E-鈣粘蛋白在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化中的作用

E-鈣粘蛋白在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化中的作用程紅新1楊曉萍1趙瑾2陶林2（1新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院一附院腎病科新疆石河子832008；2新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理科新疆石河子832002）摘要：目的：觀察單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型大鼠腎小管間質(zhì)纖維化（renaltubulointerstitialfibrosis,RIF）動(dòng)態(tài)進(jìn)展，研究該病理過(guò)程中E-鈣粘蛋白（E-cadherin,E-cd）、整合素連接激酶（intergrin-linkedkinase,ILK）的蛋白表達(dá)變化，探討E-鈣粘蛋白在腎小管間質(zhì)纖維化中的作用機(jī)制。方法：72只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=24)、假手術(shù)組(n=24)和UUO模型組(模型組，n=24)。三組大鼠分別于術(shù)后(模型組建模后)第1、3、7、14天分批處死(n=6)，留取手術(shù)側(cè)(模型組梗阻側(cè))腎臟組織。分別采用HE和Masson染色、免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR方法，評(píng)價(jià)腎小管間質(zhì)纖維化損傷程度并檢測(cè)腎臟組織中E-鈣粘蛋白、ILK的蛋白表達(dá)。結(jié)果：腎臟組織形態(tài)學(xué)顯示，與正常組及假手術(shù)組比較，梗阻時(shí)間越長(zhǎng)，模型組腎小管間質(zhì)損害程度越重，纖維化越明顯。免疫組織化學(xué)及RT-PCR顯示，隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，UUO模型組術(shù)后3天開(kāi)始腎臟組織E-cadherin的mRNA及其蛋白表達(dá)水平即出現(xiàn)下調(diào)，于第14天達(dá)最低值，ILK的蛋白表達(dá)則顯著增加，與同期正常對(duì)照組、假手術(shù)組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：在大鼠UUO腎纖維化形成過(guò)程中，E-cadherin的表達(dá)在腎損傷早期即開(kāi)始減少，并隨纖維化程度加重而逐步降低，表明E-cadherin與腎間質(zhì)纖維化關(guān)系密切，E-cadherin的表達(dá)減少促進(jìn)了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展，而ILK蛋白的表達(dá)增加在腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程中可能也發(fā)揮了重要作用。關(guān)鍵詞：UUO模型;E-鈣粘蛋白；整合素連接激酶；腎間質(zhì)纖維化THEROLEOFE-CADHERININUNILATERRALURETERALOBSTRUCTIONRATSWITHRENALTUBULOINTERSTITIALFIBROSISCHENGHong-xin,YANGXiao-ping,ZHAOJin;TAOLin(DepartmentofNephrology,theFirstAffiliatedHospitalofShiheziMedicalUniversity,Xinjiang832000,China)Abstract:ObjectiveToobservetheprogressionofrenaltubulointerstitialfibrosisinratunilateralureteralobstruction(UUO)models，investigatethechangesinexpressionofE-cadherin(E-cd)andintergrin-linkedkinase(ILK)duringthepathologicalcourse,andtoexplorethepathogenicroleofE-cdinrenaltubule-interstitiumfibrosis.Methodsseventy-twomaleSprague-Dawley(SD)ratswererandomlydividedintointonormalchtrolgroup（n=24）、sham-operationgroup(n=24)andUUOmodelgroup(modelgroup，n=24)．Ratsweresacrificed1，3，7and14dafteroperation(aftermodelestablishmentformodelgroup)(n=6foreachday)，andtherenaltissuesoftheoperatedside(obstructedsideformodelgroup)wereobtained．