第三章奶牛體細胞數(shù)

第三章奶牛體細胞數(shù)（SCC）變化規(guī)律與奶牛隱性乳炎流行調(diào)查摘要:通過對南京某奶牛場一年DHI的統(tǒng)計，分析了胎次、泌乳期和季節(jié)對SCC和奶牛隱性乳房炎發(fā)病率的影響?結(jié)果表明:奶牛胎次對SCC和隱性乳房炎發(fā)病率影響明顯，胎次增多，體細胞數(shù)和發(fā)病率都升高;泌乳期和季節(jié)對體細胞數(shù)與隱性乳房炎發(fā)病率影響不大.關鍵詞:奶牛;體細胞數(shù);隱性乳房炎;奶牛乳房炎是導致奶業(yè)損失慘重的一種疾病，一般可分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎［f}le隱性乳房炎不易察覺，可在牛群中廣泛流行。據(jù)統(tǒng)計，美國隱性乳房炎的流行是30%---70%，而國內(nèi)為50%}-80%［2'3J.乳房炎造成損失的70%可歸究于隱性乳房炎導致的奶產(chǎn)量下降［［4J0乳中體細胞數(shù)量被廣泛應用于評定奶牛各乳區(qū)和奶牛的健康狀況［5-7］，是診斷奶牛隱性乳房炎的標準［［8J?正常牛乳中含由一定數(shù)量SCC，一般細胞濃度少于1'105個/ml主要細胞是巨噬細胞，當乳腺發(fā)生炎癥反應時，PMN大量進入乳腺，成為主要成分細胞，使乳汁中體細胞數(shù)量明顯上升［6,9］。一般認為，乳中體細胞數(shù)量超過2x1護個/ml,即意味奶?；加须[性乳房炎［［s,}oJe本文通過南京某奶牛場一年奶牛DHI的統(tǒng)計，分析奶牛體細胞數(shù)和隱性乳房炎的變化規(guī)律，以期為隱性乳房炎的防治提供理論依據(jù)。材料與方法牛群南京某奶牛場泌乳期荷斯坦奶牛，圈養(yǎng)，機械擠奶，每天擠奶三次。1.2奶樣收集擠奶前常規(guī)消毒，棄頭把奶，于擠奶杯中取混合奶樣。每頭牛一份檢測奶樣，每份奶樣15}20m1,早、中、晚各占總奶樣量的4/10， 3/10}3/l0e1.3乳中體細胞數(shù)的測定委托杭州奶牛遺傳所作奶牛DHI分析。1.4統(tǒng)計分析取泌乳期為30270天的奶牛進行統(tǒng)計分析。胎次對體細胞數(shù)與隱性乳房炎發(fā)病率的影響全場奶牛一年的記錄為統(tǒng)計對象。將奶牛按產(chǎn)牛次數(shù)分為1胎、2胎、3胎、4胎、5胎、6胎、7胎、8胎（含8胎以上），計算不同胎次奶牛的平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎的發(fā)病率，分析胎次對平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎發(fā)病率的影響。1.4.2泌乳期對體細胞數(shù)與隱性乳房炎發(fā)病率的影響全場奶牛一年的記錄為統(tǒng)計對象.以二個月為泌乳一階段，將泌乳期為30270天的奶牛依次分為1,2,3、和4階段，計算不同泌乳期奶牛的平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎的發(fā)病率，分析泌乳期對平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎發(fā)病率的影響。1.4.3季節(jié)對體細胞數(shù)和隱性乳房炎發(fā)病率影響全場奶牛一年的記錄為統(tǒng)計對象。計算不同月份奶牛的平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎發(fā)病率，分析季節(jié)對體細胞數(shù)t和隱性乳房炎發(fā)病率。結(jié)果2.1胎次對體細胞數(shù)t與隱性乳房炎發(fā)病率的影響全年中，統(tǒng)計分析1胎、2胎、3胎、4胎、5胎、6胎、7胎、8胎以上（包括8胎）奶牛的體細胞，隨胎次的升高，奶牛的體細胞數(shù)呈明顯上升趨勢（圖1）,隱性乳房炎發(fā)病率也上升（圖2）e2.2泌乳期對體細胞數(shù)t與隱性乳房炎的影響泌乳期對體細胞數(shù)無明顯影響（圖3）,各期的體細胞數(shù)平均值在400000個/m1}500000個//ml間。隱性乳房炎發(fā)病率隨泌乳期的延長有下降的趨勢（圖4）e第四章上海乳房炎檢測法（（SMT）和體細胞計數(shù)（vSCC）在檢測奶牛隱性乳房炎上的應用摘要:應用SMT和scc檢測了南京某奶牛場g8頭奶牛.以scc作為隱性乳房炎判定基準，計算SMT檢測結(jié)果與不同SCC診斷閱值檢測結(jié)果的相符率.結(jié)果表明，以3X105個/ml為SCC診斷閑值，SMT檢測結(jié)果與SCC診斷結(jié)果的相符率最高，達46.880h.關鍵詞:隱性乳房炎;SMT;SCC奶牛乳房炎是奶牛的一種常見性疾病，給奶牛業(yè)造成巨大損失，其一般可分為兩類:臨床型乳房炎和隱性乳房炎川。臨床乳房炎的癥狀明顯，易于察覺。隱性乳房炎肉眼觀察無任何改變，必須借助特定的檢測方法才能診斷。奶牛隱性乳房炎的檢測方法很多，常用的主要有乳汁體細胞計數(shù)（SCC）、乳導電率、NAGas。和間接體細胞計數(shù)等［［｝l.體細胞計數(shù)（SCC）被廣泛應用于評價奶牛各乳區(qū)和奶牛的健康狀況tz.al，也是診斷奶牛隱性乳房炎或作為其他診斷方法對照的基準［s｝。正常牛乳中含有一定數(shù)里的SCC，通常少于1二10,個/ml,而發(fā)生乳房炎時，SCC常超過2‘1O5個//IIlI［3'6］。因此，SCC的顯著升高是乳房發(fā)生炎癥的一種重要指示因子。間接體細胞計數(shù)原理為乳汁中的體細胞在表面活性劑和堿性物質(zhì)的作用下，脂類物質(zhì)乳化，細胞破裂而釋放出DNA，使乳汁產(chǎn)生沉淀或形成凝塊，根據(jù)沉淀或形成凝塊的強弱，間接判定乳汁體細胞范圍而達到判定目的I'!。間接體細胞計數(shù)國外常用的為加州乳房炎檢測法（CMT），國內(nèi)的有杭州乳房炎檢測法（HMT），蘭州乳房炎檢測法（LMT）及上海乳房炎檢測法（（SMT）等。本試驗將SMT檢測的結(jié)果與奶牛健康記剝DHI）中SCC診斷結(jié)果作以比較，分析SMT在檢測隱性乳房炎上準確性。1材料與方法1.1牛群南京郊區(qū)某奶牛場同一牛舍的$g頭泌乳期荷斯坦奶牛，圈養(yǎng)，機械擠奶，每天擠奶三次。試劑SMT診斷液，上海奶牛研究所生產(chǎn)。1.2乳中體細胞數(shù)的測定擠奶前常規(guī)消毒，棄頭把奶，于擠奶杯中取混合奶樣.每頭牛一份檢測奶樣，每份奶樣15｝20m1，早、中、晚各占總奶樣t的4/10， 3110,3/l0a奶樣低溫運輸，委托杭州奶牛遺傳所作奶牛DHI分析。