土壤理化性質實驗方法總結

土壤理化性質實驗方法總結土壤理化性質實驗方法總結土壤理化性質實驗方法總結土壤理化性質實驗方法總結編制僅供參考審核批準生效日期地址：電話：傳真:郵編:目錄1土壤 1土壤樣品制備 1土壤pH值測定——電位法 1有機質——重鉻酸鉀法 3全N——半微量開氏法 5堿解N——擴散法 7全P——酸溶法 8有效P——碳酸氫鈉法 10速效K——火焰光度法 13銨態(tài)N——靛酚藍比色法 14硝酸鹽N——紫外分光光度法 152水 17水樣采集和預處理 17pH值——電位法 17總N——堿性過硫酸鉀氧化紫外分光光度法 18銨態(tài)N——靛酚藍比色法 19硝酸鹽N——紫外分光光度法 20總P——過硫酸鉀氧化鉬酸銨分光光度法 20可溶P——鉬酸銨分光光度法 22高錳酸鹽指數(shù)（CODMn） 223植物 24植物樣品制備 24全N——開氏法 24全P、全K——光譜法 254注意事項 26反復強調的. 26常用儀器說明 27天平 27移液槍 27washingissues 28things 28消化罐 28參考文獻 291土壤土壤樣品制備土壤樣品采集就不說了，根據(jù)研究目的，采樣方法也各不相同。下面介紹的是針對實驗中的樣品制備方法。在所有土壤實驗開始之前，都要先進行相應樣品的制備。師兄師姐們不止一次提過，研究生剛入學應該每人發(fā)一件白大褂和一根搟面杖。做土壤侵蝕研究的怎么能不會磨土呢？土樣經風干后，用木棍碾碎，然后過2mm篩，剩下的礫石稱重。這一部分樣品可以直接進行pH值和土壤機械組成的測定。對于不同的土壤指標，所需制備的樣品粒徑是不相同的。速效養(yǎng)分的測定往往不能研磨過細，因為這樣土壤礦物晶粒會遭到破壞，使得分析結果偏高。全量養(yǎng)分則相反，磨細一些可以使樣品更易分解或熔化，有益于測定。對于土壤硝態(tài)氮和銨態(tài)氮這類指標，則不能風干，而是采樣后直接經2mm篩，然后冷凍保存，盡快測定。根據(jù)目前實驗室所采用的比較成熟的方法，測試不同指標所需的土壤用量和粒徑如下表所示。注意，這里的用量是以我測的北京褐土為標準，測部分指標的時候根據(jù)養(yǎng)分含量需要適當調整用量。表1測試不同指標對應粒徑及用量指標pH機械組成有機質全N全P全K堿解N有效P速效KNH4-NNO3-N狀態(tài)風干風干風干風干風干風干風干風干風干新鮮新鮮粒徑（mm）221122用量（g）10301251020土壤pH值測定——電位法1.原理土壤pH值的測定是最沒技術含量，也最煩人的實驗。它的測定原理很簡單，往土里加水，充分混合后用pH計測一下，讀個數(shù)，搞定。pH值其實就是H+濃度的負對數(shù)，既然能通過電子儀器讀的出來，那就是把濃度和電動勢之類的聯(lián)系起來。這個和翻斗式雨量計有異曲同工之處，小翻斗一動，就有電子脈沖了……省去若干原理解釋。2.主要儀器燒杯、移液管或小量筒、攪拌器、pH計、濾紙3.pH計標定和天平一樣，在用pH計測定前，必須先用標準溶液進行標定。市場上可以買得到現(xiàn)成的標準試劑，一般包括3種，pH值分別為的鄰苯二甲酸氫鈉，的磷酸氫二鈉+磷酸二氫鈉，的四硼酸鈉。將對應的基準試劑用小漏斗沖入250mL的容量瓶中，加入一些蒸餾水，不停地搖晃，直至充分溶解后定容至標線就可以了。這些基準試劑在不同溫度下的pH值略有不同，具體見表2。標定時一般采用兩種緩沖溶液就夠了，兩點能夠確定一條直線嘛。當待測液為堿性時，采用和兩種緩沖溶液標定即可；當待測液為酸性時，則采用和兩種標準液。不同的pH計，其標定方法略有不同，使用前要仔細閱讀說明書，下面就以現(xiàn)在實驗室常用的方舟pHS-3C+酸度計為例進行介紹。一般而言，開機后，用蒸餾水沖洗電極，中間帶一個小球那個，另外一個探頭是測溫度的。然后放在蒸餾水中，讓機器預熱一會。用濾紙將探頭上的水分吸干，插入裝有pH值為的緩沖溶液的燒杯中，并在儀表盤上按7鍵，指示燈開始閃時，就表示儀器開始自動標定了，待指示燈穩(wěn)定發(fā)亮，表示標定完成。然后用蒸餾水沖洗探頭，用濾紙吸干，再插入pH值為或的緩沖溶液中，按4或9鍵，讓其自動標定。標定完成即可進行土壤樣品的測定。4.測定步驟稱取通過2mm孔徑篩的風干土壤于50mL高型燒杯中，稱這個土的時候用精度為或的天平就足夠了，用移液管或小量筒加入25mL蒸餾水。將燒杯置于攪拌器上。攪拌子用蒸餾水沖洗干凈，并用濾紙擦干后放入燒杯中。用秒表開始計時，攪拌1min，使土粒充分分散。用塑料鑷子取出攪拌子，因為里邊是帶磁性的，很容易在表面占有灰色的臟物。建議先用濾紙擦干后在放入一旁準備好的蒸餾水中。浸泡后取出，用蒸餾水沖洗、濾紙擦干，進行下一輪的攪拌。攪拌完成后，靜置30min，其實我也不明白為什么要靜置，因為這一款pH計需要不停攪動讓其穩(wěn)定。將電極插入待測液中，注意電極不能觸及燒杯底或壁。輕輕搖動使電極與待測液充分接觸，直到讀數(shù)穩(wěn)定記下對應數(shù)字。最煩人的事情就在此了，讀數(shù)可能很久都穩(wěn)定不下來，你就認命地搖吧。一般它30s讀數(shù)不變我就從了。如果讀數(shù)一直穩(wěn)定不下來，你實在煩的不行了，就用標準緩沖溶液再標定一次，貌似有一點收效。這是師兄的經驗，我沒有驗證過。測完一個樣品后，取出電極，仍然是蒸餾水洗滌，濾紙條吸干，然后進行下一輪測定。全部樣品測完，仍需洗滌、吸干，然后插入3mol/L的氯化鉀（KCl）溶液中保養(yǎng)，就是套在電極上的那個小杯子。保養(yǎng)液怎么配，自己算吧，初中化學這是，反正可以很負責任地說，KCl很好溶解。表2標準緩沖溶液在不同溫度下的變化溫度（℃）pH05101520253035384045有機質——重鉻酸鉀法1.原理 測有機質還蠻快的，系里的硬質試管少說有一百來根吧。雖然每一次消煮只能測6個左右，但每次只要煮上5分鐘，然后集中滴定或者找人配合同時滴定，速度會很快的。有機質測定的原理是：土壤中的有機碳在高溫下會被重鉻酸鉀氧化，多余的重鉻酸鉀以鄰菲羅琳為指示劑，用硫酸亞鐵滴定，用消耗的重鉻酸鉀體積計算出被氧化的有機碳的量。有機質的含碳量一般為58%，所以用有機碳結果乘以，即為土壤有機質的含量。