食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

第二節(jié)食品中致病性球菌的檢驗(yàn)一、金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水、飼料、食品（剩飯、糕點(diǎn)、牛奶、肉品等)以及人和動(dòng)物的體表粘膜等處均有存在，大部分是不致病的腐物寄生菌，也有一些致病的球菌。食品中生長(zhǎng)有金黃色葡萄球菌，是食品衛(wèi)生的一種潛在危險(xiǎn)，因?yàn)榻瘘S色葡萄球菌可以產(chǎn)生腸毒素，食后能引起食物中毒。因此，檢查食品中金黃色葡萄球菌有實(shí)際意義。第二節(jié)食品中致病性球菌的檢驗(yàn)一、金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)（一）形態(tài)與染色典型的葡萄球菌呈球形，直徑0.4μm-1.2μm，致病性葡萄球菌一般較非致病性菌小，且各個(gè)菌體的大小及排列也較整齊。細(xì)菌繁殖時(shí)呈多個(gè)平面的不規(guī)則分裂，堆積成為葡萄串狀排列。在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，常呈雙球或短鏈狀排列，易誤認(rèn)為鏈球菌。葡萄球菌無鞭毛及芽胞，一般不形成莢膜，易被堿性染料著色，G+，當(dāng)衰老、死亡或被白細(xì)胞吞噬后常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性，對(duì)青霉素有抗藥性的菌株也為革蘭氏陰性。（一）形態(tài)與染色食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

(二)分類葡萄球菌屬于微球菌的葡萄球菌屬，葡萄球菌種類繁多，以往的分類方法是以菌落色素將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌三種。但是這種色素指標(biāo)很不穩(wěn)定。(二)分類根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第八版，按葡萄球菌的生理化學(xué)組成，將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三種。其中金黃色葡萄球菌多為致病性菌，表皮葡萄球菌偶爾致病，腐生葡萄球菌一般為非致病菌。根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第八版，按葡萄球菌的生理化學(xué)組食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

60％-70％的金黃色葡萄球菌可被相應(yīng)的噬菌體裂解，故可用噬菌體進(jìn)行分型。表皮葡萄球菌對(duì)噬菌體不敏感，故不能用噬菌體分型。噬菌體分型在傳染源追蹤上具有重要意義。60％-70％的金黃色葡萄球菌可被相應(yīng)的噬菌體裂解，故可用通常使用的基本分型噬菌體有22型，根據(jù)它們對(duì)菌株的裂解反應(yīng)，可將金黃色葡萄球菌分成以下幾群：I群：29、25、52A、79、80；II群：3A、3B、3C、55、71；III群：6、7、42E、47、53、54、75、77、83A；IV群：42D。通常使用的基本分型噬菌體有22型，根據(jù)它們對(duì)菌株的裂解反應(yīng)

(三)培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，最適pH值為7.4。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，培養(yǎng)24h-48h后，可形成圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤(rùn)、有光澤、不透明菌落。菌落直徑通常在1mm-2mm，但也有大至4mm-5mm者。(三)培養(yǎng)特性食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件金黃色葡萄球菌形態(tài)金葡在Baird-Parker平板上菌落直徑2-3mm，灰色到黑色，邊緣淡色，周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈。接種針接觸有奶油至樹脂硬度。偶見非脂肪溶解的類似菌落耽誤渾濁帶和透明圈。觸媒實(shí)驗(yàn)↓電鏡下的金葡海博顯色培基金黃色葡萄球菌形態(tài)金葡在Baird-Parker平板上菌落直可產(chǎn)生不同色素，如金黃色、白色及檸檬色，這些色素為脂溶性，能溶于醇、乙醚、氯仿及苯等有機(jī)溶劑中，因不溶于水，故色素只限于培養(yǎng)物，而不外滲至培養(yǎng)基中。色素的形成依培養(yǎng)條件而異：通常在22℃產(chǎn)生色素較多；于37℃培養(yǎng)后，再置室溫1d-2d，色素產(chǎn)生明顯；在固體培養(yǎng)基中含有碳水化合物、牛乳或血清等，色素形成最好，有O2及CO2環(huán)境下易形成色素，而在無O2環(huán)境中不形成色素。可產(chǎn)生不同色素，如金黃色、白色及檸檬色，這些色素為脂溶性，耐鹽性強(qiáng)，在含5％-10％的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在含有20％-30％二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)，可產(chǎn)生大量的毒素。耐鹽性強(qiáng)，在含5％-10％的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在含有2在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速，37℃24h培養(yǎng)后，呈均勻混濁生長(zhǎng)，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，管底出現(xiàn)少量沉淀，輕輕振搖，沉淀物上升，旋即消散，培養(yǎng)2d-3d后可形成很薄的菌環(huán)，在管底則形成多量粘稠沉淀。在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速，37℃24h培養(yǎng)后，呈均勻混濁生長(zhǎng)在血瓊脂平板上，形成的菌落較大，多數(shù)致病性菌株可產(chǎn)生溶血毒素，使菌落周圍產(chǎn)生透明的溶血圈(β溶血)。在血瓊脂平板上，形成的菌落較大，多數(shù)致病性菌株可產(chǎn)生溶血毒(四)生化特性本屬細(xì)菌大多數(shù)不能分解乳糖、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖。產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