HEstaining，Massonstaining，immunohistochemicalstainingandreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)wereusedtoevaluatethedegreeofrenaltubulointerstitialfibrosisanddetecttheexpressionofE-cdandILKinrenaltissues．ResultsHistologicalobservationsofrenaltissuesrevealedthatthedegreeofrenaltubulointerstitialfibrosisofratsinmodelgroupwassignificantlyincreasedascomparedwiththenormalgroupandsham-operatedgroupatthe3thdayafterunilateralureteralobstruction,anditwasincreasedgraduallyaccompanyingwiththeincreasingofdegreeofobstruction.ItwasindicatedbyimmunohistochemicalstainingandRT-PCRthattheexpressionofmRNAandproteinofE-cdofrenaltissueinmodelgroupbegantodecreasewhencomparedwiththenormalgroupandsham-operatedgrouponthethirddayafterUUO(p<0.05),anditwasdecreasedgraduallyaccompanyingwiththeincreasingofdegreeofobstruction,andreachedtheminimumat14thday,andtheproteinexpressionofILKofrenaltissueinmodelgroupbegantoincreaseonthethirddayafterUUOwhencomparedwiththenormalgroupandsham-operatedgroup（p<0.05）.ConclusionIntheprocessoftherenalinterstitialfibrosisinUUOrats，theexpressionofE-cdwasdecreasedfromtheearlystageandpositivelyassociatedwithfibrosisstage，itwasdecreasedgraduallyaccompanyingwiththeincreasingofdegreeoffibrosis.ThechangeoftheexpressionofE-cdprobablypromotedtherenalfibrosis,andthehigherproteinexpressionofILKmaycontributetorenalinterstitialfibrosis.KeyWords:Unilateralureteralobstruction（UUO）;E-cadherin;ILK;Renalinterstitialfibrosi腎間質(zhì)纖維化（renalinterstitialfibrosis,RIF）是幾乎所有終末期腎病(ESRD)的最終轉(zhuǎn)歸,腎功能的惡化，很大程度上取決于腎小管間質(zhì)纖維化的程度[1]。腎間質(zhì)纖維化(RIF)發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,涉及了細(xì)胞、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等因素之間復(fù)雜的相互作用。E-鈣粘蛋白是一種鈣依賴性粘附分子,是組成腎小管上皮細(xì)胞間緊密連接的重要成分,它在保持細(xì)胞完整性和極性中起著重要作用。Surmeet等[2]在對(duì)慢性移植腎小管萎縮癥/間質(zhì)纖維化的研究中證實(shí)，細(xì)胞粘附的喪失及E-鈣粘蛋白表達(dá)下降在腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化疾病進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著的重要作用。我們應(yīng)用RT-PCR和免疫組化方法，檢測(cè)單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠模型腎小管間質(zhì)纖維化的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程中，E-鈣粘蛋白（E-cadherin,E-cd）的mRNA和蛋白表達(dá)變化及整合素連接激酶（intergrin-linkedkinase,ILK）的蛋白表達(dá)變化，旨在進(jìn)一步探討E-鈣粘蛋白與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系。1材料與方法1.1動(dòng)物分組和實(shí)驗(yàn)方法雄性8周齡SD大鼠72只，體重(200±12)g（新疆醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）。