遺傳學(xué)-紅色面包霉的雜交課件

實驗十一紅色面包霉的雜交(5學(xué)時)一實驗?zāi)康?．了解紅色面包霉的生活周期與遺傳特征。2．通過紅色面包霉性狀遺傳的雜交實驗，觀察分析子囊孢子的分離和交換現(xiàn)象，了解著絲點作圖的原理與方法。3．理解三大遺傳規(guī)律的普遍實用性。1完整ppt實驗十一紅色面包霉的雜交(5學(xué)時)1完整ppt二實驗原理

紅色面包霉（Neurosporecrassa，2n=14）又稱粗糙鏈孢霉，屬于真菌門子囊菌綱，其營養(yǎng)體是由單倍體（n=7）多細胞菌絲體和分生孢子所組成。紅色面包霉的生活史包括無性和有性兩個世代，它的無性世代是通過菌絲的有絲分裂發(fā)育成菌絲體，或由分生孢子發(fā)芽形成新的菌絲體。而有性世代是由兩種不同生理類型（接合型）的菌絲或稱不同的接合型通過融合，或異型核結(jié)合形成二倍體的合子。合子形成后立即進行減數(shù)分裂產(chǎn)生4個單倍體的核，稱為四分孢子，然后四分孢子再經(jīng)一次有絲分裂形成8個子囊孢子，并以4對“雙生”，成線性排列在子囊中。2完整ppt二實驗原理2完整ppt3完整ppt3完整ppt4完整ppt4完整ppt紅色面包霉的賴氨酸缺陷型菌株(lys-)必須在基本培養(yǎng)基上補加賴氨酸才能生長，且生長緩慢遲熟，產(chǎn)生的子囊孢子呈灰色(-)；而野生型菌株(lys+)在基本培養(yǎng)基上可正常生長，產(chǎn)生的子囊孢子呈黑色(+)。根據(jù)子囊孢子的顏色黑色與灰色的比例或在基本培養(yǎng)基上孢子萌發(fā)與不萌發(fā)比例是否為1∶1可驗證分離定律。

5完整ppt紅色面包霉的賴氨酸缺陷型菌株(lys-)必須由于控制這一對相對性狀的基因在染色體上的位置離著絲點較遠，兩種親本雜交所產(chǎn)生的子囊果中將出現(xiàn)6種可能的子囊型，即非交換型子囊(1)、(2)和交換型子囊(3)、(4)、(5)、(6)，其子囊中子囊孢子“+”與“-”的比例為4∶4，可以以著絲點作為一個位點，估算基因lys+/-與著絲點之間的交換值，進行基因定位，該方法稱為著絲點作圖(centromeremapping)。但有時由于基因轉(zhuǎn)換也會出現(xiàn)一些異常比例，如(7)、(8)的6∶2、2∶6和(9)、(10)的5∶3、3∶5。6完整ppt由于控制這一對相對性狀的基因在染色體上的位置粗糙鏈孢霉lys+與lys-雜交子囊孢子的排列順序(1)、(2)為非交換型(3)、（4)、(5)、(6)為交換型子囊(7)、（8)、(9)、(10)是由轉(zhuǎn)換造成的異常比例7完整ppt粗糙鏈孢霉lys+與lys-雜交子囊孢子的排列順序(1)、(１交換未發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，由此８個子囊孢子在子囊中的排列方式為：（１）＋＋＋＋－－－－（２）－－－－＋＋＋＋２交換發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，則８個子囊孢子在子囊中的排列順序為：（３）＋＋－－＋＋－－（４）－－＋＋－－＋＋（５）－－＋＋＋＋－－（６）＋＋－－－－＋＋基因交換發(fā)生位置及子囊孢子的排列順序8完整ppt１交換未發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，由此８個子囊孢子交換值＝交換型子囊數(shù)×1/2交換型子囊數(shù)＋非交換型子囊數(shù)×100%