致病菌株能分解甘露醇，產(chǎn)酸。甲基紅陽(yáng)性，V—P為弱陽(yáng)性，多數(shù)菌株能分解尿素產(chǎn)氨，還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚。(四)生化特性(五)毒素與酶葡萄球菌的致病力決定于細(xì)菌產(chǎn)生的毒素和酶的能力。溶血毒素、殺白血球毒素、腸毒素、血漿凝固酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、脫氧核糖核酸酶(五)毒素與酶

1、溶血毒素多數(shù)致病菌株能產(chǎn)生該毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)溶血反應(yīng)。溶血毒素是一種外毒素，根據(jù)其對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的溶血范圍、抗原性、溶血時(shí)所需溫度等不同可分為α、β、γ、δ四種，其中以β溶血素為主。1、溶血毒素食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

2、殺白血球毒素能破壞人或兔的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，使其失去活性，最后膨脹破裂。致病性與非致病性葡萄球菌都能被吞噬細(xì)胞吞噬，非致病性菌株在白細(xì)胞內(nèi)很快被殺死，而致病菌株則能在白細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。2、殺白血球毒素

3、腸毒素金黃色葡萄球菌的某些菌株能產(chǎn)生引起急性腸胃炎的腸毒素。腸毒素共分6型(A、B、C1．C2、D、E)，各型具有不同的血清學(xué)特性，其中以A型引起的食物中毒最多，B型和C型次之。該毒素為一種可溶性蛋白質(zhì)，耐熱，經(jīng)l00℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。可使人、貓、猴引起急性胃腸炎癥狀。3、腸毒素

4、血漿凝固酶這是一種能使含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的兔或人血漿發(fā)生凝固的酶。大多數(shù)致病性葡萄球菌產(chǎn)生此酶，而非致病性菌一般不產(chǎn)生。因此，凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)。凝固酶較耐熱，在l00℃30min或高壓消毒后仍保存部分活性，但易被蛋白分解酶破壞。4、血漿凝固酶

5、溶纖維蛋白酶可使人、犬、豚鼠及家兔的已經(jīng)凝固的纖維蛋白溶解。溶纖維蛋白酶是一種激酶，可激活血漿蛋白酶原成為血漿蛋白酶而使纖維蛋白溶解。凝固酶及溶纖維蛋白酶可在含有血漿的瓊脂平板內(nèi)同時(shí)測(cè)定。初次培養(yǎng)后，菌落周圍若出現(xiàn)一個(gè)不透明圈，表示產(chǎn)生凝固酶，繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)，不透明圈消失，說明為溶纖維蛋白酶作用的結(jié)果。5、溶纖維蛋白酶

6、透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸具有高度的粘稠性，是機(jī)體結(jié)締組織中基質(zhì)的主要成分。它被透明質(zhì)酸酶水解后，結(jié)締組織細(xì)胞間失去粘性呈疏松狀態(tài)，有利于細(xì)菌和毒素在機(jī)體內(nèi)擴(kuò)散，因此透明質(zhì)酸酶又稱為擴(kuò)散因子。6、透明質(zhì)酸酶7、脫氧核糖核酸酶

