頭孢菌素類課件

Analysisofantibiotics第十六章抗生素類藥物的分析Analysisofantibiotics第十六章第一節(jié)概述第二節(jié)β-內酰胺類第三節(jié)氨基糖苷類第四節(jié)四環(huán)素類第五節(jié)高分子雜質檢查第一節(jié)概述第二節(jié)β-內酰胺類第三節(jié)氨基糖2第一節(jié)概述

生物在生命活動產生的，在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱1、化學純度較低3、穩(wěn)定性差：活潑基團常為活性中心2、活性組分易發(fā)生變異：菌株、發(fā)酵條件的改變同系物多異構體多降解物多二、特點一、定義（antibiotics）第一節(jié)概述生物在生命活動產生的，在低微濃度下即可對3β–內酰胺類：青霉素類、頭孢菌素類氨基糖苷類：鏈霉素、慶大霉素、依替米星四環(huán)素類：四環(huán)素、金霉素、土霉素大環(huán)內酯類：紅霉素、螺旋霉素、麥迪霉素多烯大環(huán)類：制霉菌素、兩性霉素B多肽類：多黏菌素、放線菌素三、分類β–內酰胺類：青霉素類、頭孢菌素類三、分類4四、質量分析鑒別檢查含量/效價測定理化方法微生物法水分pH值異常毒性熱原細菌內毒素降壓物質微生物法

理化方法：準確、專屬、操作簡便；但與臨床療效有偏差四、質量分析鑒別檢查含量/效價測定理化方法微5微生物法定義：系在適宜條件下，通過檢測抗生素對微生物的抑制作用，計算抗生素活性（效價）的方法。方法：管碟法與濁度法。特點：與臨床療效吻合，靈敏，結果直觀，適用范圍廣；但操作復雜費時，誤差大。微生物法定義：系在適宜條件下，通過檢測抗生素對微生物的抑制61、管碟法1、管碟法72、濁度法利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制作用，通過測定培養(yǎng)后的細菌濁度值的大小，比較標準品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的一種方法。2、濁度法利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制作8五、活性表示方法以效價單位表示(U，μg)指每ml或每mg樣品中含有某種抗生素的有效成分的多少。例如：1mg青霉素鈉=1670U1mg慶大霉素=590U五、活性表示方法以效價單位表示(U，μg)9第二節(jié)結構性質含量測定鑒別雜質檢查β-內酰胺類藥物的分析第二節(jié)結構含量測定鑒雜質檢查β-內酰胺類藥物的分析106-aminopenicillanicacid,簡稱6-APA青霉素類7-aminocephalosporanicacid,簡稱7-ACA頭孢菌素類氫化噻唑環(huán)氫化噻嗪環(huán)＊＊＊＊6-氨基青霉烷酸7-氨基頭孢菌烷酸一、結構＊12346-aminopenicillanicacid,青霉素類11青霉素(芐青霉素)(penicillins)氨芐西林阿莫西林青霉素類青霉素(芐青霉素)(penicillins)氨芐西林阿莫12頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢菌素類頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢菌素類13頭孢羥氨芐頭孢噻吩鈉頭孢菌素類頭孢羥氨芐頭孢噻吩鈉頭孢菌素類141、酸性:游離羧基，pKa2.5-2.8，酸性較強。堿金屬鹽水溶性好，有機堿鹽難溶于水。2、旋光性:手性C﹡﹡﹡﹡﹡二、性質1、酸性:游離羧基，pKa2.5-2.8，酸性較強。2153、UV青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構260nm4、β–內酰胺環(huán)不穩(wěn)定性：含水量、純度青霉素類氧化劑、金屬離子、溫度酸、堿、青霉素酶降解失效頭孢菌素類酸、堿、胺類β–內酰胺酶降解失效3、UV青霉素類：苯環(huán)取代基260nm4、β–內酰胺環(huán)不穩(wěn)定16青霉素的降解反應青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2青霉素的降解反應青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸17鑒別Identification(一)、色譜法（HPLC、TLC）(二)、光譜法（IR、UV）(三)、呈色反應

(四)、各種鹽的反應三、鑒別鑒別(一)、色譜法（HPLC、TLC）(二)、光譜法（18(三)呈色反應1）羥肟酸鐵反應——β–內酰胺環(huán)β–內酰胺類NH2OH·HClNaOH羥肟酸Fe3+H+顯色（紅、棕、褐）(三)呈色反應1）羥肟酸鐵反應——β–內酰胺環(huán)β–內酰胺類N192）茚三酮反應——α-氨基

茚三酮Δ

藍紫色2）茚三酮反應——α-氨基茚三酮藍紫色203）雙縮脲反應——β–內酰胺類堿性酒石酸銅紫色3）雙縮脲反應——β–內酰胺類堿性酒石酸銅紫色214）變色酸-硫酸反應H2SO4Δ

HCHO變色酸（縮合）顯色5）重氮苯磺酸反應——酚羥基（偶合）4）變色酸-硫酸反應H2SO4HCHO變色酸顯色5）重氮苯磺227）硫酸-甲醛反應(BP)青霉素鉀和青霉素鈉呈紅棕色(四)焰色反應——K+、Na+7）硫酸-甲醛反應(BP)青霉素鉀和青霉素鈉呈紅棕色(四)23雜質檢查PurityTest(一)、聚合物(二)、有關物質與異構體(三)、吸光度