1.3SMT檢測檢測于擠奶前進行。檢測前，常規(guī)消毒，紙巾擦拭，棄頭三把奶。左手握檢測盤手柄，右手擠奶。按檢測杯的標記對好乳區(qū)乳頭，每乳杯中擠入乳量為2m1,檢測盤傾斜45?？蓷壢ザ嘤嗳橹?。每個乳杯中加入2m1的SMT試劑，水平旋轉(zhuǎn)檢測盤，順時針、逆時針交替輕搖使乳汁和SMT試劑混合均勻。根據(jù)混合物的顏色與狀態(tài)判定結(jié)果.混合物為液體，杯底無沉淀判為陰性（一）;混合物為液體，杯底出現(xiàn)微量沉淀為可疑（士）:杯底出現(xiàn)少量粘性沉淀但不呈現(xiàn)膠狀，流動性大，搖動沉淀物散布于杯底，并有一定的粘附性為弱陽性（+）;杯底出現(xiàn)較多粘稠膠狀沉淀，并粘附于杯底，，旋轉(zhuǎn)檢測盤，膠狀物有聚中傾向為陽性（一）;混合物幾乎完全形成膠狀物并粘附于杯底，旋轉(zhuǎn)檢測盤時難以散開為強陽性（一）;混合物立即形成膠狀物凸起，出現(xiàn)夾心奶為最強陽性（料++）.混合物呈蘭紫色則乳樣呈弱堿性，混合物為橙黃色則乳樣呈弱酸性（作為參考依據(jù)）。奶牛各乳區(qū)均為一或士的為SMT陰性牛，其它則為SMT陽性牛。1.4SMT與SCC的相符合率根據(jù)不同SCC診斷闡值判定奶牛隱性乳房炎，將SMT檢測結(jié)果與之比較，按下列公式計算SMT與SCC的相符率：相符率=陽性奶牛頭數(shù)/（陽性奶牛頭數(shù)+假陽性奶牛頭數(shù)+假陰性奶牛頭數(shù)）X100%第五章南京地區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定與主要致病菌耐藥性及致病性分析摘要:從南京地區(qū)三個奶牛場采集104份隱性乳房炎乳樣.經(jīng)分離純化，鑒定出93株細菌，荀萄球菌、鏈球菌、腸桿菌是主要致病菌.選取8株腸桿菌、10株鏈球菌和16株葡萄球菌進行了藥敏試驗、溶血性和細胞毒性試驗.結(jié)果表明，三種主要細菌對多種杭生素產(chǎn)生了耐藥性;荀萄球菌溶血能力較強外，另兩種細菌溶血能力弱或不溶血;除一株腸桿菌和兩株荀萄球菌對Ver。細胞有毒性外，其它菌株沒有，9株細菌上清對Hep-2細胞有毒性.關鍵詞:隱性乳房炎;主要致病菌;耐藥h};溶血性;細胞毒性奶牛乳房炎是奶牛的一種常見性疾病，給奶牛業(yè)造成嚴重損失。其一般可分為臨床乳房炎和隱性乳房炎.隱性乳房炎由于無明顯的臨床癥狀，不易覺察，可在牛群中普遍流行（t,210隱性乳房炎可對乳腺造成較大的損傷，引起奶產(chǎn)量與奶質(zhì)量的下降，造成巨大經(jīng)濟損失川。因此，對奶牛隱性乳房炎的防治，具有重要意義。奶牛乳房炎病因復雜，但致病菌的存在是引起乳房炎癥的主要因素。因此，對隱性乳房炎致病菌的分析是防治奶牛隱性乳房炎的重要步驟。1材料與方法1.1隱性乳房炎的檢側(cè)在南京地區(qū)三個奶牛場選取無臨床乳房炎的奶牛，用SMT法（上海乳房炎檢側(cè)法）檢測奶牛隱性乳房炎。1.2奶樣收集對患有隱性乳房炎奶牛的奶頭，常規(guī)擠奶消毒后，再用70%酒精棉球消毒乳頭和擠奶人員手指。每乳買廢棄頭三把奶后，收集S}lOml奶于經(jīng)高壓滅菌的lOm】塑料離心管中，低溫運送至實驗室。三次共采集104份乳樣.1.3病原菌的分離培養(yǎng)乳樣搖勻后，每份乳樣取0.05ml分別接種于麥康凱平板和7%兔鮮血平板，37°C培養(yǎng)24-48h，根據(jù)菌落形態(tài)作純化培養(yǎng)。每平板內(nèi)不同形態(tài)的菌落超過三種以上的視乳樣受污染。同一形態(tài)菌落超過100cfu/mL的進行純化培養(yǎng).1.4病原菌的鑒定純化培養(yǎng)物作革蘭氏染色、鏡檢，根據(jù)不同的形態(tài)特征確定鑒定的生化指標.革蘭氏陽性、成串聚集的球狀菌，按葡萄球菌鑒定，檢測觸酶、凝固酶，用葡萄球菌屬細菌生化鑒定管做初步生化鑒定;鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，按鏈球?qū)偌毦b定，檢測觸酶，用七葉昔、水楊昔、乳糖、血清菊糖、棉子糖、甘露醇、山梨醉、馬尿酸鹽、pH9.6肉湯、40%膽汁肉湯生化鑒定管進行生化鑒定;革蘭氏陰性桿菌，按腸桿菌鑒定，用腸桿菌科細菌生化常規(guī)鑒定管鑒定（上述所用生化鑒定管均為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品）。其它細菌，依形態(tài)按文獻［［3,4］作一般鑒定。1.5病原菌的藥敏試驗從三個奶牛場分離的細菌中，選8株腸桿菌、10株鏈球菌、16株葡萄球菌，采用K一法，按文獻［s］操作。鏈球菌用M-H瓊脂加5%脫纖維綿羊血。革蘭氏陽性細菌的藥敏片:頭飽哇琳、頭抱他睫、氟呱酸、鏈霉素、頭抱呱酮、萬古霉素、頭抱三嚓、復方新諾明、青霉素、氛霉素、紅霉素;革蘭氏陰性細菌的藥敏片:鏈霉素、復方新諾明、頭飽三嗓、紅霉素、吠喃妥因、四環(huán)素、氨節(jié)青霉素、慶大霉素、卡那霉素、氟嗦酸、氟呱酸、萬古霉素（以上藥敏片均購杭州天和微生物試劑有限公司）oEscherichiacoliCMCC25922株為質(zhì)控菌，試驗結(jié)果依據(jù)產(chǎn)品推薦標準判定1.6溶血性試驗參照文獻［6］e1.6.1平板檢測將各菌株分別在5%綿羊鮮血平板畫井字狀線，37C培養(yǎng)24-48h后觀察結(jié)果。1.6.2接觸溶血細菌接種于THB,37C培養(yǎng)18h，取2m1與等體積2%綿羊紅細胞混合。37'C作用1h后，2000gl0min沉淀紅細胞，取上清，6000g離心lOmin沉淀細菌，上清5407}m處測其吸光值。未接種細菌的THB與2%綿羊紅細胞混合作空白對照。1.7細胞毒性試驗參照文獻f},81,腸桿菌接種于TSB、鏈球菌接種于THB,葡萄球菌接種于Domain培養(yǎng)基［9］}37C培養(yǎng)18h}15000g離心30min,吸上清作毒性檢測.用于毒性檢測的Vero細胞、Hep-2細胞用MEM+10%小牛血清培養(yǎng)于％孔板。細胞長成單層后，吸去培養(yǎng)液，每孔加1/4體積的細菌上清與3/4體積細胞培養(yǎng)液。每種細菌的上清加兩孔，未接種細菌的三種培養(yǎng)基作空白對照。觀察三天，50%細胞變圓、脫落判為陽性。2結(jié)果病原菌的分離鑒定收集的104份乳樣中，95份分離出細菌。除9份樣品未分離出細菌外，另有to份乳樣分離出一種在7%兔鮮血平板呈Y溶血的小圓隆起粗糙菌落，革蘭氏染色陽性，生化鑒定結(jié)果均呈陰性。鑒定的93株細菌中(見表1)，葡萄球菌占57%，其中金黃色葡萄球菌14株，凝固酶陰性葡萄球菌39株;分離出22株鏈球菌，13株腸桿菌。 