脫氧核糖核酸能夠增加組織滲出物的粘性。當(dāng)組織細(xì)胞及白血球崩解時(shí)釋放出核酸，使組織滲出液的粘性增加，而脫氧核糖核酸酶能迅速分解之，從而有利于細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散。有人認(rèn)為脫氧核糖核酸酶是鑒定葡萄球菌毒力的又一指標(biāo)。7、脫氧核糖核酸酶

(六)抗原結(jié)構(gòu)葡萄球菌經(jīng)水解后，用沉淀法分析，可得到兩種抗原成分：蛋白質(zhì)抗原多糖類抗原(六)抗原結(jié)構(gòu)

1．蛋白質(zhì)抗原主要為葡萄球菌A蛋白(SPA)，為金黃色葡萄球菌的一種表面抗原，存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的表面，90％以上的金黃色葡萄球菌有此抗原。

SPA能抑制吞噬細(xì)胞的吞噬作用，對(duì)T、B細(xì)胞是良好的促分裂原。1．蛋白質(zhì)抗原2、多糖類抗原為半抗原，存在于細(xì)胞壁上，是金黃色葡萄球菌的一種重要抗原，具有型特異性。其抗原決定簇為磷壁酸的核糖醇單位。此抗原可用于葡萄球菌的分型。2、多糖類抗原

(七)抵抗力葡萄球菌抵抗力較強(qiáng)，為不形成芽胞的細(xì)菌中最強(qiáng)者。(七)抵抗力在干燥的膿汁或血液中可存活數(shù)月。加熱80℃30min才能殺死，煮沸可迅速使它死亡。在5％石炭酸、0.1％升汞中10min-15min死亡。對(duì)某些染料較敏感，1︰100000-1︰200000稀釋的龍膽紫溶液能抑制其生長(zhǎng)。對(duì)磺胺類藥物的敏感較低，對(duì)青霉素、紅霉素和慶大霉素高度敏感。在干燥的膿汁或血液中可存活數(shù)月。加熱80℃30min才能(八)葡萄球菌的致病性葡萄球菌能引起的疾患主要有化膿性感染（如毛囊炎、癤、癰、傷口化膿、氣管炎、肺炎、中耳炎、腦膜炎、心包炎等)；全身感染(如敗血癥、膿毒血癥等)；

