221動物細胞培養(yǎng)和核移植技術課件

知識回顧植物細胞工程植物細胞工程技術植物細胞工程應用植物組織培養(yǎng)植物體細胞雜交植物繁殖的新途徑作物新品種的培育細胞產物的工廠化生產知識回顧植物細胞工程植物細胞工程技術植物細胞工程應用植植植作1動物細胞工程動物細胞工程2動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞核移植技術、動物細胞融合技術、生產單克隆抗體技術動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞核3胰蛋白酶膠原蛋白酶.培養(yǎng)條件動物組織分散成

單個細胞細胞懸液培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶原理：細胞增殖（有絲分裂）結果：細胞群，細胞產物原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)過程胚胎的細胞或剛出生不久動物的組織胰蛋白酶.培養(yǎng)條件動物組織分散成

單個細胞細胞懸液培養(yǎng)胰蛋白4動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液原代培養(yǎng)細胞增殖部分細胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制5思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？２、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？３、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？４、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？沒有是成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質細胞間的成份是蛋白質思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？２、動物6思考題６、細胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動物細胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？蛋白質和磷脂能注意時間的控制不能，因為兩的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛思考題６、細胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細胞消化掉7思考題11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？13、如此時細胞數量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現象叫接觸抑制。將貼滿細胞壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)8思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去嗎？17、動物細胞培養(yǎng)就是為了得到這些細胞嗎？18、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展不是保存10代以內的細胞，因為10－50代部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細胞方向發(fā)展思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞9動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)細胞增殖部分細胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制10請總結出動物細胞培養(yǎng)的定義動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。請總結出動物細胞培養(yǎng)的定義動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相11221動物細胞培養(yǎng)和核移植技術課件12相互接觸接觸抑制單層胰蛋白酶衰老或死亡不死性降低減少相互接觸接觸抑制單層胰蛋白酶衰老或死亡不死性降低減少13活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入細胞，故不染色。中低溫新陳代謝酶抗原活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入細胞，故不染色。14思考題多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的知識，認為體培養(yǎng)細胞應該模擬內環(huán)境的哪些內容呢？思考題多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的知151、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基）保證細胞順利的生長增殖培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境保證細胞順利的生長增殖培養(yǎng)條件：16動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有血清、血漿動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境培養(yǎng)條件：動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽173、溫度和pH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基）3、溫度和pH培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境18思考題動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有血清、血漿等思考題動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？主要成分：獨特之處有：19獲得細胞或細胞產物細胞的全能性細胞數目增多一般為植物體培養(yǎng)結果快速繁殖、培育脫毒作物等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清促生長因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較獲得細胞或細胞產物細胞的全能性細胞數目增多一般20.動物細胞培養(yǎng)技術的實際應用1、大量生產細胞或產物。如：病毒疫苗干擾素

單克隆抗體胰島素2、給基因工程提供受體細胞。3、檢測有毒物質及毒性。4、用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據。.動物細胞培養(yǎng)技術的實際應用1、大量生產細胞或產物。21動物細胞培養(yǎng)核移植技術動物細胞培養(yǎng)22將動物的一個細胞的＿＿＿，移入一個已經去掉＿＿＿的＿＿細胞中，使其＿＿并發(fā)育成一個新的＿＿，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。分類