(五)、結晶性三、雜質檢查

(四)、有機溶劑雜質檢查(一)、聚合物(二)、有關物質與異構體(三)24（一）、聚合物頭孢他啶中聚合物測定葡聚糖凝膠G-10為填充劑；流動相A為含3.5%硫酸銨的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，流動相B為水；流速為0.8ml/min；檢測波長為254nm。以流動相A為流動相，用0.1mg/ml藍色葡聚糖2000溶液進樣200l進行測定，理論板數(shù)應不低于900，拖尾因子在0.75～1.5。兩種流動相系統(tǒng)中藍色葡聚糖的保留時間比應在0.93～1.07之間。對照品溶液以流動相B為流動相，重復進樣200l，峰面積值的相對標準差應小于5.0%。1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗（一）、聚合物頭孢他啶中聚合物測定葡聚糖凝膠G252）溶液的制備樣品溶液進樣200l，以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200l注入液相色譜儀，以流動相B為流動相，記錄色譜圖3）測定對照品溶液：100g/ml的頭孢他啶溶液。樣品溶液：20mg/ml的頭孢他啶樣品溶液。4）結果判斷按外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得過0.3%2）溶液的制備樣品溶液進樣200l，以流動相A為26萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結構圖原理——“分子篩”萄聚糖凝膠原理——“分子篩”27頭孢菌素類課件28（二）、有關物質與異構體頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:?38）為流動相，流速1ml/min；檢測波長278nm。要求頭孢呋辛酯A、B異構體之間，頭孢呋辛酯A異構體與頭孢呋辛酯△3-異構體之間的分離度應大于1.5；理論板數(shù)按頭孢呋辛酯A異構體峰計算，應不低于1500（二）、有關物質與異構體頭孢呋辛酯中有關物292）異構體對照溶液的配制頭孢呋辛酯0.2mg/ml溶液60℃1小時頭孢呋辛酯△3異構體溶液頭孢呋辛酯E異構體溶液頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯E異構體流動相流動相紫外光照射＞24h2）異構體對照溶液的配制頭孢呋辛酯60℃頭孢呋辛酯△3異構體303）有關物質和異構體的檢查供試品溶液：0.25mg/ml的樣品溶液。對照溶液：2.5g/ml的樣品溶液。測定：取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果判斷：供試品溶液如顯雜質峰①E異構體峰面積不得大于對照溶液主峰面積之和(1.0%)②△3-異構體峰面積不得大于1.5倍(1.5%)③其余單個雜質峰面積的和不得大于3倍(3.0%)。④供試品溶液中任何小于對照品溶液主峰面積之和0.05倍的峰可忽略不計3）有關物質和異構體的檢查供試品溶液：0.25mg/ml的樣3140020600302010時間(min)峰高(mAU)65432113.95411.9192.401供試品色譜圖中A異構體峰的面積與A、B異構體峰的面積和之比應為0.48～0.55。BA△3-EE40020600302010時間(min)峰高(mAU)6532頭孢菌素類課件33（三）、UV（四）、有機溶劑（五）、結晶性第一法(偏光顯微鏡法)第二法(X射線粉末衍射法)青霉素鉀樣品280nmA<0.10（三）、UV（四）、有機溶劑34含量測定Assay(一)、碘量法(二)、汞量法(三)、酸堿滴定法

(五)、HPLC法四、含量測定

(四)、羥肟酸比色法含量測定(一)、碘量法(二)、汞量法(三)、酸堿滴定法(五35阿莫西林克拉維酸鉀片1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以磷酸鹽緩沖液-甲醇(95:5)為流動相流速為0.7ml/min檢測波長為220nm。系統(tǒng)適用性:阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應大于3.5阿莫西林克拉維酸鉀片1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性:362、測定法(外標法)

本品10片精密稱定精密稱取適量溶解，定容濾過續(xù)濾液供試品溶液阿莫西林0.8mg

/ml克拉維酸0.8mg/ml混合對照品溶液取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別計算供試品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。2、測定法(外標法)本品10片精密精密稱取適量溶37頭孢菌素類課件38復習題（一）、選擇題1、與化學藥品相比，不是抗生素特點的選項是A.化學純度較低B.同系物、異構體、降解物多C.活性組分易發(fā)生變異D.穩(wěn)定性差E、操作步驟多復習題（一）、選擇題1、與化學藥品相比，不是抗生素特點的選項392、以下選項中不是生物學法測定抗生素效價的特點的是

A、測定結果直觀B、方法靈敏度較低，檢品用量多

C、適用范圍廣D、誤差大E、操作步驟多2、以下選項中不是生物學法測定抗生素效價的特點的是

A、測定40A.6-氨基青霉烷酸B.7-氨基頭孢菌烷酸C.7-氨基青霉烷酸D.6-氨基頭孢菌烷酸E.以上都不是3、青霉素的母核是A.6-氨基青霉烷酸3、青霉素的母核是41A.6-氨基青霉烷酸B.7-氨基頭孢菌烷酸C.7-氨基青霉烷酸D.6-氨基頭孢菌烷酸4、頭菌孢素的母核是A.6-氨基青霉烷酸4、頭菌孢素的母核是425、青霉素和頭孢菌素都屬于哪類抗生素A氨基糖苷類Bβ-內酰胺抗生素類C四環(huán)素類D喹諾酮類E大環(huán)內酯類5、青霉素和頭孢菌素都屬于哪類抗生素A氨基糖苷類436、β-內酰胺抗生素類藥物分子結構中最不穩(wěn)定的部分是（

）A.噻唑環(huán)B.噻嗪環(huán)C.內酰胺環(huán)D.芳環(huán).E以上都不對6、β-內酰胺抗生素類藥物分子結構中最不穩(wěn)定的部分是（

447、頭孢菌素類的母核的簡稱為（

）A、6-APA

B、6-ACA

C、7-APA

D、7-ACAE、7-ASA7、頭孢菌素類的母核的簡稱為（

）A、6-AP458、青霉素分子中含幾個手性碳（

）。A、1

個

B、2個

C、3

個

D、4個

E、0個

8、青霉素分子中含幾個手性碳（

）。A、1

個

469、頭孢菌素分子中所含手性碳原子的數(shù)目為（）。A、1

個

B、2個

C、3個

D、4個

E、0個9、頭孢菌素分子中所含手性碳原子的數(shù)目為（）。A、1

4710、β-內酰胺類抗生素的紫外吸收是由于結構中（）A、6－APAB、6-APA的共軛結構側鏈C、羰基D、β-內酰胺環(huán)E、氫化噻唑環(huán)10、β-內酰胺類抗生素的紫外吸收是由于結構中（4811、無旋光性的藥物是A、四環(huán)素B、青霉素C、鹽酸麻黃堿D、乙酰水楊酸E、葡萄糖11、無旋光性的藥物是A、四環(huán)素49A含有手性碳，具有旋光性B分子中的環(huán)狀部分無紫外吸收，但其側鏈部分有紫外吸收C遇硫酸-甲醛試劑有呈色反應可供鑒別D具有堿性，可與無機酸形成鹽E.以上都不是12、青霉素不具有下列哪類性質（）12、青霉素不具有下列哪類性質（）5013、β-內酰胺類抗生素藥物具有的性質是A、氫化噻唑環(huán)的羥基的酸性B、β-內酰胺環(huán)的不穩(wěn)定C、手性碳原子D、B+CE、A+B+C13、β-內酰胺類抗生素藥物具有的性質是A、氫化噻唑環(huán)的羥基5114、青霉素具有下列哪類性質（）A、含有手性碳，具有旋光性B、分子中的環(huán)狀部分有強紫外吸收C、具有堿性，不能與無機酸形成鹽D、β-內酰胺為一穩(wěn)定環(huán)E、以上都不對14、青霉素具有下列哪類性質（）A、含有手性碳，具有5215、β-內酰胺類的鑒別反應