隨機(jī)分成正常對(duì)照組、假手術(shù)組和UUO模型組，每組24只。模型組采用10％水合氯醛0.3ml/1kg腹腔注射麻醉，在劍突下一橫指處，沿腹直肌外緣處切開(kāi)SD大鼠皮膚及肌層，進(jìn)入腹腔，在左側(cè)脊椎旁找到左側(cè)腎臟，在近左腎下極處游離并結(jié)扎SD大鼠左側(cè)輸尿管，術(shù)后逐層縫合肌肉、皮膚；假手術(shù)組僅行開(kāi)腹術(shù)游離左側(cè)輸尿管，不結(jié)扎；正常對(duì)照組不做任何處理。3組大鼠均常規(guī)喂養(yǎng)，并于造模后分別在第1、3、7、14天各處死每組6只大鼠,取左側(cè)腎臟分成2份,一份固定于10%的甲醛溶液,一份置于-80℃液氮中。1.2腎臟病理檢查常規(guī)石蠟包埋,切片厚3μm,行HE和Massion染色后光鏡下觀察腎臟組織病理改變。計(jì)算腎間質(zhì)纖維化指數(shù)(%):RIF指數(shù)=(纖維化面積/腎小管間質(zhì)總面積)×100,依據(jù)RIF指數(shù)進(jìn)行分級(jí)[3]。1.3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎臟組織E-鈣粘蛋白和ILK的蛋白表達(dá)按照即用型非生物素免疫組織化學(xué)EliVisionTMplus試劑盒(福建邁新生物技術(shù)公司)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作。兔抗鼠E-cadherin多克隆抗體，購(gòu)于英國(guó)Abcame公司。鼠抗人ILK單克隆抗體，購(gòu)于SantaCruz公司。由二位病理科醫(yī)師獨(dú)立觀察染色陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行結(jié)果判定，并計(jì)算其平均值：高倍鏡下（×400）隨機(jī)選5個(gè)小管間質(zhì)視野（避開(kāi)腎小球和大血管）觀察染色細(xì)胞的面積和強(qiáng)度，計(jì)算其平均值。染色面積：0分為無(wú)染色，1分為偶有染色，2分為局灶染色，3分為彌漫染色。染色強(qiáng)度：0分為無(wú)染色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕黃色?？偡e分1分為陰性，2-3分為弱陽(yáng)性，4-5分為陽(yáng)性，6分為強(qiáng)陽(yáng)性。1.4RT-PCR法檢測(cè)腎臟組織E-鈣粘蛋白的mRNA表達(dá)方法按照美國(guó)Ferments公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，引物設(shè)計(jì)由新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室（新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）設(shè)計(jì)，由上海生工生物技術(shù)服務(wù)公司合成。E-cadherin引物上游：5′—GTGTGTGACTGTGAAGG—3′，下游：5′—TCCAGGCCCCTGTGC—3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為278bp。條件如下:預(yù)變性95℃5min,循環(huán)1次；變性95℃30s,退火59℃45s,延伸72℃45s,循環(huán)35次；最終延伸72℃10min，循環(huán)1次。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)均采用±s表示,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。組間及同時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較采用方差分析，E-cadherin、ILK與腎間質(zhì)病變積分之間的相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.結(jié)果2.1腎臟病理改變光鏡觀察，與正常對(duì)照組各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，假手術(shù)組第1、3、7、14d的腎組織HE染色未見(jiàn)明顯異常，UUO模型組術(shù)后第1d在腎間質(zhì)及小血管周?chē)梢?jiàn)有少量炎性細(xì)胞呈小灶性浸潤(rùn)；術(shù)后第3d天腎間質(zhì)炎性細(xì)胞灶性浸潤(rùn)較前明顯增多，可見(jiàn)遠(yuǎn)端腎小管空泡變性，輕至中度擴(kuò)張；UUO術(shù)后第7d天可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞在腎間質(zhì)呈片狀浸潤(rùn)，腎小管呈中至重度擴(kuò)張，部分遠(yuǎn)端腎小管萎縮、管腔閉塞，小管上皮細(xì)胞腫脹變性,腎間質(zhì)水腫、增寬，呈現(xiàn)輕度纖維組織增生表現(xiàn)，UUO術(shù)后第14d天腎間質(zhì)彌漫性炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎間質(zhì)明顯增寬,其間可見(jiàn)大量纖維組織增生，腎間質(zhì)纖維化明顯。