流式細胞的原理與臨床應(yīng)用課件

什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器目標(biāo)物可以是細胞、細菌或各種微粒0.5um~50um范圍內(nèi)什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器1流式細胞儀原理介紹流式細胞儀原理介紹2流式細胞儀基本原理示意圖流式細胞儀基本原理示意圖3流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束4通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞5流式細胞儀標(biāo)本準(zhǔn)備染色的一般原則及方法流式細胞儀標(biāo)本準(zhǔn)備6標(biāo)本來源：

外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。以及血清或各類體液樣本。標(biāo)本來源：外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其7其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE2，抗體與抗原結(jié)合后形成的復(fù)合物易被吞噬細胞清除；檢測流動中細胞（顆粒）的儀器Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。AIDS目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml其他樣本，計數(shù)后決定使用體積SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；活動性特應(yīng)性皮炎外周血白細胞分析：100ul全血表面標(biāo)志物：CD3，與TCR形成復(fù)合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的主要單位。NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。檢測流動中細胞（顆粒）的儀器3、FACSLysingSolution免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。HLA-B27屬于1型MHC基因。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病?？贵w染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）紅細胞分析：1ul全血（根據(jù)樣本中紅細胞數(shù)稀釋后使用）骨髓：100ul其他樣本，計數(shù)后決定使用體積目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-P8孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：細胞內(nèi)因子檢測需冰育）溶血：如樣本含中有紅細胞需溶血樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：9流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少FS（前向散射光）--反應(yīng)細胞大小流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)10設(shè)門：選擇要分析的細胞群體設(shè)定陰性、陽性范圍設(shè)門：選擇要分析的細胞群體設(shè)定陰性、陽性范圍11目前流式細胞儀臨床檢測項目目前流式細胞儀臨床檢測項目12流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)131、

HLA-B27的檢測1、HLA-B27的檢測14強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis）意為彎曲的脊柱。它是和種慢性、進行性和炎性疾病，主要累及骶骼關(guān)節(jié)、脊柱、脊柱骨軟組織及四肢關(guān)節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤維環(huán)和纖維環(huán)附近結(jié)締組織的骨化，椎間動關(guān)節(jié)和四肢關(guān)節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴(yán)重者可失去勞動能力。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。

就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關(guān)，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。

B27與強直性脊柱炎強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis15HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的強直性脊柱炎患者HLA－B27為陽性。但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。瑞特綜合征－65－90％瑞特綜合癥患者HLA-B27為陽性。如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是該疾病發(fā)生的必要條件，但是卻與病程發(fā)展有緊密聯(lián)系。“反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎”－是一種自身限制的少關(guān)節(jié)型關(guān)節(jié)炎伴隨著革蘭氏陰性細菌如桿菌性痢疾，沙門氏菌，弧形桿菌，耶爾森氏菌和至賀氏菌引起的胃腸感染。銀屑病關(guān)節(jié)炎

-

90%的銀屑病關(guān)節(jié)炎聯(lián)合薦腸關(guān)節(jié)炎和脊椎炎患者HLAB27陽性。急性前葡萄膜炎－通常表現(xiàn)為疼痛，畏光和流淚?？赡苁呛缒じ腥净蚪Y(jié)合了睫狀體或視網(wǎng)膜萎縮。青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。相反，青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎I，同樣也是少關(guān)節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關(guān)聯(lián)，卻不是B27。HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的16HLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；旧媳磉_在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。使用熒光定量標(biāo)準(zhǔn)微球，校正HLA-B27實驗條件后，測定樣本中T淋巴細胞HLA-B27表達水平。若HLA-B27表達水平大于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陽性結(jié)果；若HLA-B27表達水平低于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陰性結(jié)果。Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE

2、HLA-B27Calibrationbeads3、FACSLysingSolutionHLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；?7HLA-B27流式細胞儀檢測HLA-B27流式細胞儀檢測18HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)檢測流動中細胞（顆粒）的儀器胰島素依賴性糖尿病通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度流式細胞儀分析報告及圖譜HLA-B27屬于1型MHC基因。目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml乙型肝炎外周血白細胞分析：100ul全血HLA-B27流式細胞儀檢測血小板減少HLA-B27屬于1型MHC基因。HLA-B27流式細胞儀檢測自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；外周血白細胞分析：100ul全血CD4+/CD8+CD4+CD8+CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。3、FACSLysingSolutionAnti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；流式細胞儀檢測什么信號？2、淋巴細胞亞群分析HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)2、淋巴細胞亞群分析19淋巴細胞亞群基礎(chǔ)知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤細胞。表面標(biāo)志物：CD3，與TCR形成復(fù)合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的主要單位。CD3+/CD4+：輔助性T細胞CD3+/CD8+：殺傷性T細胞淋巴細胞亞群基礎(chǔ)知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤20CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免21B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。1，產(chǎn)生的抗體可與抗原起特異性的結(jié)合，如中和細菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗體與抗原結(jié)合后形成的復(fù)合物易被吞噬細胞清除；3，抗體與抗原結(jié)合后再結(jié)合補體清除病原體。B細胞特異性標(biāo)志物：CD19B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。22NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。NK細胞表面標(biāo)志物：CD3-/CD16+CD56+NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體23通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預(yù)后，監(jiān)測、指導(dǎo)臨床治療方案。淋巴細胞亞群的臨床檢測通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔24總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；器官移植排斥反應(yīng)；重癥肌無力；甲亢與甲狀腺炎患者；何杰金病T-淋巴細胞下降多見于：惡性腫瘤；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋?。唤邮芊暖?、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑B-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；巨球蛋白血癥；淋巴瘤；艾滋病B-淋巴細胞下降多見于：原發(fā)性免疫缺陷病，如性聯(lián)無丙種球蛋白血癥等、惡性腫瘤T-淋巴細胞與B-淋巴細胞同時下降多見于：聯(lián)合免疫缺陷病，如重癥狀聯(lián)合免疫缺陷病等總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多25CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病（如SCID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾?。ㄈ缭赟LE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當(dāng)使用類固醇藥物治療時，也可能上升。在急性GVHD和移植排斥中，CD8+淋巴細胞所占的比例有可能在正常人的范圍之外）

Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病（26CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫失調(diào)或已知患有免疫缺陷的病人的免疫狀態(tài)，此外，這一比值還可用來監(jiān)測骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻擊

CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。

CD4/CD8降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。Th/Ts比值CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫27自然殺傷細胞（NK）

NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；長期使用干擾素或使用干擾素的誘導(dǎo)物；骨髓移植后；習(xí)慣性流產(chǎn)。

NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。自然殺傷細胞（NK）NK細胞增高常見于：某些28Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；1、HLA-B27的檢測其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PECD4+/CD8+CD4+CD8+基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。Q&A自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；外周血白細胞分析：100ul全血部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。流式細胞儀基本原理示意圖自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；血吸蟲病自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；5um~50um范圍內(nèi)自然殺傷細胞（NK）如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少Q(mào)&A惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml5um~50um范圍內(nèi)CD4+/CD8+CD4+CD8+Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)5um~50um范圍內(nèi)檢測流動中細胞（顆粒）的儀器3、FACSLysingSolution乙型肝炎強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。乙型肝炎乙肝（急性期/慢性肝炎）若HLA-B27表達水平大于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陽性結(jié)果；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。ㄈ鏢CID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾病（如在SLE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當(dāng)使用類固醇藥物治療時，也可能上升。外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）腫瘤的細胞周期和倍體分析CD4+/CD8+CD4+CD8+結(jié)核（胸水/重癥外周血）惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·

342·

中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月Anti-HLA-B27Kit(美國BDBioscien29疾病T細胞亞群