食物中毒等等。(八)葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌引起的須瘡感染

葡萄球菌創(chuàng)口感染革蘭氏染色涂片金黃色葡萄球菌引起的須瘡感染

葡萄球菌創(chuàng)口感染革蘭氏染據(jù)調(diào)查，由于葡萄球菌在自然界的廣泛分布。當(dāng)金黃色葡萄球菌感染患者的鼻腔時(shí)，其帶菌率高達(dá)83.5％；接觸奶類的飼養(yǎng)員，冷飲奶制品生產(chǎn)人員的帶菌率為l6％-20％；炊事員及熟食加工、糖果面包生產(chǎn)工人的帶菌率為3.2％-8.6％。據(jù)調(diào)查，由于葡萄球菌在自然界的廣泛分布。鼻腔是葡萄球菌的繁殖場(chǎng)所，也是身體各部位的傳染源。葡萄球菌是常見的化膿性球菌之一，化膿部位常成為傳染源?；既榉垦椎哪膛．a(chǎn)的奶、有化膿癥的宰畜肉尸常帶有致病性葡萄球菌。鼻腔是葡萄球菌的繁殖場(chǎng)所，也是身體各部位的傳染源。葡萄球菌在不同食物、不同溫度和pH值的條件下，產(chǎn)生的腸毒素是不同的。葡萄球菌在pH值低于5的條件下很少產(chǎn)生腸毒素，當(dāng)pH值高于9.8時(shí)，無論何型葡萄球菌腸毒素都不能產(chǎn)生。葡萄球菌在不同食物、不同溫度和pH值的條件下，產(chǎn)生的腸毒素是葡萄球菌在牛奶和谷粉粥上，于20℃-37℃下經(jīng)4h-8h產(chǎn)生毒素，在5℃-6℃低溫下18d產(chǎn)生毒素或不產(chǎn)生毒素。在含水分、蛋白質(zhì)和淀粉較多的食品中，葡萄球菌較易繁殖并產(chǎn)生毒素。如帶菌的生肉餡，于37℃下經(jīng)18h-19h產(chǎn)生毒素，若在肉餡中加入少量饅頭碎屑，在同樣溫度下只經(jīng)過8h就能產(chǎn)生毒素，可見淀粉對(duì)形成毒素有促進(jìn)作用。葡萄球菌在牛奶和谷粉粥上，于20℃-37℃下經(jīng)4h-8h產(chǎn)生引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品，主要為肉、奶、魚、蛋類及其制品等動(dòng)物性食品。熟肉類如在熟后污染了致病葡萄球菌，又在20℃-30℃的環(huán)境下放置較長(zhǎng)時(shí)間，則極易引起中毒；奶和奶制品以及用奶制作的冷飲（冰激凌、冰棍）和奶油糕點(diǎn)常是引起中毒的食品；油煎雞蛋、熏魚、油浸魚罐頭等含油脂較多的食品，在污染上致病性葡萄球菌以后也能產(chǎn)生毒素。引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品，主要為肉、奶、魚、蛋類及其制葡萄球菌在空氣中氧較低時(shí)較易產(chǎn)生腸毒素因此帶有此菌的食品，在通風(fēng)不良的高溫下放置，極有利此菌生長(zhǎng)并產(chǎn)生毒素。當(dāng)食品污染了葡萄球菌并同時(shí)污染了其他微生物時(shí)，葡萄球菌的繁殖則受到抑制。如食品經(jīng)加熱，原有的各種微生物已被殺死，拮抗微生物也不復(fù)存在，熟后再一次被葡萄球菌污染，則將會(huì)促進(jìn)葡萄球菌的生長(zhǎng)并形成毒素。葡萄球菌在空氣中氧較低時(shí)較易產(chǎn)生腸毒素因此帶有此菌的食品，葡萄球菌引起的食物中毒在常發(fā)生于夏秋季節(jié)，這是因?yàn)闅鉁剌^高，有利于細(xì)菌繁殖。但在冬季，如受到污染的食品在溫度較高的室內(nèi)保存，葡萄球菌也可繁殖并產(chǎn)生毒素。葡萄球菌引起的食物中毒在常發(fā)生于夏秋季節(jié)，這是因?yàn)闅鉁剌^高(九)發(fā)病機(jī)理葡萄球菌食物中毒，是由葡萄球菌在繁殖過程中分泌到菌細(xì)胞外的腸毒素引起的。

