醫(yī)學微生物學 實驗 膿汁和糞便標本中病原菌的檢測-

醫(yī)學微生物學實驗

綜合性實驗三空氣的細菌學檢查結果分析手指皮膚的細菌學檢查結果分析空氣的細菌學檢查組號時間地點菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù)A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時間(15分鐘)CFU：colonyformingunitWHO推薦的醫(yī)院各部門空氣細菌標準級別cfu/m3適用范圍Ⅰ級區(qū)＜10器官移植、心血管、矯形等外科手術室，保護性隔離室，灌注或配制注射液實驗室Ⅱ級區(qū)＜200無菌室、手術室、供應室、嬰兒室、中心滅菌單位、術后恢復室、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥監(jiān)護病房Ⅲ級區(qū)200～500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術室浴室我國公共場所空氣衛(wèi)生細菌學標準（GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個/皿適用范圍≤1000≤103～5星級賓館、飯店≤1500≤202星級以下賓館和非星級帶空調賓館、飯店≤2500≤30普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書館、博物館、美術館、飛機客艙≤4000≤40音樂廳、影劇院、錄像廳（室）、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機室、旅客列車車廂、輪船客艙、飯館（餐廳）≤7000≤75展覽館、商場（店）、書店、候車室、候船室液體或固體標本菌落總數(shù)測定可將標本作十倍、百倍、千倍、萬倍稀釋。分別取1ml注入直徑9cm的滅菌平皿內。傾注46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大約15ml，混合均勻。瓊脂完全凝固以后，37℃培養(yǎng)48小時。選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。將計數(shù)得到的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出cfu/g(ml)。132

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4手指皮膚的細菌學檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。

2人1塊平板上:甲、丙→常規(guī)洗手下:乙、丁→標準洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮膚細菌學檢查結果分析第1格為洗手前：+第2格為洗手后常規(guī)(甲、丙)洗手方法：?標準(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？第4格空白對照：-醫(yī)學微生物學實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標本中病原菌的檢測（三）菌落特征觀察P11細菌純培養(yǎng)P10膿汁和糞便標本檢驗（錄像）油鏡使用方法（講解）細菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌落定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性。菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）。菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。菌落特征P11大?。捍?直徑約3mm以上)，中(直徑約1～3mm)，小(直徑約1mm以下)。形狀：圓形，卵圓形、假根形、絲狀、不規(guī)則等。邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。表面：隆起、平坦、中心凸起、臍形凹陷；光滑或粗糙、濕潤或干燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周圍呈草綠色、不透明)，溶血(菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán))。