白喉棒狀桿菌及檢驗課件

第二十三章：需氧革蘭陽性桿菌及檢驗

檢驗系劉濤第二十三章：1棒狀桿菌屬

第一節(jié)棒狀桿菌屬

第一節(jié)2*

G＋菌，菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名*菌體染色不均勻，出現(xiàn)節(jié)段濃染或異染顆粒*排列不規(guī)則，呈柵欄狀，或L形，或V形*無莢膜、無鞭毛、不產(chǎn)生芽胞*多為條件致病菌，只有白喉棒狀桿菌是致病菌*G＋菌，菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名3白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌4CASE患兒，男，6歲，咽痛、聲嘶、咳嗽、發(fā)熱3天；體溫37℃，心率96/分，白細(xì)胞升高；亞碲酸鉀培養(yǎng)+++病史：百白破疫苗出生后三個月打了第一針，加強(qiáng)免疫因經(jīng)濟(jì)困難而未接種（家屬說舍不得花錢，一針要40多元；孩子的父親右手殘疾）問題：什么??？患者和密切接觸者需如何處理？CASE患兒，男，6歲，咽痛、聲嘶、咳嗽、發(fā)熱3天；5*白喉（Diphtheria）是一種急性呼吸道傳染病特征：患者咽喉部出現(xiàn)灰白色的假膜假膜*白喉（Diphtheria）是一種急性呼吸道傳染病特征6一、生物學(xué)性狀一、生物學(xué)性狀71.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征

細(xì)長桿菌，粗細(xì)不一，一端或兩端膨大呈棒狀，排列不規(guī)則，呈柵欄狀、V字形或L形。奈瑟染色革蘭染色1.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征細(xì)長桿菌，粗細(xì)不一，一端或81.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征

異染顆粒

成分：核糖核酸+多磷酸鹽作用：儲存養(yǎng)料、鑒定價值

Albert染色1.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征異染顆粒Albert染92.培養(yǎng)特性*呂氏血清斜面培養(yǎng)物含凝固的血清，生長迅速，異染顆粒明顯。*亞碲酸鉀血平板黑色菌落。還原在亞碲酸鉀血瓊脂平板上的白喉棒狀桿菌菌落（18～24h）亞碲酸鹽碲（黑色）2.培養(yǎng)特性*呂氏血清斜面培養(yǎng)物還原在亞碲酸鉀血瓊脂平板上10

根據(jù)對亞碲酸鉀的還原能力、菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉棒狀桿菌分為3種類型：重型（gravis）、輕型（mitis）和中間型（intermedius）。重型輕型菌落不溶血、不規(guī)則、有條紋菌落β溶血、光澤、凸起根據(jù)對亞碲酸鉀的還原能力、菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉113.變異*白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異。*無毒株溶原性細(xì)菌（產(chǎn)生外毒素）

噬菌體3.變異*白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異。噬124.抵抗力

*抗寒冷和干燥*對濕熱抵抗力弱*對青霉素、氯霉素、紅霉素敏感對磺胺不敏感4.抵抗力*抗寒冷和干燥13二、致病性與免疫性二、致病性與免疫性14

1.致病物質(zhì)：*白喉毒素（diphtherotoxin）*索狀因子（cordfactor）*K抗原（Kantigen）1.致病物質(zhì)：*白喉毒素（diphtheroto15

2.致病機(jī)制1）白喉外毒素：只有攜帶β棒狀桿菌噬菌體的溶原性白喉桿菌才能產(chǎn)生外毒素外毒素結(jié)構(gòu)：B亞單位：有結(jié)合和轉(zhuǎn)位功能A亞單位：其上有1個催化區(qū)作用靶位：心肌和神經(jīng)細(xì)胞2.致病機(jī)制1）白喉外毒素：只有攜帶β棒狀桿菌噬菌體的溶16