具體的反應式如下。消煮反應：2K2Cr2O7+8H2SO4+3C→2Cr2(SO4)3+2K2SO4+3CO2+8H2O滴定反應：K2Cr2O7+6FeSO4+7H2SO4→Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+K2SO4+7H2O指示劑變色的氧化還原狀態(tài)：鄰啡羅啉：氧化態(tài)(無色)→還原態(tài)(棕紅色)2.主要儀器硬質試管、移液管（移液槍）、油浴鍋、三角瓶、酸式滴定管3.試劑重鉻酸鉀標準溶液（1/6K2Cr2O7為L）：稱取烘干的重鉻酸鉀（K2Cr2O7）溶解于水中，加熱溶解，冷卻后用蒸餾水定容至1L。重鉻酸鉀必須稱取準確，后邊要用它來標定硫酸亞鐵的濃度。鄰菲羅啉指示劑：稱取鄰菲羅啉（C12H8N2·H2O）及硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）溶于100mL水中，貯于棕色瓶中。硫酸亞鐵溶液（L）：稱取硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）溶于水中，加15mL濃硫酸，用蒸餾水定容至1L。由于硫酸亞鐵在空氣中并不穩(wěn)定，因此每次使用前都需用重鉻酸鉀溶液進行標定。方法是移取5mL重鉻酸鉀溶液和5ml濃硫酸加于三角瓶中，滴入3滴鄰菲羅啉指示劑，用硫酸亞鐵溶液滴定，直至溶液變成棕紅色。記錄硫酸亞鐵的用量，根據(jù)反應式計算其濃度。（初中化學-_-;）濃硫酸（H2SO4）：cm33.步驟稱取通過孔徑篩的風干土樣放入硬質試管中，用移液管或移液槍依次加入5mL重鉻酸鉀標準溶液和5mL濃硫酸，輕輕搖勻。注意，一定要搖勻，讓土粒和試劑充分混合，否則消煮不完全。將油浴鍋加熱至185~190℃，待溫度穩(wěn)定下來后，將試管插入帶網(wǎng)孔鐵絲籠中，管口放一小漏斗（用以冷凝蒸出的水汽，減少蒸發(fā)），放入油浴鍋中。漏斗可重復使用，用蒸餾水沖洗干凈后稍晾一會即可把鐵絲籠上下?lián)u動或轉動幾次，使溫度均勻，此時溫度下降至170~180℃，從試管內液體開始翻動起計算，沸騰5min。消煮完成后立即把鐵絲籠提起，稍停，使油沿管壁留下，然后放在托盤上?？梢栽谕斜P內鋪上報紙，當試管從油浴鍋中取出之后，放在托盤之上，以免蠟油濺在別處，不易去除。將試管取下用蒸餾水將試管中的消煮液洗入250毫升的三角瓶中，洗液體積保持60—70毫升，冷卻，加鄰菲羅啉指示劑3滴，將L的FeSO4溶液加入酸式滴定管中進行滴定，顏色由桔黃－草綠－深綠－棕紅色即為終點。記錄FeSO4用量。每批樣品測定的同時，作空白標定，即用純石英砂或灼燒過的土壤代替土樣，記錄FeSO4用量。4.計算土壤有機碳%=（Vo–V）×c×××100/m有機質%=有機碳%×Vo：空白標定時所消耗FeSO4標準液的體積（ml）；V：土壤標定時所消耗FeSO4標準液的體積（ml）；c：硫酸亞鐵標準溶液的濃度（mol/LFeSO4）；：1/4C的摩爾質量（kg/mol）；：由有機C換算為有機質的因數(shù)；：氧化校正系數(shù)；m：風干土樣質量（g）。全N——半微量開氏法1.原理 土壤中的含氮化合物，利用濃硫酸和催化劑，在高溫條件下轉變?yōu)镹H4+進入溶液。隨后加入NaOH使其轉變?yōu)镹H3逸出，經蒸餾用硼酸液吸收，再用酸標準溶液滴定，由其消耗量計算出氨量。 土壤全N測定其實是最省心的實驗，不過要冒一定的風險。學院有全套開氏定氮儀，包括消煮、蒸餾和滴定。雖然滴定用的電極壞了換，換了壞，現(xiàn)在已經全部變成手動滴定了，但還是相對convenient。自動消煮的時間很長，可以去配制試劑；蒸餾的時間也有4min左右，足以把之前的消煮管洗刷干凈了。所以這個實驗做起來相當經濟，一點都不費時間。建議一天一批，一批16個樣品+2個重復+2個空白。當然如果人多，配合好，一天做兩批也不成問題。但是實驗所涉及到的試劑卻不是那么好說話的，而且消煮管也需要特別注意，很容易損壞，還有傳說中的吸收池。估計后面的同學是看不到了，因為已經被我失手毀了，淚奔~~對了，實驗開始之前必須先向王曉嵐老師申請，王老師會就具體儀器的操作進行詳細地講解。2.主要儀器消煮管、消煮爐、定氮儀、酸式滴定管、三角瓶3.試劑混合催化劑：硫酸鉀（K2SO4）、硫酸銅（CuSO4）、硒（Se）按照100:10:1的比例混合，在研缽中研細后，混合。硫酸銅最難磨，建議先處理它，然后加入硫酸鉀，繼續(xù)研磨，最后加入硒粉，攪拌混合就可以，注意，硒粉有毒，要做好防護措施。混勻后放入試劑瓶中保存。大概估算好用量，現(xiàn)在的專用研缽最多只能磨300g左右，而且難度很大，極容易溢出，最好將每次研磨量控制在200g左右。濃硫酸（H2SO4，cm3）氫氧化鈉溶液（10mol/L）：稱取氫氧化鈉（NaOH）溶于水中，用蒸餾水定容至約4L，直接用燒杯定容即可。氫氧化鈉遇水放熱，而且氣味也很嗆人。配制時最好有全套裝備，并用盆裝好自來水放置在通風櫥中。在5L的大燒杯內倒入3L左右的蒸餾水，置于盆中，一邊用玻璃棒攪拌，一邊加入氫氧化鈉。由于用量較大，常采用的方法是藥品連盒稱重，倒完后再稱盒重，記錄倒入的氫氧化鈉的量。一定要計算清楚，因為一瓶藥品的質量并不等于瓶上標注的量。1600g氫氧化鈉大概是3瓶+1/2瓶，最后半瓶要準確稱取。硼酸溶液（約%）：稱取硼酸（H3BO3）溶于水中，用蒸餾水定容至約3L，可直接用燒杯定容，因為其濃度并不參與計算。硼酸溶解較快，不用加熱促溶，之前有同學認為加熱促溶會導致實驗結果不準，我沒有進行過對比，但建議還是常溫溶解為宜。配制完成后倒入相應的塑料桶中。定氮混合指示劑：稱取溴甲酚綠和甲基紅于研缽中，加入少量95％乙醇，研磨至指示劑全部溶解后，加95％乙醇至100ml。鹽酸標準溶液（L）：吸取濃鹽酸，用蒸餾水定容至1L。如果土壤含N量較高，則適當提高鹽酸標準溶液的濃度。