CD4+/CD8+CD4+CD8+類風(fēng)關(guān)（活動期）

SLE-或（活動期）

Sjogren綜合癥

多發(fā)性硬化癥

重癥肌無力

膜型腎小球腎炎

胰島素依賴性糖尿病

乙型肝炎自身溶血性貧血

上呼吸道感染

傳染性單核細胞增多癥（急性期）疾病30巨細胞病毒感染

乙肝（急性期/慢性肝炎）

結(jié)核（胸水/重癥外周血）麻風(fēng)

瘧疾

血吸蟲病

AIDS

CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+腫瘤

再障及粒細胞減少癥

巨細胞病毒感染

血小板減少

活動性特應(yīng)性皮炎

過敏性皮炎

巨細胞病毒感染31BD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC

MultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCBD四色淋巴亞群檢測試劑盒：

MultiTESTCD3F32Q&AQ&A33什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器目標(biāo)物可以是細胞、細菌或各種微粒0.5um~50um范圍內(nèi)什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器34流式細胞儀原理介紹流式細胞儀原理介紹35流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束36通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞37抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）紅細胞分析：1ul全血（根據(jù)樣本中紅細胞數(shù)稀釋后使用）骨髓：100ul其他樣本，計數(shù)后決定使用體積目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血目標(biāo)細胞數(shù)量38B細胞特異性標(biāo)志物：CD19淋巴細胞亞群的臨床檢測疾病T細胞亞群其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE5um~50um范圍內(nèi)部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；表面標(biāo)志物：CD3，與TCR形成復(fù)合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的主要單位。疾病T細胞亞群目前流式細胞儀臨床檢測項目檢測流動中細胞（顆粒）的儀器外周血白細胞分析：100ul全血CD3+/CD4+：輔助性T細胞相反，青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎I，同樣也是少關(guān)節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關(guān)聯(lián)，卻不是B27。青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋?。灰腋危毙云?慢性肝炎）CD4+/CD8+CD4+CD8+目標(biāo)物可以是細胞、細菌或各種微粒0.目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml溶血：如樣本含中有紅細胞需溶血5um~50um范圍內(nèi)外周血白細胞分析：100ul全血外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；血吸蟲病類風(fēng)關(guān)（活動期）乙型肝炎CAT:340183)，CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。淋巴細胞亞群的臨床檢測強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PET-淋巴細胞與B-淋巴細胞同時下降多見于：聯(lián)合免疫缺陷病，如重癥狀聯(lián)合免疫缺陷病等CD4+/CD8+CD4+CD8+HLA-B27流式細胞儀檢測目標(biāo)物可以是細胞、細菌或各種微粒0.Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)檢測流動中細胞（顆粒）的儀器自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；外周血白細胞分析：100ul全血基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。B細胞特異性標(biāo)志物：CD195um~50um范圍內(nèi)CD8+T39什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器目標(biāo)物可以是細胞、細菌或各種微粒0.5um~50um范圍內(nèi)什么是流式細胞儀？檢測流動中細胞（顆粒）的儀器40流式細胞儀原理介紹流式細胞儀原理介紹41流式細胞儀基本原理示意圖流式細胞儀基本原理示意圖42流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束流式細胞儀檢測什么信號？細胞抗原抗體熒光激光束43通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度

通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞44流式細胞儀標(biāo)本準(zhǔn)備染色的一般原則及方法流式細胞儀標(biāo)本準(zhǔn)備45標(biāo)本來源：

