人一氧化氮合成酶elisa試劑盒使用說明書

人一氧化氮合成酶(NOS)elisa試劑盒使用說明書Elisakit規(guī)格：48孔配置/96孔配置標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5mlX1瓶酶標(biāo)試劑：3mlX1瓶(48)/6mlX1瓶(96)【人一氧化氮合成j(NOS)elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。試劑盒組成：封板膜：2片(48)/2片(96)說明書：1份密封袋:1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/L0.5mlX1瓶0.5mlX1瓶2-8°C保存酶標(biāo)包被板：1X481X962-8C保存樣品稀釋液:3mlX1瓶6mlX1瓶2-8C保存顯色劑A液:3mlX1瓶6mlX1瓶2-8C保存顯色劑B液:3mlX1瓶6mlX1瓶2-8C保存終止液：3mlX1瓶6mlX1瓶2-8C保存濃縮洗滌液：(20mlX20倍)X1瓶(20mlX30倍)X1瓶2-8C保存實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人一氧化氮合成酶(NOS)水平。用純化的人一氧化氮合成酶(NOS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS)，再與HRP標(biāo)記的一氧化氮合成酶(NOS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人一氧化氮合成酶(NOS)濃度。目的：本試劑盒用于測(cè)入血清，血漿及相關(guān)液體樣本中一氧化氮合成酶(NOS)的含量。服務(wù)承諾：供貨期：款到發(fā)貨。工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo)。請(qǐng)來電咨詢?yōu)榭蛻籼峁﹣順訖z測(cè)服務(wù)，最大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測(cè))。保存條件及有效期：試劑盒保存：2-8C|有效期：6個(gè)月【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa試劑盒】樣本處理及要求：血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8^的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100|il，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50gl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100gl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50gl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50gl棄掉，再各取50gl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50gl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50gl，混勻后從第七、第八孔中分別取50gl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50gl，混勻后從第九第十孔中各取50gl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50gl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40gl，然后再加待測(cè)樣品10gl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37C溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50gl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50gl，再加入顯色劑B50gl，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50gl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行?！救艘谎趸铣擅福∟OS）elis試劑盒】注意事項(xiàng)：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（I倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）o封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行