奶牛乳房炎是奶牛的一種常見性疾病，給奶牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失其病因復雜，雖經(jīng)過多年的研究，仍未完全克服。奶牛乳房炎一般可分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎病。隱性乳房炎病無明顯癥狀，可在牛群中廣泛流行，引起奶牛奶產(chǎn)t的顯著下降，造成巨大的經(jīng)濟損失。全面了解奶牛乳房炎，加深對隱性乳房炎危害的認識，采取有效防治措施降低隱性乳房炎發(fā)病率，維護乳房健康，對提高奶產(chǎn)t與奶質(zhì)t,保證人民生活健康都有極其重要意義。1乳房炎的概念及分類Dr.Klastrup提出乳房炎定義，1986年國際乳業(yè)聯(lián)盟(vIDF)公布如下:⑴正常乳房。乳汁成分正常，無乳房炎的臨床癥狀和病原微生物。＜2)潛在性感染。乳汁體細胞正常，但存在病原微生物。(3)亞臨床型乳房炎。肉眼看不見乳房炎癥狀，但乳汁檢查發(fā)現(xiàn)體細胞數(shù)增加，乳汁成分改變。(4)臨床型乳房炎，又可分為急性乳房炎、亞急性乳房炎和慢性乳房炎.急性乳房炎乳房的紅、腫、熱、痛癥狀明顯，體溫升高，乳汁的變化也明顯;亞急性乳房炎癥狀不明顯，但乳汁變化，尤其是擠奶前乳有絮塊存在:慢性乳房炎乳房炎癥狀不明顯，乳汁變化時隱時現(xiàn)，乳房逐漸萎縮硬化，病程很長。(5)非特異性乳房炎(無細菌乳房炎)，也可分為臨床型和亞臨床型.臨床型的癥狀與感染的臨床型相似;亞臨床型則只有乳汁變化。微生物檢查，兩者均為陰性。(6)乳炎管菌落形成，即病原只在乳頭管繁殖.因此由乳頭采樣，檢菌陽性.但乳房穿刺取樣，則檢菌陰性101e美國國家乳房炎委員會以乳房和乳汁有無肉眼可見變化，將乳房炎劃分為:⑴非臨床型或亞臨床型乳房炎(Nonclinicalorsubclinicalmastitis)。乳房和乳汁都無肉眼可見變化，要用特殊的試驗才能檢出乳汁的變化，通常稱為隱性乳房炎(hiddenmastitis)o(2)臨床型乳房炎(Clinicalmastitis):乳房和乳汁均有肉眼可見的變化.輕度臨床型乳房炎(Mildclinicalmastitis)，乳汁中有絮片、凝塊，有時呈水樣，乳房輕度發(fā)熱和疼痛或不熱不痛，可能腫脹。重度臨床型乳房炎(Severeclinicalmastitis)，患病乳區(qū)急性腫脹，熱、硬、疼、痛，乳汁異常，分泌減少。如出現(xiàn)體溫升高，脈搏增速，患畜抑郁、衰弱、食欲喪失等全身癥狀，稱為急性全身性乳房炎(Acutesystemicmastitis)}5}e臨床型乳房炎根據(jù)炎癥性質(zhì)還可進行分類:(1)漿液性炎?漿液及大t白細胞滲到間質(zhì)組織中，乳房紅腫熱痛，乳t減少，乳汁稀薄，含絮片，乳上淋巴結(jié)往往腫脹。(2)卡他性炎，脫落的腺上皮細胞及白細胞沉積于上皮表面。又有乳管及乳池卡他和腺泡卡他之分。乳管及乳池卡他僅在開始擠出的奶中含絮片，而腺泡卡他則可表現(xiàn)出患病乳區(qū)紅腫熱痛，乳量減產(chǎn)，乳汁水樣，含絮片，可出現(xiàn)全身癥狀。＜3)纖維蛋白性炎。纖維蛋白沉積于上皮表面或組織內(nèi)，為重劇急性炎癥。乳上淋巴結(jié)腫脹。擠不出奶或只擠出幾滴清水.本型多由卡他性炎發(fā)展而來，往往與膿性子宮炎并發(fā)。(4)化膿性炎，包括三種:急性膿性卡他性炎、乳房膿腫和蜂窩織炎。急性膿性卡他性炎由卡他性炎轉(zhuǎn)來，除患區(qū)炎性反應外，乳量劇減或完全無乳，乳汁水樣含絮片，有較重的全身癥狀，數(shù)日后轉(zhuǎn)為慢性，最后乳區(qū)萎縮硬化，乳汁稀薄或貓液樣，乳量漸減直至無乳;乳房膿腫，乳房中有多個自小米大至豆大膿腫，個別的大膿腫充滿乳區(qū)，有時向皮膚外破潰，乳上淋巴結(jié)腫脹，乳汁呈私性膿樣，含絮片;蜂窩織炎，為皮下或腺間結(jié)締組織化膿，一般是乳房外傷、漿性炎、乳房膿腫并發(fā)，產(chǎn)后生殖器官炎癥易繼發(fā)本癥，乳上淋巴結(jié)腫脹，乳量劇減，以后乳汁含絮片。＜5）出血性炎。乳房深部組織及腺管出血，皮膚有紅色斑點，乳上淋巴結(jié)腫脹。乳量劇減，乳汁水樣含絮片及血液，可能由溶血性大腸桿菌等所引起［s］e奶牛隱性乳房炎的危害奶牛隱性乳房炎無明顯的癥狀，不易覺察，能在牛群中廣泛流行，是威脅世界奶牛業(yè)的一種多發(fā)病，發(fā)病率為20}}60}［2］.我國的發(fā)病率更高，在50%-80%之間［2,7,16］。盡管對奶牛乳房炎的研究已達一百多年，但由于病因復雜，現(xiàn)在仍是導致奶牛業(yè)損失最嚴重的一種疾病。這些損失包括乳房炎導致的奶牛產(chǎn)量的下降、奶成分改變而導致的奶品質(zhì)降低、廢棄牛奶飛醫(yī)藥治療、瞎奶頭、母牛的過早淘汰及抗生素的濫用而威脅人類健康等。Timms等報道〔}1，乳房炎造成的損失約70%可歸于隱性乳房炎引起的奶產(chǎn)里下降。Bartett等構(gòu)建了一個統(tǒng)計模型【29］,預測結(jié)果表明與隱性乳房炎相關聯(lián)的平均牛群的損失是每頭牛每天損失1.17千克奶，隱性乳房炎與大約5%奶損失相關。美國全國乳房炎委員會估計美國每頭奶牛每年因乳房炎的花費是225美元，加拿大的是140300美元［68］。我國每年因隱性乳房炎造成的損失約達1.35億人民幣奶牛乳房炎的發(fā)病機理當病原微生物侵入乳腺上皮細胞或乳房乳頭受到機械損傷時，可引起乳房組織的抵御性炎癥反應。在炎性反應的初期，受損乳區(qū)血管擴張，血流變慢，血管的通透性增加，血液中含有的炎性介質(zhì)，如組胺、白細胞三烯與血液中的凝固性因子增多，活化的M}釋放出多種細胞因子，吸引PMN和淋巴細胞進入乳房，加劇炎性反應。同時，由于血液滲出物中含有凝固性因子，滲出物很快在乳房內(nèi)凝固，造成泌乳障礙［231e如果對乳房的刺激在短時間內(nèi)停止，則血管的炎性反應也相應減退，乳房的機能可以部分或完全恢復。如果感染比較嚴重，則可導致泌乳腺泡的損壞，使該乳區(qū)失去泌乳功能。象.以二個月為泌乳一階段，將泌乳期為30270天的奶牛依次分為1,2,3、和4階段，計算不同泌乳期奶牛的平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎的發(fā)病率，分析泌乳期對平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎發(fā)病率的影響。1.4.3季節(jié)對體細胞數(shù)和隱性乳房炎發(fā)病率影響全場奶牛一年的記錄為統(tǒng)計對象。