A硫酸-硝酸顯色反應

B變色酸硫酸顯色反應

C羥肟酸鐵反應

D還原碘的反應

E還原酒石酸銅的反應15、β-內酰胺類的鑒別反應

A硫酸-硝酸顯色反應

B5316、以下藥物不發(fā)生羥肟酸鐵呈色反應的是A.阿莫西林B.青霉素C.四環(huán)素D.頭孢氨芐E.以上都不對16、以下藥物不發(fā)生羥肟酸鐵呈色反應的是A.阿莫西林5417、青霉素的鑒別方法不包括有（）A紅外吸收光譜B紫外吸收光譜C羥肟酸鐵反應D與硫酸-甲醛試劑呈色反應E重氮化—偶合反應17、青霉素的鑒別方法不包括有（）A紅外吸收光譜5518、青霉素和頭孢菌素具有—CONH—結構，可利用下列哪些反應進行鑒別（）A、坂口反應B、印三酮反應C、三氯化鐵反應D、雙縮尿反應18、青霉素和頭孢菌素具有—CONH—結構，可利用下列哪些反56（二）、填空題1、抗生素的效價測定主要分為------和--------兩大類2、青霉素的分子結構中的母核為------------（二）、填空題1、抗生素的效價測定主要分為------和--57第三節(jié)結構性質含量測定鑒別雜質檢查氨基糖苷類藥物的分析第三節(jié)結構含量測定鑒雜質檢查氨基糖苷類藥物的分析58

氨基環(huán)醇+氨基糖→苷鏈霉素(Streptomycin)一、結構氨基環(huán)醇+氨基糖→苷鏈霉素(Streptomyc59巴龍霉素(paromomycin)D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺巴龍胺D－核糖巴龍霉糖巴龍二糖胺巴龍霉素(paromomycin)D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺60慶大霉素(gentamycin)絳紅糖胺(紫素胺)2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺(N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺)慶大霉素(gentamycin)絳紅糖胺(紫素胺)2-脫氧611）堿性（氨基）：臨床應用其硫酸鹽2）溶解度（氨基、羥基）：水溶性3）旋光性（糖）：多個手性碳4）穩(wěn)定性（苷）：強酸、堿條件均可水解二、性質1）堿性（氨基）：臨床應用其硫酸鹽二、性質621、茚三酮反應——α-氨基、羥基胺類茚三酮Δ

藍紫色鏈霉素慶大霉素三、鑒別1、茚三酮反應——α-氨基、羥基胺類茚三酮藍紫色鏈霉素三、鑒632、Molisch試驗紅紫色羥甲基糠醛

五碳糖或六碳糖結構藍紫色2、Molisch試驗紅紫色羥甲基糠醛五碳糖或六643、N-甲基葡萄糖胺反應（Elson-Morgan反應）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛H+紅色3、N-甲基葡萄糖胺反應（Elson-Morgan反應）乙酰65乙酰丙酮OH-對二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色乙酰丙酮OH-對二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色664、麥芽酚反應H+5、坂口反應——鏈霉胍特有反應鏈霉素OH-水解8-羥基喹啉NaOBr或α-萘酚鏈霉胍橙紅色鏈霉糖特有反應4、麥芽酚反應H+5、坂口反應——鏈霉胍特有反應鏈霉素OH-67坂口反應麥芽酚反應N-甲基葡萄糖胺反應坂口反應麥芽酚反應N-甲基葡萄687、色譜法6、硫酸鹽反應8、光譜法TLCHPLCUVIR7、色譜法6、硫酸鹽反應8、光譜法TLCHPLCUV691、鏈霉素中鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）的檢查來源：發(fā)酵中產生方法：TLC中的對照品法2、硫酸奈替米星中西索米星的檢查(TLC)4、慶大霉素C組分的測定四、雜質檢查3、硫酸鹽測定——EDTA滴定與HPLC

BP(2005)——HPLC-ECDCh.P——HPLC-ELSDUSP-------HPLC-UV1、鏈霉素中鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）的檢查來源：發(fā)酵中產生方701）色譜條件填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：水-冰醋酸-甲醇(25:5:70)配制的0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液檢測波長：330nm

系統(tǒng)適用性試驗：理論板數(shù)：按C2組分峰計算應不低于2000。分離度：C2a

峰和C2峰的分離度應符合要求。

1）色譜條件系統(tǒng)適用性試驗：712)測定法

A、0.65mg/ml的樣品溶液，精密量取10.0ml，置量瓶中，加異丙醇2ml與鄰苯二醛試液1.6ml，用異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，冷卻，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖B、慶大霉素標準品，同法測定。C組分的保留時間依次為：C1、C1a、C2a、C2。量取C1、C1a、C2a、C2的峰面積。3）結果C1應為25％～50％，C1a應為10％～35％，C2a＋C2應為25～50％

。

2)測定法3）結果72慶大霉素無紫外吸收，需衍生化處理后再進行HPLC測定。λmax=330nm慶大霉素無紫外吸收，需衍生化處理后再進行HPLC測定。λma734）討論1、柱效：以C2峰計算，理論板數(shù)應不低于2000，在此柱效下各組分之間才能達到規(guī)定的分離度。為此色譜柱做適當選擇。2、流動相：流動相極性適當控制，極性過強，出峰快，分離不佳。C1峰與衍生試劑等雜質峰難分析;極性過弱，出峰太慢。實驗表明，C2峰的保留時間控制在20min～30min較為適宜。3、衍生化試劑與衍生物的穩(wěn)定性：配制后不能久置，生成的衍生物不穩(wěn)定。一般避光保存可使用三天。4、離子對試劑濃度影響：離子對試劑濃度對慶大霉素OPA衍生物保留值有影響。4）討論1、柱效：以C2峰計算，理論板數(shù)應不低于2000，在74微生物檢定法HPLC法五、含量測定微生物檢定法五、含量測定75HPLC法HPLC-蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量