A型腸毒素的毒力最強(qiáng)，攝入1μg即能引起中毒，而B型腸毒素?cái)z入25μg才能引起中毒。(九)發(fā)病機(jī)理（十)檢驗(yàn)原理金黃色葡萄球菌耐鹽性強(qiáng)，在l00-150g/L的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，適宜生長(zhǎng)的鹽濃度為5％-7.5％，可以利用這個(gè)特性對(duì)金黃色葡萄球菌增菌，抑制雜菌。（十)檢驗(yàn)原理金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生溶血素．在血平板上生長(zhǎng)，菌落周圍有透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生溶血素．在血平板上生長(zhǎng)，菌落周圍有透明的可產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵磷脂，產(chǎn)生甘油脂和可溶性磷酸膽堿所以在Baird-Parker(含卵黃和亞碲酸鉀)平板上生長(zhǎng)，菌落為黑色，周圍有一混濁帶，在其外層有一透明圈，利用此特性可分離金黃色葡萄球菌。可產(chǎn)生卵磷脂酶，分解卵磷脂，產(chǎn)生甘油脂和可溶性磷酸膽堿金黃色葡萄球菌還可產(chǎn)生凝固酶，凝固酶可使血漿中的血漿蛋白酶原變成血漿蛋白酶，使血漿凝固這是鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)，是不是致病的金黃色葡萄球菌主要看它是否產(chǎn)生凝固酶。金黃色葡萄球菌還可產(chǎn)生凝固酶，凝固酶可使血漿中的血漿蛋白酶（十一）檢驗(yàn)程序GB/T4789.10-2010（十一）檢驗(yàn)程序GB/T4789.10/38－2010金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)第一法：定性第二法：BairdParker平板法增加了計(jì)算公式第三法：MPN法GB/T4789.10/38－2010金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)1.定性1.定性2.BairdParker平板法2.BairdParker平板法典型菌落計(jì)數(shù)和確認(rèn)1.金黃色葡萄球菌在BP平板上，菌落致敬為2mm-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一渾濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會(huì)遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無渾濁帶及透明圈。長(zhǎng)期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。2.選擇有典型的金黃色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀釋度3個(gè)平板所有菌落數(shù)合計(jì)在20CFU-200CFU之間的平板，計(jì)數(shù)典型菌落數(shù)。3.從典型菌落中任選5個(gè)菌落，做血漿凝固試驗(yàn)。典型菌落計(jì)數(shù)和確認(rèn)食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件3.MPN法3.MPN法檢測(cè)流程計(jì)數(shù)及血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)接種BHI肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面檢測(cè)流程計(jì)數(shù)及血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)接種BHI肉湯及營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)金黃色葡萄球菌在甘露醇Thankyou!Thankyou!第二節(jié)食品中致病性球菌的檢驗(yàn)一、金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水、飼料、食品（剩飯、糕點(diǎn)、牛奶、肉品等)以及人和動(dòng)物的體表粘膜等處均有存在，大部分是不致病的腐物寄生菌，也有一些致病的球菌。食品中生長(zhǎng)有金黃色葡萄球菌，是食品衛(wèi)生的一種潛在危險(xiǎn)，因?yàn)榻瘘S色葡萄球菌可以產(chǎn)生腸毒素，食后能引起食物中毒。因此，檢查食品中金黃色葡萄球菌有實(shí)際意義。第二節(jié)食品中致病性球菌的檢驗(yàn)一、金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)（一）形態(tài)與染色典型的葡萄球菌呈球形，直徑0.4μm-1.2μm，致病性葡萄球菌一般較非致病性菌小，且各個(gè)菌體的大小及排列也較整齊。細(xì)菌繁殖時(shí)呈多個(gè)平面的不規(guī)則分裂，堆積成為葡萄串狀排列。在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，常呈雙球或短鏈狀排列，易誤認(rèn)為鏈球菌。葡萄球菌無鞭毛及芽胞，一般不形成莢膜，易被堿性染料著色，G+，當(dāng)衰老、死亡或被白細(xì)胞吞噬后常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性，對(duì)青霉素有抗藥性的菌株也為革蘭氏陰性。（一）形態(tài)與染色食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

(二)分類葡萄球菌屬于微球菌的葡萄球菌屬，葡萄球菌種類繁多，以往的分類方法是以菌落色素將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌三種。但是這種色素指標(biāo)很不穩(wěn)定。(二)分類根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第八版，按葡萄球菌的生理化學(xué)組成，將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌三種。其中金黃色葡萄球菌多為致病性菌，表皮葡萄球菌偶爾致病，腐生葡萄球菌一般為非致病菌。根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第八版，按葡萄球菌的生理化學(xué)組食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

60％-70％的金黃色葡萄球菌可被相應(yīng)的噬菌體裂解，故可用噬菌體進(jìn)行分型。表皮葡萄球菌對(duì)噬菌體不敏感，故不能用噬菌體分型。噬菌體分型在傳染源追蹤上具有重要意義。60％-70％的金黃色葡萄球菌可被相應(yīng)的噬菌體裂解，故可用通常使用的基本分型噬菌體有22型，根據(jù)它們對(duì)菌株的裂解反應(yīng)，可將金黃色葡萄球菌分成以下幾群：I群：29、25、52A、79、80；II群：3A、3B、3C、55、71；III群：6、7、42E、47、53、54、75、77、83A；IV群：42D。通常使用的基本分型噬菌體有22型，根據(jù)它們對(duì)菌株的裂解反應(yīng)

