實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件

實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆砧b別大腸菌群的方法掌握以最大概率數(shù)法測(cè)定大腸菌群數(shù)量的方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)原理大腸菌群指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源于人畜糞便,以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷食品有否被腸道致病菌污染。食品中大腸菌群以100m檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示實(shí)驗(yàn)原理2檢驗(yàn)程序乳糖膽鹽發(fā)酵臂36±1)℃24±2)h伊紅美藍(lán)瓊庸平板36土1℃,18~24h蘭染色乳糖發(fā)酬管36±1)℃24=2)h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽孢桿菌不產(chǎn)氣大腸蘭群陰性大腸群性][大斷面群陰性報(bào)肯檢驗(yàn)程序3實(shí)驗(yàn)設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱:(36±1)℃顯微鏡培養(yǎng)皿試管、移液管、三角燒瓶、小倒管天平載玻片實(shí)驗(yàn)設(shè)備4實(shí)驗(yàn)試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管:20g蛋白胨、5g豬膽鹽及10g乳糖溶于L水中,校正pH為74,加25m溴甲酚紫指示液(0.4g兒),分裝每管20m,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌20min。伊紅美藍(lán)瓊脂平板:10g蛋白陳、29K2HPO4及179瓊脂溶解于1L水中,校正pH至71,分裝于錐形瓶?jī)?nèi),121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加人10g乳糖并加熱溶化瓊脂冷至50~55℃。加人20mL伊紅溶液(20g/)和0ML美藍(lán)溶液(6.5g/)搖勻,傾注平板實(shí)驗(yàn)試劑5乳糖發(fā)酵管:將20g蛋白陳和10g乳糖溶于1水中,校正pH至74,加入25mL溴甲酚紫指示液(04g/),按檢驗(yàn)要求分裝,并放人一個(gè)小倒管,加熱至115℃高壓滅菌15min滅菌生理鹽水:0.9%乳糖發(fā)酵管:6革蘭氏染色液①結(jié)晶紫染色液:1g結(jié)晶紫溶于20mL95%乙醇,與80m草酸銨溶液(10g/凵混合,搖勻。②革蘭氏碘液1g碘與2g碘化鉀混合后,用少量水溶解,稀釋至300mL。③沙黃復(fù)染液025g沙黃溶于10m95%乙醇中,然后用90m水稀釋,混勻。革蘭氏染色液7實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1)檢樣稀釋(無菌操作)①將25mL(或g)檢樣置于含225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶,充分振搖(固體檢樣用勻漿器,用8000-1000min的速度處理1min)制成1:10的均勻稀釋液。②用1m滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi),混勻,制成1:100的稀釋液③另取1mL滅菌試管,按②操作依次做10倍遞增稀釋液,每稀釋一次,換用一支1mL滅菌試管。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟82)乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)接種2mL待檢樣品于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)接種3個(gè)稀釋度,每一稀釋度接種3管,置(36土1)℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)(24士2)h。如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸桿菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。2)乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)93)分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)接在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置(36士1)℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1824h。取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。3)分離培養(yǎng)10實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件11實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件12實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件13實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件14實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件15實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件16實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件17實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件18實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件19實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件20實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件21實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件22實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件23實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件24實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件25實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件26實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件27實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆砧b別大腸菌群的方法掌握以最大概率數(shù)法測(cè)定大腸菌群數(shù)量的方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?8實(shí)驗(yàn)原理大腸菌群指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源于人畜糞便,以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷食品有否被腸道致病菌污染。食品中大腸菌群以100m檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示實(shí)驗(yàn)原理29檢驗(yàn)程序乳糖膽鹽發(fā)酵臂36±1)℃24±2)h伊紅美藍(lán)瓊庸平板36土1℃,18~24h蘭染色乳糖發(fā)酬管36±1)℃24=2)h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽孢桿菌不產(chǎn)氣大腸蘭群陰性大腸群性][大斷面群陰性報(bào)肯檢驗(yàn)程序30實(shí)驗(yàn)設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱:(36±1)℃顯微鏡培養(yǎng)皿試管、移液管、三角燒瓶、小倒管天平載玻片實(shí)驗(yàn)設(shè)備31實(shí)驗(yàn)試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管:20g蛋白胨、5g豬膽鹽及10g乳糖溶于L水中,校正pH為74,加25m溴甲酚紫指示液(0.4g兒),分裝每管20m,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌20min。伊紅美藍(lán)瓊脂平板:10g蛋白陳、29K2HPO4及179瓊脂溶解于1L水中,校正pH至71,分裝于錐形瓶?jī)?nèi),121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)加人10g乳糖并加熱溶化瓊脂冷至50~55℃。加人20mL伊紅溶液(20g/)和0ML美藍(lán)溶液(6.5g/)搖勻,傾注平板實(shí)驗(yàn)試劑32乳糖發(fā)酵管:將20g蛋白陳和10g乳糖溶于1水中,校正pH至74,加入25mL溴甲酚紫指示液(04g/),按檢驗(yàn)要求分裝,并放人一個(gè)小倒管,加熱至115℃高壓滅菌15min滅菌生理鹽水:0.9%乳糖發(fā)酵管:33革蘭氏染色液①結(jié)晶紫染色液:1g結(jié)晶紫溶于20mL95%乙醇,與80m草酸銨溶液(10g/凵混合,搖勻。②革蘭氏碘液1g碘與2g碘化鉀混合后,用少量水溶解,稀釋至300mL。③沙黃復(fù)染液025g沙黃溶于10m95%乙醇中,然后用90m水稀釋,混勻。革蘭氏染色液34實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1)檢樣稀釋(無菌操作)①將25mL(或g)檢樣置于含225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶,充分振搖(固體檢樣用勻漿器,用8000-1000min的速度處理1min)制成1:10的均勻稀釋液。②用1m滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi),混勻,制成1:100的稀釋液③另取1mL滅菌試管,按②操作依次做10倍遞增稀釋液,每稀釋一次,換用一支1mL滅菌試管。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟352)乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)接種2mL待檢樣品于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)接種3個(gè)稀釋度,每一稀釋度接種3管,置(36土1)℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)(24士2)h。如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸桿菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。2)乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)363)分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)接在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置(36士1)℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1824h。取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。3)分離培養(yǎng)37實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件38實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件39實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件40實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件41實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件42實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課件43實(shí)驗(yàn)大腸菌群的檢驗(yàn)課