胚胎細胞核移植、體細胞核移植細胞核細胞核卵母重組胚胎核移植技術將動物的一個細胞的＿＿＿，移入一個已經去掉＿＿＿的＿＿細23母綿羊A乳腺細胞

（體細胞）

母綿羊B未受精的卵細胞

母綿羊C“多莉”新的卵細胞發(fā)育成早期胚胎去核卵細胞提取細胞核核移植胚胎移植體細胞核移植技術克隆羊母綿羊A乳腺細胞

（體細胞）母綿羊B未受精的卵細胞母綿24（MⅡ卵母細胞）減數第二次分裂中期2.結合P48圖2-21，敘述克隆高產奶牛的培育過程。將供體細胞注入去核卵母細胞核移植胚胎移植供體細胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細胞）減數第二次分裂中期2.結合P48圖2-2125胚胎移植胚胎發(fā)育供體體細胞細胞培養(yǎng)體細胞群細胞融合細胞胚胎代孕母體生出克隆個體卵巢卵母細胞(減Ⅱ)去核無核卵母細胞體細胞核移植技術過程胚胎移植胚胎發(fā)育供體體細胞細胞培養(yǎng)體細胞群細胞融合細胞胚胎代26整個過程用了哪些技術？細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植新生牛的性別、基因？與供體相同繁殖方式？無性繁殖原理？動物細胞核的全能性體細胞核移植技術整個過程用了哪些技術？體細胞核移植技術271、對比多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點？2、討論分析上述哪一種措施更科學？并說明理由？MⅡ卵母細胞細胞質中含有的物質更易支持胚胎的全程發(fā)育，用它作受體更容易成功。將供體細胞注入受體細胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便。思考與討論：（1）多莉克隆過程中受體細胞是去核卵細胞，高產奶?？寺∵^程中受體細胞是去核卵母細胞。（2）多莉克隆過程是將供體細胞核注入受體細胞，而高產奶牛的克隆過程是將供體細胞注入受體細胞。1、對比多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點28１、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？為使核移植動物的核遺傳物質全部來自有利用價值的動物提供的細胞。２、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內的細胞，為什么？10代以內的細胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變。討論：3、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細胞。不是１、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉29（三）體細胞核移植技術的應用前景閱讀P49-501、畜牧業(yè)方面：2、醫(yī)藥衛(wèi)生方面：可以加速家畜遺傳改良的進程，促進優(yōu)良畜群繁育。保護瀕危物種，增加其存活數量生產醫(yī)用蛋白質組織器官的移植3、其他領域了解胚胎發(fā)育及衰老過程更好追蹤研究疾病的發(fā)展過程、治療疾?。ㄈw細胞核移植技術的應用前景閱讀P49-501、畜牧業(yè)方30（四）體細胞核移植技術存在的問題1、成功率低2、克隆動物存在健康問題（四）體細胞核移植技術存在的問題1、成功率低2、克隆動物存在31植物組織培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)和核移植的比較植物組織培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)和核移植的比較32植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)核移植結果關鍵環(huán)節(jié)與外植體完全相同的個體相同分化程度的細胞群與供體基本相同的個體細胞的脫分化、再分化、分化細胞分化、細胞癌變核融合、細胞分化植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)核移植結關與外植體完全相同的個體相同33【高考警示鐘】1.植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)過程都存在細胞的培養(yǎng)過程，但植物細胞可以先分裂再分化，而動物細胞不分化只分裂。2.區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關鍵是是否分瓶培養(yǎng)。貼壁生長到一定程度需要用胰蛋白酶處理，然后再分瓶培養(yǎng)，原代培養(yǎng)結束，開始了傳代培養(yǎng)。3.植物組織培養(yǎng)成的植株與提供外植體的植株完全相同，而動物細胞核移植形成的個體與供體大部分性狀相同，也有部分性狀與受體相同?！靖呖季剧姟?4【典例訓練1】人的血清白蛋白(HAS)在臨床上需求量很大，通常從血液中提取。但由于艾滋病病毒等的威脅與日俱增，使人們對血液制品的使用顧慮重重。如果應用現代生物科學技術，將人的血清白蛋白基因導入奶牛細胞中，那么利用牛的乳汁生產血清白蛋白就會安全、高效地滿足人類需求。如圖是利用奶牛乳汁生產人類血清白蛋白的圖解，根據圖示回答：【典例訓練1】人的血清白蛋白(HAS)在臨床上需求量很大，通35(1)以上過程涉及的現代生物技術中，屬于細胞工程的有____________________________。(2)在基因工程中，我們稱①為目的基因，請舉出獲取目的基因的主要方法：_____________________________(至少答兩種)。在①進入③之前要構建基因表達載體，這是基因工程的核心，除目的基因外，基因表達載體還必須含有________________________，將①導入③的常用方法是_________________。