(三)培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，最適pH值為7.4。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，培養(yǎng)24h-48h后，可形成圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤(rùn)、有光澤、不透明菌落。菌落直徑通常在1mm-2mm，但也有大至4mm-5mm者。(三)培養(yǎng)特性食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件金黃色葡萄球菌形態(tài)金葡在Baird-Parker平板上菌落直徑2-3mm，灰色到黑色，邊緣淡色，周圍有一渾濁帶，外層有一透明圈。接種針接觸有奶油至樹脂硬度。偶見非脂肪溶解的類似菌落耽誤渾濁帶和透明圈。觸媒實(shí)驗(yàn)↓電鏡下的金葡海博顯色培基金黃色葡萄球菌形態(tài)金葡在Baird-Parker平板上菌落直可產(chǎn)生不同色素，如金黃色、白色及檸檬色，這些色素為脂溶性，能溶于醇、乙醚、氯仿及苯等有機(jī)溶劑中，因不溶于水，故色素只限于培養(yǎng)物，而不外滲至培養(yǎng)基中。色素的形成依培養(yǎng)條件而異：通常在22℃產(chǎn)生色素較多；于37℃培養(yǎng)后，再置室溫1d-2d，色素產(chǎn)生明顯；在固體培養(yǎng)基中含有碳水化合物、牛乳或血清等，色素形成最好，有O2及CO2環(huán)境下易形成色素，而在無O2環(huán)境中不形成色素?？僧a(chǎn)生不同色素，如金黃色、白色及檸檬色，這些色素為脂溶性，耐鹽性強(qiáng)，在含5％-10％的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在含有20％-30％二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)，可產(chǎn)生大量的毒素。耐鹽性強(qiáng)，在含5％-10％的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，在含有2在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速，37℃24h培養(yǎng)后，呈均勻混濁生長(zhǎng)，延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，管底出現(xiàn)少量沉淀，輕輕振搖，沉淀物上升，旋即消散，培養(yǎng)2d-3d后可形成很薄的菌環(huán)，在管底則形成多量粘稠沉淀。在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速，37℃24h培養(yǎng)后，呈均勻混濁生長(zhǎng)在血瓊脂平板上，形成的菌落較大，多數(shù)致病性菌株可產(chǎn)生溶血毒素，使菌落周圍產(chǎn)生透明的溶血圈(β溶血)。在血瓊脂平板上，形成的菌落較大，多數(shù)致病性菌株可產(chǎn)生溶血毒(四)生化特性本屬細(xì)菌大多數(shù)不能分解乳糖、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖。產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

致病菌株能分解甘露醇，產(chǎn)酸。甲基紅陽(yáng)性，V—P為弱陽(yáng)性，多數(shù)菌株能分解尿素產(chǎn)氨，還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚。(四)生化特性(五)毒素與酶葡萄球菌的致病力決定于細(xì)菌產(chǎn)生的毒素和酶的能力。溶血毒素、殺白血球毒素、腸毒素、血漿凝固酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、脫氧核糖核酸酶(五)毒素與酶

1、溶血毒素多數(shù)致病菌株能產(chǎn)生該毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，在試管中出現(xiàn)溶血反應(yīng)。溶血毒素是一種外毒素，根據(jù)其對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的溶血范圍、抗原性、溶血時(shí)所需溫度等不同可分為α、β、γ、δ四種，其中以β溶血素為主。1、溶血毒素食品中致病性球菌的檢驗(yàn)-葡萄球菌課件

2、殺白血球毒素能破壞人或兔的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，使其失去活性，最后膨脹破裂。致病性與非致病性葡萄球菌都能被吞噬細(xì)胞吞噬，非致病性菌株在白細(xì)胞內(nèi)很快被殺死，而致病菌株則能在白細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。2、殺白血球毒素

3、腸毒素金黃色葡萄球菌的某些菌株能產(chǎn)生引起急性腸胃炎的腸毒素。腸毒素共分6型(A、B、C1．C2、D、E)，各型具有不同的血清學(xué)特性，其中以A型引起的食物中毒最多，B型和C型次之。該毒素為一種可溶性蛋白質(zhì)，耐熱，經(jīng)l00℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。可使人、貓、猴引起急性胃腸炎癥狀。3、腸毒素