但都需用碳酸鈉（Na2CO3）溶液或四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）溶液標定，即吸取10mL碳酸鈉標準溶液于三角瓶中，滴入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標準溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，即為終點，由此計算鹽酸濃度。4.步驟稱取通過孔徑的風干土樣，小心地送入開氏管底部，同時做2個空白和2個重復。加入混合催化劑和8mL濃硫酸，搖勻后將其置于消煮用的架子上，然后掛在溫控消煮爐上。將上部的漏斗對應扣在開氏管上，然后輕按下移鍵，消煮架會隨之向下移動。注意調整架子的位置，保證開氏管與底部吻合，不然極容易造成破碎。有師兄因為這個毀了兩個開氏管，一個$25。設定溫度為200℃1小時，而后375℃小時。在試樣蒸餾之前，先檢查定氮儀，執(zhí)行0程序，空蒸2~3次清洗管道。待消煮液冷卻后，將開氏管置于定氮儀上，吸收池（現(xiàn)在是燒杯）置于定氮儀冷凝器承接管下，向池內注入適量硼酸，使液面沒過冷凝管末端，執(zhí)行1程序。程序執(zhí)行完成之后，取下吸收池，加入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標準溶液進行滴定，顏色由藍綠色剛轉變?yōu)樽霞t色即達到終點。與此同時進行空白消煮液的蒸餾和滴定，以校正試劑等誤差。然后取下開氏管，注意帶兩層手套，因為蒸餾放熱，而且管內的液體容易溢出。用蒸餾水清洗儀器后換上下一個樣品。全部試驗做完之后，再空蒸一次清洗管道。將開氏管洗干凈后置于定氮儀中，關閉定氮儀，用蒸餾水沖洗儀器內部。并整理清洗外部殘余的各種溶液。由于高濃度的氫氧化鈉極易結晶呈白色，很容易被看出來，然后被罵，所以……好自為之吧~5.計算全氮（N），mg·kg－1＝[c·（V-V0）×14]/mV：滴定待測液消耗酸標準溶液體積，ml；V0：滴定空白消耗酸標準溶液體積，ml；C：酸標準溶液濃度，mol·L－1；m：風干試樣質量，g；堿解N——擴散法1.原理 在一定濃度的堿溶液和一定的溫度條件下，易水解態(tài)氮和硝態(tài)氮水解轉化為氨，并不斷擴散逸出，被硼酸吸收。用標準酸滴定被硼酸溶液吸收的氨，由此計算堿解氮的含量。 說實話，兩年的堿解N實驗都不是我一個人獨立完成的，主要倚仗實驗專家——趙玉明師兄。從堿性膠液的配置，到毛玻璃片的固定，再到滴定，我基本上只能算是個打下手的。和全N測定很像，做好準備工作，愛干嘛干嘛去，然后取出，滴定?；旧希绻媱澓侠淼脑?，中間可以做另一項指標的測定了。2.主要儀器擴散皿+毛玻璃片、橡皮筋、半微量滴定管、烘箱3.試劑氫氧化鈉溶液（L）：稱取氫氧化鈉（NaOH）溶解于水，用蒸餾水稀釋至1L。硫酸亞鐵還原劑：根據(jù)所需用量（大概1個樣1g），稱取并磨細硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O），使其通過孔徑篩，貯于玻璃瓶中，說是說要過篩啦，其實磨得差不多就行了，主要是為了和土壤充分接觸，促進反應。堿性膠液：稱取40g阿拉伯膠放入裝有50mL水的燒杯中，攪拌促溶。再加入20mL甘油和20mL飽和碳酸鉀水溶液，攪勻。一般于堿解氮測定前配制。其實各種藥品的比例并不是嚴格固定不變的。根據(jù)趙師兄的經驗，重要的是在配制過程中快速充分攪拌，別讓膠液中出現(xiàn)阿拉伯膠的硬核，而甘油和碳酸鉀則可以根據(jù)自己的需要適當調整，多加入甘油則膠液較稀，下次實驗仍可使用，但當次使用的效果不好。定氮混合指示劑：稱取溴甲酚綠和甲基紅于研缽中，加入少量95％乙醇，研磨至指示劑全部溶解后，加95％乙醇至100mL。硼酸溶液（20g/L）：稱取硼酸（H3BO3）溶于水中，稀釋至1L。鹽酸標準溶液（L）：吸取9mL濃鹽酸，用蒸餾水定容至1L。滴定前用L的碳酸鈉或四硼酸鈉標準溶液標定，即吸取10mL碳酸鈉標準溶液于三角瓶中，滴入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標準溶液滴定至溶液由藍色變?yōu)樽霞t色，即為終點，由此計算鹽酸濃度。怎么配這兩種標液自己算去~4.步驟檢查擴散皿是否有明顯的缺口或凹痕，如果有，該扔的就扔，不要舍不得哦~然后稱取過孔徑篩的風干土樣和硫酸亞鐵還原劑，均勻平鋪于擴散皿的外室內，或者輕輕地在桌面上晃動，讓其分布均勻。同時根據(jù)具體情況作空白和重復，一般至少各2個。在擴散皿內室加入2mL硼酸溶液，并滴入兩滴定氮混合指示劑。在擴散皿的外室邊緣涂上堿性膠液，蓋上毛玻璃，旋轉數(shù)次，使毛玻璃與擴散皿的邊緣完全黏合。這個一定要注意，千萬不能漏氣了。慢慢轉開毛玻璃的一邊，使擴散皿外室露出一條狹縫，在擴散皿外室迅速加入10mL氫氧化鈉溶液，立即用毛玻璃蓋嚴。然后小心地用橡皮筋兩根交叉成十字形圈緊，使毛玻璃固定。放在烘箱中于40℃保溫24h±。將擴散皿取出，小心轉開毛玻璃。用L鹽酸標準溶液滴定內室硼酸中吸收的氨，顏色由藍色剛轉變?yōu)樽霞t色即達到終點。滴定時應用細玻璃棒攪動內室溶液，不宜搖動擴散皿，以免逸出。5.計算堿解氮（N），mg·kg－1＝[c·（V-V0）×14×1000]/mV：滴定待測液消耗酸標準溶液體積，ml；V0：滴定空白消耗酸標準溶液體積，ml；C：酸標準溶液濃度，mol·L－1；m：風干試樣質量，g；全P——酸溶法1.原理 危險的實驗又來了，準備好全套裝備哦，實驗服、膠皮手套、線手套、口罩，一個都不能少?？纯磳嶒炘砭兔靼琢恕Ｔ诟邷貤l件下，土壤中含磷礦物及有機磷化合物與濃硝酸、高氯酸及氫氟酸作用，使之完全分解，全部轉化為正磷酸鹽而進入溶液，然后用鉬銻抗比色法測定。2.試劑消化罐+鋼外套、移液管或移液槍、烘箱、電熱板、比色管、分光光度計注意：消化罐要用稀硝酸浸泡過夜，將殘余附著的P去除。實驗室有酸缸，貌似是硝酸（1+3），就是一份酸三分水啦。手碰到了貌似沒有什么感覺，但瞬間就會發(fā)黃、蛻皮~所以不管是放入還是取用消化罐的時候一定要戴膠皮手套，而且要檢查一下手套有沒有破洞之類的~俺就吃過這種苦頭~消化罐取出后用蒸餾水沖洗幾次，烘干備用~3.試劑鉬酸鹽溶液：將濃硫酸加入400mL水中，不斷攪拌，冷卻至室溫，濃硫酸稀釋會放熱，這個應該都知道吧，備好盛有自來水的盆哦。