(1)以上過程涉及的現代生物技術中，屬于細胞工程的有____36(4)用④細胞進行培養(yǎng)發(fā)育成胚胎時，一般不超過_______代，原因是________________________，此培養(yǎng)過程與植物細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基有何不同？_________________________。(5)將⑤送入⑦的最佳時期是_____________期。(3)圖中②一般經過____________處理可以得到③，從③到④的過程中一般利用未受精的卵母細胞去核后作為受體細胞，對卵母細胞的去核處理一般選擇在_______________期進行。(4)用④細胞進行培養(yǎng)發(fā)育成胚胎時，一般不超過_______37【解析】(1)圖中形成④的過程為核移植，由重組細胞發(fā)育成⑤的過程需經動物細胞培養(yǎng)。(2)獲取目的基因的方法主要有PCR擴增技術、人工合成法和從基因文庫中提取法，獲取的目的基因導入動物細胞常用顯微注射法。(3)動物組織分散成單個細胞常用胰蛋白酶處理，對卵母細胞的去核處理一般選擇在MⅡ時期。(4)動物細胞培養(yǎng)時，一般不超過10代，超過10代后細胞的核型可能會發(fā)生變化。(5)胚胎移植的最佳時期是桑椹胚或囊胚期。【解題指南】1.考查實質：動物細胞核移植過程、基因工程操作過程。2.解題關鍵：(1)明確①→③過程是將目的基因導入受體細胞，④的形成過程為核移植；(2)明確細胞培養(yǎng)在10代以內，細胞核型不會發(fā)生變化?！窘馕觥?1)圖中形成④的過程為核移植，由重組細胞發(fā)育成⑤的38答案：(1)核移植技術、動物細胞培養(yǎng)(2)基因文庫中提取、PCR技術擴增、人工化學合成(兩種即可)啟動子、終止子、標記基因顯微注射法(3)胰蛋白酶或膠原蛋白酶MⅡ(或減數第二次分裂中)(4)1010代以內的細胞，細胞核型不發(fā)生變化此培養(yǎng)基中加入動物血清、血漿等(5)桑椹胚或囊胚答案：(1)核移植技術、動物細胞培養(yǎng)39【變式】（2012·桐城模擬）某同學在學習“細胞工程”時，列表比較了動植物細胞工程的有關內容，你認為有幾處錯誤植物細胞工程動物細胞工程技術手段植物組織培養(yǎng)、植物體細胞雜交動物細胞培養(yǎng)和融合、單克隆抗體、核移植等特殊處理酶解法去除細胞壁胃蛋白酶處理制成細胞懸浮液融合方法物理方法、化學方法、生物方法物理方法、化學方法、生物方法典型應用無病毒植物的培育、人工種子等單克隆抗體的制備等培養(yǎng)基區(qū)別所用的糖必須為葡萄糖所用的糖為葡萄糖且動物血清不可缺少【變式】（2012·桐城模擬）某同學在學習“細胞工程”時，列40A．0B．1C．2D．3【解析】選D。動物的組織塊剪碎后只能用胰蛋白酶處理，而不能用胃蛋白酶處理；植物的原生質體的促融方法可用物理法或化學法，而不用生物法；植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的糖需用蔗糖，不用葡萄糖。A．0B．1C．2D．341１、動物的克隆與植物克隆一樣嗎？２、用動物體細胞進行克隆的過程,其實際操作過程是什么？動物克隆過程的實際是細胞核移植不思考題１、動物的克隆與植物克隆一樣嗎？２、用動物體細胞進行克隆的過42動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的重要區(qū)別在于[]A、培養(yǎng)基不同B、動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行C、動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能D、動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株鞏固練習A動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)的重要區(qū)別在于[]43動物細胞工程技術的基礎是[]A、動物細胞融合B、胚胎移植C、動物細胞培養(yǎng)D、核移植鞏固練習C動物細胞工程技術的基礎是[]鞏固練習C44下列不屬于克隆的是[]A、生物體通過體細胞進行的無性繁殖B、將某腫瘤細胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細胞系C、扦插和嫁接D、將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA中鞏固練習D下列不屬于克隆的是[]鞏固練習D45植物體細胞雜交的結果是[]A、產生雜種植株B、產生雜交細胞C、原生質體的融合D、形成愈傷組織鞏固練習A植物體細胞雜交的目的是[]A、產生雜種植株B、產生雜交細胞C、原生質體的融合D、形成愈傷組織A植物體細胞雜交的結果是[]鞏固練習A植物體細46對比：動物細胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)..植物組織培養(yǎng)技術動物細胞培養(yǎng)技術原理培養(yǎng)基結果分散處理脫分化細胞全能性細胞有絲分裂固體,營養(yǎng)物質,激素液體,營養(yǎng)物質,血清等完整植株細胞群或細胞產物無有有無植物組織培養(yǎng)技術是植物細胞工程技術的基礎。動物細胞培養(yǎng)技術是動物細胞工程技術的基礎。復習植物細胞工程和動物細胞工程的部分內容。對比：動物細胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)..植物組織培養(yǎng)技術動物細胞47知識回顧植物細胞工程植物細胞工程技術植物細胞工程應用植物組織培養(yǎng)植物體細胞雜交植物繁殖的新途徑作物新品種的培育細胞產物的工廠化生產知識回顧植物細胞工程植物細胞工程技術植物細胞工程應用植植植作48動物細胞工程動物細胞工程49動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞核移植技術、動物細胞融合技術、生產單克隆抗體技術動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)技術、動物細胞核50胰蛋白酶膠原蛋白酶.培養(yǎng)條件動物組織分散成