外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其他。以及血清或各類體液樣本。標(biāo)本來源：外周血、骨髓、組織塊、培養(yǎng)細胞、脫落細胞及其46其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE2，抗體與抗原結(jié)合后形成的復(fù)合物易被吞噬細胞清除；檢測流動中細胞（顆粒）的儀器Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。AIDS目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml其他樣本，計數(shù)后決定使用體積SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；活動性特應(yīng)性皮炎外周血白細胞分析：100ul全血表面標(biāo)志物：CD3，與TCR形成復(fù)合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的主要單位。NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。檢測流動中細胞（顆粒）的儀器3、FACSLysingSolution免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。HLA-B27屬于1型MHC基因。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。抗體染色一般方法外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）紅細胞分析：1ul全血（根據(jù)樣本中紅細胞數(shù)稀釋后使用）骨髓：100ul其他樣本，計數(shù)后決定使用體積目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-P47孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：細胞內(nèi)因子檢測需冰育）溶血：如樣本含中有紅細胞需溶血樣本溶血后離心上機檢測（固定后可放置較長時間）孵育、溶血、固定抗體孵育：室溫下避光15分鐘（某些情況下如：48流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少FS（前向散射光）--反應(yīng)細胞大小流式細胞儀分析報告及圖譜SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)49設(shè)門：選擇要分析的細胞群體設(shè)定陰性、陽性范圍設(shè)門：選擇要分析的細胞群體設(shè)定陰性、陽性范圍50目前流式細胞儀臨床檢測項目目前流式細胞儀臨床檢測項目51流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病流式細胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)521、

HLA-B27的檢測1、HLA-B27的檢測53強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis）意為彎曲的脊柱。它是和種慢性、進行性和炎性疾病，主要累及骶骼關(guān)節(jié)、脊柱、脊柱骨軟組織及四肢關(guān)節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤維環(huán)和纖維環(huán)附近結(jié)締組織的骨化，椎間動關(guān)節(jié)和四肢關(guān)節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴(yán)重者可失去勞動能力。強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。

就目前的研究文獻而言，HLA-B27與AS并非絕對相關(guān)，有些AS患者表現(xiàn)為HLA-B27陰性，而且并非所有HLA-B27陽性者均出現(xiàn)AS癥狀。

B27與強直性脊柱炎強直性脊柱炎（ankylosingspondylistis54HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的強直性脊柱炎患者HLA－B27為陽性。但是HLA-B27陽性的人群中只有8－20％是強直性脊柱炎。瑞特綜合征－65－90％瑞特綜合癥患者HLA-B27為陽性。如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是該疾病發(fā)生的必要條件，但是卻與病程發(fā)展有緊密聯(lián)系。“反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎”－是一種自身限制的少關(guān)節(jié)型關(guān)節(jié)炎伴隨著革蘭氏陰性細菌如桿菌性痢疾，沙門氏菌，弧形桿菌，耶爾森氏菌和至賀氏菌引起的胃腸感染。銀屑病關(guān)節(jié)炎

-

90%的銀屑病關(guān)節(jié)炎聯(lián)合薦腸關(guān)節(jié)炎和脊椎炎患者HLAB27陽性。急性前葡萄膜炎－通常表現(xiàn)為疼痛，畏光和流淚?？赡苁呛缒じ腥净蚪Y(jié)合了睫狀體或視網(wǎng)膜萎縮。青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎II－這些兒童中75％為HLAB27+。相反，青少年風(fēng)濕癥/慢性關(guān)節(jié)炎I，同樣也是少關(guān)節(jié)性的，但是更常見于女孩，與慢性虹膜睫狀體炎(30%)，陽性的ANA(80%)和HLADR5關(guān)聯(lián)，卻不是B27。HLA-B27診斷的臨床意義強直性脊柱炎－90-100%的55HLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因。基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。使用熒光定量標(biāo)準(zhǔn)微球，校正HLA-B27實驗條件后，測定樣本中T淋巴細胞HLA-B27表達水平。若HLA-B27表達水平大于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陽性結(jié)果；若HLA-B27表達水平低于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陰性結(jié)果。Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE

2、HLA-B27Calibrationbeads3、FACSLysingSolutionHLA-B27的臨床檢測HLA-B27屬于1型MHC基因?；?6HLA-B27流式細胞儀檢測HLA-B27流式細胞儀檢測57HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)檢測流動中細胞（顆粒）的儀器胰島素依賴性糖尿病通過流式細胞儀我們可以得到以下信息

-相對細胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度(SSC)

-相對細胞大小(FSC)

-染色過細胞的相對熒光強度流式細胞儀分析報告及圖譜HLA-B27屬于1型MHC基因。目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml乙型肝炎外周血白細胞分析：100ul全血HLA-B27流式細胞儀檢測血小板減少HLA-B27屬于1型MHC基因。HLA-B27流式細胞儀檢測自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；外周血白細胞分析：100ul全血CD4+/CD8+CD4+CD8+CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。3、FACSLysingSolutionAnti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；流式細胞儀檢測什么信號？2、淋巴細胞亞群分析HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)2、淋巴細胞亞群分析58淋巴細胞亞群基礎(chǔ)知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤細胞。表面標(biāo)志物：CD3，與TCR形成復(fù)合體，是T細胞識別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的主要單位。CD3+/CD4+：輔助性T細胞CD3+/CD8+：殺傷性T細胞淋巴細胞亞群基礎(chǔ)知識T淋巴細胞：主要殺傷病原體感染細胞及腫瘤59CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要功能。Tc細胞識別抗原活化后釋放胞漿內(nèi)顆粒毒素：穿孔素perforin和顆粒酶granzyme，殺傷靶細胞。CD8+T細胞又稱細胞毒性T細胞，Tc或CTL，它在T細胞免60B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。1，產(chǎn)生的抗體可與抗原起特異性的結(jié)合，如中和細菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗體與抗原結(jié)合后形成的復(fù)合物易被吞噬細胞清除；3，抗體與抗原結(jié)合后再結(jié)合補體清除病原體。B細胞特異性標(biāo)志物：CD19B淋巴細胞B淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的抗體產(chǎn)生細胞。61NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體，NK細胞一經(jīng)識別病毒感染細胞后即對之施加殺傷作用。NK細胞表面標(biāo)志物：CD3-/CD16+CD56+NK細胞NK自然殺傷細胞：識別病毒感染細胞表面表達的相應(yīng)配體62通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔助臨床疾病的診斷，探索疾病發(fā)病機理、病程、預(yù)后，監(jiān)測、指導(dǎo)臨床治療方案。淋巴細胞亞群的臨床檢測通過淋巴細胞亞群的檢測可了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，輔63總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多見于：慢性活動性肝炎或慢性遷延性肝炎；器官移植排斥反應(yīng)；重癥肌無力；甲亢與甲狀腺炎患者；何杰金病T-淋巴細胞下降多見于：惡性腫瘤；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；原發(fā)性免疫缺陷病，如生天性胸腺發(fā)育不全等、艾滋病；接受放療、化療或者使用腎上腺皮質(zhì)激素等免疫抑制劑B-淋巴細胞上升多見于：多發(fā)性骨髓瘤；巨球蛋白血癥；淋巴瘤；艾滋病B-淋巴細胞下降多見于：原發(fā)性免疫缺陷病，如性聯(lián)無丙種球蛋白血癥等、惡性腫瘤T-淋巴細胞與B-淋巴細胞同時下降多見于：聯(lián)合免疫缺陷病，如重癥狀聯(lián)合免疫缺陷病等總T和總B判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病T-淋巴細胞上升多64CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾病（如SCID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾病（如在SLE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當(dāng)使用類固醇藥物治療時，也可能上升。在急性GVHD和移植排斥中，CD8+淋巴細胞所占的比例有可能在正常人的范圍之外）

Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。?5CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫失調(diào)或已知患有免疫缺陷的病人的免疫狀態(tài)，此外，這一比值還可用來監(jiān)測骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻擊

CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。

CD4/CD8降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。Th/Ts比值CD4+/CD8+的比值：評價那些自身免疫失調(diào)或被懷疑是免疫66自然殺傷細胞（NK）