2.致病機(jī)制2）索狀因子破壞哺乳動物細(xì)胞中的線粒體，影響細(xì)胞呼吸與磷酸化。

3）K抗原：抗吞噬2.致病機(jī)制2）索狀因子3）K抗原：抗吞噬17

3.所致疾?。?傳染源：患者、恢復(fù)期帶菌者、健康帶菌者*傳播途徑：飛沫或污染（多在秋冬季）*臨床表現(xiàn)：白喉——急性呼吸道傳染病3.所致疾?。?傳染源：患者、恢復(fù)期帶菌者、健康帶18*臨床表現(xiàn)：

1）細(xì)菌與毒素共同作用引起局部癥狀：

炎癥，壞死，纖維蛋白滲出，假膜導(dǎo)致窒息2）毒素入血引起全身中毒癥狀：

外周神經(jīng)炎：膈肌麻痹—呼吸困難—聲帶麻痹—聲音嘶啞—軟頜麻痹—吞咽困難

心肌炎

3.所致疾病：*臨床表現(xiàn)：3.所致疾?。?9白喉棒狀桿菌及檢驗課件20

1）人群易感性

*普遍易感；

*1~5歲兒童；

*成人也有可能。4.免疫性1）人群易感性4.免疫性21

2）免疫特點

*抗毒素免疫；

*感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力；

*機(jī)體還可通過其它方式獲得免疫力：

六月以下嬰兒----母親

成人----隱性感染、疫苗2）免疫特點22三、微生物學(xué)檢查法三、微生物學(xué)檢查法23*標(biāo)本：假膜邊緣取材*涂片鏡檢：革蘭染色菌體顏色奈瑟染色典型菌體排列Albert染色異染顆粒標(biāo)本片鏡下特點*標(biāo)本：假膜邊緣取材革蘭染色菌24*分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種呂氏血清斜面37℃6~12h直接涂片鏡檢

接種亞碲酸鉀瓊脂平板培養(yǎng)黑色菌落12~18h灰白色小菌落（快速診斷）*分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種呂氏血清斜面37℃6~12h直接涂片25Elek平板試驗

白喉桿菌的有毒菌株可產(chǎn)生白喉外毒素，白喉抗毒素可與其特異性結(jié)合，中和白喉外毒素的毒性，可用細(xì)菌培養(yǎng)法和動物試驗予以證實。【原理】

Elek平板毒力試驗是一種體外的毒力測定方法。通過觀察白喉抗毒素與白喉外毒素的雙向瓊脂擴(kuò)散現(xiàn)象，判斷所培養(yǎng)的白喉桿菌的產(chǎn)毒性。

【材料】1．產(chǎn)毒素的白喉桿菌、類白喉桿菌及待測的白喉桿菌呂氏血清斜面24h培養(yǎng)物。2．Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基。3．白喉抗毒素(1000u/m1)、馬或兔血清(無菌)、無菌濾紙條(6.0×1.5cm)、無菌5ml刻度吸管、無菌平皿及鑷子等。

Elek平板試驗26【方法】

1．將Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基10ml加熱融化，待冷至50～55℃時，加入無菌的馬或兔血清2ml，立刻混勻，并傾注平板。

2．趁瓊脂未凝固前，用無菌鑷子將浸有白喉抗毒素(1000u/m1)的濾紙條(盡量使濾紙條上的抗毒素流盡)貼于平板中央，待瓊脂凝固后將平板置37℃溫箱內(nèi)1～2h(平板面朝下)，使培養(yǎng)基略干燥。

【方法】273．接種細(xì)菌，以接種環(huán)取產(chǎn)毒素白喉桿菌、類白喉桿菌和待檢的白喉桿菌分別以與濾紙條成垂直的方向劃線接種，接種線須密且集中，接種的菌量宜多。若用此法測未知標(biāo)本需設(shè)陽性對照(產(chǎn)毒株)及陰性對照(無毒株)，一般每個平板可接種5～6個標(biāo)本。置37℃培養(yǎng)24、48、72h觀察結(jié)果。3．接種細(xì)菌，以接種環(huán)取產(chǎn)毒素白喉桿菌、類白喉桿菌和待檢的白28【結(jié)果】