單個細胞細胞懸液培養(yǎng)胰蛋白酶膠原蛋白酶原理：細胞增殖（有絲分裂）結果：細胞群，細胞產物原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)過程胚胎的細胞或剛出生不久動物的組織胰蛋白酶.培養(yǎng)條件動物組織分散成

單個細胞細胞懸液培養(yǎng)胰蛋白51動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液原代培養(yǎng)細胞增殖部分細胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制52思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？２、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？３、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？４、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？沒有是成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質細胞間的成份是蛋白質思考題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？２、動物53思考題６、細胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？１０、動物細胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？蛋白質和磷脂能注意時間的控制不能，因為兩的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛思考題６、細胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細胞消化掉54思考題11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？13、如此時細胞數量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現象叫接觸抑制。將貼滿細胞壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)55思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去嗎？17、動物細胞培養(yǎng)就是為了得到這些細胞嗎？18、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展不是保存10代以內的細胞，因為10－50代部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細胞方向發(fā)展思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞56動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液原代培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)細胞增殖部分細胞無限傳代去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制57請總結出動物細胞培養(yǎng)的定義動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。請總結出動物細胞培養(yǎng)的定義動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相58221動物細胞培養(yǎng)和核移植技術課件59相互接觸接觸抑制單層胰蛋白酶衰老或死亡不死性降低減少相互接觸接觸抑制單層胰蛋白酶衰老或死亡不死性降低減少60活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入細胞，故不染色。中低溫新陳代謝酶抗原活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入細胞，故不染色。61思考題多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的知識，認為體培養(yǎng)細胞應該模擬內環(huán)境的哪些內容呢？思考題多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的知621、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基）保證細胞順利的生長增殖培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境保證細胞順利的生長增殖培養(yǎng)條件：63動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有血清、血漿動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境培養(yǎng)條件：動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽643、溫度和pH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。合成培養(yǎng)基）3、溫度和pH培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境65思考題動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？主要成分：葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、維生素、血清、血漿等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有血清、血漿等思考題動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？主要成分：獨特之處有：66獲得細胞或細胞產物細胞的全能性細胞數目增多一般為植物體培養(yǎng)結果快速繁殖、培育脫毒作物等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清促生長因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較獲得細胞或細胞產物細胞的全能性細胞數目增多一般67.動物細胞培養(yǎng)技術的實際應用1、大量生產細胞或產物。如：病毒疫苗干擾素

