微生物檢測的基本技術(shù)

2.4微生物檢測的基本技術(shù)染色觀察劃線接種，分離純化生化反應(yīng)Foodmate2004/3/13染色觀察革蘭氏染色1884年丹麥醫(yī)師Gram所發(fā)明

革

蘭

氏

染

色

法1.涂片固定2.單染—結(jié)晶紫染液第一次染色

1min

3.媒染—碘-碘化鉀溶液浸濕30S4.脫色—95%乙醇溶液進(jìn)行顏色洗脫5.復(fù)染—紅色的藩紅染液第二次染色

呈現(xiàn)第二次染色的效果紅色；稱革蘭氏陰性菌（紅陰G-）細(xì)菌呈現(xiàn)第一次染色的效果紫色，革蘭氏陽性菌（紫陽G＋）；劃線接種，分離純化Inoculatinganagarplatetoobtainsinglecolonies灼燒生化反應(yīng)應(yīng)來測定定微生物物的代謝謝產(chǎn)物，，生化反反應(yīng)常用用來鑒別別一些在在形態(tài)和和其它方方面不易易區(qū)別的的微生物物。微生物生生化反應(yīng)應(yīng)：糖酵解試試驗淀粉水解解試驗V-P試驗甲基紅（（MethylRed）試驗靛基質(zhì)（（Imdole）試驗枸椽酸鹽鹽試驗：：尿素酶（（Urease）試驗三糖鐵（（TSI）瓊脂試試驗糖酵解試試驗不同微生生物分解解利用糖糖類的能能力有很很大差異異，或能能利用或或不能利利用，能能利用者者，或產(chǎn)產(chǎn)氣或不不產(chǎn)氣。?？捎弥钢甘緞┘凹鞍l(fā)酵管管檢驗。。淀粉水解解試驗?zāi)承┘?xì)菌菌可以產(chǎn)產(chǎn)生分解解淀粉的的酶，把把淀粉水水解為麥麥芽糖或或葡萄糖糖。淀粉粉水解后后，遇碘碘不再變變藍(lán)色。。V-P試驗?zāi)承┘?xì)菌菌在葡萄萄糖蛋白白胨水培培養(yǎng)基中中能分解解葡萄糖糖產(chǎn)生丙丙酮酸，，丙酮酸酸縮合，，脫羧成成乙酰甲甲基甲醇醇，后者者在強(qiáng)堿堿環(huán)境下下，被空空氣中氧氧氧化為為二乙酰酰，二乙乙酰與蛋蛋白胨中中的胍基基生成紅紅色化合合物，稱稱V－P（+）反應(yīng)。。甲基紅（（MethylRed）試驗?zāi)c桿菌科科各菌屬屬都能發(fā)發(fā)酵葡萄萄糖，在在分解葡葡萄糖過過程中產(chǎn)產(chǎn)生丙酮酮酸，進(jìn)進(jìn)一步分分解中，，由于糖糖代謝的的途徑不不同，可可產(chǎn)生乳乳酸，琥琥珀酸、、醋酸和和甲酸等等大量酸酸性產(chǎn)物物，可使使培養(yǎng)基基PH值下降至至pH4.5以下，使使甲基紅紅指示劑劑變紅。。靛基質(zhì)（（Imdole）試驗?zāi)承┘?xì)菌菌能分解解蛋白胨胨中的色色氨酸，，生成吲吲哚。吲吲哚的存存在可用用顯色反反應(yīng)表現(xiàn)現(xiàn)出來。。吲哚與與對二甲甲基氨基基苯醛結(jié)結(jié)合，形形成玫瑰瑰吲哚，，為紅色色化合物物。枸椽酸鹽鹽試驗?zāi)承┘?xì)菌菌能利用用枸椽酸酸鹽作為為碳源，，及磷酸酸銨作為為氮源，，將枸椽椽酸鹽分分解為二二氧化碳碳，培養(yǎng)養(yǎng)基反應(yīng)應(yīng)后成堿堿性，由由于指示示劑的作作用，培培養(yǎng)基變變?yōu)樘m色色。尿素酶（（Urease）試驗有些細(xì)菌菌能產(chǎn)生生尿素酶酶，將尿尿素分解解、產(chǎn)生生2個分子的的氨，使使培養(yǎng)基基變?yōu)閴A堿性，酚酚紅呈粉粉紅色。。1、未接接種2、尿素素酶陽性性3、尿素素酶陰性性三糖鐵（（TSI）瓊脂試試驗本試驗可可同時觀觀察乳糖糖和蔗糖糖發(fā)酵產(chǎn)產(chǎn)酸或產(chǎn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣氣（變黃黃）；產(chǎn)產(chǎn)生硫化化氫（變變黑）。。葡萄糖糖被分解解產(chǎn)酸可可使斜面面先變黃黃，但因因量少，，生成的的少量酸酸，因接接觸空氣氣而氧化化，加之之細(xì)菌利利用培養(yǎng)養(yǎng)基中含含氮物質(zhì)質(zhì)，生成成堿性產(chǎn)產(chǎn)物，故故使斜面面后來又又變紅，，底部由由于是在在厭氧狀狀態(tài)下，，酸類不不被氧化化，所以以仍保持持黃色。。a.uninoculated

b.littlechange/alkaline/-/-

c.alkaline/acid/-/+

d.acid/acid/+/+

e.acid/acid/+/-

slantcolor/buttcolor/gasproduction/hydrogensulfideproduction沙門氏菌菌的TSI試驗驗謝謝觀看看/歡迎下載載BYFAITHIMEANAVISI