧乙酸噴霧、熏蒸；過氧化氫噴霧；二氧化氯溶液噴灑；中草藥點燃煙熏二、室內空氣消毒滅菌1.物理消毒法56三、手和皮膚的消毒用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手病原微生物污染時應用消毒劑消毒。三、手和皮膚的消毒用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手57第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、微生物的種類二、微生物的物理狀態(tài)三、微生物的數(shù)量四、消毒劑性質、濃度與作用時間五、溫度六、酸堿度七、有機物第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、微生物的種類58第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全59第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全生物安全（biosafety）是生物技術安全（safetyofbiotechnology）的簡稱狹義的指現(xiàn)代生物技術的研究、開發(fā)、應用及轉基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危害。廣義的指與生物有關的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風險。第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全生物安全（biosafet60病原微生物所致的安全問題，如安全隱患、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等，也是人類社會面臨的最現(xiàn)實的生物安全問題病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染關于病原微生物實驗室生物安全，我國法令包括對病原微生物的分類管理，對實驗室的分級管理，實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任等

病原微生物所致的安全問題，如安全隱患、生物武器、生物恐怖、重61

一、病原微生物的分類根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類：第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。一、病原微生物的分類根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害62第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類是指在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境63二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害，具有有效的預防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或對動植物