計算不同月份奶牛的平均體細胞數(shù)和平均隱性乳房炎發(fā)病率，分析季節(jié)對體細胞數(shù)t和隱性乳房炎發(fā)病率。3討論統(tǒng)計中，刪除了產(chǎn)奶前30天和產(chǎn)奶270天后的奶牛資料，是為了避免奶牛初乳和臨近干奶期乳中體細胞數(shù)變化較大造成的影響［6）。從統(tǒng)計分析中可以看出，除胎次對體細胞有明顯影響，泌乳期，季節(jié)對體細胞影響不大，這與楊建光和Reneau報道的不相一致［f21,可能是所統(tǒng)計的方式不同，故結(jié)果出現(xiàn)差異所致。此外，本調(diào)查所統(tǒng)計的牛群中，不同月份牛的頭數(shù)有所波動，這也可能影響到統(tǒng)計結(jié)果。以全年奶牛作為研究對象，分析產(chǎn)奶天、胎次對體細胞的影響，結(jié)果所反映的是一年總的情況。以2x1護個/ml為判定為奶牛隱性乳房炎的閡值，無論從胎次、泌乳期，還是從季節(jié)上看，隱性乳房炎的發(fā)病率大多在40%至50%間，表明該牛場牛群隱性乳房炎發(fā)病率維持在一個較高水平，巫需采取措施改善奶牛乳房健康狀況。1.3SMT檢測檢測于擠奶前進行。檢測前，常規(guī)消毒，紙巾擦拭，棄頭三把奶。，左手握檢測盤手柄，右手擠奶。按檢測杯的標記對好乳區(qū)乳頭，每乳杯中擠入乳量為2m1，檢測盤傾斜45?？蓷壢ザ嘤嗳橹?。每個乳杯中加入2m1的SMT試劑，水平旋轉(zhuǎn)檢測盤，順時針、逆時針交替輕搖使乳汁和SMT試劑混合均勻。根據(jù)混合物的顏色與狀態(tài)判定結(jié)果.混合物為液體，杯底無沉淀判為陰性（一）;混合物為液體，杯底出現(xiàn)微量沉淀為可疑（士）:杯底出現(xiàn)少量粘性沉淀但不呈現(xiàn)膠狀，流動性大，搖動沉淀物散布于杯底，并有一定的粘附性為弱陽性（+）;杯底出現(xiàn)較多粘稠膠狀沉淀，并粘附于杯底，，旋轉(zhuǎn)檢測盤，膠狀物有聚中傾向為陽性（一）;混合物幾乎完全形成膠狀物并粘附于杯底，旋轉(zhuǎn)檢測盤時難以散開為強陽性（一）;混合物立即形成膠狀物凸起，出現(xiàn)夾心奶為最強陽性（料++）.混合物呈蘭紫色則乳樣呈弱堿性，混合物為橙黃色則乳樣呈弱酸性（作為參考依據(jù)）。奶牛各乳區(qū)均為一或士的為SMT陰性牛，其它則為SMT陽性牛。SMT與SCC的相符合率根據(jù)不同SCC診斷闡值判定奶牛隱性乳房炎，將SMT檢測結(jié)果與之比較，按下列公式計算SMT與SCC的相符率：相符率=陽性奶牛頭數(shù)/（陽性奶牛頭數(shù)+假陽性奶牛頭數(shù)+假陰性奶牛頭數(shù)）X100%3討論體細胞數(shù)是反映乳房健康狀況的重要標志，被廣泛用于奶牛隱性乳房炎的診斷。但關于判定奶牛隱性乳房炎的SCC闡值，尚未形成一致看法，2X105個/ml,3X105個Jml和5、1Os個//ml都有人提出}'"9}oSMT由于操作簡便快捷，不需特殊設備，因而得到廣泛應用。本試驗以分別2X105個/ml,3:1O5個//ml,5X105個//ml作為SCC判定閩值，以SCC判定結(jié)果為基準，計算SMT與SCC診斷的符合率，認為3X105個/ml作為SCC診斷闡值，SMT與SCC診斷結(jié)果相符率最高。SMT與SCC檢測結(jié)果出現(xiàn)差異，可能是SCC針對的是奶牛個體，而SMT檢測的是單乳區(qū)。當奶牛有的乳區(qū)體細胞數(shù)較高，其他乳區(qū)體細胞低時，牛個體SCC低，SMT可檢測出單個乳區(qū)的狀況，導致SMT檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性:當奶牛所有乳區(qū)的體細胞數(shù)超過2二1OS個//ml,而又沒達到SMT，檢測的靈敏度，則可導致SMT檢測結(jié)果出現(xiàn)假陰性?作為一種間接體細胞計數(shù)法，SMT檢測的結(jié)果只是奶中體細胞數(shù)蚤的一種粗略的反映，其準確性遠不及SCC,也未見對SMT評價的報道，影響SMT檢測的因素并不明確，還需對SMT作進一步研究。目前，雖然我國奶牛業(yè)作DHI分析的時間不長，進行DHI分析的企業(yè)也不多，這與我國奶牛業(yè)的發(fā)展水平相關。隨著我國奶牛業(yè)的不斷壯大，飼養(yǎng)水平的不斷提高，社會對奶質(zhì)的要求不斷增強，DHI將成為奶牛業(yè)必然需求，SCC作為DHI分析的主要指標也必將是監(jiān)測奶牛隱性乳房炎的主要方法。為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品）。其它細菌，依形態(tài)按文獻［［3,4］作一般鑒定。病原菌的藥敏試驗從三個奶牛場分離的細菌中，選8株腸桿菌、10株鏈球菌、16株葡萄球菌，采用K一法，按文獻［s］操作。鏈球菌用M-H瓊脂加5%脫纖維綿羊血。革蘭氏陽性細菌的藥敏片:頭飽哇琳、頭抱他睫、氟呱酸、鏈霉素、頭抱呱酮、萬古霉素、頭抱三嚓、復方新諾明、青霉素、氛霉素、紅霉素;革蘭氏陰性細菌的藥敏片:鏈霉素、復方新諾明、頭飽三嗓、紅霉素、吠喃妥因、四環(huán)素、氨節(jié)青霉素、慶大霉素、卡那霉素、氟嗦酸、氟呱酸、萬古霉素（以上藥敏片均購杭州天和微生物試劑有限公司）oEscherichiacoliCMCC25922株為質(zhì)控菌，試驗結(jié)果依據(jù)產(chǎn)品推薦標準判定1.6溶血性試驗參照文獻［6］e1.6.1平板檢測將各菌株分別在5%綿羊鮮血平板畫井字狀線，37°C培養(yǎng)24-48h后觀察結(jié)果。1.6.2接觸溶血細菌接種于THB,37C培養(yǎng)18h，取2m1與等體積2%綿羊紅細胞混合。37'C作用1h后，2000g10min沉淀紅細胞，取上清，6000g離心lOmin沉淀細菌，上清5407}m處測其吸光值。未接種細菌的THB與2%綿羊紅細胞混合作空白對照。1.7細胞毒性試驗參照文獻f},81,腸桿菌接種于TSB、鏈球菌接種于THB,葡萄球菌接種于Domain培養(yǎng)基l9］，37C培養(yǎng)18h}15000g離心30min,吸上清作毒性檢測.用于毒性檢測的Vero細胞、Hep-2細胞用MEM+10%小牛血清培養(yǎng)于％孔板。細胞長成單層后，吸去培養(yǎng)液，每孔加1/4體積的細菌上清與3/4體積細胞培養(yǎng)液。每種細菌的上清加兩孔，未接種細菌的三種培養(yǎng)基作空白對照。觀察三天，50%細胞變圓、8｝5毖少｝I毛陽和f4乳房炎的感染和傳播極大多數(shù)乳房炎是由病原菌感染引起，大體可分為兩大類:一種為接觸性傳染病原，病原體定植于乳腺，可通過擠奶傳播，引起的乳房炎易在乳區(qū)間和牛群之間傳播;另一種是環(huán)境性病原，病原體可存在于奶牛體表和周圍環(huán)境中，通常不引起乳腺的感染，當奶牛乳房受損或機體防御能力下降，病原體進入乳池而引起乳腺感染。