1、色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗：固定相：C18流動相：0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（84：16）檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器

依替米星和奈替米星混合對照溶液進樣：分離度＞1.2重復性（C2b）：RSD＞2.0%HPLC-蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量1、色譜條76HPLC蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量HPLC蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量772、測定：依替米星對照溶液：1.0mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml。樣品溶液：含依替米星約0.5mg/ml的溶液。取對照溶液20ul，進入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積對數(shù)值和濃度對數(shù)值計算回歸方程，r＜0.99。取樣品溶液：同法測定，計算依替米星含量。2、測定：依替米星對照溶液：1.0mg/ml、0.25m78復習題（一）、選擇題1、硫酸慶大霉素含量（效價）測定方法應采用

A.微生物檢定法B.四氮唑比色法C.汞量法D.酸性染料比色法E.柯柏反應比色法復習題（一）、選擇題1、硫酸慶大霉素含量（效價）測定792、慶大霉素無紫外吸收，美國藥典采用HPLC法測定C組分時采用什么方法檢出

A、三氯化鐵顯色法B、鄰苯二醛衍生化法C、硫醇汞鹽法

D、柱后衍生化法E、熒胺衍生化法2、慶大霉素無紫外吸收，美國藥典采用HPLC法測定C組分時采803、下列有關慶大霉素敘述正確的是（）A、在紫外區(qū)無吸收B、無茚三酮反應C、有麥芽酚反應D、慶大霉素是由慶大霉素C1、C2構成的復合物E、在230nm處有紫外吸收3、下列有關慶大霉素敘述正確的是（）A、在紫外區(qū)無吸815、慶大霉素C組分的測定采用紫外檢測器是利用AC組分的紫外吸收性質BC組分受紫外光激發(fā)熒光C鄰苯二醛衍生化后具紫外吸收DC組分與流動相作用具紫外吸收EC組分分離過程后具紫外吸收5、慶大霉素C組分的測定采用紫外檢測器是利用AC組分的826、下列反應屬于鏈霉素特征鑒別反應的是（）A、茚三酮反應B、麥芽酚反應C、有N-甲基葡萄糖胺反應D、硫酸-硝酸呈色反應E、三氯化鐵反應6、下列反應屬于鏈霉素特征鑒別反應的是（）A、茚三838、下列反應屬于鏈霉素特有鑒別反應的（）A、茚三酮反應B、麥芽酚反應C、坂口反應D、硫酸-硝酸呈色反應E、三氯化鐵反應8、下列反應屬于鏈霉素特有鑒別反應的（）A、茚三酮反84A、鏈霉素的堿性溶液加8—羥基喹啉、次溴酸鈉試液，即顯橙紅色B、鏈霉素的堿性溶液置水浴加熱，加硫酸鐵銨產生紫紅色

C、中性紅在青霉素V鉀的堿性溶液中顯橙色，加青霉素酶，溶液顏色變?yōu)榧t色

D、維生素B1在堿性溶液中被鐵氰化鉀氧化，轉溶于正丁醇中，顯藍色熒光

E、慶大霉素與茚三酮反應，顯藍紫色

9、麥芽酚反應

10、硫色素反應A、鏈霉素的堿性溶液加8—羥基喹啉、次溴酸鈉試液，即顯橙紅色8511、坂口反應為下列哪一藥物特有的鑒別反應（）。A.慶大霉素

B.鏈霉素C.青霉素

D.四環(huán)素E大環(huán)內酯類12、鏈霉胍的特有反應是（

）。A.茚三酮反應

B.N-甲基葡萄糖胺反應C.麥芽酚反應

D.坂口反應.E三氯化鐵反應11、坂口反應為下列哪一藥物特有的鑒別反應（）。12、鏈霉胍8613、鏈霉素特有反應是（

）。A.茚三酮反應

B.N-甲基葡萄糖胺反應C.麥芽酚反應

D.坂口反應.E三氯化鐵反應14、不是鏈霉素的鑒別方法為A、坂口（Sakaguchi）反應B、麥芽酚（Maltol）反應C、三氯化鐵反應D、茚三酮反應E、N-甲基葡萄糖胺反應13、鏈霉素特有反應是（

）。14、不是鏈霉素的鑒8715、以下是慶大霉素的鑒別反應A茚三酮試劑顯藍紫色

B三氯化鐵試劑顯紅棕色C羥肟酸鐵反應顯紅色D堿性苦味酸試劑顯紅色EKober反應，顯桃紅色15、以下是慶大霉素的鑒別反應A茚三酮試劑顯藍紫色

B三8816、具有氨基糖苷結構的藥物是A、鏈霉素B、青霉素鈉C、頭孢羥氨芐D、鹽酸美他環(huán)素E、羅紅霉素

16、具有氨基糖苷結構的藥物是89第四節(jié)結構性質含量測定鑒別雜質檢查四環(huán)素類藥物的分析第四節(jié)結構含量測定鑒雜質檢查四環(huán)素類藥物的分析90ABCD123456789101112一、化學結構ABCD123456789101112一、化學結構91與酸、堿均可成鹽，臨床多用鹽酸鹽強酸或強堿中溶解度↑

