臨床免疫學(xué)檢驗

第二章

抗原抗體反應(yīng)1．抗原抗體反應(yīng)有哪些特點？2．如何理解抗原抗體反應(yīng)的特異性和交叉反應(yīng)？3．抗原抗體反應(yīng)體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？4．抗原抗體反應(yīng)有哪些影響因素？5．基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)有哪些？思考題小結(jié)

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。抗原抗體之間的結(jié)合力涉及靜電引力、范德華引力、氫鍵和疏水作用力?？乖贵w反應(yīng)的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。影響抗原抗體反應(yīng)的因素包括反應(yīng)物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學(xué)檢測技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標(biāo)記免疫反應(yīng)五種類型。

第三章免疫原和抗血清的制備1．如何制備可溶性抗原？2．常用的細(xì)胞破碎方法有哪些？3．什么是抗血清？什么是多克隆抗體？4．如何制備抗血清？5．動物采血有哪些方法？6．抗血清的鑒定包括哪些內(nèi)容？思考題小結(jié)

免疫原是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體并能與抗體發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)。半抗原是指僅有抗原性而無免疫原性的物質(zhì)，與載體結(jié)合后可具有免疫原性。免疫佐劑是先于抗原或與抗原一起注入機體，可增強機體對該抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì)?？寡迨墙?jīng)過抗原免疫的動物血清。在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內(nèi)多個B細(xì)胞克隆被激活并產(chǎn)生針對多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體。特異性IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等；制備單價特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。第五章凝集反應(yīng)1．凝集反應(yīng)的特點是什么？2．什么叫直接凝集反應(yīng)，什么叫間接凝集反應(yīng)？它們之間有何異同？3．?dāng)⑹鲩g接血凝試驗的原理。4．什么是直接Coombs?什么是間接Coombs，它們之間有何區(qū)別？5．凝集反應(yīng)的優(yōu)缺點是什么？思考題小結(jié)

凝集反應(yīng)是指細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒性載體與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象?？梢苑譃橹苯幽磻?yīng)和間接凝集反應(yīng)。在臨床檢驗中最常用的為間接血凝試驗、膠乳凝集試驗和明膠試驗。抗球蛋白試驗又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種很有用的方法。直接Coombs試驗用于病人紅細(xì)胞上不完全抗體檢測；間接Coombs試驗用于檢測游離的血清中的不完全抗體。

第五章（二）沉淀反應(yīng)1.什么是沉淀反應(yīng)？2.沉淀反應(yīng)的特點？3.免疫濁度法的原理、方法與分類？4.影響免疫比濁測定的因素有哪些？思考題沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合而出的沉淀現(xiàn)象.根據(jù)沉淀反應(yīng)介質(zhì)和檢測方法的不同，將其分為液體內(nèi)沉淀試驗、凝膠內(nèi)沉淀試驗和凝膠免疫電泳試驗三大基本類型。免疫濁法度測定為液體內(nèi)沉淀試驗；單向擴散試驗平板法是一種定量的凝膠內(nèi)沉淀試驗，免疫電泳技術(shù)是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，常見的有對流免疫電泳、火箭免疫電泳、免疫電泳、免疫固定電泳等。小結(jié)第六章放射免疫技術(shù)1.制備放射性125I標(biāo)記物的基本原理是什么？有哪些方法？2.反應(yīng)結(jié)束后，如何將免疫復(fù)合物與游離標(biāo)記物分離開？3.免疫放射分析與放射免疫分析的反應(yīng)原理有何不同？4.靈敏度、特異性和測定范圍，免疫放射分析與放射免疫分析有何區(qū)別？思考題

放射免疫技術(shù)的基本原理是放射性核素可探測的靈敏性、精確性與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，主要包括RIA和IRMA。RIA所用的標(biāo)記物應(yīng)具備高比活度、高純度和完整的免疫活性；抗血清應(yīng)具有較高的抗體親和力、高度的特異性和適宜的工作滴度；標(biāo)準(zhǔn)品濃度需按標(biāo)準(zhǔn)進行標(biāo)定；結(jié)合與游離反應(yīng)物的分離（二抗法、PEG法、PR試劑法和固相法）應(yīng)徹底、迅速、不影響反應(yīng)平衡、非特異性低和操作簡便。擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線需根據(jù)不同檢測項目和不同的要求選用恰當(dāng)?shù)姆磻?yīng)參數(shù)。小結(jié)第七章熒光免疫技術(shù)第八章