接觸性病原包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和支原體等.環(huán)境性病原包括大腸桿菌、克雷伯氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌、沙雷氏菌、變形桿菌、假單胞菌以及其它革蘭氏陰性菌，凝固酶陰性荀萄球菌、環(huán)境鏈球菌、真菌、原囊藻屬、化膿性放線桿菌和牛棒狀桿菌等［25.69］0病原體可通過兩種途徑感染乳腺，血源性和外源性。血源性感染，病原體原存在于體內(nèi)，經(jīng)血液循環(huán)轉(zhuǎn)移而引起;外源性感染，病原菌的感染途徑為通過乳頭導管侵入乳房，是引起乳房炎的主要感染途徑。健康的乳頭端，覆蓋著一層強韌而柔軟的皮膚，其孔周圍包圍著括約肌，關閉時能防止牛奶外流，又可預防病原菌的入侵，乳頭孔里分布有角蛋白，能產(chǎn)生蠟狀的殺菌物質(zhì)并可封閉乳頭孔。乳汁中的白細胞有吞曦細菌的作用，乳鐵蛋白和免疫球蛋白能抑制細菌生長。健康的乳頭孔即使有少t細菌入俊也不能引起感染，因為健康的乳頭具備天然防御機能。當乳頭反復受到不良的擠奶刺激，尤其是擠奶器擠奶時，負壓過高，真空波動過大，擠奶時間過長，引起乳頭充血，發(fā)炎，潰瘍，甚至外翻，乳頭防御細菌入侵的功能受到破壞，細菌就很容易俊入乳腺組織內(nèi)，引起感染.感染的過程就是隱性乳房炎，也就是部分輸乳管及乳腺細胞發(fā)炎，肉眼看不出臨床癥狀和乳汁變化，只有通過精密檢查，才能判定。隱性乳房炎是非常危險的，因為它感染乳區(qū)多，不易發(fā)現(xiàn)，是感染源，致使牛奶產(chǎn)t、質(zhì)t下降。據(jù)報道，40%的隱性乳房炎可發(fā)展為臨床型乳房炎，18%可以自愈，其余變?yōu)槌掷m(xù)型。隱性乳房炎的治療效果幽隴床乳房炎的好。因此，早期診斷和治療隱性乳房炎是縮短感染持續(xù)時間的有效措施。5奶牛乳房炎的發(fā)病規(guī)律乳房炎的發(fā)病率與飼養(yǎng)管理、環(huán)境衛(wèi)生、季節(jié)、胎數(shù)、泌乳月都有一定的關系，M.Thirunavukkarasu等報道，乳房炎的發(fā)病率隨產(chǎn)奶量的增加與泌乳時間的延長而升高，且乳房下垂者多發(fā)。楊章平報道隱性乳房炎的發(fā)生與管理有很大關系｝u｝，機械擠奶牛群的發(fā)病率高于手擠奶牛群，牛群不清潔，擁擠，日光少，易患乳房炎，飼養(yǎng)方式改變導致能t失衡，也易患乳房炎:奶牛乳房炎的發(fā)生率隨季節(jié)變化而變化，以第三季度發(fā)生率最高，并以3,4胎的發(fā)生率最高，頭胎牛的發(fā)生率最低;處于3--4泌乳月和第9泌乳月以上的牛易感性較強;生殖系統(tǒng)或蹄感染使乳房炎發(fā)病率升高，干奶期或分娩期的感染率比其它時期高數(shù)倍。6奶牛乳房炎的病原學引致奶牛乳房炎的病原多達130多種［［5.｝］，主要為細菌，少數(shù)為真菌和病毒。細菌主要有鏈球菌、葡萄球菌和腸桿菌細菌;真菌有念珠菌、毛抱子菌和曲霉菌等;病毒主要有疙疹病毒、口蹄疫病毒、牛痘病毒和牛冠狀病毒［［67］，多為繼發(fā)感染。6.1葡萄球菌(staphylococcus)引致奶牛乳房炎的葡萄球菌主要是金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)。其中以金黃色葡萄球菌最常見，致病性較強。表皮葡萄球菌的檢出率也較高。該屬細菌分布較廣，抵抗力較強，同種菌的致病力相差較大，其毒力的強弱與細菌產(chǎn)生的胞外毒素和酶密切相關。葡萄球菌產(chǎn)生的毒素和酶主要有以下幾種:葡萄球菌溶血素(Stapholysin)，有較強的溶血活性，分為。、s、Y、s四種類型。a毒素與牛羊壞疽性乳房炎有關，它導致白細胞等崩解，并作用于平滑肌和血管壁細胞，引致平滑肌收縮、麻痹，最終壞死、從乳房炎患牛奶樣分離的菌株較多產(chǎn)生p毒素，為磷脂酶C,與乳房炎有關、腸毒素(Enterotoxin)，是一組結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)，分子盆26000-34000，耐熱抗酸，根據(jù)抗原性差異可將其分為A,B,C,-C3,D,E七個型，其中A,D兩型最常見、凝固酶(Coagulase)，有分泌于菌體外的游離凝固酶(freecoagulase)和結(jié)合在菌體表面的結(jié)合凝固酶(bondcoagulase)兩種，它們能使含有抗凝劑的家兔和人的血漿凝固.游離凝固酶類似凝血酶原的作用:凝集因子可使血漿纖維蛋白與菌體交聯(lián)，引起菌體凝集.凝固酶耐熱，具有抗原性，易被蛋白酶分解、凝固酶有助于致病菌株抵御宿主體內(nèi)吞噬細胞和殺菌物質(zhì)的作用，同時也使感染局限化、檢測葡萄球菌凝固酶是鑒別菌株的重要指標，致病株多為凝固酶陽性、毒素休克綜合征毒素1(Toxicshocksyndrometoxin1,TSST1)，是一種超抗原，分子t為22000的蛋白質(zhì)，引致人類變態(tài)反應，發(fā)生毒素休克綜合征、耐熱核酸酶(Heatstablenuclease)，高度耐熱，100°C作用15min不失去活性，由致病菌株產(chǎn)生、感染部位的組織細胞和白細胞崩解時釋放出核酸，使?jié)B出液粘性增加、此酶能迅速分解核酸，利于病菌擴散.溶纖維蛋白酶(Fibrinolysin),是一種激酶，可通過激活血漿蛋白酶原成為血漿蛋白酶而使纖維蛋白溶解，從而對抗凝血過程.透明質(zhì)酸酶(Hyalurouidase),可以溶解組織基質(zhì)中的透明質(zhì)酸，有利于細菌和細菌毒素在組織間的擴散、葡萄球菌A蛋白(staphylococcalproteinA,SPA)，存在于大多數(shù)金黃色葡萄球菌細胞壁上的一種蛋白抗原、所有人源株都含有5PA,動物源株的則較少見.SPA為一種單鏈多膚，與膚聚糖共價結(jié)合于細菌的細胞壁上，它能與人及幾乎所有的哺乳動物的免疫球蛋白的Fc片段結(jié)合、SPA與IgG結(jié)合形成的復合物在機體內(nèi)生物作用，如具趨化性、抵抗吞噬細胞的吞噬、損傷血小板、促進細胞分裂和引發(fā)過敏反應等、除上述毒力因子外，還有磷酸酶、脂酶、卵磷脂酶等yo}06.2鏈球菌(Streptococcus)鏈球菌也是引起奶牛乳房炎的主要致病菌之一。