2、旋光性二、性質1、兩性：-OH→酸性N(CH3)2→堿性與酸、堿均可成鹽，臨床多用鹽酸鹽2、旋光性二、性質1924、不穩(wěn)定性3、UV和熒光

抗生素及其降解產物紫外照射下產生熒光4、不穩(wěn)定性3、UV和熒光抗生素及其降解產物紫外照射下93AApH2.0~6.0土霉素、多西環(huán)素不易發(fā)生差向異構化：氫鍵。四環(huán)素（金霉素）差向四環(huán)素（差向金霉素）A.差向異構化AApH2.0~6.0土霉素、多西環(huán)素不易發(fā)生差向異構化：氫94B.酸性脫水降解λmax=445nmλmax=435nmDDDCBBCBCB.酸性脫水降解λmax=445nmλmax=43595C.堿性脫水降解C.堿性脫水降解961、HPLC2、TLC(正相分配薄層色譜)EDTA→克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象3、IR4、UV5、顯色法濃硫酸三氯化鐵三、鑒別1、HPLC2、TLC(正相分配薄層色譜)EDTA→克服痕97200nm300nm400nmTC1.有關物質——HPLC2.雜質吸光度——UV268nm355nm四、雜質檢查五、含量測定鹽酸四環(huán)素-HPLC200nm300nm400nmTC1.有關物質——HPLC298第五節(jié)、高分子雜質的檢查生產過程貯存過程使用不當內源性(藥物自身聚合物)外源性(蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結合物)發(fā)酵過程二、分類一、高分子雜質定義系對藥品中分子量大于藥物本身的雜質的總稱控制重點第五節(jié)、高分子雜質的檢查生產過程內源性(藥物自身聚合物)外991.基本結構青霉素族多肽（青霉素噻唑多肽）聚合物母核參于反應側鏈參于反應頭孢菌素族與母核有關的N型聚合反應側鏈參與反應的L型聚合反應1.基本結構青霉素族多肽（青霉素噻唑多肽）聚合物母核參于反應1002.特點（1）生產工藝產生雜質：發(fā)酵中產生的任何蛋白及蛋白碎片均可帶入產品中，相同的蛋白或蛋白碎片上可以結合不同數(shù)目的藥物分子，形成青霉素噻唑多肽類雜質。（2）降解作用：有不同聚合度和不同機理聚合反應形成的聚合物，聚合物發(fā)生不同程度的降解作用。（3）以異構體存在樣品：同聚和異聚反應可同時發(fā)生。（4）高分子雜質的種類、數(shù)量與生產工藝密切相關（溶媒結晶、噴霧干燥）2.特點（1）生產工藝產生雜質：發(fā)酵中產生的任何蛋白及蛋白碎1013、雜質控制方法反相高效液相、離子交換色譜和凝膠色譜。葡聚糖凝膠SephadexC－10自身對照外標法3、雜質控制方法反相高效液相、離子交換色譜和凝膠色譜。自身對1021、四環(huán)素具有的性質是：復習題一、選擇題A.氧化性

B.僅有堿性C.僅有酸性

D.酸堿兩性E以上都不對1、四環(huán)素具有的性質是：復習題一、選擇題A.氧化性

103

2、四環(huán)素在弱酸性條件下的降解產物是A.差向四環(huán)素B.脫水四環(huán)素C.異四環(huán)素D.去甲四環(huán)素E.去甲氧四環(huán)素2、四環(huán)素在弱酸性條件下的降解產物是A.差向四環(huán)素104ThankYou!AddyourcompanysloganThankYou!AddyourcompanyslAnalysisofantibiotics第十六章抗生素類藥物的分析Analysisofantibiotics第十六章第一節(jié)概述第二節(jié)β-內酰胺類第三節(jié)氨基糖苷類第四節(jié)四環(huán)素類第五節(jié)高分子雜質檢查第一節(jié)概述第二節(jié)β-內酰胺類第三節(jié)氨基糖107第一節(jié)概述

生物在生命活動產生的，在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱1、化學純度較低3、穩(wěn)定性差：活潑基團常為活性中心2、活性組分易發(fā)生變異：菌株、發(fā)酵條件的改變同系物多異構體多降解物多二、特點一、定義（antibiotics）第一節(jié)概述生物在生命活動產生的，在低微濃度下即可對108β–內酰胺類：青霉素類、頭孢菌素類氨基糖苷類：鏈霉素、慶大霉素、依替米星四環(huán)素類：四環(huán)素、金霉素、土霉素大環(huán)內酯類：紅霉素、螺旋霉素、麥迪霉素多烯大環(huán)類：制霉菌素、兩性霉素B多肽類：多黏菌素、放線菌素三、分類β–內酰胺類：青霉素類、頭孢菌素類三、分類109四、質量分析鑒別檢查含量/效價測定理化方法微生物法水分pH值異常毒性熱原細菌內毒素降壓物質微生物法

理化方法：準確、專屬、操作簡便；但與臨床療效有偏差四、質量分析鑒別檢查含量/效價測定理化方法微110微生物法定義：系在適宜條件下，通過檢測抗生素對微生物的抑制作用，計算抗生素活性（效價）的方法。方法：管碟法與濁度法。特點：與臨床療效吻合，靈敏，結果直觀，適用范圍廣；但操作復雜費時，誤差大。微生物法定義：系在適宜條件下，通過檢測抗生素對微生物的抑制1111、管碟法1、管碟法1122、濁度法利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制作用，通過測定培養(yǎng)后的細菌濁度值的大小，比較標準品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的一種方法。2、濁度法利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制作113五、活性表示方法以效價單位表示(U，μg)指每ml或每mg樣品中含有某種抗生素的有效成分的多少。例如：1mg青霉素鈉=1670U1mg慶大霉素=590U五、活性表示方法以效價單位表示(U，μg)114第二節(jié)結構性質含量測定鑒別雜質檢查β-內酰胺類藥物的分析第二節(jié)結構含量測定鑒雜質檢查β-內酰胺類藥物的分析1156-aminopenicillanicacid,簡稱6-APA青霉素類7-aminocephalosporanicacid,簡稱7-ACA頭孢菌素類氫化噻唑環(huán)氫化噻嗪環(huán)＊＊＊＊6-氨基青霉烷酸7-氨基頭孢菌烷酸一、結構＊12346-aminopenicillanicacid,青霉素類116青霉素(芐青霉素)(penicillins)氨芐西林阿莫西林青霉素類青霉素(芐青霉素)(penicillins)氨芐西林阿莫117頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢菌素類頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢菌素類118頭孢羥氨芐頭孢噻吩鈉頭孢菌素類頭孢羥氨芐頭孢噻吩鈉頭孢菌素類1191、酸性:游離羧基，pKa2.5-2.8，酸性較強。堿金屬鹽水溶性好，有機堿鹽難溶于水。2、旋光性:手性C﹡﹡﹡﹡﹡二、性質1、酸性:游離羧基，pKa2.5-2.8，酸性較強。21203、UV青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構260nm4、β–內酰胺環(huán)不穩(wěn)定性：含水量、純度青霉素類氧化劑、金屬離子、溫度酸、堿、青霉素酶降解失效頭孢菌素類酸、堿、胺類β–內酰胺酶降解失效3、UV青霉素類：苯環(huán)取代基260nm4、β–內酰胺環(huán)不穩(wěn)定121青霉素的降解反應青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑酰基羥胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2青霉素的降解反應青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸122鑒別Identification(一)、色譜法（HPLC、TLC）(二)、光譜法（IR、UV）(三)、呈色反應