酶免疫技術(shù)1．酶免疫技術(shù)的要點？2．酶聯(lián)免疫吸附試驗的原理（ELISA）？3．常用的酶有哪幾類？特點？4．何謂包被與封閉？其作用？5．ELISA的非特異性干擾有哪些，其機制？思考題酶免疫技術(shù)是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種，它是以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑的免疫檢測方法，在抗原與抗體的特異性反應(yīng)完成后，通過酶對底物的作用進一步提高敏感性。酶免疫技術(shù)可分為酶免疫組織化學(xué)技術(shù)和酶免疫測定兩大類,后者根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合與游離的酶標(biāo)記物而分為均相和非均相兩種類型。均相酶免疫測定主要用于小分子激素和半抗原的測定，非均相酶免疫測定根據(jù)是否使用固相支持物，又可分為液相和固相酶免疫測定兩種類型。最常用的是以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,其原理可以有夾心法、競爭法、間接法和捕獲法等。小結(jié)第九章化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)1．什么叫化學(xué)發(fā)光劑？化學(xué)發(fā)光劑必須具備那些條件？2．吖啶酯化學(xué)發(fā)光的原理和特點是什么？3．酶促反應(yīng)的發(fā)光劑有哪些？其發(fā)光原理和特點是？4．三聯(lián)吡啶釕發(fā)光的原理和特點是什么？5．三丙胺在電化學(xué)發(fā)光中起什么作用？6.發(fā)光劑的標(biāo)記有那些方法？影響因素有那些？7．什么是直接化學(xué)發(fā)光免疫分析？其特點是什么？8．什么是化學(xué)發(fā)光酶免疫分析？其特點是什么？思考題發(fā)光是指分子或原子中的電子吸收能量后，由基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，然后再返回到基態(tài)，并釋放光子的過程。化學(xué)發(fā)光是吸收了化學(xué)反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)光。化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，分為直接化學(xué)發(fā)光免疫分析，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析。小結(jié)第十章

生物素-親合素放大技術(shù)小結(jié)生物素—親合素（鏈霉親合素）系統(tǒng)具有的多級放大獨特效應(yīng)，可極大地提高分析測定的靈敏度；二者之間的高親和、高特異結(jié)合以及既可偶聯(lián)生物大分子，又可連接標(biāo)記材料的特性，使該系統(tǒng)在標(biāo)記免疫分析技術(shù)領(lǐng)域中的應(yīng)用具有很強的穩(wěn)定性和適用性。該系統(tǒng)有二種基本類型：以游離親合素為中間物，分別連接包含生物素化大分子的待檢反應(yīng)體系和標(biāo)記生物素的BAB法或ABC技術(shù)；另一類是直接用標(biāo)記親合素連接生物素化大分子反應(yīng)體系進行檢測的BA法或LAB。在生物素—親合素（鏈霉親合素）放大系統(tǒng)應(yīng)用中，無論采用酶、熒光素或發(fā)光物作為檢測示蹤劑，均是待測抗原與生物素化抗體反應(yīng)形成復(fù)合物后，再利用生物素與親合素間的多價放大結(jié)合特性，或直接與標(biāo)有示蹤劑的生物素結(jié)合（BA、LAB法），或依次與親合素（鏈霉親合素）、生物素示蹤標(biāo)記物反應(yīng)連接成聚合物（BAB、ABC法），最終使待測反應(yīng)信號被放大，提高檢測方法的靈敏度。第十二第十一章固相膜免疫測定思考題1.敘述固相膜免疫測定概念。2．膜的種類與特性是什么？3．膜載體免疫測定的種類有哪些？4．斑點金免疫滲濾試驗(DIGFA)的原理是什么？5．免疫層析試驗（ICA）的原理是什么？小結(jié)