其中無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)、停乳鏈球菌(Streptococcus咖}galactiae)、乳房鏈球菌(Streptococcusuberis)以及化膿鏈球菌(Streptococcuspyogen)的感染在奶牛中比較常見。鏈球菌的抗原結(jié)構(gòu)復雜，包括屬特異、型特異、群特異三種抗原:(1)屬特異性抗原，即核蛋白抗原，又稱P抗原;(2)型特異，又稱表面抗原，是位于多糖抗原之外的蛋白質(zhì)抗原。A群鏈球菌具有M,R,T等蛋白質(zhì)抗原，M抗原與致病性及免疫原性有關，非A群鏈球菌有的具有類M蛋白。(3)群特異性抗原，又稱C抗原，是存在于鏈球菌細胞壁中的多糖成分，其抗原決定簇為氨基糖類。蘭氏分類即以此為基礎，用大寫英文字母表示，目前鏈球菌已確定20個血清群。蘭氏分群，無乳鏈球菌為B群，停乳鏈球菌為C群，乳房鏈球菌不能分型。致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素和酶，可致人和動物多種疾病。鏈球菌溶血素(Streptolysin)，根據(jù)對氧的敏感性分為溶血素O(streptolysinO,SLO)和溶血素S(streptolysinS,SLS)oSLO為A,C和G群的一些菌株所產(chǎn)生，是一種含硫琉基的蛋白質(zhì)，對氧敏感，遇氧硫琉基被氧化即失去活性。SLO對心肌有較強的毒性作用，也能破壞中性白細胞、巨噬細胞和神經(jīng)細胞。各群鏈球菌產(chǎn)生的SLO的抗原性相同。SLS也多由A,C和G群等鏈球菌產(chǎn)生，是含糖的小分子膚，對氧穩(wěn)定，無抗原性，對酸和熱敏感，不易保存，溶血作用比SLO慢，呈p溶血。SLS也能破壞白細胞、血小板等。鏈球菌的不同致病菌株，還可產(chǎn)生鏈激酶(Streptoxinase,又名溶纖維蛋白酶)，鏈道酶＜Streptodornase，又名鏈球菌脫氧核搪核酸酶)，透明質(zhì)酸酶等，其性質(zhì)和作用與葡萄球菌的酶類類似yob03大腸桿菌(Eschericheacoli大腸桿菌是一種兼性厭氧的革蘭氏陰性桿菌。其抗原主要分O,.K,H三種，他們是本菌血清型鑒定的物質(zhì)基礎。迄今，己確定的大腸桿菌O抗原有173種，K抗原有80種，H抗原有56種。O抗原是S型菌的一種耐熱菌體抗原，它的抗原特異性決定于LPS的特異多糖側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)?當S型菌體丟失該部分結(jié)構(gòu)時，即變成R型菌，O抗原也隨之丟失.每一菌株只含有一種O抗原.K抗原是菌體表面的一種熱不穩(wěn)定抗原，多存在于被膜或英膜中，個別位于菌毛中。根據(jù)耐熱性的不同，K抗原又分成L,A和B三型。一個菌株可含有1-2種不同的K抗原。在80種K抗原中，除K88和K99是兩種蛋白抗原外，其于均屬于多糖K抗原。H抗原是一種不耐熱的鞭毛抗原，每一種有動力的菌株僅含有一種H抗原，且無兩相變異。無鞭毛菌種或丟失鞭毛的變種則不含H抗原。H抗原能刺激機體產(chǎn)生高效價的凝集抗體。大腸桿菌的血清可能很多，但致病性大腸桿菌的血清型是有限的。根據(jù)毒力因子與發(fā)病機制的不同，Gyles認為與動物疾病有關的病原性大腸桿菌可分為五類:產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(EnterotoxigenicE.coli,ETEC)，產(chǎn)類志賀毒素大腸桿菌(Shiga-liketoxigenicE.coli,SLTEC)，腸致病性大腸桿菌(EnteropathogenicE.coli,EPEC),敗血性大腸桿菌(SepticaemicE.coli,SEPEC)及尿道致病性大腸桿菌(LJropathogenicE.coli,UPEC)。其中研究最清楚的是前兩類，主要毒力因子包括腸毒素、特殊菌毛或貓附因子、類志賀毒素等toola7奶牛隱性乳房炎的檢測方法臨床型乳房炎癥狀明顯，根據(jù)乳汁和乳房的變化就可作出診斷。隱性乳房炎無臨床癥狀，乳汁也無肉眼可見變化，但乳汁的體細胞數(shù)、導電率、NAGase酶和pH值與正常乳不同，還出現(xiàn)炎癥因子。通過這些指標的檢測，可以作出診斷。此外，還通過病原的檢測，從病原學方面作出診斷.1體細胞記數(shù)體細胞數(shù)}(somaticcellcounts,SCC)是廣泛應用于評價奶牛各乳區(qū)和奶牛健康狀況的一種重要指標［30,39.41］。乳房炎即乳腺出現(xiàn)炎癥.乳中的體細胞主要是白細胞，包括淋巴細胞、PMN和M。正常牛乳中含有一定數(shù)量SCC，通常細胞數(shù)童少于100,000個/mloPMN在正常乳中的所占比例較少(12%)，但在乳房炎癥反應過程中，PMN變成主要類型細胞，超過90%的細胞是PMNt3},4}1oHarmon等認為［t411，影響牛群和個體SCC的主要因素是乳腺內(nèi)感染。SCC的顯著升高是因為局部感染過程中吸引了大t的PMN進入乳腺，年齡、泌乳期、季節(jié)、應激等與乳腺健康無關的因素，對SCC沒有直接或顯著的影響。因此，SCC達到200,000個//ml或更高時，就可認為奶?；加须[性乳房炎。乳汁體細胞計數(shù)的方法可分為體細胞直接計數(shù)和間接檢驗法.直接記數(shù)法有白細胞分類記數(shù)刻度管檢驗法、直接顯微鏡細胞計數(shù)法、電子熒光細胞計數(shù)法、體細胞自動計數(shù)儀計數(shù)等。目前，利用電腦技術(shù)，體細胞直接記數(shù)已完全自動化，可快速大t完成乳汁中體細胞記數(shù)工作［tsl0體細胞間接計數(shù)由于使用方便、簡單，是目前使用較廣泛的一種隱性乳房炎檢測法。國外使用較多的體細胞間接計數(shù)法是CMT,其原理是乳汁中的體細胞在表面活性劑和堿性物質(zhì)的作用下，脂類物質(zhì)乳化，細胞破裂而釋放出DNA，使乳汁產(chǎn)生沉病菌抗體，通過檢測這些物質(zhì)即可作出診斷。ELISA在檢測抗原物質(zhì)上特異性好，靈敏度高，是較為常用的檢測與鑒定特定病原或疾病的方法。在檢測乳房炎及其致病菌上，國外己有不少報道，如檢測金黃色葡萄球菌、鏈球菌、支原體、炎癥反應抗原等[40,s6,s9,61]8奶牛乳房炎的防治奶牛的泌乳是周期性的，乳房炎又可分為幾種不同類型，因此，對乳房炎的防治要根據(jù)泌乳周期的不同階段和乳房炎的類型，應采取相應的防治措施?？偟脑瓌t是殺滅已侵入乳房的病原菌，防治新的病原菌侵入，減輕或消除乳房的炎癥癥狀，增強奶牛對病原生物的抵御力[5]。防治乳房炎的藥物總的可分為四大類，即抗生素類、中草藥、疫苗、維生素及微量元素。8.1臨床型乳房炎以治為主，殺滅侵入乳房的病原菌和消除炎性癥狀.