UUO組與正常對(duì)照組、假手術(shù)組相比，腎間質(zhì)損害評(píng)分有顯著性差異，見(jiàn)表1。表1：各組不同時(shí)間腎小管間質(zhì)損害程度評(píng)分(±s，RIF指數(shù))時(shí)間UUO組假手術(shù)組＃正常組§FP術(shù)后1天0.345±0.2970.064±0.1060.000±0.0005.9210.05術(shù)后3天1.720±0.3570.263±0.2080.000±0.00084.6550.05術(shù)后7天2.427±0.4310.634±0.2330.000±0.00058.2400.001術(shù)后14天2.878±0.1810.865±0.2430.000±0.00046.0250.000F66.56518.57———P0.0010.05———注：UUO組內(nèi)比，P<0.001，假手術(shù)組內(nèi)比：1d與3d，7d與14d比，P＞0.05，其余時(shí)間兩兩比較，P<0.05，正常組內(nèi)比，P>0.05。同時(shí)間的組間比較：各組術(shù)后1d之間比，P＞0.05，術(shù)后3d，假手術(shù)組與模型組比，P<0.05，術(shù)后7d和14d，假手術(shù)組與模型組比，P<0.001，術(shù)后3d、7d和14d，正常組與假手術(shù)組比，P＞0.052.2大鼠腎臟組織E-鈣粘蛋白和ILK的蛋白表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)正常組、假手術(shù)組均可見(jiàn)E-鈣粘蛋白在腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，在UUO術(shù)后第3d開(kāi)始，模型組小管上皮細(xì)胞E-cadherin表達(dá)面積即顯著減少(5.47±0.16)，并隨梗阻時(shí)間延長(zhǎng)、腎小管結(jié)構(gòu)的破壞其表達(dá)面積呈持續(xù)降低，與同期正常組、假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01，見(jiàn)表2，圖1。各時(shí)間點(diǎn)ILK在正常腎組織中沒(méi)有表達(dá)；在假手術(shù)組中，UUO術(shù)后第1、3、7d，ILK在少數(shù)周?chē)醒准?xì)胞浸潤(rùn)的腎小管上皮細(xì)胞中有微量的表達(dá)，可見(jiàn)少量黃染顆粒出現(xiàn)，在UUO術(shù)后第14d，可見(jiàn)ILK在空泡變性、管腔萎縮閉塞的腎小管上皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)區(qū)表達(dá)的黃染面積明顯增加，與正常對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），提示ILK的表達(dá)增加也可由手術(shù)損傷所致的炎癥反應(yīng)刺激引起。在UUO模型組中，UUO術(shù)后第3d開(kāi)始，模型組大鼠的腎間質(zhì)區(qū)以及變性、萎縮的腎小管上皮細(xì)胞胞漿中即可見(jiàn)大量黃染顆粒，ILK黃染面積與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），見(jiàn)表3，圖2。表2各組大鼠腎組織不同時(shí)間E-cadherin表達(dá)的比較（n=6,±s）組別術(shù)后1天術(shù)后3天術(shù)后7天術(shù)后14天F值P值正常組假手術(shù)組UUO組F值P值6.41±0.1176.43±0.1036.43±0.3200.0130.9876.41±0.1836.40±0.1415.47±0.16366.2450.006.31±0.1176.40±0.1414.33±0.163408.3150.006.23±0.1636.50±0.1792.47±0.1631073.2030.002.1480.645381.545——0.1260.5950.00——注:組內(nèi)比較：正常組、假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)之間比較，p>0.05，UUO模型組各時(shí)間點(diǎn)之間比較，p<0.01。組間比較：正常組與假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)之間比較，p>0.05，UUO模型組與正常組及假手術(shù)組3d、7d、14d比較，p<0.01。表3：各組腎小管間質(zhì)中ILK的表達(dá)(n=6,±s)時(shí)間NUUO組假手術(shù)組正常組FP術(shù)后1天60.284±0.2560.135±0.1610.100±0.1100.1530.05術(shù)后3天61.668±0.4310.166±0.1530.100±0.11063.8270.05術(shù)后7天62.373±0.7770.865±0.2450.100±0.11035.1740.05術(shù)后14天63.268±0.4111.102±0.2730.100±0.110182.3460.001F39.47631.400———P0.0010.001———注：uuo組內(nèi)比，3d與7d比，P<0.05,其余時(shí)間兩兩比較，P<0.001；假手術(shù)組內(nèi)比：1d與3d、7d與14d比，P>0.05，其余比，P<0.001。