(四)、各種鹽的反應三、鑒別鑒別(一)、色譜法（HPLC、TLC）(二)、光譜法（123(三)呈色反應1）羥肟酸鐵反應——β–內酰胺環(huán)β–內酰胺類NH2OH·HClNaOH羥肟酸Fe3+H+顯色（紅、棕、褐）(三)呈色反應1）羥肟酸鐵反應——β–內酰胺環(huán)β–內酰胺類N1242）茚三酮反應——α-氨基

茚三酮Δ

藍紫色2）茚三酮反應——α-氨基茚三酮藍紫色1253）雙縮脲反應——β–內酰胺類堿性酒石酸銅紫色3）雙縮脲反應——β–內酰胺類堿性酒石酸銅紫色1264）變色酸-硫酸反應H2SO4Δ

HCHO變色酸（縮合）顯色5）重氮苯磺酸反應——酚羥基（偶合）4）變色酸-硫酸反應H2SO4HCHO變色酸顯色5）重氮苯磺1277）硫酸-甲醛反應(BP)青霉素鉀和青霉素鈉呈紅棕色(四)焰色反應——K+、Na+7）硫酸-甲醛反應(BP)青霉素鉀和青霉素鈉呈紅棕色(四)128雜質檢查PurityTest(一)、聚合物(二)、有關物質與異構體(三)、吸光度

(五)、結晶性三、雜質檢查

(四)、有機溶劑雜質檢查(一)、聚合物(二)、有關物質與異構體(三)129（一）、聚合物頭孢他啶中聚合物測定葡聚糖凝膠G-10為填充劑；流動相A為含3.5%硫酸銨的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，流動相B為水；流速為0.8ml/min；檢測波長為254nm。以流動相A為流動相，用0.1mg/ml藍色葡聚糖2000溶液進樣200l進行測定，理論板數(shù)應不低于900，拖尾因子在0.75～1.5。兩種流動相系統(tǒng)中藍色葡聚糖的保留時間比應在0.93～1.07之間。對照品溶液以流動相B為流動相，重復進樣200l，峰面積值的相對標準差應小于5.0%。1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗（一）、聚合物頭孢他啶中聚合物測定葡聚糖凝膠G1302）溶液的制備樣品溶液進樣200l，以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200l注入液相色譜儀，以流動相B為流動相，記錄色譜圖3）測定對照品溶液：100g/ml的頭孢他啶溶液。樣品溶液：20mg/ml的頭孢他啶樣品溶液。4）結果判斷按外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得過0.3%2）溶液的制備樣品溶液進樣200l，以流動相A為131萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結構圖原理——“分子篩”萄聚糖凝膠原理——“分子篩”132頭孢菌素類課件133（二）、有關物質與異構體頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:?38）為流動相，流速1ml/min；檢測波長278nm。要求頭孢呋辛酯A、B異構體之間，頭孢呋辛酯A異構體與頭孢呋辛酯△3-異構體之間的分離度應大于1.5；理論板數(shù)按頭孢呋辛酯A異構體峰計算，應不低于1500（二）、有關物質與異構體頭孢呋辛酯中有關物1342）異構體對照溶液的配制頭孢呋辛酯0.2mg/ml溶液60℃1小時頭孢呋辛酯△3異構體溶液頭孢呋辛酯E異構體溶液頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯E異構體流動相流動相紫外光照射＞24h2）異構體對照溶液的配制頭孢呋辛酯60℃頭孢呋辛酯△3異構體1353）有關物質和異構體的檢查供試品溶液：0.25mg/ml的樣品溶液。對照溶液：2.5g/ml的樣品溶液。測定：取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果判斷：供試品溶液如顯雜質峰①E異構體峰面積不得大于對照溶液主峰面積之和(1.0%)②△3-異構體峰面積不得大于1.5倍(1.5%)③其余單個雜質峰面積的和不得大于3倍(3.0%)。④供試品溶液中任何小于對照品溶液主峰面積之和0.05倍的峰可忽略不計3）有關物質和異構體的檢查供試品溶液：0.25mg/ml的樣13640020600302010時間(min)峰高(mAU)65432113.95411.9192.401供試品色譜圖中A異構體峰的面積與A、B異構體峰的面積和之比應為0.48～0.55。BA△3-EE40020600302010時間(min)峰高(mAU)65137頭孢菌素類課件138（三）、UV（四）、有機溶劑（五）、結晶性第一法(偏光顯微鏡法)第二法(X射線粉末衍射法)青霉素鉀樣品280nmA<0.10（三）、UV（四）、有機溶劑139含量測定Assay(一)、碘量法(二)、汞量法(三)、酸堿滴定法

(五)、HPLC法四、含量測定

(四)、羥肟酸比色法含量測定(一)、碘量法(二)、汞量法(三)、酸堿滴定法(五140阿莫西林克拉維酸鉀片1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以磷酸鹽緩沖液-甲醇(95:5)為流動相流速為0.7ml/min檢測波長為220nm。系統(tǒng)適用性:阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應大于3.5阿莫西林克拉維酸鉀片1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性:1412、測定法(外標法)