由于臨床乳房炎對奶牛損傷大，可導致全身癥狀，需要迅速的療效，常采用抗生素治療，有的也用磺胺類和吠喃類藥。病情嚴重的還配合進行全身治療。為避免病原菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性和抗生素在乳中殘留，近年來研制復方中草藥進行治療，效果也較好[[s]08.2隱性乳房炎以防為主，防治結(jié)合。預防病原菌侵入乳房，即使侵入也能很快殺滅.常采取以下兩項措施預防:(1)乳頭藥浴。擠奶結(jié)束后乳頭管擴約肌尚未收縮，病原體極易從此侵入乳房。因此，擠奶后，應立即用藥液漫泡或噴灑乳頭，以殺滅附著在乳頭孔周圍和乳頭管內(nèi)的病原體。據(jù)報道，僅此一項就可使乳房新感染減少50%左右。有試驗表明，擠奶前后都藥浴，比僅在擠奶后藥浴的效果更好.藥浴的藥液，要求殺菌力強，刺激性小，性能穩(wěn)定，價廉易得.(2)乳頭保護膜.乳房炎的主要感染途徑是乳頭管，擠奶后將乳頭管封閉，防止病原菌侵入擴也是預防乳房炎得一種有效途徑。保護膜通氣性好，對皮膚沒有刺激性，不僅能保護乳頭管不被病原體侵入，對乳頭表皮附著的病原菌還有固定和殺滅作用[s}.對于患病奶牛，應及時隔離治療，防治其成為傳染源。為了防止病原菌產(chǎn)生耐藥性和降低抗生素在乳中殘留，近年來，中草藥在治療隱性乳房炎上應用越來越普遍[tz]O8.3干奶期預防干奶期是奶牛泌乳周期的一個重要階段，特別對乳房健康管理來講，干奶期對許多軀體系統(tǒng)，包括乳腺，是解剖和生理上的一次重要調(diào)整。乳房在干奶期要經(jīng)過三個不同的階段，即自動退化期、退化穩(wěn)定期、和生乳期。自動退化期是乳房自動停乳的過程，通常要30天左右，這一階段是出現(xiàn)新感染的最危險時期，尤其是停奶后的頭三周.原因是在此期間乳頭部附著的菌群、乳頭管內(nèi)細菌的生存能力、乳頭管對細菌的滲透性及乳房內(nèi)防御機能都發(fā)生了變化，有利于細菌的侵入和感染。退化穩(wěn)定期完全千奶，約為2周.這一時期乳頭管收縮，乳房內(nèi)抗菌物質(zhì)增加，細菌的滲透和生存性降低。生乳期為產(chǎn)犢前約2周，乳房內(nèi)白細胞吞噬能力降低，乳房開始充乳，乳頭管擴張，甚至漏奶，為病原菌的侵入提供了條件，增加了感染的危險。然而，干奶期是治療乳房炎的最佳時期。干奶期間，藥物在乳房內(nèi)作用的時間長，濃度高而分布均勻，一般可獲得治療良好的療效.因此，干奶期治療，對減少下一泌乳期乳房炎發(fā)病率，提咼奶產(chǎn)量都有顯著的作用[s,m]08.4奶牛乳腺的藥理學機制和抗生素治療自從20世紀40年代抗生素問世以來，抗生素一直是控制奶牛乳房炎的基本藥物。但人們也認識到單靠抗生素不能從根本上解決奶牛乳房炎問題。因為無論全身或是乳房內(nèi)用藥都很難使乳汁內(nèi)抗生素達到有效濃度。特別是金黃色葡萄球菌等微生物可以寄生在細胞內(nèi)，或在抗生素治療后形成L一型細菌，它們在標準培養(yǎng)荃不生長，卻可繼續(xù)存在，慢性感染乳房。而且在乳房炎治療中，體外藥敏實驗結(jié)果與臨床療效相關性很差，其原因主要有兩個方面:一是通常的藥敏試驗是在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中進行的，不能模擬細菌在感染部位的真實情況，乳房中的病原菌通常生長緩慢，對抗菌藥物的敏感性也相對較低，同時抗菌藥物與乳汁混合時其效能往往降低[26].二是依據(jù)體外藥敏試驗選用的藥物往往缺乏藥動學資料。此外，組織腫脹及乳小管被炎癥碎片阻塞也可導致抗生素治療失敗。但從根本上講，抗生素失敗的原因應主要歸咎于由乳腺特殊生理結(jié)構(gòu)形成的藥理學和藥動學機制[25]08.4.1全身給藥全身給藥時，藥物必須能有效地從血液進入乳腺，才能清除乳腺感染。目前最常用的評價方法是測定乳中的藥物濃度.藥物由血液向乳汁中的有效轉(zhuǎn)移受4個因素的影響[[}0]:(1)藥物的脂溶性。脂溶性好的藥物易通過血乳屏障進入乳汁中。正常乳汁的pH值介于6.5-r6.8之間，而血液的pH值是7.4。血?乳的這種pH梯度有利于有機堿類藥物如紅霉素、螺旋霉素等從血液轉(zhuǎn)運至乳中，這些大環(huán)內(nèi)醋類抗菌藥物因其具有良好的的脂溶性很容易通過血乳屏障，并在乳中離子化后產(chǎn)生聚集現(xiàn)象。脂溶性差的抗菌藥物則較難通過血乳屏障，如氨基貳類藥物，有機酸類藥物如青霉素、頭抱菌素、磺胺類在正常情況下轉(zhuǎn)運至乳中更困難，乳中藥物濃度常低于血漿中的。但急性炎癥時血乳屏障的完整性受到破壞，乳汁pH值接近血液，此時，有機酸類藥物在乳中亦可達到較高的藥物濃度，如青霉素，在正常情況下全身使用后，血清中的濃度可比正常乳中高37倍，而在乳房炎時只高15倍[[s2]?同樣氨節(jié)青霉素全身使用后，血清中濃度比正常乳中高8倍，乳房炎時高6倍。因此，使用高劑f和無毒的藥物可提高此類藥物在乳房炎中的濃度。(2)藥物的電離度，低電離度的藥物易進入乳汁.藥物的電離化程度決定其在乳汁和血漿中的分配。青霉素的電離度很高，因此難以進入乳汁中，但未電離的血漿中的青霉素也可以進入乳汁。(3)藥物的蛋白結(jié)合性。與血漿蛋白、乳房內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合性差的藥物易進入乳汁。藥物從體循環(huán)進入乳中的轉(zhuǎn)運方式主要是被動擴散，非離子化、脂溶性高的游離型藥物容易通過血乳屏障而進入乳中。(4)藥物濃度梯度。藥物的濃度梯度作為促進藥物進入各組織及分泌物中的動力，隨藥物的劑量、給藥頻率和吸收率而變化.高劑量或給藥頻率越高，促進藥物進入身體各部分的梯度越大[52].此外，注射位置不同也可影響藥物的吸收和分布，靜脈注射可產(chǎn)生迅速的體內(nèi)分布和藥理效應，但易產(chǎn)生不良反應，肌注和皮下注射的藥物吸收速度與給藥部位的血流量成正比，都比靜注慢，其中以皮下注射的吸收速度最慢?？傊?，紅霉素、大環(huán)內(nèi)酷類、氟抓霉素、甲氧節(jié)旋、氧四環(huán)素和利福平在全身用藥后會在乳房內(nèi)有較高的分布。磺按類、青霉素G,氨節(jié)青霉素、鐵卡霉素和幾種頭抱菌素在全身用藥后在乳房內(nèi)有中等t或有限的分布?全身使用頭抱唾映、氨基糖昔類及多粘菌素B后在乳腺中只有少t的分布。雖然在青霉素使用時，為了達到較高的濃度，大幅度增加用量而不用擔心毒副作用，但這種做法在慶大霉素則十分危險，因為慶大霉素的毒幅作用較強，殘留時間較長[zs]e8.4.2乳房內(nèi)給藥乳房炎為抗菌藥物提供了一種獨特的給藥途徑一乳房內(nèi)給藥【川。盡管它常與全身給藥聯(lián)合應用，但因其用藥安全.，在治療乳房炎中是最常用的一種給藥途徑.