臨床免疫學檢驗

第二章

抗原抗體反應1．抗原抗體反應有哪些特點？2．如何理解抗原抗體反應的特異性和交叉反應？3．抗原抗體反應體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？4．抗原抗體反應有哪些影響因素？5．基于抗原抗體反應的免疫學檢測技術有哪些？思考題小結

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。抗原抗體之間的結合力涉及靜電引力、范德華引力、氫鍵和疏水作用力。抗原抗體反應的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。影響抗原抗體反應的因素包括反應物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學檢測技術的基礎是抗原抗體反應，免疫學技術有凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應、中和反應和標記免疫反應五種類型。

第三章免疫原和抗血清的制備1．如何制備可溶性抗原？2．常用的細胞破碎方法有哪些？3．什么是抗血清？什么是多克隆抗體？4．如何制備抗血清？5．動物采血有哪些方法？6．抗血清的鑒定包括哪些內容？思考題小結

免疫原是誘導機體產生抗體并能與抗體發(fā)生反應的物質。半抗原是指僅有抗原性而無免疫原性的物質，與載體結合后可具有免疫原性。免疫佐劑是先于抗原或與抗原一起注入機體，可增強機體對該抗原的特異性免疫應答或改變免疫應答類型的物質?？寡迨墙涍^抗原免疫的動物血清。在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內多個B細胞克隆被激活并產生針對多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體。特異性IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等；制備單價特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。第五章凝集反應1．凝集反應的特點是什么？2．什么叫直接凝集反應，什么叫間接凝集反應？它們之間有何異同？3．敘述間接血凝試驗的原理。4．什么是直接Coombs?什么是間接Coombs，它們之間有何區(qū)別？5．凝集反應的優(yōu)缺點是什么？思考題小結

凝集反應是指細菌和紅細胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒性載體與相應抗體結合后，可出現肉眼可見的凝集現象?？梢苑譃橹苯幽磻烷g接凝集反應。在臨床檢驗中最常用的為間接血凝試驗、膠乳凝集試驗和明膠試驗。抗球蛋白試驗又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。直接Coombs試驗用于病人紅細胞上不完全抗體檢測；間接Coombs試驗用于檢測游離的血清中的不完全抗體。

第五章（二）沉淀反應1.什么是沉淀反應？2.沉淀反應的特點？3.免疫濁度法的原理、方法與分類？4.影響免疫比濁測定的因素有哪些？思考題沉淀反應是指可溶性抗原與相應抗體在適當條件下發(fā)生特異性結合而出的沉淀現象.根據沉淀反應介質和檢測方法的不同，將其分為液體內沉淀試驗、凝膠內沉淀試驗和凝膠免疫電泳試驗三大基本類型。免疫濁法度測定為液體內沉淀試驗；單向擴散試驗平板法是一種定量的凝膠內沉淀試驗，免疫電泳技術是電泳分析與沉淀反應的結合產物，常見的有對流免疫電泳、火箭免疫電泳、免疫電泳、免疫固定電泳等。小結第六章放射免疫技術1.制備放射性125I標記物的基本原理是什么？有哪些方法？2.反應結束后，如何將免疫復合物與游離標記物分離開？3.免疫放射分析與放射免疫分析的反應原理有何不同？4.靈敏度、特異性和測定范圍，免疫放射分析與放射免疫分析有何區(qū)別？思考題

放射免疫技術的基本原理是放射性核素可探測的靈敏性、精確性與抗原抗體反應的特異性相結合，主要包括RIA和IRMA。RIA所用的標記物應具備高比活度、高純度和完整的免疫活性；抗血清應具有較高的抗體親和力、高度的特異性和適宜的工作滴度；標準品濃度需按標準進行標定；結合與游離反應物的分離（二抗法、PEG法、PR試劑法和固相法）應徹底、迅速、不影響反應平衡、非特異性低和操作簡便。擬合標準曲線需根據不同檢測項目和不同的要求選用恰當的反應參數。小結第七章熒光免疫技術第八章