注意觀察在接種線兩側(cè)距濾紙條約1cm處有無與接種線呈45°角的白色沉淀線出現(xiàn)。有沉淀者，白喉桿菌毒力試驗陽性，該菌株產(chǎn)生白喉外毒素；無沉淀線者，白喉桿菌毒力試驗陰性，該菌株不產(chǎn)生白喉外毒素?！窘Y(jié)果】29*毒力鑒定：動物試驗，Elek平板毒力實驗白喉桿菌菌苔沉淀線(陽性)含白喉抗毒素濾紙片Elek毒力實驗結(jié)果*毒力鑒定：動物試驗，Elek平板毒力實驗白喉桿菌菌苔沉淀30四、防治原則四、防治原則311.

預(yù)防

*

人工主動免疫：注射DTP混合疫苗*

人工被動免疫：注射白喉抗毒素*藥物預(yù)防：用青霉素或紅霉素預(yù)防1.預(yù)防322.治療

*

白喉抗毒素：皮試，盡早使用*

抗生素2.治療33

第二十三章：需氧革蘭陽性桿菌及檢驗

檢驗系劉濤第二十三章：34棒狀桿菌屬

第一節(jié)棒狀桿菌屬

第一節(jié)35*

G＋菌，菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名*菌體染色不均勻，出現(xiàn)節(jié)段濃染或異染顆粒*排列不規(guī)則，呈柵欄狀，或L形，或V形*無莢膜、無鞭毛、不產(chǎn)生芽胞*多為條件致病菌，只有白喉棒狀桿菌是致病菌*G＋菌，菌體一端或兩端彭大呈棒狀而得名36白喉棒狀桿菌白喉棒狀桿菌37CASE患兒，男，6歲，咽痛、聲嘶、咳嗽、發(fā)熱3天；體溫37℃，心率96/分，白細(xì)胞升高；亞碲酸鉀培養(yǎng)+++病史：百白破疫苗出生后三個月打了第一針，加強(qiáng)免疫因經(jīng)濟(jì)困難而未接種（家屬說舍不得花錢，一針要40多元；孩子的父親右手殘疾）問題：什么??？患者和密切接觸者需如何處理？CASE患兒，男，6歲，咽痛、聲嘶、咳嗽、發(fā)熱3天；38*白喉（Diphtheria）是一種急性呼吸道傳染病特征：患者咽喉部出現(xiàn)灰白色的假膜假膜*白喉（Diphtheria）是一種急性呼吸道傳染病特征39一、生物學(xué)性狀一、生物學(xué)性狀401.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征

細(xì)長桿菌，粗細(xì)不一，一端或兩端膨大呈棒狀，排列不規(guī)則，呈柵欄狀、V字形或L形。奈瑟染色革蘭染色1.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征細(xì)長桿菌，粗細(xì)不一，一端或411.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征

異染顆粒

成分：核糖核酸+多磷酸鹽作用：儲存養(yǎng)料、鑒定價值

Albert染色1.白喉棒狀桿菌的形態(tài)學(xué)特征異染顆粒Albert染422.培養(yǎng)特性*呂氏血清斜面培養(yǎng)物含凝固的血清，生長迅速，異染顆粒明顯。*亞碲酸鉀血平板黑色菌落。還原在亞碲酸鉀血瓊脂平板上的白喉棒狀桿菌菌落（18～24h）亞碲酸鹽碲（黑色）2.培養(yǎng)特性*呂氏血清斜面培養(yǎng)物還原在亞碲酸鉀血瓊脂平板上43

根據(jù)對亞碲酸鉀的還原能力、菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉棒狀桿菌分為3種類型：重型（gravis）、輕型（mitis）和中間型（intermedius）。重型輕型菌落不溶血、不規(guī)則、有條紋菌落β溶血、光澤、凸起根據(jù)對亞碲酸鉀的還原能力、菌落形態(tài)及生化反應(yīng)可將白喉443.變異*白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異。*無毒株溶原性細(xì)菌（產(chǎn)生外毒素）