固相膜免疫測定與ELISA相類似，其特點是以微孔膜作為固相。固相膜的特點在于其多孔性，像濾紙一樣，固相膜可被液體穿過流出，液體也可以通過毛細(xì)管作用在膜上向前移行，利用這種性能建立了多種類型的快速檢驗方法。固相膜免疫測定包括了斑點金免疫滲濾試驗、免疫層析試驗、斑點ELISA、酶聯(lián)免疫斑點試驗、免疫印跡法、放射免疫沉淀試驗。第十三章免疫細(xì)胞的分離與免疫細(xì)胞功能檢測及應(yīng)用免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)小結(jié)淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對其進行進一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對其表面標(biāo)志的檢測。常用于鑒定和檢測計數(shù)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志是CD抗原。進一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴細(xì)胞的功能趨向一致和單一。但目前看來，還很少有只通過一個CD抗原就能將某一類淋巴細(xì)胞亞群指示出來的CD抗原，CD抗原指示出來的淋巴細(xì)胞亞群多數(shù)都是相對特異。根據(jù)T細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能和表面CD分子表達(dá)至少可以分為：輔助性T細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；SmIg為B細(xì)胞所特有，是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)，以CD5和CD19為標(biāo)志可將B細(xì)胞分為B1和B2兩個亞群；目前多以CD3-、CD16+、CD56+作為NK細(xì)胞的典型標(biāo)志。第十三章免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)思考題T細(xì)胞功能檢測內(nèi)容有哪些？何謂溶血空斑試驗的原理和方法學(xué)？NK細(xì)胞活性測定的方法學(xué)有哪些？免疫細(xì)胞功能檢測的臨床應(yīng)用有哪些？小結(jié)免疫細(xì)胞功能試驗包括體內(nèi)和體外試驗。免疫細(xì)胞功能體外試驗主要根據(jù)免疫細(xì)胞的增殖活性、分泌活性和殺傷活性等特性而進行實驗設(shè)計。具體免疫細(xì)胞功能檢測內(nèi)容包括：①淋巴細(xì)胞功能檢測，包括T細(xì)胞增殖試驗、T細(xì)胞分泌功能測定、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗以及體內(nèi)試驗；B細(xì)胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯(lián)免疫斑點法以及體內(nèi)試驗；NK細(xì)胞活性檢測方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學(xué)發(fā)光法、流式細(xì)胞術(shù)法等。②吞噬細(xì)胞功能檢測，方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。第十四章

細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附因子的測定1．細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類？2．基于促進細(xì)胞增殖生物學(xué)活性，檢測IL-1、IL-2、方法所使用的細(xì)胞依賴株與檢測原則是什么？3．細(xì)胞因子生物活性測定法的種類，各用于哪些細(xì)胞因子的檢測，主要優(yōu)缺點？4．ELISA法在細(xì)胞因子和粘附分子檢測可應(yīng)用于哪些方面，主要優(yōu)缺點？5．在臨床疾病診斷中，檢測細(xì)胞因子和粘附分子的意義是什么？應(yīng)用細(xì)胞因子檢測方法的原則有哪些？思考題細(xì)胞因子和粘附分子是構(gòu)成免疫應(yīng)答的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，檢測這些分子可反映機體的免疫狀態(tài)。細(xì)胞因子或粘附分子的檢測方法包括生物學(xué)測定法和免疫測定法兩大類。細(xì)胞因子和粘附分子檢測的臨床意義。對某些特定疾病具有診斷價值；對細(xì)胞因子治療具有監(jiān)測和指導(dǎo)用藥的意義；對機體的免疫狀態(tài)具有評價作用。小結(jié)第十六章體液免疫球蛋白測定1.血清免疫球蛋白測定方法有哪些?2.比較單向免疫擴散法和速率散射比濁法優(yōu)缺點。3.免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測定有何臨床意義？4.如何正確選擇測定M蛋白的實驗項目思考題

免疫球蛋白是由漿細(xì)胞所產(chǎn)生能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgE和IgD五類，其相應(yīng)重鏈分別稱為γ鏈、α鏈、μ鏈、δ鏈和ε鏈輕鏈分為κ型和λ型，兩型輕鏈無功能差異免疫球蛋白定量測定方法：單向環(huán)狀免疫擴散法、火箭免疫電泳法、

