小鼠ⅲ型膠原coliiielisa試劑盒說明書模板

小鼠皿型膠原（ColIII）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書產(chǎn)品編號:E-EL-M0316（本試劑盒僅供體外研究使用、 不用于臨床診斷!)聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品選用世界著名生產(chǎn)廠家的原料，采用專業(yè)ELISAkit生產(chǎn)技術制造。適用于體外定量檢測小鼠血清、 血漿、組織勻漿或細胞培養(yǎng)上清液中天然和重組ColIII濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分 ！如有疑問,請及時聯(lián)系伊萊瑞特生物科技有限公司。試劑盒組成名稱-中文名稱-英文規(guī)格保存條件ELISA酶標板MicroELISAPlate8X12/86X4°C凍干標準品ReferenceStandard2/1支*4C標準品&樣品稀釋液ReferenceStandard&SampleDiluent1瓶20mL/12mL*4C濃縮生物素化抗體ConcentratedBiotinylatedDetectionAb1支120gL/70丄*4C生物素化抗體稀釋液DiluentforBiotinylatedDetectionAb1瓶10mL/6mL*4C濃縮HRP酶結合物ConcentratedHRPConjugate1支120此/70丄*4C（避光）酶結合物稀釋液DiluentforHRPConjugate1瓶10mL/6mL*4C濃縮洗滌液（25芥ConcentratedWashBuffer(25)x1瓶30mL/16mL*4C底物溶液（TMB）SubstrateReagent1瓶10mL/6mL*4C（避光）反應終止液StopSolution1瓶10mL/6mL*4C圭寸板覆膜PlateSealer5/3張*產(chǎn)品說明書ProductDescription1份:[96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整 ）檢測原理：本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠ColIII抗體包被于酶標板上,實驗時標本或標準品中的ColIII會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠 ColIII抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠ColIII抗體與結合在包被抗體上的小鼠 ColIII結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物 ，游離的成分被洗去。加入顯色底物（TMB）,TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍色 ，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，ColIII濃度與OD45o值之間呈正比，經(jīng)過繪制標準曲線求出標本中 ColIII的濃度。標本收集：血清：全血標本于室溫放置2小時或4C過夜后于1000為離心20分鐘,取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原 ，無內(nèi)毒素試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA.Na2,標本采集后30分鐘內(nèi)于1000>g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血 ,高血脂標本。組織勻漿：用預冷的PBS（0.01M,pH=7.4）沖洗組織,以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果）,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,能夠?qū)驖{液進行超聲破碎,或重復凍融。最后將勻漿液于5000>g離心5~10分鐘,取上清檢測。細胞培養(yǎng)上清：取細胞培養(yǎng)上清于1000>離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測。其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測（具體處理方法可參考：）標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測 ，請按一次使用量分裝，凍存于-20C/-80°C冰箱內(nèi)，避免重復凍融，1-6月內(nèi)檢測,4C保存的應在1周內(nèi)進行檢測。如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品最高值 ，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。試驗所需自備物品：酶標儀（450nm波長濾光片）高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10讓,2-20也20-200讓，200-1000山37°C恒溫箱，雙蒸水或去離子水吸水紙檢測前準備工作：請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4C。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40C水浴微加熱使結晶完全溶解后再配制洗滌液 （加熱溫度不要超過50C,使用時洗滌液應為室溫）。標準品：加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為1000ng/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋 ）。建議配制成以下濃度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、0ng/mL,樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制500ng/mL標準品：取0.5mL1000ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100山/孔計），實際配制時應多配制100-200此。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體 （1:100）成工作濃度。當日使用。酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100gL/孔計）,實際配制時應多配制 100-200o使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物（1:100）成工作濃度。當日使用。標準品稀釋方法圖例：（以500山/管為例，也可根據(jù)實際用量來稀釋，如200gL/管）1000 500 250 125 62.5 31.25 15.63 0 ng/mL洗滌方法:自動洗板機：每孔加入洗滌液350gL,注入與吸出間隔60秒。手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350gL,浸泡1-2分鐘,吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。操作步驟：實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100gL,余孔分別加標準品或待測樣品 100gL,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37C孵育90分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。棄去液體,甩干,不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液100山（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標板加上覆膜，37C溫育1小時。棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350gL/每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。每孔加酶結合物工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100gL,加上覆膜,37C溫育30分鐘。棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。每孔加底物溶液（TMB）100也酶標板加上覆膜37C避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止）。每孔加終止液50也終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源,預熱儀器,設置好檢測程序。實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。注意事項:保存:試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程