實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件

實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)1地貧的發(fā)病率、地域分布及危害

地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；廣西發(fā)病率為20%；重型地貧給家庭社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；地貧的發(fā)病率、地域分布及危害地中海沿岸國家、東南亞及中國南2實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件3中國南方人群地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計(jì)廣西17.66.424.0廣東8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1貴州4.25.19.3重慶5.22.07.2中國南方人群地貧基因攜帶率地區(qū)攜帶率(%)地貧β地貧4高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估5定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：

由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：6其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或7地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；診斷(Diagnosis)貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；5%,則為β地貧基因攜帶者標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成?；靹?，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。肽鏈分析Peptidechainanalyses（勿倒掉比色杯中的溶液）溶血％=D1×100％βchaindisappear6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；【參考值（參考范圍）】父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。肽鏈分析Peptidechainanalyses地中海貧血的病理生理地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；地中海貧血的病理生理8實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件9α-地中海貧血

重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）4個(gè)α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。α-地中海貧血重型α地貧10實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件11實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件12實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件13實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件14重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血15重度β-地中海貧血骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等重度β-地中海貧血骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻16重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血17重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血18血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis肽鏈分析PeptidechainanalysesD2X1.3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml?！緟⒖贾担▍⒖挤秶緿2X1.高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。（HbBart’s胎兒水腫綜合征）2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；Erythrocytefragilitytest臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。βchaindisappear重度β-地中海貧血血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores19重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血20重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血21實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件22實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件23結(jié)論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測(cè)。2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。3.產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產(chǎn)前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。5.無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷是未來發(fā)展的方向。結(jié)論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推24羊膜腔穿刺術(shù)羊膜腔穿刺術(shù)25羊膜腔穿刺術(shù)羊膜腔穿刺術(shù)26實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查27--靶型RBC--靶型RBC28本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。αchaindisappear正常溶血率：指紅細(xì)胞滲透脆性在正常范圍。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)重型地貧給家庭社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。地貧診斷基因芯片(Thalachip);臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）（勿倒掉比色杯中的溶液）（勿倒掉比色杯中的溶液）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。肽鏈分析Peptidechainanalyses臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）溶血％=D1×100％溶血率降低：指紅細(xì)胞滲透脆性降低；7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。地貧診斷基因芯片(Thalachip);【參考值（參考范圍）】本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。

紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)Erythrocytefragilitytest地貧患者正常人本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。29血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores30實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件31

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽鏈分析Peptidechain

analyses

32單管多重PCR

單管多重PCR

33

PCR-ASO

PCR-ASO34診斷(Diagnosis)

臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）診斷(Diagnosis)臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽35

地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可懷疑為地貧;HbA2<2.5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.HbA2>3.5%,則為β地貧基因攜帶者地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH36

地中海貧血確診試驗(yàn)

地貧診斷基因芯片(Thalachip);地貧基因診斷條膜(反向點(diǎn)雜交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探針點(diǎn)雜交DNA測(cè)序地中海貧血確診試驗(yàn)

地貧診斷基因芯片(Thalachip)37鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺鐵性貧血遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥傳染性肝炎或肝硬化鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺38實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)

(試劑盒一管法)實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)39【檢驗(yàn)原理】貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。測(cè)定紅細(xì)胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴(yán)重缺鐵性貧血癥）【檢驗(yàn)原理】40【主要組成成分】組成：由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；SG-B母液（終止紅細(xì)胞溶血液）；SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成?！局饕M成成分】41【樣品要求】新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標(biāo)本為不合格樣品。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成?！緲悠芬蟆?2【實(shí)驗(yàn)操作】1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37℃，預(yù)熱1-2分鐘。2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。4、將上清液輕輕倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。溶血

％=D1

×100％D2X1.25【實(shí)驗(yàn)操作】溶血％=D143βchaindisappear7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。SG-C母液采用皂素（saponin）制成。溶血％=D1×100％鑒別診斷(Differentialdiagnosis)5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；地中海貧血初篩檢查SG-B母液采用氯化鈉制成；5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.肽鏈分析Peptidechainanalyses標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。βchaindisappear7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。SG-B母液采用氯化鈉制成；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。溶血％=D1×100％本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)SG-B母液（終止紅細(xì)胞溶血液）；SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。Erythrocytefragilitytest父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。溶血％=D1×100％混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37℃，預(yù)熱1-2分鐘。父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。（勿倒掉比色杯中的溶液）6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2?！緟⒖贾担▍⒖挤秶勘窘M疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標(biāo)本為不合格樣品。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。地貧診斷基因芯片(Thalachip);溶血率降低：指紅細(xì)胞滲透脆性降低；【參考值（參考范圍）】溶血率％>65％為正常溶血率；<55％為溶血率降低；（注56-64％為溶血率輕度降低）?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】正常溶血率：指紅細(xì)胞滲透脆性在正常范圍。溶血率降低：指紅細(xì)胞滲透脆性降低；常見于地貧或低頻基因攜帶者、嚴(yán)重缺鐵性貧血者，小性紅細(xì)胞增多癥貧血者等。溶血率輕度降低：指紅細(xì)胞溶血率不明顯減低，在正常與可疑貧血癥之間。βchaindisappearSG-C母液采用皂素（sap44實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)45地貧的發(fā)病率、地域分布及危害