另溶解20g鉬酸銨〔（NH4）6Mo7O24·4H2O〕于200mL水中。鉬酸銨不易溶解，需要60℃水浴，在實驗室可以選擇用超聲波清洗器（可以調溫的），也可以用水浴鍋，調到60℃，用玻璃棒攪拌，很快也就溶解了。溶解酒石酸銻鉀〔KSbC4H4O7·1/2H2O〕于100mL水中，這個很快。在不斷攪拌下將硫酸溶液徐徐加入鉬酸銨溶液中，再加入酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1L，鉬銻抗混合顯色劑：在100mL鉬酸鹽溶液中，加入抗壞血酸，使用前配制。這個大概準確就可以了，用一個燒杯，大致倒入100mL鉬酸鹽溶液，然后用硫酸紙稱上抗壞血酸，呃，抗壞血酸粉末狀的，需要溶解。用玻璃棒攪拌，讓其溶解。溶解速度也不慢，要注意，此時呈黃色。如果發(fā)藍，說明已經混入P了，或者是水有問題，或者是藥品配置有問題。二硝基酚指示劑：稱取二硝基酚（C6H3OH（NO2）2）溶于水中，用蒸餾水定容至100mL。氫氧化鈉溶液（4mol/L）：稱取氫氧化鈉（NaOH）溶于水中，用蒸餾水定容至250mL。硫酸溶液（1mol/L）：吸取6mL濃硫酸（H2SO4）至50mL水中，用蒸餾水定容至100mL。濃硝酸（HNO3）高氯酸（HClO4，70~72%）氫氟酸（HF）磷貯備液：稱取烘干的KH2PO4用水溶解后轉移至1L的容量瓶中，加入大約800mL的蒸餾水，加入濃硫酸（H2SO4），然后定容。此貯備液的P濃度為50mg/L。磷標準液：測定當天將25mL磷貯備液轉移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標線，即為磷標準液（5mg/L）。.所需試劑很多，特別是鉬酸鹽溶液，配制較麻煩，一定要提前做好準備。此外，高氯酸和氫氟酸一般沒辦法在市場上買到，求助高師兄吧~4.步驟稱取通過孔徑的風干土樣置于消化罐中，依次加入3mL濃硝酸、1mL高氯酸和1mL氫氟酸，旋緊后放入烘箱中。記住，一定要旋緊，否則有什么其他雜質混入就功虧一簣了。將溫度調至160℃，當溫度達到160℃時開始計時，5~6h后停止加熱。同時做空白試驗。注意，加熱時間可以延長，但不能縮短，以保證土壤充分熔化。這種方法是當時學校的分析測試中心采用的，雖然我覺得的土樣很可能沒有什么代表性，誤差較大，但現(xiàn)在只有這種辦法，還是從了吧。磨土的時候一定要充分混合。由于消煮所用的都是強酸，極具腐蝕性，只能用高溫熔融室（237）角落里的舊烘箱。一般從室溫升到160℃需要1個多小時，而總的消煮時間又較長，所以可以用兩種計劃。PlanA：晚上臨走前放入烘箱，第二天一早來關，馬上打開箱門讓其冷卻，然后去吃個早飯、上上網(wǎng)，就差不多了，可以進行下一步，全P測定比較麻煩，一天時間差不多完成一批；PlanB：早晨放入，下午取出，這樣時間比較緊張，一整天就耗在實驗室吧將電熱板置于通風櫥中，溫度調至180℃（剛開始調高點也無所謂，讓電熱板快點升溫）。待消化罐冷卻后，將其置于電熱板上加熱去硅及殘留的氫氟酸，將有大量白煙冒出。加熱至罐內液體呈半個指甲蓋大小時取下，放在通風櫥內，白煙冒盡取出。用蒸餾水將消化罐內的消解液洗入50mL的比色管內，用蒸餾水定容至標線，搖勻，靜置。（至此可以按照速效K方法利用火焰光度計測定土壤全K含量。不用醋酸銨浸提，在比色管中吸取1mL，然后加入10mL氯化鋰，記錄檢流計讀數(shù)。當然，別忘了作標線。呃，速效K測定放后邊了，自己找吧~）到這一步也可以選擇拿著比色管到分析測試中心去測，￥5一個樣，很省心省力，也不貴。如果想要親力親為，就吸取10mL稀釋的消解液至50mL比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，加二硝基酚指示劑2滴，先滴入幾滴氫氧化鈉溶液使其呈黃色，再用稀硫酸調至無色，此時溶液pH值約為3。加入5mL鉬銻混合顯色劑，定容至標線，搖勻。吸液時個人習慣都不同，我的習慣是用大肚的10mL移液管，據(jù)說這個比直筒身材的準，吸取待測液前先用其潤洗一遍（就是第一遍吸的不要），移液之后先用蒸餾水潤洗，然后用濾紙稍微吸干外圍的水分，然后進行下一個樣品的吸取。同時，也要配置標準曲線溶液，用移液槍分別取0、、、、、、磷標準溶液于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，利用二硝基酚、氫氧化鈉和稀硫酸調節(jié)pH值，然后加入5mL鉬銻混合顯色劑，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。定容完成之后，讓其靜置顯色，國標上的說法是在20℃室溫下顯色15min，考慮到溫度可能存在差異，也為了讓其充分顯色，一般30min~1hour都沒有問題。此時，可以打開分光光度計了，反正也要預熱30min。預熱時可以洗洗瓶子、比色管之類的，注意哦，由于轉了兩次比色管，還要配置標線，需要的比色管大概是（待測樣品個數(shù)+4）*2+7，請預先準備好。預熱差不多了，就可以進行分光光度計的配準了（我也不知道能不能叫“配準”將分光光度計的坡長調至700nm處，選擇OA/100%處，貌似是這樣，然后調歸100。用蒸餾水清洗2個及以上比色皿，倒入超過其體積2/3的蒸餾水，放入儀器中比色。我一般用2個，多了也顧不過來。如果這兩個比色皿的讀數(shù)一致，說明其干凈程度相同，即提供了一個可以比較待測液的標準。如果不同或是距100過低，則需用擦鏡紙仔細擦拭，用稀酸或洗液（重鉻酸鉀+硫酸）浸泡，或用超聲波清洗器清洗干凈。符合要求后，將對應值調至100。然后選擇AT/CF鍵，此時兩個比色皿都為。一個比色皿留在分光光度計內，做基準之用，另一個取出，倒去蒸餾水，倒入待測液。一般先對標準溶液按其濃度從低到高進行測定，防止高濃度影響低濃度的吸光值。但每次測定最好都先用待測液潤洗，然后用濾紙小心吸取比色皿外邊的液體。根據(jù)標準溶液的濃度和吸光值，繪制標準曲線。然后根據(jù)標準曲線和待測液的吸光值，計算其P濃度，再根據(jù)分取倍數(shù)這算土壤全P含量。由于全P進行了多次稀釋，這里不詳細介紹其計算方法。