4、血漿凝固酶這是一種能使含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的兔或人血漿發(fā)生凝固的酶。大多數(shù)致病性葡萄球菌產(chǎn)生此酶，而非致病性菌一般不產(chǎn)生。因此，凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)。凝固酶較耐熱，在l00℃30min或高壓消毒后仍保存部分活性，但易被蛋白分解酶破壞。4、血漿凝固酶

5、溶纖維蛋白酶可使人、犬、豚鼠及家兔的已經(jīng)凝固的纖維蛋白溶解。溶纖維蛋白酶是一種激酶，可激活血漿蛋白酶原成為血漿蛋白酶而使纖維蛋白溶解。凝固酶及溶纖維蛋白酶可在含有血漿的瓊脂平板內(nèi)同時(shí)測(cè)定。初次培養(yǎng)后，菌落周圍若出現(xiàn)一個(gè)不透明圈，表示產(chǎn)生凝固酶，繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)，不透明圈消失，說明為溶纖維蛋白酶作用的結(jié)果。5、溶纖維蛋白酶

6、透明質(zhì)酸酶透明質(zhì)酸具有高度的粘稠性，是機(jī)體結(jié)締組織中基質(zhì)的主要成分。它被透明質(zhì)酸酶水解后，結(jié)締組織細(xì)胞間失去粘性呈疏松狀態(tài)，有利于細(xì)菌和毒素在機(jī)體內(nèi)擴(kuò)散，因此透明質(zhì)酸酶又稱為擴(kuò)散因子。6、透明質(zhì)酸酶7、脫氧核糖核酸酶

脫氧核糖核酸能夠增加組織滲出物的粘性。當(dāng)組織細(xì)胞及白血球崩解時(shí)釋放出核酸，使組織滲出液的粘性增加，而脫氧核糖核酸酶能迅速分解之，從而有利于細(xì)菌在組織中的擴(kuò)散。有人認(rèn)為脫氧核糖核酸酶是鑒定葡萄球菌毒力的又一指標(biāo)。7、脫氧核糖核酸酶

(六)抗原結(jié)構(gòu)葡萄球菌經(jīng)水解后，用沉淀法分析，可得到兩種抗原成分：蛋白質(zhì)抗原多糖類抗原(六)抗原結(jié)構(gòu)

1．蛋白質(zhì)抗原主要為葡萄球菌A蛋白(SPA)，為金黃色葡萄球菌的一種表面抗原，存在于細(xì)菌細(xì)胞壁的表面，90％以上的金黃色葡萄球菌有此抗原。

SPA能抑制吞噬細(xì)胞的吞噬作用，對(duì)T、B細(xì)胞是良好的促分裂原。1．蛋白質(zhì)抗原2、多糖類抗原為半抗原，存在于細(xì)胞壁上，是金黃色葡萄球菌的一種重要抗原，具有型特異性。其抗原決定簇為磷壁酸的核糖醇單位。此抗原可用于葡萄球菌的分型。2、多糖類抗原

(七)抵抗力葡萄球菌抵抗力較強(qiáng)，為不形成芽胞的細(xì)菌中最強(qiáng)者。(七)抵抗力在干燥的膿汁或血液中可存活數(shù)月。加熱80℃30min才能殺死，煮沸可迅速使它死亡。在5％石炭酸、0.1％升汞中10min-15min死亡。對(duì)某些染料較敏感，1︰100000-1︰200000稀釋的龍膽紫溶液能抑制其生長(zhǎng)。對(duì)磺胺類藥物的敏感較低，對(duì)青霉素、紅霉素和慶大霉素高度敏感。在干燥的膿汁或血液中可存活數(shù)月。加熱80℃30min才能(八)葡萄球菌的致病性葡萄球菌能引起的疾患主要有化膿性感染（如毛囊炎、癤、癰、傷口化膿、氣管炎、肺炎、中耳炎、腦膜炎、心包炎等)；全身感染(如敗血癥、膿毒血癥等)；