交換型子囊的出現(xiàn)是由于該基因與著絲點之間發(fā)生了一次染色體片段的交換，所以從交換型子囊數(shù)占總子囊數(shù)的百分比，可以計算出該基因與著絲點間的交換值。算式如下：9完整ppt交換值＝交換型子囊數(shù)×1/2交換三實驗材料紅色面包霉（N.crassa）野生型(lys+)菌株，賴氨酸缺陷型(lys-)菌株。四實驗用具、藥品顯微鏡、恒溫箱、高壓滅菌鍋、酒精燈、三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、載玻片、鑷子、接種針、解剖針、濾紙；5%次氯酸鈉、各種培養(yǎng)基

10完整ppt三實驗材料10完整ppt五實驗方法1．菌種活化

實驗前5～7d，把冰箱中保存的野生型和賴氨酸缺陷型菌株取出進行活化。在無菌條件下，用接種環(huán)挑取少量分生孢子或菌絲體分別接種在馬鈴薯培養(yǎng)基上，置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)5d左右，長好的菌株在菌絲上部可見紅粉狀孢子。11完整ppt五實驗方法11完整ppt2．接種雜交在無菌條件下(或用酒精燈火焰封口法)，用接種環(huán)挑取少許野生型和賴氨酸缺陷型的菌絲，接種在同一試管的雜交培養(yǎng)基上，貼上標(biāo)簽，28℃培養(yǎng)約2周后子囊成熟，一般當(dāng)子囊果呈棕黑色時即可進行觀察分析。觀察時期要掌握適當(dāng)，如偏早，雖有子囊但孢子尚未成熟都呈白色。如過遲，則全為黑色，對交換型和非交換型的分類帶來困難。12完整ppt2．接種雜交12完整ppt3．收集子囊果在長有棕黑色子囊果的試管中，加少量無菌水，搖動片刻，倒入空三角燒瓶中，加熱煮沸5min，以防分生孢子飛揚。4．鏡檢觀察取一載玻片，滴1～2滴5%次氯酸鈉溶液，然后用解剖針將子囊果挑出放到載玻片上(若子囊果上附著的分生孢子過多，可先在5%次氯酸鈉溶液中洗滌，再移到載玻片上)，用鑷子柄平壓或蓋上另一載玻片，用手指壓片，壓開子囊果，使子囊充分壓散而未破裂。13完整ppt3．收集子囊果13完整ppt用另一載玻片蓋上，用手指壓片，將子囊果壓破，置顯微鏡下（10×15倍）檢查，即可見到30-40個子囊。觀察子囊中子囊孢子的排列情況。這里用載玻片蓋上壓片而不用蓋玻片，是因為子囊果很硬，用蓋玻片壓，蓋玻片會破碎。也可在顯微鏡下用鑷子把子囊果輕輕夾破，擠出子囊。如發(fā)現(xiàn)30-40個子囊象一串香蔗一樣，可加一滴水，用解剖針把子囊撥開。此過程無需無菌操作，但要注意不能使分生孢子散出。觀察過的載玻片、用過的鑷子和解剖針等物都需放入50%的石碳酸中浸泡后取出洗凈，以防止污染實驗室。14完整ppt用另一載玻片蓋上，用手指壓片，將子囊果壓破，置顯微鏡下（10在顯微鏡下觀察記錄子囊孢子在子囊中的排列順序，將結(jié)果記入下表。紅色面包霉性狀遺傳雜交實驗結(jié)果子囊類型子囊數(shù)非交換型（1）＋＋＋＋――――（2）――――＋＋＋＋交換型（3）＋＋――＋＋――（4）――＋＋――＋＋（5）――＋＋＋＋――（6）＋＋――――＋＋合計其它類型15完整ppt在顯微鏡下觀察記錄子囊孢子在子囊中的排列順序，將結(jié)果記入下表六注意事項本實驗操作須嚴(yán)格消毒，防止污染，做到：1．實驗用過的接種針要過火滅菌；2．鑷子放入5%次氯酸鈉溶液中，浸泡5min后洗凈；3．用過的載玻片及玻璃器皿用5%石炭酸溶液浸泡后取出，沖洗擦干；4．不要的菌株和菌液須煮沸5min方可倒去。16完整ppt六注意事項16完整ppt七作業(yè)1．每組接種雜交一試管，待子囊果長成后進行觀察，按不同的子囊類型記數(shù)填入下表，并計算基因與著絲點間的交換值。2．分析紅色面包霉的子囊孢子分離和交換現(xiàn)象與高等植物的性狀分離和交換有什么不同，本實驗結(jié)果說明了什么？17完整ppt七作業(yè)17完整ppt時間安排：生工：4月12日，星期四，上午10：00：雜交4月26日，星期四，上午10：00：鏡檢。生技：4月12日，星期四，下午1：00：雜交4月26日，星期四，下午1：00：鏡檢。18完整ppt時間安排：18完整ppt實驗十一紅色面包霉的雜交(5學(xué)時)一實驗?zāi)康?．了解紅色面包霉的生活周期與遺傳特征。2．通過紅色面包霉性狀遺傳的雜交實驗，觀察分析子囊孢子的分離和交換現(xiàn)象，了解著絲點作圖的原理與方法。3．理解三大遺傳規(guī)律的普遍實用性。19完整ppt實驗十一紅色面包霉的雜交(5學(xué)時)1完整ppt二實驗原理