在后文會提到如何用標準曲線計算對應養(yǎng)分濃度，并折算其土壤含量。方法類似，注意分取倍數(shù)就是了。有效P——碳酸氫鈉法1.原理 中性、石灰性土壤中的速效磷，多以磷酸一鈣和磷酸二鈣狀態(tài)存在，可用碳酸氫鈉提取到溶液中，同時使浸提液中鈣離子形成碳酸鈣沉淀，然后將待測液用鉬銻抗混合顯色劑在常溫下進行還原，使黃色的銻磷鉬雜多酸還原成為磷酸鉬藍，可通過比色測定。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機、漏斗、移液管、比色管、分光光度計、定量濾紙（+18cm）3.試劑碳酸氫鈉浸提液（L）：稱取碳酸氫鈉（NaHCO3）于水中，用蒸餾水定容至1L。在有效磷的測定中，碳酸氫鈉的用量很大，泡濾紙和活性炭，做浸提液，建議先準備一個5L左右的試劑瓶或容量瓶若干。無磷活性炭：將活性炭用L的碳酸氫鈉溶液浸泡過夜，在平瓷漏斗上抽氣過濾。方法是將抽氣漏斗洗干凈，并用蒸餾水沖洗數(shù)次。將兩張定量濾紙（18cm）交疊鋪于抽氣漏斗底部，噴上少許蒸餾水，使濾紙緊貼漏斗底部和旁邊。將浸泡后的活性炭倒入，同時，將連通抽氣漏斗的水龍頭開到最大。用蒸餾水多淋洗幾次，以防烘干后的無磷活性炭含有碳酸氫鈉白色結晶。鉬酸鹽溶液：將濃硫酸加入400mL水中，不斷攪拌，冷卻至室溫。另溶解20g鉬酸銨〔（NH4）6Mo7O24·4H2O〕于200mL水中。溶解酒石酸銻鉀〔KSbC4H4O7·1/2H2O〕于100mL水中。在不斷攪拌下將硫酸溶液徐徐加入鉬酸銨溶液中，再加入酒石酸銻鉀溶液，用蒸餾水稀釋至1L，貯于棕色瓶中。注意事項參照全P測定。鉬銻抗混合顯色劑：在100mL鉬酸鹽溶液中，加入抗壞血酸，使用前配制。無磷濾紙：把定量濾紙置于碳酸氫鈉溶液中浸泡過夜，使用時取出使用即可。取出的時候把手洗凈，輕輕擠出水分。磷貯備液：稱取烘干的KH2PO4溶于水，并加入濃硫酸，定容于1L，則P濃度為50mg/L。磷標準液：測定當天將磷貯備液稀釋10倍，即為磷標準液（5mg/L）。4.步驟稱取通過1mm孔徑篩的風干土樣于250mL三角瓶中，用漏斗加入50mL碳酸氫鈉溶液，再加入無磷活性炭，在振蕩機上振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾至150mL三角瓶中。吸取濾液10mL于50mL比色管中，用蒸餾水稀釋至25mL，加入5mL鉬銻混合顯色劑，定容至標線，搖勻。注意，由于NaHCO3與混合顯色劑中的酸反應會產生大量CO2，必須輕輕搖晃比色管，直至CO2全部放出才可進行定容和充分搖勻。如果CO2未放完，就蓋上比色管的蓋子，很容易噴出，造成損失。在室溫下放置30min~1hour后，于700nm波長處，使用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標準曲線上對照得到有效磷含量。標準曲線：分別取0、、、、、、磷標準溶液于50mL的比色管中，分別加入碳酸氫鈉溶液10mL（與所取濾液體積一致），然后用蒸餾水稀釋至25mL，分別加入5mL鉬銻混合顯色劑，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。于700nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標準曲線。附：土壤全P記錄表格及計算（淋溶褐土） 表2是標準曲線的記錄表。例如，在50mL的比色管中加入mL磷標準液（5mg/L），則比色管內磷的濃度為：*5/50=L。以吸光值為橫坐標，比色管中的磷濃度為縱坐標，得到圖1。磷濃度與吸光值呈線性關系，一般決定系數(shù)R2在3個9以上。得出的一次線性方程即可用于計算土壤的磷濃度。表2土壤有效P測定標準曲線加入（mL）吸光值濃度（mg/L）0圖1土壤有效P測定標準曲線 將土壤測定所得的吸光值帶入擬合方程，可以得到各土壤樣品對應比色管的磷濃度。但是，由于存在系統(tǒng)誤差，如蒸餾水或過濾環(huán)節(jié)中存在P，需要把空白部分減去?？梢杂脴悠返奈庵禍p去空白吸光值，也可以用計算出來的磷濃度減去空白計算出來的磷濃度，本計算中采用后者。由于比色時只吸取了10mL濾液，將其定容至50mL，即濾液被稀釋了5倍，因此，濾液的濃度等于比色管磷濃度*5。濾液中的磷含量等于濾液磷濃度乘以50mL，也就是所取的土壤樣品中可以浸提出的有效磷。因此，土壤有效磷含量=濾液濃度*50/土樣質量。表3土壤有效P記錄和計算土樣編號采樣深度（cm）質量(g)吸光值比色管濃度（mg/L）比色管-空白（mg/L）濾液濃度（mg/L）土壤含量（mg/kg）MY0-20MY20-40MY40-60MYC40-60MY60-80MY80-100MY0-5MY5-10MY10-15MY15-20空白1空白2空白平均速效K——火焰光度法1.原理速效K是最好測的土壤化學指標之一，除了醋酸銨的醋味，其實還可以忍受啦~其原理是用中性的醋酸銨（CH3COONH4，1mol/L）溶液浸提土壤時，NH4+與土壤膠體表面的K+進行交換，連同水溶性K+一起進入溶液。浸提液中的K可直接用火焰光度法測定。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機、漏斗、移液管或移液槍、比色管（50mL的小容量瓶也可以，用于配制標準曲線）、火焰光度計、10mL小燒杯（火焰光度計專用）、定性濾紙（）3.試劑醋酸銨溶液（1mol/L）：稱取醋酸銨（CH3COONH4）溶于水中，用蒸餾水定容至1L。很多化學分析講義上要求調節(jié)pH值，但本身醋酸銨接近中性，目前的測定中基本沒有必要。氯化鋰溶液（L）：稱取無水氯化鋰（LiCl）溶于水中，用蒸餾水定容至1L。鉀標準溶液：準確稱取烘干的氯化鉀（KCl）溶于1mol/L的醋酸銨溶液中，并用此溶液定容至1L，則K濃度為100mg/L。注意，使用醋酸銨溶液配制，不是蒸餾水。4.步驟稱取通過1mm孔徑篩的風干土樣于250mL三角瓶中，加入50mL醋酸銨溶液，在振蕩機上振蕩30min，用干的定性濾紙過濾至150mL三角瓶中。同時做空白和重復樣品。