色素：一般為無色或灰白色，特殊色素有兩類：脂溶性色素(菌落本身著色，培養(yǎng)基不著色)和水溶性色素(菌落及培養(yǎng)基均著色)。細菌菌的的溶溶血血現(xiàn)現(xiàn)象象根據(jù)據(jù)細細菌菌對對血血平平板板中中紅紅細細胞胞的的溶溶解解能能力力可可分分為為以以下下三三種種溶溶血血類類型型α（（甲甲型型））溶溶血血:產(chǎn)生生溶溶血血素素，，不不完完全全性性溶溶血血，，在在血血平平板板上上菌菌落落周周圍圍有有1～～2mm半半透透明明的的草草綠綠色色溶溶血血環(huán)環(huán)。。β（（乙乙型型））溶溶血血:呈完完全全性性溶溶血血，，在在血血平平板上菌菌落落周周圍圍有有2～～4mm寬寬，，界界限限分分明明，，無無色色透透明明的的溶溶血血環(huán)環(huán)。。γ（（丙丙型型））溶溶血血:不產(chǎn)產(chǎn)生生溶溶血血素素，，在在血血平平板上的的菌菌落落周周圍圍無無溶溶血血環(huán)環(huán)。。細菌菌的的純純培培養(yǎng)養(yǎng)挑選選單單菌菌落落:膿汁汁標標本本在在普普通通平平板板上上有有黃黃色色、、白白色色兩兩種種菌菌落落，，菌菌落落的的色色素素是是脂脂溶溶性性的的，，是是細細菌菌本本身身的的顏顏色色。。菌菌落落直直徑徑2mm左左右右、、圓圓形形、、隆隆起起、、表表面面光光滑滑、、濕濕潤潤、、邊邊緣緣整整齊齊、、不不透透明明。。糞便便標標本本在在伊伊紅紅美美藍藍平平板板上上，，有有紫紫黑黑色色、、淡淡粉粉紅紅色色兩兩種種菌菌落落，，菌菌落落顏顏色色是是水水溶溶性性的的，，不不是是細細菌菌本本身身的的顏顏色色，，顏顏色色的的產(chǎn)產(chǎn)生生是是因因為為大大腸腸埃埃希希菌菌分分解解乳乳糖糖產(chǎn)產(chǎn)酸酸，，酸酸使使伊伊紅紅與與美美藍藍結結合合，，形形成成紫紫黑黑色色具具有有金金屬屬光光澤澤、、大大而而隆隆起起、、不不透透明明的的菌菌落落；；菌菌落落直直徑徑2～3mm。。致致病病菌菌不不分分解解乳乳糖糖，，菌菌落落呈呈伊伊紅紅的的顏顏色色，，很很淡淡的的粉粉紅紅色色，，半半透透明明，，直直徑徑1～～2mm?！x選擇擇平平板板上上相相同同的的菌菌落落數(shù)數(shù)多多的的、、典典型型的的、、容容易易挑挑取取的的單單菌菌落落，，進進行行接接種種。。37℃培養(yǎng)養(yǎng)24小時時37℃培養(yǎng)養(yǎng)24小時時紫黑色通常描述的的菌落直徑徑和顏色是是特指培養(yǎng)養(yǎng)18～24小時，，菌落分布布比較稀少少的區(qū)域、、典型的菌菌落。若培養(yǎng)物放放置時間過過長，或者者平板上某某個部位細細菌比較多多、菌落比比較密集，，大腸桿菌菌菌落顏色色可能會發(fā)發(fā)生改變。。因為大腸腸桿菌利用用完乳糖以以后，就要要利用蛋白白質，蛋白白質分解大大多產(chǎn)生堿堿性物質，，中和了乳乳糖分解時時產(chǎn)生的酸酸。大腸桿桿菌菌落可可能會由原原來的紫黑黑色變成粉粉紅色，和和致病菌顏顏色一樣。。不要在菌落落密集的區(qū)區(qū)域挑選菌菌落，它可可能是菌落落形成單位位（CFU），不是是單菌落，很容易選選錯。37℃培養(yǎng)養(yǎng)36小時由紫黑色變成粉紅色色斜面接種法法P10（1組4支支）甲→普通平平板→黃色菌落→1支支斜面乙→普通平平板→白色菌落→1支支斜面丙→伊紅美美藍→紫黑菌落→1支支斜面丁→伊紅美美藍→粉紅菌落→1支支斜面★斜面標記記：組號、、黃色、白白色、紫黑黑、粉紅。?！镌谄矫蟮撞坎坎Ａ?，，畫個大圈圈選菌落，，同組同學學認可，才才能挑取。?！锱囵B(yǎng)時間不不得超過18小時。。斜面接種法法P10甲→黃色,乙→白色色。丙→紫黑,丁→粉紅紅。標記：組號號，顏色安全警告接種環(huán)接種種斜面一次次，可產(chǎn)生生幾十個微微生物氣溶溶膠顆粒。。氣溶膠粒徑徑＞100um沉降降很快,＜＜50um在0.4s內擴散散開,＜5um通過過呼吸道直直接到達肺肺泡。Pike博博士對實驗驗室感染統(tǒng)統(tǒng)計分析結結果發(fā)現(xiàn)，，不明原因因的感染高高達82%，大多數(shù)數(shù)是氣溶膠膠在空氣中中擴散引起起的。實驗時應坐坐著，在酒精燈半半徑20厘厘米范圍內內操作，保持安靜、、有序，盡盡量少說話話、少走動動，以免感染病病原菌。奧林巴斯CX21型生物物顯微鏡（實驗柜內，，每人一臺））注意：只能能橫放，不不得豎放。。