食物中毒等等。(八)葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌引起的須瘡感染

葡萄球菌創(chuàng)口感染革蘭氏染色涂片金黃色葡萄球菌引起的須瘡感染

葡萄球菌創(chuàng)口感染革蘭氏染據(jù)調(diào)查，由于葡萄球菌在自然界的廣泛分布。當(dāng)金黃色葡萄球菌感染患者的鼻腔時(shí)，其帶菌率高達(dá)83.5％；接觸奶類的飼養(yǎng)員，冷飲奶制品生產(chǎn)人員的帶菌率為l6％-20％；炊事員及熟食加工、糖果面包生產(chǎn)工人的帶菌率為3.2％-8.6％。據(jù)調(diào)查，由于葡萄球菌在自然界的廣泛分布。鼻腔是葡萄球菌的繁殖場(chǎng)所，也是身體各部位的傳染源。葡萄球菌是常見的化膿性球菌之一，化膿部位常成為傳染源?；既榉垦椎哪膛．a(chǎn)的奶、有化膿癥的宰畜肉尸常帶有致病性葡萄球菌。鼻腔是葡萄球菌的繁殖場(chǎng)所，也是身體各部位的傳染源。葡萄球菌在不同食物、不同溫度和pH值的條件下，產(chǎn)生的腸毒素是不同的。葡萄球菌在pH值低于5的條件下很少產(chǎn)生腸毒素，當(dāng)pH值高于9.8時(shí)，無論何型葡萄球菌腸毒素都不能產(chǎn)生。葡萄球菌在不同食物、不同溫度和pH值的條件下，產(chǎn)生的腸毒素是葡萄球菌在牛奶和谷粉粥上，于20℃-37℃下經(jīng)4h-8h產(chǎn)生毒素，在5℃-6℃低溫下18d產(chǎn)生毒素或不產(chǎn)生毒素。在含水分、蛋白質(zhì)和淀粉較多的食品中，葡萄球菌較易繁殖并產(chǎn)生毒素。如帶菌的生肉餡，于37℃下經(jīng)18h-19h產(chǎn)生毒素，若在肉餡中加入少量饅頭碎屑，在同樣溫度下只經(jīng)過8h就能產(chǎn)生毒素，可見淀粉對(duì)形成毒素有促進(jìn)作用。葡萄球菌在牛奶和谷粉粥上，于20℃-37℃下經(jīng)4h-8h產(chǎn)生引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品，主要為肉、奶、魚、蛋類及其制品等動(dòng)物性食品。熟肉類如在熟后污染了致病葡萄球菌，又在20℃-30℃的環(huán)境下放置較長(zhǎng)時(shí)間，則極易引起中毒；奶和奶制品以及用奶制作的冷飲（冰激凌、冰棍）和奶油糕點(diǎn)常是引起中毒的食品；油煎雞蛋、熏魚、油浸魚罐頭等含油脂較多的食品，在污染上致病性葡萄球菌以后也能產(chǎn)生毒素。引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品，主要為肉、奶、魚、蛋類及其制葡萄球菌在空氣中氧較低時(shí)較易產(chǎn)生腸毒素因此帶有此菌的食品，在通風(fēng)不良的高溫下放置，極有利此菌生長(zhǎng)并產(chǎn)生毒素。當(dāng)食品污染了葡萄球菌并同時(shí)污染了其他微生物時(shí)，葡萄球菌的繁殖則受到抑制。如食品經(jīng)加熱，原有的各種微生物已被殺死，拮抗微生物也不復(fù)存在，熟后再一次被葡萄球菌污染，則將會(huì)促進(jìn)葡萄球菌的生長(zhǎng)并形成毒素。葡萄球菌在空氣中氧較低時(shí)較易產(chǎn)生腸毒素因此帶有此菌的食品，葡萄球菌引起的食物中毒在常發(fā)生于夏秋季節(jié)，這是因?yàn)闅鉁剌^高，有利于細(xì)菌繁殖。但在冬季，如受到污染的食品在溫度較高的室內(nèi)保存，葡萄球菌也可繁殖并產(chǎn)生毒素。葡萄球菌引起的食物中毒在常發(fā)生于