吸取10mL氯化鋰溶液于小燒杯中，加入1mL濾液，用于在火焰光度計上進行速效K測定。同時，分別取0、、、、、鉀標準溶液于50mL的比色管中，用醋酸銨溶液稀釋至標線，搖勻。注意，在配制標準溶液前要采用醋酸銨溶液對比色管進行潤洗。與樣品一致，先吸取10mL氯化鋰溶液于小燒杯中，再加入1mL標準液。打開火焰光度計時要先仔細閱讀儀器操作指南，先打開煤氣，點火時注意調節(jié)空氣和煤氣的氣壓，當打開的火焰呈藍色時即可。在測定前，先預熱30min。然后先用蒸餾水潤洗探頭，保證水分連通，排水口有水排出。先測定標準曲線的在火焰光度計上的讀數(shù)，將取用0mL和mL的標準溶液對應燒杯置于測試臺上，輕輕上移，將讀數(shù)分別調至和。然后將其余標準溶液依次進行測定，記錄讀數(shù)，擬合速效K濃度和火焰光度計讀數(shù)線性方程。將其余樣品依次進行測定，記錄讀數(shù)，利用擬合方程進行速效K含量的計算。關閉火焰光度計嚴格按照相關儀器說明進行，依次關閉儀器、閥門和煤氣開關。銨態(tài)N——靛酚藍比色法1.原理 NH4+在強堿性介質中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍。溶液的藍色很穩(wěn)定，在NH4-N濃度為L~L范圍內，其深淺與NH4-N含量成正比。在一般的實驗手冊上，多采取苯酚和硝普鈉混合配制酚溶液，但后者有劇毒，實驗室多不采用。本文參照相關文獻，采用異丙醇和丙酮替代硝普鈉，標準曲線擬合結果顯示，其效果也不錯。 其實，很多涉及比色的實驗都牽涉到一個顯色范圍的問題。因此，不能武斷地相信實驗書或這里所描述的稱取土樣質量和浸提液體積。這里僅針對北京的普通褐土，相對而言，其養(yǎng)分含量值較低。根據(jù)所采土樣的情況，可以做適當?shù)恼{整，只是在計算的時候要注意分取倍數(shù)，將其折算進去。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機、漏斗、移液管、移液槍、比色管、分光光度計、定量濾紙（）3.試劑氯化鉀溶液（2mol/L）：稱取氯化鉀（KCl），溶于水，用蒸餾水定容至1L。5%乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA）溶液：稱取5gEDTA溶于水，定容于100mL。酚鈉溶液（126g/L）：稱取126g結晶苯酚溶解在20mL異丙醇和40mL丙酮中，并用異丙醇稀釋到200mL；另外稱取54gNaOH溶解于200mL水中，與苯酚溶液混合，用蒸餾水定容至1L，貯于棕色瓶中，存放在4℃冰箱中備用。注意，苯酚有毒，在常溫下呈結晶態(tài)，不易取用。可以將改錐清洗干凈，一點一點取出來。實驗服、手套和口罩一個都不能少，我實踐過苯酚濺到臉上的情況，呈粉紅色~~還有次氯酸鈉溶液：次氯酸鈉（NaClO）與蒸餾水大致按照1:3配置，用鹽酸調pH值至。實驗當天配制，次氯酸鈉也很嗆人，做好保護措施。NH4-N貯備液：稱取烘干的（NH4）2SO4溶于水，定容于1L，則NH4-N濃度為100mg/L。NH4-N標準液：測定當天將NH4+-N貯備液稀釋20倍，即為NH4-N標準液（5mg/L）。4.步驟稱取過2mm篩的新鮮土壤，置于250mL的三角瓶中，加入50mL氯化鉀溶液，放在振蕩機上振蕩1個小時。靜置半個小時，過濾。同時做空白試驗。吸取10mL濾液置于50mL的比色管中，依次加入EDTA1mL、酚鈉溶液4mL、新配制的次氯酸鈉溶液3mL，然后用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。室溫下放置2~3小時后，于625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標準曲線上對照得到銨態(tài)氮含量。標準曲線：分別取0、、1、2、3、4、5mL銨態(tài)氮標準溶液于50mL的比色管中，加入10mL氯化鉀溶液，再依次加入1mLEDTA、4mL酚鈉溶液、3mL次氯酸鈉溶液，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。室溫下放置2~3小時后，于625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標準曲線。5.計算 利用比色法測定土壤化學性質時，其計算方法基本相同（具體見有效P測定）。但有兩點需要注意。一是考慮到靛酚藍比色法的顯色范圍，對于養(yǎng)分含量不同的土壤樣品的實驗用量可能有所不同，計算時要注意分取倍數(shù)。二是銨態(tài)氮采用的是新鮮土壤樣品，在進行試驗的同時應測定其土壤含水率，然后進行折算：土壤銨態(tài)氮含量=所測含量*（1+土壤含水率）。硝酸鹽N——紫外分光光度法1.原理 NO3-在220nm處有強吸收，在275nm處無吸收，而主要干擾因子－土壤有機質均有吸收，分別測定兩個波段的吸光度，利用校正因數(shù)進行換算，從而得到NO3-N的校正吸光度，與NO3-N濃度成正比。目前，校正因素多采用2。 實驗操作起來比較簡單，就是要測兩個波段，而現(xiàn)在實驗室的分光光度計還沒有那么高級，所以，忍了吧~2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、量筒、振蕩機、漏斗、移液管、比色管、紫外分光光度計、定量濾紙（）3.試劑氯化鉀溶液（2mol/L）：稱取氯化鉀（KCl），溶于水，再稀釋至1000mL。NO3-N貯備液：稱取烘干的KNO3溶于水，定容于1L，則NO3-N濃度為100mg/L。NO3-N標準液：測定當天將NO3-N貯備液稀釋5倍，即為NO3-N標準液（20mg/L）。4.步驟稱取過2mm篩的新鮮土壤，置于250mL的三角瓶中，加入50mL氯化鉀溶液，放在振蕩機上振蕩1個小時。靜置半個小時，過濾。吸取25mL濾液置于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，從標準曲線上對照得到硝態(tài)氮含量。注意哦，這里用的是石英比色皿和紫外分光光度計。