本品10片精密稱定精密稱取適量溶解，定容濾過續(xù)濾液供試品溶液阿莫西林0.8mg

/ml克拉維酸0.8mg/ml混合對照品溶液取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別計算供試品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。2、測定法(外標法)本品10片精密精密稱取適量溶142頭孢菌素類課件143復習題（一）、選擇題1、與化學藥品相比，不是抗生素特點的選項是A.化學純度較低B.同系物、異構體、降解物多C.活性組分易發(fā)生變異D.穩(wěn)定性差E、操作步驟多復習題（一）、選擇題1、與化學藥品相比，不是抗生素特點的選項1442、以下選項中不是生物學法測定抗生素效價的特點的是

A、測定結果直觀B、方法靈敏度較低，檢品用量多

C、適用范圍廣D、誤差大E、操作步驟多2、以下選項中不是生物學法測定抗生素效價的特點的是

A、測定145A.6-氨基青霉烷酸B.7-氨基頭孢菌烷酸C.7-氨基青霉烷酸D.6-氨基頭孢菌烷酸E.以上都不是3、青霉素的母核是A.6-氨基青霉烷酸3、青霉素的母核是146A.6-氨基青霉烷酸B.7-氨基頭孢菌烷酸C.7-氨基青霉烷酸D.6-氨基頭孢菌烷酸4、頭菌孢素的母核是A.6-氨基青霉烷酸4、頭菌孢素的母核是1475、青霉素和頭孢菌素都屬于哪類抗生素A氨基糖苷類Bβ-內酰胺抗生素類C四環(huán)素類D喹諾酮類E大環(huán)內酯類5、青霉素和頭孢菌素都屬于哪類抗生素A氨基糖苷類1486、β-內酰胺抗生素類藥物分子結構中最不穩(wěn)定的部分是（

）A.噻唑環(huán)B.噻嗪環(huán)C.內酰胺環(huán)D.芳環(huán).E以上都不對6、β-內酰胺抗生素類藥物分子結構中最不穩(wěn)定的部分是（

1497、頭孢菌素類的母核的簡稱為（

）A、6-APA

B、6-ACA

C、7-APA

D、7-ACAE、7-ASA7、頭孢菌素類的母核的簡稱為（

）A、6-AP1508、青霉素分子中含幾個手性碳（

）。A、1

個

B、2個

C、3

個

D、4個

E、0個

8、青霉素分子中含幾個手性碳（

）。A、1

個

1519、頭孢菌素分子中所含手性碳原子的數(shù)目為（）。A、1

個

B、2個

C、3個

D、4個

E、0個9、頭孢菌素分子中所含手性碳原子的數(shù)目為（）。A、1

15210、β-內酰胺類抗生素的紫外吸收是由于結構中（）A、6－APAB、6-APA的共軛結構側鏈C、羰基D、β-內酰胺環(huán)E、氫化噻唑環(huán)10、β-內酰胺類抗生素的紫外吸收是由于結構中（15311、無旋光性的藥物是A、四環(huán)素B、青霉素C、鹽酸麻黃堿D、乙酰水楊酸E、葡萄糖11、無旋光性的藥物是A、四環(huán)素154A含有手性碳，具有旋光性B分子中的環(huán)狀部分無紫外吸收，但其側鏈部分有紫外吸收C遇硫酸-甲醛試劑有呈色反應可供鑒別D具有堿性，可與無機酸形成鹽E.以上都不是12、青霉素不具有下列哪類性質（）12、青霉素不具有下列哪類性質（）15513、β-內酰胺類抗生素藥物具有的性質是A、氫化噻唑環(huán)的羥基的酸性B、β-內酰胺環(huán)的不穩(wěn)定C、手性碳原子D、B+CE、A+B+C13、β-內酰胺類抗生素藥物具有的性質是A、氫化噻唑環(huán)的羥基15614、青霉素具有下列哪類性質（）A、含有手性碳，具有旋光性B、分子中的環(huán)狀部分有強紫外吸收C、具有堿性，不能與無機酸形成鹽D、β-內酰胺為一穩(wěn)定環(huán)E、以上都不對14、青霉素具有下列哪類性質（）A、含有手性碳，具有15715、β-內酰胺類的鑒別反應

A硫酸-硝酸顯色反應

B變色酸硫酸顯色反應

C羥肟酸鐵反應

D還原碘的反應

E還原酒石酸銅的反應15、β-內酰胺類的鑒別反應

A硫酸-硝酸顯色反應

B15816、以下藥物不發(fā)生羥肟酸鐵呈色反應的是A.阿莫西林B.青霉素C.四環(huán)素D.頭孢氨芐E.以上都不對16、以下藥物不發(fā)生羥肟酸鐵呈色反應的是A.阿莫西林15917、青霉素的鑒別方法不包括有（）A紅外吸收光譜B紫外吸收光譜C羥肟酸鐵反應D與硫酸-甲醛試劑呈色反應E重氮化—偶合反應17、青霉素的鑒別方法不包括有（）A紅外吸收光譜16018、青霉素和頭孢菌素具有—CONH—結構，可利用下列哪些反應進行鑒別（）A、坂口反應B、印三酮反應C、三氯化鐵反應D、雙縮尿反應18、青霉素和頭孢菌素具有—CONH—結構，可利用下列哪些反161（二）、填空題1、抗生素的效價測定主要分為------和--------兩大類2、青霉素的分子結構中的母核為------------（二）、填空題1、抗生素的效價測定主要分為------和--162第三節(jié)結構性質含量測定鑒別雜質檢查氨基糖苷類藥物的分析第三節(jié)結構含量測定鑒雜質檢查氨基糖苷類藥物的分析163

氨基環(huán)醇+氨基糖→苷鏈霉素(Streptomycin)一、結構氨基環(huán)醇+氨基糖→苷鏈霉素(Streptomyc164巴龍霉素(paromomycin)D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺巴龍胺D－核糖巴龍霉糖巴龍二糖胺巴龍霉素(paromomycin)D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺165慶大霉素(gentamycin)絳紅糖胺(紫素胺)2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺(N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺)慶大霉素(gentamycin)絳紅糖胺(紫素胺)2-脫氧1661）堿性（氨基）：臨床應用其硫酸鹽2）溶解度（氨基、羥基）：水溶性3）旋光性（糖）：多個手性碳4）穩(wěn)定性（苷）：強酸、堿條件均可水解二、性質1）堿性（氨基）：臨床應用其硫酸鹽二、性質1671、茚三酮反應——α-氨基、羥基胺類茚三酮Δ