單克隆抗體胰島素2、給基因工程提供受體細胞。3、檢測有毒物質及毒性。4、用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據。.動物細胞培養(yǎng)技術的實際應用1、大量生產細胞或產物。68動物細胞培養(yǎng)核移植技術動物細胞培養(yǎng)69將動物的一個細胞的＿＿＿，移入一個已經去掉＿＿＿的＿＿細胞中，使其＿＿并發(fā)育成一個新的＿＿，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。分類

胚胎細胞核移植、體細胞核移植細胞核細胞核卵母重組胚胎核移植技術將動物的一個細胞的＿＿＿，移入一個已經去掉＿＿＿的＿＿細70母綿羊A乳腺細胞

（體細胞）

母綿羊B未受精的卵細胞

母綿羊C“多莉”新的卵細胞發(fā)育成早期胚胎去核卵細胞提取細胞核核移植胚胎移植體細胞核移植技術克隆羊母綿羊A乳腺細胞

（體細胞）母綿羊B未受精的卵細胞母綿71（MⅡ卵母細胞）減數第二次分裂中期2.結合P48圖2-21，敘述克隆高產奶牛的培育過程。將供體細胞注入去核卵母細胞核移植胚胎移植供體細胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細胞）減數第二次分裂中期2.結合P48圖2-2172胚胎移植胚胎發(fā)育供體體細胞細胞培養(yǎng)體細胞群細胞融合細胞胚胎代孕母體生出克隆個體卵巢卵母細胞(減Ⅱ)去核無核卵母細胞體細胞核移植技術過程胚胎移植胚胎發(fā)育供體體細胞細胞培養(yǎng)體細胞群細胞融合細胞胚胎代73整個過程用了哪些技術？細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植新生牛的性別、基因？與供體相同繁殖方式？無性繁殖原理？動物細胞核的全能性體細胞核移植技術整個過程用了哪些技術？體細胞核移植技術741、對比多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點？2、討論分析上述哪一種措施更科學？并說明理由？MⅡ卵母細胞細胞質中含有的物質更易支持胚胎的全程發(fā)育，用它作受體更容易成功。將供體細胞注入受體細胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便。思考與討論：（1）多莉克隆過程中受體細胞是去核卵細胞，高產奶?？寺∵^程中受體細胞是去核卵母細胞。（2）多莉克隆過程是將供體細胞核注入受體細胞，而高產奶牛的克隆過程是將供體細胞注入受體細胞。1、對比多莉羊和課本高產奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點75１、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？為使核移植動物的核遺傳物質全部來自有利用價值的動物提供的細胞。２、用于核移植的供體細胞一般都選用傳代10代以內的細胞，為什么？10代以內的細胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變。討論：3、體細胞核移植方法生產的克隆動物是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細胞。不是１、在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉76（三）體細胞核移植技術的應用前景閱讀P49-501、畜牧業(yè)方面：2、醫(yī)藥衛(wèi)生方面：可以加速家畜遺傳改良的進程，促進優(yōu)良畜群繁育。保護瀕危物種，增加其存活數量生產醫(yī)用蛋白質組織器官的移植3、其他領域了解胚胎發(fā)育及衰老過程更好追蹤研究疾病的發(fā)展過程、治療疾?。