地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；廣西發(fā)病率為20%；重型地貧給家庭社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；地貧的發(fā)病率、地域分布及危害地中海沿岸國家、東南亞及中國南46實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件47中國南方人群地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計(jì)廣西17.66.424.0廣東8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1貴州4.25.19.3重慶5.22.07.2中國南方人群地貧基因攜帶率地區(qū)攜帶率(%)地貧β地貧48高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估49定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：

由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：50其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或51地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；診斷(Diagnosis)貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；5%,則為β地貧基因攜帶者標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成?；靹颍?000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘?；靹颍?000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。肽鏈分析Peptidechainanalyses（勿倒掉比色杯中的溶液）溶血％=D1×100％βchaindisappear6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；【參考值（參考范圍）】父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。肽鏈分析Peptidechainanalyses地中海貧血的病理生理地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；地中海貧血的病理生理52實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件53α-地中海貧血

重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）4個(gè)α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。α-地中海貧血重型α地貧54實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件55實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件56實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件57實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件58重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血59重度β-地中海貧血骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等重度β-地中海貧血骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻60重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血61重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血62血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis肽鏈分析PeptidechainanalysesD2X1.3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml?！緟⒖贾担▍⒖挤秶緿2X1.高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。（HbBart’s胎兒水腫綜合征）2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；Erythrocytefragilitytest臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。βchaindisappear重度β-地中海貧血血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores63重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血64重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血65實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件66實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件67結(jié)論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測(cè)。2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。3.產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產(chǎn)前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。5.無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷是未來發(fā)展的方向。結(jié)論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推68羊膜腔穿刺術(shù)羊膜腔穿刺術(shù)69羊膜腔穿刺術(shù)羊膜腔穿刺術(shù)70實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)室檢查71--靶型RBC--靶型RBC72本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。αchaindisappear正常溶血率：指紅細(xì)胞滲透脆性在正常范圍。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)重型地貧給家庭社會(huì)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。地貧診斷基因芯片(Thalachip);臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）（勿倒掉比色杯中的溶液）（勿倒掉比色杯中的溶液）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。肽鏈分析Peptidechainanalyses臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）溶血％=D1×100％溶血率降低：指紅細(xì)胞滲透脆性降低；7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。地貧診斷基因芯片(Thalachip);【參考值（參考范圍）】本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。

紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)Erythrocytefragilitytest地貧患者正常人本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。73血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores74實(shí)驗(yàn)四地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)課件75

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽鏈分析Peptidechain

analyses

76單管多重PCR

單管多重PCR

77

PCR-ASO

PCR-ASO78診斷(Diagnosis)

臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽性＋（基因分析）診斷(Diagnosis)臨床特點(diǎn)＋實(shí)驗(yàn)室檢查＋父母調(diào)查陽79

地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可懷疑為地貧;HbA2<2.5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標(biāo)準(zhǔn)α地貧.HbA2>3.5%,則為β地貧基因攜帶者地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH80

地中海貧血確診試驗(yàn)

地貧診斷基因芯片(Thalachip);地貧基因診斷條膜(反向點(diǎn)雜交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探針點(diǎn)雜交DNA測(cè)序地中海貧血確診試驗(yàn)

地貧診斷基因芯片(Thalachip)81鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺鐵性貧血遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥傳染性肝炎或肝硬化鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺82實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)

(試劑盒一管法)實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn)83【檢驗(yàn)原理】貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。測(cè)定紅細(xì)胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴(yán)重缺鐵性貧血癥）【檢驗(yàn)原理】84【主要組成成分】組成：由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；SG-B母液（終止紅細(xì)胞溶血液）；SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成；成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。【主要組成成分】85【樣品要求】新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標(biāo)本為不合格樣品。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。【樣品要求】86【實(shí)驗(yàn)操作】1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37℃，預(yù)熱1-2分鐘。2、加入待測(cè)抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml。混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。4、將上清液輕輕倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。6、將