因為220nm和275nm屬于紫外波段，用玻璃比色皿是測不出來的。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、10mL硝態(tài)氮標準溶液于50mL的比色管中，加入25mL氯化鉀溶液（加入多少浸提液和前面取用了多少是對應的，目的在于消除這部分的影響），用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，繪制標準曲線。這里的計算也要注意用土壤含水量換算，因為用的新鮮土壤樣品~2水水樣采集和預處理 目前，采集的水樣包括小區(qū)地表徑流和河流兩種。降雨產流后，均勻攪拌集流桶后采集水樣。如果含沙量較大時，則利用垂直剖面采樣器進行采樣。河流采樣多選取適合的斷面，在橋上利用采樣器采集。Anyway，無論采集到的水樣多少，都以1L的塑料瓶舉例說明預處理方式。 如果樣品含沙量不高，可以直接進行過濾；否則，一般需靜置2~3個小時。過濾需要準備鐵架子、18cm定量濾紙、漏斗，還有空瓶。樣品靜置后，緩緩將其上清液倒入一個干凈的塑料瓶中，其余用蒸餾水沖至飯盒中再度靜置。濾紙疊好放在漏斗中，噴灑少量蒸餾水，讓其緊貼漏斗壁。將漏斗倒置于裝有上清液的瓶上，連同塑料瓶快速倒置，使瓶底斜靠在實驗臺架子上，用鐵絲架固定，防止其向兩側傾斜。漏斗下部為承接濾液的塑料瓶，當過濾的水樣達到一定量時，會沒過漏斗下部，氣壓平衡會使得過濾變慢。因此，多在承接的塑料瓶上加一個套，相當于將漏斗位置墊高。如果樣品不是很渾濁，2~3個小時即可過濾完成。盛在飯盒中的泥沙樣品靜置后倒掉上清液，放在烘箱中以105℃ 詳細記錄樣品瓶號、上清液瓶號、濾液瓶編號以及飯盒編號，切忌弄亂。在濾液瓶上一般可多貼一個標簽，表明采樣點和日期，方便日后實驗測試分析。如果不能進行及時的分析和檢測，馬上放入冰箱內冷凍保存。pH值——電位法1.原理水樣pH值的測定我就不羅嗦了，方法和土壤一樣，而且還少了攪拌等若干工序。直接測就行了。原理一樣，電動勢——pH。2.主要儀器燒杯、pH計、濾紙3.試劑（鄰苯二甲酸氫鈉）標準緩沖溶液、（磷酸氫二鈉+磷酸二氫鈉）標準緩沖溶液、（四硼酸鈉）標準緩沖液：將對應的pH基準試劑用小漏斗沖入250mL的容量瓶中，待充分溶解后，定容至標線。4.步驟吸取一定量的水樣置于50mL高型燒杯中，好吧，直接倒就可以了，然后用pH計進行測定。將電極插入待測液中（注意電極不能觸及燒杯底或壁），輕輕搖動燒杯以除去電極上的水膜，使其快速平衡，記下穩(wěn)定后的pH值。取出電極，用蒸餾水洗滌，而后用濾紙條吸干水分后即可進行下一個樣品的測定?？侼——堿性過硫酸鉀氧化紫外分光光度法1.原理 在60℃以上的水溶液中，過硫酸鉀可分解產生硫酸氫鉀和原子態(tài)氧，硫酸氫鉀在溶液中離解而產生氫離子，故在氫氧化鈉的堿性介質中可促使分解過程趨于完全。分解出的原子態(tài)氧在120℃~124℃條件下，可使水樣中含氮化合物的氮元素轉化為硝酸鹽，并且在此過程中有機物同時被氧化分解?？捎米贤夥止夤舛确ㄓ诓ㄩL220nm和275nm處，分別測定吸光度，利用校正因數(shù)進行換算，從而得到NO 說實話，這個實驗我在系里沒做過。好吧，我承認，用消化罐和烘箱代替比色管和壓力鍋試過，試了有5次+都沒有成功。一來是因為實驗室沒有合適的壓力鍋，二來是有老師說壓力鍋不安全（去年出了若干這類事故，道聽途說~）。所以看了一篇文獻，用消化罐試了試，但我始終覺得中間環(huán)節(jié)有混入N的可能，所以標線一直不準，就放棄了。但是我在其他實驗室有幫過忙，大概知道一些。據(jù)說實驗室有購買新的消解儀器的意向，又安全又快，不過貴~呵呵，只是不知要等到何年何月~2.主要儀器比色管、紗布、橡皮筋、壓力鍋、移液管、紫外分光光度計注意：比色管要用稀鹽酸（1+9）或稀硫酸（1+35）浸泡過夜，去除殘余的N。取出后用蒸餾水清洗數(shù)次~3.試劑堿性過硫酸鉀溶液：稱取40g過硫酸鉀（K2S2O8），60℃水浴熱溶于300mL水中；另稱取15g氫氧化鈉（NaOH），溶于300mL水中。其實溶于多少水無所謂，反正溶解了，且加和不超過1L就行。將過硫酸鉀溶液緩緩倒入氫氧化鈉溶液中，待冷卻后（氫氧化鈉溶解會放熱啦），定容至1L，鹽酸（1+9）：吸取100mL濃鹽酸于容量瓶中，用蒸餾水定容至1L。NO3-N貯備液：稱取烘干的KNO3溶于水，定容于1L，則NO3-N濃度為100mg/L。NO3-N標準液：測定當天將NO3-N貯備液稀釋10倍，即為NO3-N標準液（10mg/L）。4.步驟吸取10mL水樣于比色管中，加入5mL堿性過硫酸鉀溶液，塞緊磨口塞并用紗布及皮筋固定，以防彈出。將比色管置于壓力鍋中，加熱，使壓力表指針到~cm3，此時溫度達到120~124℃冷卻后加入鹽酸（1+9）1mL，定容至25mL，搖勻。然后分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，從標準曲線上對照得到硝態(tài)氮含量。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、10mL硝態(tài)氮標準溶液于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至10mL，加入5mL堿性過硫酸鉀溶液，采用與樣品相同的方法進行消煮。待消煮液冷卻后加入1mL稀鹽酸（1+9），并用蒸餾水定容至25mL，然后分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，繪制標準曲線。銨態(tài)N——靛酚藍比色法1.原理 NH4+在強堿性介質中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍。溶液的藍色很穩(wěn)定，在NH4-N濃度為L~L范圍內，其深淺與NH4-N含量成正比。水樣銨態(tài)N的測定原理與土壤一樣，少了浸提部分，反而還更簡單了呢~所以試劑配制和實驗步驟的注意事項盡可以參考土壤銨態(tài)N測定。