ㄈw細胞核移植技術的應用前景閱讀P49-501、畜牧業(yè)方77（四）體細胞核移植技術存在的問題1、成功率低2、克隆動物存在健康問題（四）體細胞核移植技術存在的問題1、成功率低2、克隆動物存在78植物組織培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)和核移植的比較植物組織培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)和核移植的比較79植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)核移植結果關鍵環(huán)節(jié)與外植體完全相同的個體相同分化程度的細胞群與供體基本相同的個體細胞的脫分化、再分化、分化細胞分化、細胞癌變核融合、細胞分化植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)核移植結關與外植體完全相同的個體相同80【高考警示鐘】1.植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)過程都存在細胞的培養(yǎng)過程，但植物細胞可以先分裂再分化，而動物細胞不分化只分裂。2.區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關鍵是是否分瓶培養(yǎng)。貼壁生長到一定程度需要用胰蛋白酶處理，然后再分瓶培養(yǎng)，原代培養(yǎng)結束，開始了傳代培養(yǎng)。3.植物組織培養(yǎng)成的植株與提供外植體的植株完全相同，而動物細胞核移植形成的個體與供體大部分性狀相同，也有部分性狀與受體相同?！靖呖季剧姟?1【典例訓練1】人的血清白蛋白(HAS)在臨床上需求量很大，通常從血液中提取。但由于艾滋病病毒等的威脅與日俱增，使人們對血液制品的使用顧慮重重。如果應用現代生物科學技術，將人的血清白蛋白基因導入奶牛細胞中，那么利用牛的乳汁生產血清白蛋白就會安全、高效地滿足人類需求。如圖是利用奶牛乳汁生產人類血清白蛋白的圖解，根據圖示回答：【典例訓練1】人的血清白蛋白(HAS)在臨床上需求量很大，通82(1)以上過程涉及的現代生物技術中，屬于細胞工程的有____________________________。(2)在基因工程中，我們稱①為目的基因，請舉出獲取目的基因的主要方法：_____________________________(至少答兩種)。在①進入③之前要構建基因表達載體，這是基因工程的核心，除目的基因外，基因表達載體還必須含有________________________，將①導入③的常用方法是_________________。(1)以上過程涉及的現代生物技術中，屬于細胞工程的有____83(4)用④細胞進行培養(yǎng)發(fā)育成胚胎時，一般不超過_______代，原因是________________________，此培養(yǎng)過程與植物細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基有何不同？_________________________。(5)將⑤送入⑦的最佳時期是_____________期。(3)圖中②一般經過____________處理可以得到③，從③到④的過程中一般利用未受精的卵母細胞去核后作為受體細胞，對卵母細胞的去核處理一般選擇在_______________期進行。(4)用④細胞進行培養(yǎng)發(fā)育成胚胎時，一般不超過_______84【解析】(1)圖中形成④的過程為核移植，由重組細胞發(fā)育成⑤的過程需經動物細胞培養(yǎng)。(2)獲取目的基因的方法主要有PCR擴增技術、人工合成法和從基因文庫中提取法，獲取的目的基因導入動物細胞常用顯微注射法。(3)動物組織分散成單個細胞常用胰蛋白酶處理，對卵母細胞的去核處理一般選擇在MⅡ時期。(4)動物細胞培養(yǎng)時，一般不超過10代，超過10代后細胞的核型可能會發(fā)生變化。(5)胚胎移植的最佳時期是桑椹胚或囊胚期?！窘忸}指南】1.考查實質：動物細胞核移植過程、基因工程操作過程。2.解題關鍵：(1)明確①→③過程是將目的基因導入受體細胞，④的形成過程為核移植；(2)明確細胞培養(yǎng)在10代以內，細胞核型不會發(fā)生變化。【解析】(1)圖中形成④的過程為核移植，由重組細胞發(fā)育成⑤的85答案：(1)核移植技術、動物細胞培養(yǎng)(2)基因文庫中提取、PCR技術擴增、人工化學合成(兩種即可)啟動子、終止子、標記基因