同時(shí)間組間比：1d，各組之間比P>0.05；3d和7d，uuo組與假手術(shù)組比，P<0.05；14d，各組之間比P<0.001。2.3大鼠腎臟組織E-鈣粘蛋白的mRNA表達(dá)從RT-PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖可看出從UUO術(shù)后第3天開(kāi)始，模型組電泳條帶亮度明顯降低。采用凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)伯樂(lè)BIO-RADGEL-DOC2000凝膠電泳成像分析軟件）進(jìn)行陽(yáng)性條帶灰度值分析，E-cadherin/GAPDH計(jì)算E-cadherinmRNA的相對(duì)表達(dá)量。UUO模型組E-cadherin的mRNA表達(dá)從術(shù)后第3天開(kāi)始下降，呈時(shí)間依賴性降低，至第14天降至最低值，與正常組及假手術(shù)組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01）,見(jiàn)表4，圖3-4。MarkerGAPDH正常假1d假3d假7d假14d手1d手3d手7d手14d圖3腎小管上皮細(xì)胞E-鈣粘蛋白mRNA的表達(dá)表4各組之間E-cadherinmRNA/GAPDH的表達(dá)（n=6）指標(biāo)組別1d3d7d14d正常組1.5921.5921.5921.592E-cadherin假手術(shù)組1.5801.5221.4591.376UUO組1.5481.1400.7640.2382.4相關(guān)性分析隨著腎間質(zhì)病理?yè)p害程度的加重，模型組中E-cadherin的mRNA和蛋白表達(dá)呈下降趨勢(shì)，E-cd的表達(dá)與腎間質(zhì)損害程度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.903，P<0.001），UUO術(shù)后模型組中ILK在腎間質(zhì)的蛋白表達(dá)呈持續(xù)上升趨勢(shì)，其與腎間質(zhì)損害程度均呈正相關(guān)（r=0.776，p<0.001）。E-cadherin和ILK的蛋白表達(dá)量之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.873，p<0.01）。3討論E-cadherin屬于鈣粘素族中一員,是維持腎小管上皮細(xì)胞極性和緊密連接的重要粘附分子。在胚胎腎臟發(fā)育過(guò)程中，胚胎期后腎間充質(zhì)細(xì)胞在形成腎單位過(guò)程中要經(jīng)歷間充質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(MET)，形成極性細(xì)胞，分化為成熟腎單位的各個(gè)部分，MET是腎臟形成中重要的生理活動(dòng)[4]。E-鈣粘蛋白對(duì)上皮細(xì)胞極性的維持,可能是通過(guò)上皮細(xì)胞膜表面的Na+K+ATP酶重排,使其限制性地分布在細(xì)胞膜的側(cè)面和基底面,而在間充質(zhì)細(xì)胞膜表面的Na+K+ATP酶分布則是均勻地散布在整個(gè)膜上,即在由間充質(zhì)細(xì)胞向上皮細(xì)胞的分化過(guò)程中,Na+K+ATP酶發(fā)生了重排,在此過(guò)程中,E-鈣粘蛋白起著極其重要的作用[5]。近年來(lái)對(duì)于E-cadherin的研究多限于腫瘤方面，關(guān)于E-cadherin與腎間質(zhì)纖維化關(guān)系的研究還少見(jiàn)報(bào)道。UUO引起的腎梗阻是誘導(dǎo)腎纖維化最經(jīng)典的模型[6]，在本實(shí)驗(yàn)研究中，我們制作了UUO大鼠模型，通過(guò)HE和Masson染色，我們觀察到術(shù)后14d時(shí)UUO模型組大鼠腎間質(zhì)彌漫性炎細(xì)胞浸潤(rùn);腎小管萎縮、管腔塌陷;腎間質(zhì)增寬、膠原纖維組織沉積，腎間質(zhì)纖維化十分明顯，證明我們實(shí)驗(yàn)用的UUO模型造模成功。在本實(shí)驗(yàn)中我們證實(shí)，腎間質(zhì)纖維化的UUO動(dòng)物模型中存在著E-cadherin的表達(dá)下調(diào)，在梗阻后第3天開(kāi)始，UUO模型組大鼠E-cadherinmRNA和蛋白表達(dá)水平即出現(xiàn)下降，且隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)其表達(dá)持續(xù)降低，在術(shù)后第14天時(shí)E-cadherin表達(dá)達(dá)最低值，僅見(jiàn)弱表達(dá)，這與yang等[7]學(xué)者的研究結(jié)果相似。