NK細胞增高常見于：某些病毒感染性疾病的早期；長期使用干擾素或使用干擾素的誘導(dǎo)物；骨髓移植后；習(xí)慣性流產(chǎn)。

NK細胞降低常見于：惡性腫瘤，特別是中晚期或伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤；免疫缺陷病及使用腎上腺激素等免疫抑制劑。部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。自然殺傷細胞（NK）NK細胞增高常見于：某些67Anti-HLA-B27Kit(美國BDBiosciences公司；1、HLA-B27的檢測其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PECD4+/CD8+CD4+CD8+基本上表達在機體所有有核細胞上，特別是淋巴細胞表面有豐富的含量。Q&A自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；外周血白細胞分析：100ul全血部分病毒感染、細菌感染及真菌感染；CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。流式細胞儀基本原理示意圖自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；血吸蟲病自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；5um~50um范圍內(nèi)自然殺傷細胞（NK）如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。SS（側(cè)向散射光）--反應(yīng)細胞內(nèi)物質(zhì)的多少Q(mào)&A惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·342·中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月如果HLAB27+個體是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性發(fā)展為瑞特綜合癥，只有1％的可能性正常。目標(biāo)細胞數(shù)量及檢測終濃度：1×106/ml5um~50um范圍內(nèi)CD4+/CD8+CD4+CD8+Th和Ts淋巴細胞的百分數(shù)5um~50um范圍內(nèi)檢測流動中細胞（顆粒）的儀器3、FACSLysingSolution乙型肝炎強直性脊柱炎是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病中具有代表性的疾病，臨床上曾長期把AS誤認為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的一個亞型，60年代以來人們才認識到期無論從病因?qū)W、遺傳學(xué)、流行病學(xué)和臨床表現(xiàn)特點等諸多方面來看，AS都是一種不同于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的獨立疾病。乙型肝炎乙肝（急性期/慢性肝炎）若HLA-B27表達水平大于標(biāo)準(zhǔn)微球設(shè)定MARK，則為陽性結(jié)果；自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等；CD4/CD8升高：自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE。CD4+和CD8+T細胞有助于監(jiān)測患有免疫缺陷疾?。ㄈ鏢CID、AIDS的病人體內(nèi)CD4+細胞亞群的百分率相對降低，而CD8+群體的百分率相對升高），自身免疫性疾病（如在SLE病人中，CD8+淋巴細胞的相對百分比往往會降低，但當(dāng)使用類固醇藥物治療時，也可能上升。外周血白細胞分析：100ul全血血小板分析：1~5ul全血（根據(jù)樣本血小板數(shù)量）腫瘤的細胞周期和倍體分析CD4+/CD8+CD4+CD8+結(jié)核（胸水/重癥外周血）惡性腫瘤患者T細胞亞群和SIL22R的變化及意義盧香蘭1,李霞1,王萍萍1,李玲2,李艷1·

342·

中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報JChinMedUniv第33卷第3期2004年6月Anti-HLA-B27Kit(美國BDBioscien68疾病T細胞亞群

CD4+/CD8+CD4+CD8+類風(fēng)關(guān)（活動期）

SLE-或（活動期）

Sjogren綜合癥

多發(fā)性硬化癥

重癥肌無力

膜型腎小球腎炎

胰島素依賴性糖尿病

乙型肝炎自身溶血性貧血

上呼吸道感染

傳染性單核細胞增多癥（急性期）疾病69巨細胞病毒感染

乙肝（急性期/慢性肝炎）

結(jié)核（胸水/重癥外周血）麻風(fēng)

瘧疾

血吸蟲病

AIDS

CD4+/CD8+CD3+CD4+CD8+腫瘤

再障及粒細胞減少癥

巨細胞病毒感染

血小板減少

活動性特應(yīng)性皮炎