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1a1a2a2a3a3a課題目標(biāo)說(shuō)明植物組織培養(yǎng)的基本原理,學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù),進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn):植物組織培養(yǎng)過(guò)程中使用的無(wú)菌技術(shù)。課題難點(diǎn):植物組織培養(yǎng)過(guò)程中使用的無(wú)菌技術(shù)。4a課題目標(biāo)4a5a5a6a6a7a7a8a8a9a9a10a10a(一)旁欄思考題1.你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專(zhuān)題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽;蔗糖提供碳源,同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng),無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類(lèi)。11a(一)旁欄思考題11a12a12a13a13a14a14a15a15a16a16a17a17a18a18a19a19a20a20a21a21a2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎?答:教師可以安排學(xué)生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報(bào)成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格,沒(méi)有被雜菌污染。22a2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎?22a23a23a(一)對(duì)接種操作中污染情況的分析接種3~4d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率,分析接種操作是否符合無(wú)菌要求。24a(一)對(duì)接種操作中污染情況的分析24a(二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)更換培養(yǎng)基后愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。25a(二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化25a(三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照,填好結(jié)果記錄表,培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開(kāi)始就要求學(xué)生做好實(shí)驗(yàn)記錄,可以讓學(xué)生分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。26a(三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄26a(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無(wú)土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開(kāi)塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過(guò)渡幾天,等壯苗后再定植大田或進(jìn)行盆栽。學(xué)生可以在課后統(tǒng)計(jì)自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。27a(四)生根苗的移栽是否合格27a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng),如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄,因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。28a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。
29a答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
無(wú)菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無(wú)性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高,對(duì)無(wú)菌操作的要求非常嚴(yán)格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無(wú)菌技術(shù)包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行表面滅菌時(shí),一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。妥善處理被污染的培養(yǎng)物
將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內(nèi)進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,然后再打開(kāi)培養(yǎng)瓶,進(jìn)行清洗。
有毒藥品的用后處理一般應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專(zhuān)業(yè)部門(mén)處理。30a實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)無(wú)菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵妥善處植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展大自然中存在著許多有趣的植物無(wú)性生殖現(xiàn)象。例如,馬鈴薯的塊莖能夠發(fā)芽生根,秋海棠的葉片能夠長(zhǎng)成新植株。這些現(xiàn)象促發(fā)科學(xué)家去思考、解釋。1902年,有一位德國(guó)的植物學(xué)家大膽地預(yù)言:“植物的體細(xì)胞在一定條件下,可以如同受精卵一樣,具有潛在的發(fā)育成植株的能力?!?958年,美國(guó)科學(xué)家斯圖爾德(F.C.Steward)將胡蘿卜韌皮部的一些細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),由于細(xì)胞分化而最終發(fā)育成完整的新植株。這個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果在生物學(xué)界引起了很大的震動(dòng),它表明已經(jīng)高度分化的植物細(xì)胞仍然具有發(fā)育成完整植株的能力。已經(jīng)分化的細(xì)胞所具有的這種潛在發(fā)育能力稱(chēng)作細(xì)胞全能性。既然胡蘿卜的單個(gè)細(xì)胞能發(fā)育為完整植株,小塊的植物組織就更不應(yīng)該有什么問(wèn)題。此后很多年,科學(xué)家和技術(shù)人員將許多植物進(jìn)行了組織培養(yǎng),并獲得了成功。如今,植物組織培養(yǎng)已不再神秘莫測(cè),而發(fā)展成為常規(guī)技術(shù)。31a植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展31a32a1a33a2a34a3a課題目標(biāo)說(shuō)明植物組織培養(yǎng)的基本原理,學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù),進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn):植物組織培養(yǎng)過(guò)程中使用的無(wú)菌技術(shù)。課題難點(diǎn):植物組織培養(yǎng)過(guò)程中使用的無(wú)菌技術(shù)。35a課題目標(biāo)4a36a5a37a6a38a7a39a8a40a9a41a10a(一)旁欄思考題1.你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專(zhuān)題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?答:微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽;蔗糖提供碳源,同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng),無(wú)機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類(lèi)。42a(一)旁欄思考題11a43a12a44a13a45a14a46a15a47a16a48a17a49a18a50a19a51a20a52a21a2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎?答:教師可以安排學(xué)生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報(bào)成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過(guò)滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格,沒(méi)有被雜菌污染。53a2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎?22a54a23a(一)對(duì)接種操作中污染情況的分析接種3~4d后,在接種操作中被雜菌污染的培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率,分析接種操作是否符合無(wú)菌要求。55a(一)對(duì)接種操作中污染情況的分析24a(二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)更換培養(yǎng)基后愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽的比例和時(shí)間。56a(二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化25a(三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照,填好結(jié)果記錄表,培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開(kāi)始就要求學(xué)生做好實(shí)驗(yàn)記錄,可以讓學(xué)生分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。57a(三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄26a(四)生根苗的移栽是否合格生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷及根系。一般使用無(wú)土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前消毒,可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開(kāi)塑料薄膜后24h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過(guò)渡幾天,等壯苗后再定植大田或進(jìn)行盆栽。學(xué)生可以在課后統(tǒng)計(jì)自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。58a(四)生根苗的移栽是否合格27a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng),如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄,因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作。59a答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。
60a答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
無(wú)菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無(wú)性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高,對(duì)無(wú)菌操作的要求非常嚴(yán)格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。無(wú)菌技術(shù)包括培養(yǎng)基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行表面滅菌時(shí),一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。妥善處理被污染的培養(yǎng)物
將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內(nèi)進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,然后再打開(kāi)培養(yǎng)瓶,進(jìn)行清洗。
有毒藥品的用后處理一般應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專(zhuān)業(yè)部門(mén)處理。61a實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)無(wú)菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵妥善處植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展大自然中存在著許多有趣的植物無(wú)性生殖現(xiàn)象。例如,馬鈴薯的塊莖能夠發(fā)芽生根,秋海棠的葉片能夠長(zhǎng)成新植株。這些現(xiàn)象促發(fā)科學(xué)家去思考、解釋。1902年,有一位德國(guó)的植物學(xué)家大膽地預(yù)言:“植物的體細(xì)胞在一定條件下,可以如同受精卵一樣,具有潛在的發(fā)育成植株的能力?!?958年,美國(guó)科學(xué)家斯圖爾德(F.C.Steward)將胡蘿卜韌皮
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