噬菌體3.變異*白喉棒狀桿菌形態(tài)、菌落和毒性均可發(fā)生變異。噬454.抵抗力

*抗寒冷和干燥*對濕熱抵抗力弱*對青霉素、氯霉素、紅霉素敏感對磺胺不敏感4.抵抗力*抗寒冷和干燥46二、致病性與免疫性二、致病性與免疫性47

1.致病物質(zhì)：*白喉毒素（diphtherotoxin）*索狀因子（cordfactor）*K抗原（Kantigen）1.致病物質(zhì)：*白喉毒素（diphtheroto48

2.致病機(jī)制1）白喉外毒素：只有攜帶β棒狀桿菌噬菌體的溶原性白喉桿菌才能產(chǎn)生外毒素外毒素結(jié)構(gòu)：B亞單位：有結(jié)合和轉(zhuǎn)位功能A亞單位：其上有1個催化區(qū)作用靶位：心肌和神經(jīng)細(xì)胞2.致病機(jī)制1）白喉外毒素：只有攜帶β棒狀桿菌噬菌體的溶49

2.致病機(jī)制2）索狀因子破壞哺乳動物細(xì)胞中的線粒體，影響細(xì)胞呼吸與磷酸化。

3）K抗原：抗吞噬2.致病機(jī)制2）索狀因子3）K抗原：抗吞噬50

3.所致疾?。?傳染源：患者、恢復(fù)期帶菌者、健康帶菌者*傳播途徑：飛沫或污染（多在秋冬季）*臨床表現(xiàn)：白喉——急性呼吸道傳染病3.所致疾病：*傳染源：患者、恢復(fù)期帶菌者、健康帶51*臨床表現(xiàn)：

1）細(xì)菌與毒素共同作用引起局部癥狀：

炎癥，壞死，纖維蛋白滲出，假膜導(dǎo)致窒息2）毒素入血引起全身中毒癥狀：

外周神經(jīng)炎：膈肌麻痹—呼吸困難—聲帶麻痹—聲音嘶啞—軟頜麻痹—吞咽困難

心肌炎

3.所致疾病：*臨床表現(xiàn)：3.所致疾病：52白喉棒狀桿菌及檢驗課件53

1）人群易感性

*普遍易感；

*1~5歲兒童；

*成人也有可能。4.免疫性1）人群易感性4.免疫性54

2）免疫特點

*抗毒素免疫；

*感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力；

*機(jī)體還可通過其它方式獲得免疫力：

六月以下嬰兒----母親

成人----隱性感染、疫苗2）免疫特點55三、微生物學(xué)檢查法三、微生物學(xué)檢查法56*標(biāo)本：假膜邊緣取材*涂片鏡檢：革蘭染色菌體顏色奈瑟染色典型菌體排列Albert染色異染顆粒標(biāo)本片鏡下特點*標(biāo)本：假膜邊緣取材革蘭染色菌57*分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種呂氏血清斜面37℃6~12h直接涂片鏡檢

接種亞碲酸鉀瓊脂平板培養(yǎng)黑色菌落12~18h灰白色小菌落（快速診斷）*分離培養(yǎng)：標(biāo)本接種呂氏血清斜面37℃6~12h直接涂片58Elek平板試驗

白喉桿菌的有毒菌株可產(chǎn)生白喉外毒素，白喉抗毒素可與其特異性結(jié)合，中和白喉外毒素的毒性，可用細(xì)菌培養(yǎng)法和動物試驗予以證實?！驹怼?/p>

Elek平板毒力試驗是一種體外的毒力測定方法。通過觀察白喉抗毒素與白喉外毒素的雙向瓊脂擴(kuò)散現(xiàn)象，判斷所培養(yǎng)的白喉桿菌的產(chǎn)毒性。

【材料】1．產(chǎn)毒素的白喉桿菌、類白喉桿菌及待測的白喉桿菌呂氏血清斜面24h培養(yǎng)物。2．Elek瓊脂蛋白胨培養(yǎng)基。3．白喉抗毒素(1000u/m1)、馬或兔血清(無菌)、無菌濾紙條(6.0×1.5cm)、無菌5ml刻度吸管、無菌平皿及鑷子等。

Elek平板試驗59【方法】

1．將