乳房內(nèi)給藥可在乳汁中迅速達到很高的藥物濃度，對鏈球菌和某些葡萄球菌引致的感染通?？僧a(chǎn)生臨床治愈，但對金黃色葡萄球菌感染的細菌學治愈率較低.在急性乳房炎中，乳房內(nèi)給藥很難估計藥物在乳腺組織中的藥物動力學特征，特別是嚴重腫脹的乳房或炎癥產(chǎn)物的壓迫、阻塞乳導管系統(tǒng)，致使乳房內(nèi)灌注的藥物分布不均，從而導致治療失敗［36］，因此，對金黃色葡萄球菌這類組織侵襲菌，即使體外藥敏試驗對所選用的藥物敏感，細菌學治愈率也往往難以達到較好的水平。另外，乳房灌注還有引入新感染的危險［n］。乳房內(nèi)給藥也應考慮藥物的藥理學特性，如同全身用藥一樣，乳房內(nèi)注入抗生素也會造成藥物進入血漿。藥物進入血漿的轉(zhuǎn)運方式也是被動擴散，其進入體循環(huán)的程度亦取決于藥物的脂溶性、蛋白結(jié)合率、離子化程度，以及乳汁pH值、乳區(qū)的炎癥程度等因素.此外，乳房炎藥劑中加入油佐劑可減緩藥物分布率及由乳房的擴散，這對治療干奶牛的制劑特別有效，如使用單硬脂酸鋁或節(jié)星青霉素可防止抗生素由乳腺進入血漿?乳房內(nèi)給藥后,，按摩乳房可稍提高在乳腺內(nèi)的分布t。而對某些奶牛，特別是大乳房奶牛的乳房炎，提高用藥劑量十分必要，尤其首劑t應加倍?如同全身給藥一樣，乳房內(nèi)使用抗生素也與該藥物在乳腺內(nèi)的分布水平有關，如紅霉素、大環(huán)內(nèi)酷類、氨節(jié)青霉素、新生霉素和利福霉素等在乳房內(nèi)給藥有較好的分布青霉素G.氛灑西林、頭抱菌素、頭飽唾峽和氧四環(huán)素有中等量的分布;而氮墓糖昔類及多粘菌素B則很少分布［｝o］e無論是全身給藥還是局部乳房內(nèi)給藥，在體內(nèi)具有良好藥動學特征的藥物將有助于提高臨床效果【勿.藥物有效濃度在乳房內(nèi)持續(xù)時間的長短取決于藥物的理化性質(zhì)、給藥劑t、生物利用度、半衰期及病原菌對抗菌藥物的敏感性等因素.對大多數(shù)感染來說，維持長時間高的藥物濃度是較理想的，然而對金黃色葡萄球菌來說，抗菌藥物濃度與臨床效果可能不相關性。因為金黃色葡萄球菌不單能寄生在細胞外的乳汁中，而且還能存活在細胞（主要為M｝和PMN）內(nèi)?寄生在細胞內(nèi)的細菌不但妨礙了抗菌藥物治療，而且可成為再次感染的病原源［3z,3a］。因此，能進入細胞內(nèi)殺菌的藥物似乎更有效，但這類藥物非常少.利福霉素、環(huán)丙沙星在減少細胞內(nèi)金黃色葡萄球菌存活率方面顯示出較好的應用前景［55, 62］.在乳房炎的洽療中還有一個特點，即治療的臨床癥狀改替后仍孺繼續(xù)進行治療，因為細菌學治愈率比臨床治愈率低很多，部分原因就是過早停止治療。8.5中草藥治療奶牛乳房炎中獸醫(yī)稱乳房炎為乳痛，多是陽明經(jīng)實熱、厥陰肝經(jīng)淤滯和沖任二脈失調(diào)，使乳房脈絡不暢，乳汁積滯發(fā)熱腐敗而造成的炎性反應。中獸醫(yī)理論認為，乳頭屬厥陰肝經(jīng)，乳房屬陽明胃經(jīng)，乳房炎的防治應著眼于肝胃，應疏肝氣、散郁結(jié)、清胃熱、消腫毒、通脈絡I?］。當前對于中藥防治乳房炎的研究，重點是單味藥物和復方藥物對乳房炎的臨床療效.單味藥物中，已證明黃連、黃柏、當歸、廣獲香、魚腥草等對乳房炎致病菌均有較好的抑制作用［3,B,18］.復方藥的研制中，楊良存使用藕節(jié)、瓜萎、牛勞子為主藥自制藕節(jié)湯，對26例奶牛急性乳房炎進行治療，用藥2｝3劑后全部治愈［21］;普希英應用蒲公英、紫花地丁青皮、赤芍、木鰲子混合制成針劑，分別使用乳池注射、乳房涂擦結(jié)合生理鹽水洗乳池、肌肉注射三種給藥方式，對隱性乳房炎的療效率分別為:61.7%,88.9%和80.0%［IZ］e中草藥治療奶牛乳房炎，可避免產(chǎn)生耐藥菌株和乳中殘留抗生素，因而倍受關注.在中藥治療乳房炎中，蒲公英、金銀花和連翅是被普遍認可的藥物，其它使用較多的主要有:當歸、陳皮、青皮、紅花、甘草、丹參等。但中草藥仍存在作用機制不清、成分不明確的缺陷，魚需進一步研究發(fā)掘。8.6乳房炎疫苗由于乳腺的特殊生理和組織結(jié)構(gòu)，使得在利用疫苗免疫預防奶牛乳房炎上存在許多獨特性問題［28,32,39］.首先，乳房炎是乳腺抵抗侵入病原的一種免疫反應，也就是說，疾病與免疫反應是等同的。所以，特異性增強免疫命也可能使疾病惡化。其次，乳房內(nèi)儲存有大t的乳汁，這使乳腺內(nèi)抗感染?的免疫成分，包括Ig、淋巴細胞、M。和補體,被稀釋。乳腺分泌上皮的巨大表面也使乳腺的免疫監(jiān)視變得極為復雜，而且，乳中的成份，特別是脂類和酪蛋白，極大地削弱了乳腺和乳汁中抗原呈遞細胞的吞噬和殺菌活性?對許多乳房炎致病菌來說，乳汁是良好的培養(yǎng)基，這更抑制M}發(fā)揮其作用。再次，乳房炎是由多種不同病原引致的。最后，乳腺的自身位置使其即使在最好的管理和衛(wèi)生條件下也能接觸泥漿、糞尿，這使乳腺經(jīng)常處于環(huán)境性乳房炎病原的威脅下?由于這些內(nèi)在的困難，使得很難判定一種疫苗是成功還是失敗的。一種疫苗是否要具有降低乳房炎的嚴重性和發(fā)生率?預防新感染?消除已存在的感染?還是三者兼具?理想的疫苗應同時具有這三種功能。然而，結(jié)果遠非象其它成功疫苗所料的那樣好，因為大多乳房炎疫苗難以發(fā)揮應有的作用。盡管乳腺免疫接種存在困難，但在過去的十來年里，高效乳房炎疫苗的研制也取得了顯著進展［4］0金黃色葡萄球菌是一種常見的乳房炎致病菌，致病力較強，對乳房損傷大，可在乳腺和牛群間傳播，危害整個牛群。因此，金黃色葡萄球菌疫苗受到廣泛關注，有多種金黃色葡萄球菌疫苗的報道，如細菌素疫苗、類毒素疫苗、減毒活疫苗、英膜多糖疫苗等［53,65］,其中英膜多糖疫苗顯示出較好的保護效果。Watson等認為［6s］,pMN是消除金黃色葡萄球菌的主要作用因子，保護性免疫能增強PMN的吞噬能力，提高調(diào)理性和親細胞性IgG2抗體的濃度，而不是IgG:抗體的，是增強PMN活性所必須，保護性免疫加速了PMN對感染的反應。研究顯示［53,54］，英膜多糖和。或p毒素等表面抗原是提高金黃色葡萄球菌疫苗作用的重要保護性抗原成分。對鏈球菌乳房炎疫苗的研究沒有金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的多關于無乳鏈球菌，一些研究顯示，前感染和甚至是福爾馬林滅活的菌體超免疫也不能提供免疫保護［47］。但Rainard和Poutrel報道了一種稱之為”X”蛋白的疫苗免疫牛體，可產(chǎn)生調(diào)理性抗體［60］。至于乳房鏈球菌，前感染可提供免疫保護［42］，福爾馬林滅活乳房鏈球菌菌素直接注射牛乳房，