紅色面包霉（Neurosporecrassa，2n=14）又稱粗糙鏈孢霉，屬于真菌門子囊菌綱，其營養(yǎng)體是由單倍體（n=7）多細胞菌絲體和分生孢子所組成。紅色面包霉的生活史包括無性和有性兩個世代，它的無性世代是通過菌絲的有絲分裂發(fā)育成菌絲體，或由分生孢子發(fā)芽形成新的菌絲體。而有性世代是由兩種不同生理類型（接合型）的菌絲或稱不同的接合型通過融合，或異型核結(jié)合形成二倍體的合子。合子形成后立即進行減數(shù)分裂產(chǎn)生4個單倍體的核，稱為四分孢子，然后四分孢子再經(jīng)一次有絲分裂形成8個子囊孢子，并以4對“雙生”，成線性排列在子囊中。20完整ppt二實驗原理2完整ppt21完整ppt3完整ppt22完整ppt4完整ppt紅色面包霉的賴氨酸缺陷型菌株(lys-)必須在基本培養(yǎng)基上補加賴氨酸才能生長，且生長緩慢遲熟，產(chǎn)生的子囊孢子呈灰色(-)；而野生型菌株(lys+)在基本培養(yǎng)基上可正常生長，產(chǎn)生的子囊孢子呈黑色(+)。根據(jù)子囊孢子的顏色黑色與灰色的比例或在基本培養(yǎng)基上孢子萌發(fā)與不萌發(fā)比例是否為1∶1可驗證分離定律。

23完整ppt紅色面包霉的賴氨酸缺陷型菌株(lys-)必須由于控制這一對相對性狀的基因在染色體上的位置離著絲點較遠，兩種親本雜交所產(chǎn)生的子囊果中將出現(xiàn)6種可能的子囊型，即非交換型子囊(1)、(2)和交換型子囊(3)、(4)、(5)、(6)，其子囊中子囊孢子“+”與“-”的比例為4∶4，可以以著絲點作為一個位點，估算基因lys+/-與著絲點之間的交換值，進行基因定位，該方法稱為著絲點作圖(centromeremapping)。但有時由于基因轉(zhuǎn)換也會出現(xiàn)一些異常比例，如(7)、(8)的6∶2、2∶6和(9)、(10)的5∶3、3∶5。24完整ppt由于控制這一對相對性狀的基因在染色體上的位置粗糙鏈孢霉lys+與lys-雜交子囊孢子的排列順序(1)、(2)為非交換型(3)、（4)、(5)、(6)為交換型子囊(7)、（8)、(9)、(10)是由轉(zhuǎn)換造成的異常比例25完整ppt粗糙鏈孢霉lys+與lys-雜交子囊孢子的排列順序(1)、(１交換未發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，由此８個子囊孢子在子囊中的排列方式為：（１）＋＋＋＋－－－－（２）－－－－＋＋＋＋２交換發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，則８個子囊孢子在子囊中的排列順序為：（３）＋＋－－＋＋－－（４）－－＋＋－－＋＋（５）－－＋＋＋＋－－（６）＋＋－－－－＋＋基因交換發(fā)生位置及子囊孢子的排列順序26完整ppt１交換未發(fā)生在著絲點與lys＋／－基因之間，由此８個子囊孢子交換值＝交換型子囊數(shù)×1/2交換型子囊數(shù)＋非交換型子囊數(shù)×100%