藍紫色鏈霉素慶大霉素三、鑒別1、茚三酮反應——α-氨基、羥基胺類茚三酮藍紫色鏈霉素三、鑒1682、Molisch試驗紅紫色羥甲基糠醛

五碳糖或六碳糖結構藍紫色2、Molisch試驗紅紫色羥甲基糠醛五碳糖或六1693、N-甲基葡萄糖胺反應（Elson-Morgan反應）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛H+紅色3、N-甲基葡萄糖胺反應（Elson-Morgan反應）乙酰170乙酰丙酮OH-對二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色乙酰丙酮OH-對二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色1714、麥芽酚反應H+5、坂口反應——鏈霉胍特有反應鏈霉素OH-水解8-羥基喹啉NaOBr或α-萘酚鏈霉胍橙紅色鏈霉糖特有反應4、麥芽酚反應H+5、坂口反應——鏈霉胍特有反應鏈霉素OH-172坂口反應麥芽酚反應N-甲基葡萄糖胺反應坂口反應麥芽酚反應N-甲基葡萄1737、色譜法6、硫酸鹽反應8、光譜法TLCHPLCUVIR7、色譜法6、硫酸鹽反應8、光譜法TLCHPLCUV1741、鏈霉素中鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）的檢查來源：發(fā)酵中產生方法：TLC中的對照品法2、硫酸奈替米星中西索米星的檢查(TLC)4、慶大霉素C組分的測定四、雜質檢查3、硫酸鹽測定——EDTA滴定與HPLC

BP(2005)——HPLC-ECDCh.P——HPLC-ELSDUSP-------HPLC-UV1、鏈霉素中鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）的檢查來源：發(fā)酵中產生方1751）色譜條件填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：水-冰醋酸-甲醇(25:5:70)配制的0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液檢測波長：330nm

系統(tǒng)適用性試驗：理論板數(shù)：按C2組分峰計算應不低于2000。分離度：C2a

峰和C2峰的分離度應符合要求。

1）色譜條件系統(tǒng)適用性試驗：1762)測定法

A、0.65mg/ml的樣品溶液，精密量取10.0ml，置量瓶中，加異丙醇2ml與鄰苯二醛試液1.6ml，用異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，冷卻，濾過，取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖B、慶大霉素標準品，同法測定。C組分的保留時間依次為：C1、C1a、C2a、C2。量取C1、C1a、C2a、C2的峰面積。3）結果C1應為25％～50％，C1a應為10％～35％，C2a＋C2應為25～50％

。

2)測定法3）結果177慶大霉素無紫外吸收，需衍生化處理后再進行HPLC測定。λmax=330nm慶大霉素無紫外吸收，需衍生化處理后再進行HPLC測定。λma1784）討論1、柱效：以C2峰計算，理論板數(shù)應不低于2000，在此柱效下各組分之間才能達到規(guī)定的分離度。為此色譜柱做適當選擇。2、流動相：流動相極性適當控制，極性過強，出峰快，分離不佳。C1峰與衍生試劑等雜質峰難分析;極性過弱，出峰太慢。實驗表明，C2峰的保留時間控制在20min～30min較為適宜。3、衍生化試劑與衍生物的穩(wěn)定性：配制后不能久置，生成的衍生物不穩(wěn)定。一般避光保存可使用三天。4、離子對試劑濃度影響：離子對試劑濃度對慶大霉素OPA衍生物保留值有影響。4）討論1、柱效：以C2峰計算，理論板數(shù)應不低于2000，在179微生物檢定法HPLC法五、含量測定微生物檢定法五、含量測定180HPLC法HPLC-蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量

1、色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗：固定相：C18流動相：0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（84：16）檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器

依替米星和奈替米星混合對照溶液進樣：分離度＞1.2重復性（C2b）：RSD＞2.0%HPLC-蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量1、色譜條181HPLC蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量HPLC蒸發(fā)光散射法測定硫酸依替米星含量1822、測定：依替米星對照溶液：1.0mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml。樣品溶液：含依替米星約0.5mg/ml的溶液。取對照溶液20ul，進入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積對數(shù)值和濃度對數(shù)值計算回歸方程，r＜0.99。取樣品溶液：同法測定，計算依替米星含量。2、測定：依替米星對照溶液：1.0mg/ml、0.25m183復習題（一）、選擇題1、硫酸慶大霉素含量（效價）測定方法應采用

A.微生物檢定法B.四氮唑比色法C.汞量法D.酸性染料比色法E.柯柏反應比色法復習題（一）、選擇題1、硫酸慶大霉素含量（效價）測定1842、慶大霉素無紫外吸收，美國藥典采用HPLC法測定C組分時采用什么方法檢出

A、三氯化鐵顯色法B、鄰苯二醛衍生化法C、硫醇汞鹽法

D、柱后衍生化法E、熒胺衍生化法2、慶大霉素無紫外吸收，美國藥典采用HPLC法測定C組分時采1853、下列有關慶大霉素敘述正確的是（）A、在紫外區(qū)無吸收B、無茚三酮反應C、有麥芽酚反應D、慶大霉素是由慶大霉素C1、C2構成的復合物E、在230nm處有紫外吸收3、下列有關慶大霉素敘述正確的是（）A、在紫外區(qū)無吸1865、慶大霉素C組分的測定采用紫外檢測器是利用AC組分的紫外吸收性質BC組分受紫外光激發(fā)熒光C鄰苯二醛衍生化后具紫外吸收DC組分與流動相作用具紫外吸收EC組分分離過程后具紫外吸收5、慶大霉素C組分的測定采用紫外檢測器是利用AC組分的1876、下列反應屬于鏈霉素特征鑒別反應的是（）A、茚三酮反應B、麥芽酚反應C、有N-甲基葡萄糖胺反應D、硫酸-硝酸呈色反應E、三氯化鐵反應6、下列反應屬于鏈霉素特征鑒別反應的是（）A、茚三1888、下列反應屬于鏈霉素特有鑒別反應的（）A、茚三酮反應B、麥芽酚反應C、坂口反應D、硫酸-硝酸呈色反應E、三氯化鐵反應8、下列反應屬于鏈霉素特有鑒別反應的（）