酶免疫技術1．酶免疫技術的要點？2．酶聯免疫吸附試驗的原理（ELISA）？3．常用的酶有哪幾類？特點？4．何謂包被與封閉？其作用？5．ELISA的非特異性干擾有哪些，其機制？思考題酶免疫技術是標記免疫技術的一種，它是以酶標記的抗原或抗體作為主要試劑的免疫檢測方法，在抗原與抗體的特異性反應完成后，通過酶對底物的作用進一步提高敏感性。酶免疫技術可分為酶免疫組織化學技術和酶免疫測定兩大類,后者根據抗原抗體反應后是否需要分離結合與游離的酶標記物而分為均相和非均相兩種類型。均相酶免疫測定主要用于小分子激素和半抗原的測定，非均相酶免疫測定根據是否使用固相支持物，又可分為液相和固相酶免疫測定兩種類型。最常用的是以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,其原理可以有夾心法、競爭法、間接法和捕獲法等。小結第九章化學發(fā)光免疫分析技術1．什么叫化學發(fā)光劑？化學發(fā)光劑必須具備那些條件？2．吖啶酯化學發(fā)光的原理和特點是什么？3．酶促反應的發(fā)光劑有哪些？其發(fā)光原理和特點是？4．三聯吡啶釕發(fā)光的原理和特點是什么？5．三丙胺在電化學發(fā)光中起什么作用？6.發(fā)光劑的標記有那些方法？影響因素有那些？7．什么是直接化學發(fā)光免疫分析？其特點是什么？8．什么是化學發(fā)光酶免疫分析？其特點是什么？思考題發(fā)光是指分子或原子中的電子吸收能量后，由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，然后再返回到基態(tài)，并釋放光子的過程。化學發(fā)光是吸收了化學反應過程中所產生的化學能使分子激發(fā)而發(fā)光?；瘜W發(fā)光免疫分析是將化學發(fā)光與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的標記免疫分析技術，分為直接化學發(fā)光免疫分析，化學發(fā)光酶免疫分析和電化學發(fā)光免疫分析。小結第十章

生物素-親合素放大技術小結生物素—親合素（鏈霉親合素）系統(tǒng)具有的多級放大獨特效應，可極大地提高分析測定的靈敏度；二者之間的高親和、高特異結合以及既可偶聯生物大分子，又可連接標記材料的特性，使該系統(tǒng)在標記免疫分析技術領域中的應用具有很強的穩(wěn)定性和適用性。該系統(tǒng)有二種基本類型：以游離親合素為中間物，分別連接包含生物素化大分子的待檢反應體系和標記生物素的BAB法或ABC技術；另一類是直接用標記親合素連接生物素化大分子反應體系進行檢測的BA法或LAB。在生物素—親合素（鏈霉親合素）放大系統(tǒng)應用中，無論采用酶、熒光素或發(fā)光物作為檢測示蹤劑，均是待測抗原與生物素化抗體反應形成復合物后，再利用生物素與親合素間的多價放大結合特性，或直接與標有示蹤劑的生物素結合（BA、LAB法），或依次與親合素（鏈霉親合素）、生物素示蹤標記物反應連接成聚合物（BAB、ABC法），最終使待測反應信號被放大，提高檢測方法的靈敏度。第十二第十一章固相膜免疫測定思考題1.敘述固相膜免疫測定概念。2．膜的種類與特性是什么？3．膜載體免疫測定的種類有哪些？4．斑點金免疫滲濾試驗(DIGFA)的原理是什么？5．免疫層析試驗（ICA）的原理是什么？小結

固相膜免疫測定與ELISA相類似，其特點是以微孔膜作為固相。固相膜的特點在于其多孔性，像濾紙一樣，固相膜可被液體穿過流出，液體也可以通過毛細管作用在膜上向前移行，利用這種性能建立了多種類型的快速檢驗方法。固相膜免疫測定包括了斑點金免疫滲濾試驗、免疫層析試驗、斑點ELISA、酶聯免疫斑點試驗、免疫印跡法、放射免疫沉淀試驗。第十三章免疫細胞的分離與免疫細胞功能檢測及應用免疫細胞的分離及其表面標志檢測技術小結淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在光學顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對其進行進一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學的方法，而要依靠對其表面標志的檢測。常用于鑒定和檢測計數淋巴細胞的表面標志是CD抗原。進一步區(qū)分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴細胞的功能趨向一致和單一。但目前看來，還很少有只通過一個CD抗原就能將某一類淋巴細胞亞群指示出來的CD抗原，CD抗原指示出來的淋巴細胞亞群多數都是相對特異。根據T細胞的免疫效應功能和表面CD分子表達至少可以分為：輔助性T細胞、細胞毒性T細胞和調節(jié)性T細胞；SmIg為B細胞所特有，是鑒定B細胞可靠的指標，以CD5和CD19為標志可將B細胞分為B1和B2兩個亞群；目前多以CD3-、CD16+、CD56+作為NK細胞的典型標志。第十三章免疫細胞功能檢測技術思考題T細胞功能檢測內容有哪些？何謂溶血空斑試驗的原理和方法學？NK細胞活性測定的方法學有哪些？免疫細胞功能檢測的臨床應用有哪些？小結免疫細胞功能試驗包括體內和體外試驗。免疫細胞功能體外試驗主要根據免疫細胞的增殖活性、分泌活性和殺傷活性等特性而進行實驗設計。具體免疫細胞功能檢測內容包括：①淋巴細胞功能檢測，包括T細胞增殖試驗、T細胞分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗以及體內試驗；B細胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯免疫斑點法以及體內試驗；NK細胞活性檢測方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學發(fā)光法、流式細胞術法等。②吞噬細胞功能檢測，方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。第十四章