我們觀察到在UUO術(shù)后一周內(nèi)即出現(xiàn)腎小管結(jié)構(gòu)改變，在UUO術(shù)后兩周時(shí)腎小管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)嚴(yán)重破壞，管腔塌陷、閉塞，這種改變與E-cadherin的表達(dá)變化相伴行，可以推測(cè)輸尿管梗阻引起的腎損傷早期即出現(xiàn)E-cadherin的表達(dá)下降，進(jìn)而引起腎小管上皮細(xì)胞膜表面的Na+K+ATP酶再次重排，即由限制性地分布在細(xì)胞膜的側(cè)面和基底面轉(zhuǎn)變?yōu)樵俅尉鶆虻厣⒉荚谡麄€(gè)膜上，導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生結(jié)構(gòu)改變，即由上皮細(xì)胞重向間充質(zhì)細(xì)胞分化，且隨著尿路梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，E-cadherin的表達(dá)進(jìn)行性降低，大量腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)殚g充質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞極性及粘附作用喪失，腎小管結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，腎小管上皮細(xì)胞從腎小管基底膜脫落并逐漸遷移至腎間質(zhì)，轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞，分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)沉積于腎間質(zhì)，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化（RIF）的發(fā)生與發(fā)展。E-cadherin與腎間質(zhì)損害程度呈顯著負(fù)相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)r=-0.903，P<0.001。ILK是一種絲氨酸－蘇氨酸蛋白激酶，參與調(diào)節(jié)整合素分子介導(dǎo)的細(xì)胞黏附、細(xì)胞形狀改變和基因表達(dá)等過(guò)程。近期的研究證明ILK是介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）和RIF的重要的胞內(nèi)信號(hào)分子。研究表明，在病理狀態(tài)下，腎間質(zhì)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）蛋白表達(dá)增高是EMT的標(biāo)志，即是腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)生的重要機(jī)制[8]。，國(guó)內(nèi)楊曉萍等[9]的研究證實(shí)，UUO模型術(shù)后ILK及α-SMA在腎小管間質(zhì)的表達(dá)均出現(xiàn)上調(diào)，并隨著腎間質(zhì)損害程度的加重而表達(dá)持續(xù)增加，ILK與α-SMA表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，證實(shí)有EMT現(xiàn)象,本實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，隨著小管間質(zhì)病變程度的加重，UUO模型組中ILK的表達(dá)面積進(jìn)行性增多，腎小管上皮細(xì)胞表型特異性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)則進(jìn)行性降低，從另一個(gè)側(cè)面映證了UUO模型術(shù)后EMT的發(fā)生。E-cadherin表達(dá)與ILK的表達(dá)量之間呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)r=-0.873，P<0.01，ILK的高表達(dá)導(dǎo)致了細(xì)胞粘附分子E-cadherin的表達(dá)減少,并進(jìn)一步導(dǎo)致了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展。我們相信對(duì)E-鈣粘蛋白作用機(jī)制和調(diào)控因素的進(jìn)一步研究,將有助于為臨床上干預(yù)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，預(yù)防和治療腎間質(zhì)纖維化提供新的理論依據(jù)。參考文獻(xiàn):[1]NangakuM．Mechanismsoftubulointerstitialinjuryinthekidney:finalcommonpathwaystoend-stagerenalfailure［J］．InternMed，2004，43(1):9－17．[2]SurmeetBedi,MD,AparnaVidyasagar,andArjangDjamali,MD.Epithelial-to-MesenchymalTransitionandChronicAllograftTubulointerstitialFibrosis.