交換型子囊的出現(xiàn)是由于該基因與著絲點之間發(fā)生了一次染色體片段的交換，所以從交換型子囊數(shù)占總子囊數(shù)的百分比，可以計算出該基因與著絲點間的交換值。算式如下：27完整ppt交換值＝交換型子囊數(shù)×1/2交換三實驗材料紅色面包霉（N.crassa）野生型(lys+)菌株，賴氨酸缺陷型(lys-)菌株。四實驗用具、藥品顯微鏡、恒溫箱、高壓滅菌鍋、酒精燈、三角燒瓶、試管、培養(yǎng)皿、載玻片、鑷子、接種針、解剖針、濾紙；5%次氯酸鈉、各種培養(yǎng)基

28完整ppt三實驗材料10完整ppt五實驗方法1．菌種活化

實驗前5～7d，把冰箱中保存的野生型和賴氨酸缺陷型菌株取出進行活化。在無菌條件下，用接種環(huán)挑取少量分生孢子或菌絲體分別接種在馬鈴薯培養(yǎng)基上，置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)5d左右，長好的菌株在菌絲上部可見紅粉狀孢子。29完整ppt五實驗方法11完整ppt2．接種雜交在無菌條件下(或用酒精燈火焰封口法)，用接種環(huán)挑取少許野生型和賴氨酸缺陷型的菌絲，接種在同一試管的雜交培養(yǎng)基上，貼上標(biāo)簽，28℃培養(yǎng)約2周后子囊成熟，一般當(dāng)子囊果呈棕黑色時即可進行觀察分析。觀察時期要掌握適當(dāng)，如偏早，雖有子囊但孢子尚未成熟都呈白色。如過遲，則全為黑色，對交換型和非交換型的分類帶來困難。30完整ppt2．接種雜交12完整ppt3．收集子囊果在長有棕黑色子囊果的試管中，加少量無菌水，搖動片刻，倒入空三角燒瓶中，加熱煮沸5min，以防分生孢子飛揚。4．鏡檢觀察取一載玻片，滴1～2滴5%次氯酸鈉溶液，然后用解剖針將子囊果挑出放到載玻片上(若子囊果上附著的分生孢子過多，可先在5%次氯酸鈉溶液中洗滌，再移到載玻片上)，用鑷子柄平壓或蓋上另一載玻片，用手指壓片，壓開子囊果，使子囊充分壓散而未破裂。31完整ppt3．收集子囊果13完整ppt用另一載玻片蓋上，用手指壓片，將子囊果壓破，置顯微鏡下（10×15倍）檢查，即可見到30-40個子囊。觀察子囊中子囊孢子的排列情況。這里用載玻片蓋上壓片而不用蓋玻片，是因為子囊果很硬，用蓋玻片壓，蓋玻片會破碎。也可在顯微鏡下用鑷子把子囊果輕輕夾破，擠出子囊。如發(fā)現(xiàn)30-40個子囊象一串香蔗一樣，可加一滴水，用解剖針把子囊撥開。此過程無需無菌操作，但要注意不能使分生孢子散出。觀察過的載玻片、用過的鑷子和解剖針等物都需放入50%的石碳酸中浸泡后取出洗凈，以防止污染實驗室。32完整ppt用另一載玻片蓋上，用手指壓片，將子囊果壓破，置顯微鏡下（10在顯微鏡下觀察記錄子囊孢子在子囊中