ELISA、免疫比濁法、放射免疫分析法小結(jié)臨床意義：選擇性蛋白尿指數(shù)來評估腎小球濾過膜破壞程度及觀察治療和預(yù)后效果；測定尿液免疫球蛋白含量，來對腎小球疾病類型鑒別。測定腦脊液蛋白質(zhì)，對判斷CSF中蛋白質(zhì)的來源，區(qū)分中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病類別有著重要意義。臨床上常通過白蛋白商值和腦脊液免疫球蛋白指數(shù)來反映血腦屏障受損程度。血清IgG亞類測定對研究免疫缺陷病和超敏反應(yīng)性疾病有重要價值。

第十七章

補體檢測及應(yīng)用小結(jié)補體是重要的參與固有免疫的可溶性球蛋白分子，同時有助于特異性抗體產(chǎn)生后效應(yīng)的發(fā)揮，可有效地清除機體的可溶性免疫復(fù)合物，發(fā)揮徹底排除異物的功效。與此同時，也可通過清除抗原抗體反應(yīng)形成于組織或細(xì)胞膜上的復(fù)合物，造成炎癥損傷，參與疾病的形成過程。補體清除可溶性免疫復(fù)合物，與補體的溶細(xì)胞作用和調(diào)理吞噬作用的發(fā)揮相關(guān)。補體的檢測，主要是根據(jù)補體的抗原性和溶細(xì)胞活性設(shè)計的。補體檢測的方法涉及總補體活性的測定和單個補體成分的檢測，其中總補體活性測定，在臨床應(yīng)用廣泛者當(dāng)數(shù)經(jīng)典途徑的CH50檢測法；而單個補體成分檢測則包括溶血法與免疫化學(xué)法，后者可用于定量測定。

臨床免疫檢驗的質(zhì)量保證與質(zhì)量保證相關(guān)的定義主要有：質(zhì)量保證，室內(nèi)質(zhì)量控制，室間質(zhì)量評價，準(zhǔn)確度，偏倚，精密度，重復(fù)性條件，批，均值，標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)，正態(tài)分布；與實驗方法診斷效率評價相關(guān)的定義有：診斷敏感性，診斷特異性，診斷效率，陽性預(yù)測值，陰性預(yù)示值。在免疫測定中，試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色（或測定信號激發(fā)）和測定等每一步驟均對測定結(jié)果都可能會產(chǎn)生較大的影響，所有的實驗技術(shù)人員在進行相關(guān)測定時，必須嚴(yán)格按相應(yīng)的SOP進行操作。小結(jié)標(biāo)準(zhǔn)品定值的測定方法可使用參考方法，標(biāo)準(zhǔn)品值的溯源從一級標(biāo)準(zhǔn)的值傳遞到最終試驗所使用的校準(zhǔn)物的過程通常由幾個校準(zhǔn)步驟組成，包括標(biāo)準(zhǔn)品和測定方法、緩沖液及其基質(zhì)、稀釋的控制、最終結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)評價和質(zhì)量控制等。臨床免疫檢測質(zhì)控圖的選擇、繪制及質(zhì)控結(jié)果判斷包括Levey-Jennings質(zhì)控圖方法，Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法，累積和質(zhì)控方法，“即刻法”質(zhì)控方法。

IQC僅覆蓋上述各步中的測定分析步驟；而EQA則除了監(jiān)測測定分析步驟外，還包括一個較大范圍的實驗室活動，諸如在標(biāo)本接收中樣本處理的可靠性，以及測定結(jié)果的報告和解釋。QA覆蓋了更寬范圍的活動，最為重要的是標(biāo)本收集、結(jié)果報告和解釋階段。

第二十一章

超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測1、了解超敏反應(yīng)的概念;了解四型超敏反應(yīng)常見疾病2、熟悉四型超敏反應(yīng)的發(fā)生機制和主要參與反應(yīng)的免疫效應(yīng)分子3、掌握超敏反應(yīng)的主要免疫學(xué)檢測方法及其應(yīng)用重點：血清IgE的檢測難點：四型超敏反應(yīng)的發(fā)生機制本章學(xué)習(xí)要點小結(jié)—免疫學(xué)檢測方法Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的檢驗有多種方法：①皮膚試驗，例如青霉素皮試；②血清IgE測定。Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)的檢驗