細胞因子與細胞粘附因子的測定1．細胞因子和細胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？2．基于促進細胞增殖生物學活性，檢測IL-1、IL-2、方法所使用的細胞依賴株與檢測原則是什么？3．細胞因子生物活性測定法的種類，各用于哪些細胞因子的檢測，主要優(yōu)缺點？4．ELISA法在細胞因子和粘附分子檢測可應用于哪些方面，主要優(yōu)缺點？5．在臨床疾病診斷中，檢測細胞因子和粘附分子的意義是什么？應用細胞因子檢測方法的原則有哪些？思考題細胞因子和粘附分子是構成免疫應答的重要物質基礎，檢測這些分子可反映機體的免疫狀態(tài)。細胞因子或粘附分子的檢測方法包括生物學測定法和免疫測定法兩大類。細胞因子和粘附分子檢測的臨床意義。對某些特定疾病具有診斷價值；對細胞因子治療具有監(jiān)測和指導用藥的意義；對機體的免疫狀態(tài)具有評價作用。小結第十六章體液免疫球蛋白測定1.血清免疫球蛋白測定方法有哪些?2.比較單向免疫擴散法和速率散射比濁法優(yōu)缺點。3.免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測定有何臨床意義？4.如何正確選擇測定M蛋白的實驗項目思考題

免疫球蛋白是由漿細胞所產生能與相應抗原特異性結合的球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgE和IgD五類，其相應重鏈分別稱為γ鏈、α鏈、μ鏈、δ鏈和ε鏈輕鏈分為κ型和λ型，兩型輕鏈無功能差異免疫球蛋白定量測定方法：單向環(huán)狀免疫擴散法、火箭免疫電泳法、

ELISA、免疫比濁法、放射免疫分析法小結臨床意義：選擇性蛋白尿指數來評估腎小球濾過膜破壞程度及觀察治療和預后效果；測定尿液免疫球蛋白含量，來對腎小球疾病類型鑒別。測定腦脊液蛋白質，對判斷CSF中蛋白質的來源，區(qū)分中樞神經系統(tǒng)疾病類別有著重要意義。臨床上常通過白蛋白商值和腦脊液免疫球蛋白指數來反映血腦屏障受損程度。血清IgG亞類測定對研究免疫缺陷病和超敏反應性疾病有重要價值。

第十七章

補體檢測及應用小結補體是重要的參與固有免疫的可溶性球蛋白分子，同時有助于特異性抗體產生后效應的發(fā)揮，可有效地清除機體的可溶性免疫復合物，發(fā)揮徹底排除異物的功效。與此同時，也可通過清除抗原抗體反應形成于組織或細胞膜上的復合物，造成炎癥損傷，參與疾病的形成過程。補體清除可溶性免疫復合物，與補體的溶細胞作用和調理吞噬作用的發(fā)揮相關。補體的檢測，主要是根據補體的抗原性和溶細胞活性設計的。補體檢測的方法涉及總補體活性的測定和單個補體成分的檢測，其中總補體活性測定，在臨床應用廣泛者當數經典途徑的CH50檢測法；而單個補體成分檢測則包括溶血法與免疫化學法，后者可用于定量測定。

臨床免疫檢驗的質量保證與質量保證相關的定義主要有：質量保證，室內質量控制，室間質量評價，準確度，偏倚，精密度，重復性條件，批，均值，標準差，變異系數，正態(tài)分布；與實驗方法診斷效率評價相關的定義有：診斷敏感性，診斷特異性，診斷效率，陽性預測值，陰性預示值。在免疫測定中，試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色（或測定信號激發(fā)）和測定等每一步驟均對測定結果都可能會產生較大的影響，所有的實驗技術人員在進行相關測定時，必須嚴格按相應的SOP進行操作。小結標準品定值的測定方法可使用參考方法，標準品值的溯源從一級標準的值傳遞到最終試驗所使用的校準物的過程通常由幾個校準步驟組成，包括標準品和測定方法、緩沖液及其基質、稀釋的控制、最終結果的統(tǒng)計學評價和質量控制等。臨床免疫檢測質控圖的選擇、繪制及質控結果判斷包括Levey-Jennings質控圖方法，Levey-Jennings質控圖結合Westgard多規(guī)則質控方法，累積和質控方法，“即刻法”質控方法。

IQC僅覆蓋上述各步中的測定分析步驟；而EQA則除了監(jiān)測測定分析步驟外，還包括一個較大范圍的實驗室活動，諸如在標本接收中樣本處理的可靠性，以及測定結果的報告和解釋。QA覆蓋了更寬范圍的活動，最為重要的是標本收集、結果報告和解釋階段。

第二十一章

超敏反應性疾病及其免疫檢測1、了解超敏反應的概念;了解四型超敏反應常見疾病2、熟悉四型超敏反應的發(fā)生機制和主要參與反應的免疫效應分子3、掌握超敏反應的主要免疫學檢測方法及其應用重點：血清IgE的檢測難點：四型超敏反應的發(fā)生機制本章學習要點小結—免疫學檢測方法Ⅰ型變態(tài)反應的檢驗有多種方法：①皮膚試驗，例如青霉素皮試；②血清IgE測定。Ⅱ型變態(tài)反應的檢驗