奧林巴斯CX21型生物物顯微鏡使用須知顯微鏡是精精密光學儀儀器，請不不要讓其受受到撞擊，，請小心操操作。在搬運顯微微鏡時，請請按右圖所所示，以雙雙手抓住鏡鏡臂孔的兩兩側，小心心搬運?！锶绻米≥d載物臺①和和鏡筒②等等部位搬運運的話，有有可能會造造成損壞。。顯微鏡各部部件名稱開關與調整整光強開或關之前前，必須將將亮度調整整旋鈕②按按箭頭相反方向轉動到到最小位置，以免損壞壞燈泡。電源開關①①撥到∣側側為開，撥撥到○側為為關閉。按箭頭方向向轉動亮度度調整旋鈕鈕②變亮，，相反方向向轉動則變變暗。放置標本按箭頭方向向轉動粗調調旋鈕②降降下載物臺臺。按箭頭方向向拉開載物物臺標本夾夾③，自自前向后將將標本片放放入平臺，，標本夾③③輕輕放放回原位。。轉動上側垂垂直移動桿桿④和下側側水平移動動桿⑤，移移動標本至至光路中間間。載物臺位置置刻度載物臺上的的刻度方便便確定標本本位置，標標本移動后后可以快速速回到原位位。水平刻度的的標識位置置以機械載載物臺的①①位置來讀讀取。垂直刻度的的標識線以以②的位置置來讀取。。聚焦從顯微鏡的的側面觀察察，按箭頭頭方向轉動動粗調旋鈕鈕①，使物物鏡③盡可可能接近標本。一邊邊看目鏡，，一邊慢慢慢逆箭頭方向轉轉動粗調旋旋鈕①，使使載物臺臺下降?？吹綐吮疽砸院螅梦⑽⒄{旋鈕②②來正確對對焦?！?0倍物鏡鏡的工作距離（WD，從從物鏡到標標本的距距離）為10.5mm?！镉顽R的WD為0.13mm。。調整瞳距調整瞳距是是調整雙目目間的距離離，使兩眼眼同時看到到一個顯微微鏡像，能能防止觀察察時的疲勞勞。方法：一邊邊看目鏡，，一邊移動動雙目鏡筒筒，讓左右右的視野一一致。標識●的位位置表示瞳瞳距。請記記住自己的的瞳距值，，以便下次次觀察時調調整。調整屈光度度數(shù)調整觀察者者左右視力力。以右眼看右右側的目鏡鏡，旋轉粗微調旋轉盤，對對好焦距。。以左眼看左左側的目鏡鏡，旋轉屈光度調整環(huán)①，，對好焦距距。調整聚光鏡鏡位置和孔孔徑光闌用聚光鏡上上下移動旋旋鈕①，將將聚光鏡轉轉到最上面面。在孔徑光闌闌環(huán)②上刻刻有物鏡倍倍率（10倍，100倍等）），觀察時時將與使用用物鏡相對對應的倍率率放到正面面。轉換物鏡旋轉物鏡轉轉盤①，將將希望使用用的物鏡（（10倍、、100倍倍）轉到標標本的上方方。100倍浸浸油物鏡使使用方法油鏡放入光光路之前，，一定要在在標本的觀觀察部位上上加一滴浸浸油。旋轉物鏡轉轉盤，使油油鏡進入光光路，用微微調旋鈕對對好焦距。。如果浸油內內有氣泡，，會影響觀觀察，可稍稍微旋轉物物鏡轉盤，，使油鏡來來回通過1～2次浸油油，排除油油內氣泡。。顯微鏡油鏡鏡的使用P1310×物鏡鏡→標本位位置→滴加加香柏油→→100××油鏡→浸浸泡油中,幾乎與標標本接觸（（工作距離離0.13mm）→→細調節(jié)調調焦，觀察察物像→記記錄結果→→關閉電源源。油鏡處理：：擦鏡紙拭拭去香柏油油→擦鏡鏡紙沾少許許乙醇和乙乙醚（7:3）混合合液擦拭→→擦鏡紙擦擦拭油鏡。。顯微鏡罩上上防塵罩→→橫放在實驗柜內內。★(順德校區(qū)區(qū)）實驗臺臺兩側的電電源插座，，只能插入入一個插頭頭，請選擇擇離你最近近的電源插插座?！铮ㄐ１静浚嶒炁_中中間，三個個位的插座座，中間那那位插孔沒沒有電，不不能使用，，只能用兩兩側的插座座。細菌的顯微微鏡檢查法法顯微鏡：光光學顯微鏡鏡目鏡鏡：：10倍倍物鏡鏡：：油油鏡鏡頭頭（（90或或100倍倍））放大大倍倍數(shù)數(shù)：：10××90或或100＝＝900或或1000鏡油油：：香香柏柏油油或或石石蠟蠟油油香柏柏油油折折射射率率（（n＝＝1.515）），，玻玻片片折折射射率率（（n＝＝1.52）），，石石蠟蠟油油（（n＝＝1.46）），，空空氣氣（（n＝＝1.00））。?！镉顽R使使用用完完畢畢必必須須擦擦拭拭油鏡頭頭。。油透鏡鏡光線線載玻玻片片思考考題題在微微生生物物學學實實驗驗中中,怎怎樣樣才才能能避避免免雜雜菌菌的的污污染染?空氣氣的的衛(wèi)衛(wèi)生生標標準準規(guī)規(guī)定定如如何何?你的的實實驗驗結結果果說說明明了了什什么么問問題題?怎樣樣從從醫(yī)醫(yī)務務人人員員手手指指上上分分離離和和鑒鑒定定金金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌?菌落落特特征征主主要要描描述述哪哪幾幾方方面面問問題題？？任任何何挑挑選選單單菌菌落落？？醫(yī)學學微微生生物物學學實實驗驗綜綜合合性性實實驗驗三三、、一一空氣氣、、手手指指皮皮膚膚的的細細菌菌學學檢檢查查結結果果分分析析膿汁汁和和糞糞便便標標本本中中病病原原菌菌的的檢檢測測菌落落特特