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動物細胞工程實驗傳代培養(yǎng)及細胞計數(shù)實驗?zāi)康恼莆諅鞔囵B(yǎng)的一般方法和步驟以及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)。熟悉培養(yǎng)細胞的觀察方法。學(xué)習(xí)血球計數(shù)板的計數(shù)方法。實驗原理細胞在培養(yǎng)皿長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續(xù)生長，同時也將細胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細胞直接分皿就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分皿。實驗步驟實驗前將無血清培養(yǎng)基和含血清培養(yǎng)基分裝并進行溫育（37℃）。以溫度計實際顯示溫度為準(zhǔn)！實驗步驟將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。實驗步驟用不含血清1640培養(yǎng)基沖洗細胞。實驗步驟將無血清培養(yǎng)基吸出，加入0.25％胰蛋白酶溶液1ml，使細胞都浸入溶液中。實驗步驟離心后，棄上清，加含血清1640重懸，混勻，取50ul用于細胞計數(shù)。實驗步驟血球計數(shù)板的計數(shù)原理實驗完畢，將培養(yǎng)基瓶口迅速過酒精燈火焰消毒，擰緊后，封口膜密封。拿出超凈臺，放入冰箱。實驗后，請將超凈工作臺內(nèi)擦拭干凈，酒精噴灑消毒，并將酒精擦干凈，打開紫外燈滅菌。用過的離心管和血球計數(shù)板須清洗干凈。各個實驗小組的同學(xué)負責(zé)將垃圾帶走，值日生打掃實驗室衛(wèi)生。實驗步驟：9、實驗后的整理工作實驗報告試述傳代培養(yǎng)的步驟和注意事項，并指出哪些是關(guān)鍵步驟。傳代培養(yǎng)時要注意嚴格的無菌操作，并防止細胞之間的交叉污染。酶解消化要適度，消化過度會對細胞造成損害，消化不夠則難于將細胞解離下來。傳代后第2-3天觀察細胞生長情況，了解細胞是否健康生長：健康細胞的形態(tài)飽滿，折光性好。掌握好代傳代時機：健康生長的細胞生長致密，即將鋪滿瓶底時，即可

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