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、漏斗、定量濾紙（）、移液管、移液槍、比色管、分光光度計3.試劑5%乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA）溶液：稱取5gEDTA溶于水，定容于100mL。酚鈉溶液（126g/L）：稱取126g結晶苯酚溶解在20mL異丙醇和40mL丙酮中，并用異丙醇稀釋到200mL；另外稱取54gNaOH溶解于200mL水中，與苯酚溶液混合，用蒸餾水定容至1L，貯于棕色瓶中，存放在4℃次氯酸鈉溶液：次氯酸鈉（NaClO）與蒸餾水大致按照1:3配置，用鹽酸調pH值至。實驗當天配制。NH4-N貯備液：稱取烘干的（NH4）2SO4溶于水，定容于1L，則NH4-N濃度為100mg/L。NH4-N標準液：測定當天將NH4-N貯備液稀釋20倍，即為NH4-N標準液（5mg/L）。4.步驟一般水樣采集回來都會馬上過濾。如果覺得待測水樣仍渾濁，則在測定前再用定量濾紙過濾一次。然后吸取25mL濾液置于50mL的比色管中，依次加入EDTA1mL、酚鈉溶液4mL、新配制的次氯酸鈉溶液3mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。同時做空白試驗。如果水中銨態(tài)N含量較高，可以調整水樣用量，以確保其銨態(tài)N含量在測定范圍內。在室溫下放置2~3小時后，于625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標準曲線上對照得到NH4-N含量。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、10mLNH4-N標準溶液于50mL的比色管中，依次加入1mLEDTA、4mL酚鈉溶液、3mL次氯酸鈉溶液，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。在室溫下放置2~3小時后，于625nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標準曲線。硝酸鹽N——紫外分光光度法1.原理 NO3-在220nm處有強吸收，在275nm處無吸收，而溶解的有機物均有吸收，分別測定兩個波段的吸光度，利用校正因數(shù)進行換算，從而得到NO3-N的校正吸光度，與NO3-N濃度成正比。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、漏斗、定量濾紙（）、移液管、移液槍、比色管（配標準曲線用）、紫外分光光度計3.試劑NO3-N貯備液：稱取烘干的KNO3溶于水，定容于1L，則NO3-N濃度為100mg/L。NO3-N標準液：測定當天將NO3-N貯備液稀釋5倍，即為NO3-N標準液（20mg/L）。4.步驟利用定量濾紙過濾水樣（自行決定），然后直接將濾液置于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，從標準曲線上對照得到硝態(tài)氮含量。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、10mL硝態(tài)氮標準溶液于50mL的比色管中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分別于220nm和275nm波長處，用1cm石英比色皿測定吸光度，利用A220-2A275計算校正吸光度，繪制標準曲線?？侾——過硫酸鉀氧化鉬酸銨分光光度法1.原理 在中性條件下用過硫酸鉀使試樣消解，將所含磷全部氧化為正磷酸鹽。在酸性介質中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應，在銻鹽存在下生成磷鉬雜多酸后，立即被抗壞血酸還原，生成藍色的絡合物。 水樣總P測定也經過了3次失敗，現(xiàn)在已經成為我最喜歡的實驗之一了。嘿嘿，標準曲線的藍色由淺至深依次排開，很好看，算是原因之一吧。失敗原因總結了一下，一是未浸泡消化罐，帶來隨機誤差；一是消化罐鋼外套的蓋子沒有旋緊，鐵銹混入。剛好再強調一下：消化罐一定要用砂紙仔細磨去鐵銹，然后沖洗干凈烘干。對了，這種實驗方法和國標略有不用，用消化罐和烘箱取代了比色管和壓力鍋。2.主要儀器移液管、消化罐+鋼外套、烘箱、比色管、移液槍、分光光度計3.試劑過硫酸鉀溶液（50g/L）：將50g過硫酸鉀（K2S2O8）在60℃水浴下溶解于水中，然后稀釋至1L鉬酸鹽溶液：溶解13g鉬酸銨〔（NH4）6Mo7O24·4H2O〕于100mL水中，60℃水浴。溶解酒石酸銻鉀〔KSbC4H4O7·1/2H2O〕于100mL水中。在不斷攪拌下把鉬酸銨溶液徐徐加到300mL硫酸（1+1）中，加酒石酸銻鉀溶液并且混合均勻。這里相當于定容至500mL，所以前邊的溶解于多少水中都不是定量的，加和不要超過500mL就可以。也可以全部翻倍，定容至1L。然后保存在棕色瓶中，一個月沒有問題。另外，注意這里的硫酸和鉬酸銨用量略有不同，雖然個人覺得差異不大，用來測定土壤P也基本沒有影響，但還是尊重下國標吧抗壞血酸（100g/L）：溶解10g抗壞血酸（C6H8O6）于水中，并稀釋至100mL，用燒杯溶解就可以，顯色劑不參與計算，不用太精確。使用當天配制。磷貯備液：稱取烘干的KH2PO4溶于水，加入濃硫酸（H2SO4），定容于1L，則P濃度為50mg/L。磷標準液：測定當天將10mL磷貯備液轉移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標線，即為磷標準液（2mg/L）。4.步驟取水樣15mL水樣于消化罐中，分別加入過硫酸鉀溶液。旋緊后放入烘箱中，將溫度調至125℃，當溫度達到125℃時開始計時，30min后停止加熱。待消化罐冷卻后，取10mL消解液于25mL比色管中，分別加入1mL抗壞血酸溶液和2mL鉬酸鹽溶液（國標上說抗壞血酸加完后30s再加鉬酸鹽，完全可以置之不理，從來不相信這種時間差異會受影響，不過順序還是要遵守下，這樣抗壞血酸才能充分還原磷鉬雜多酸）在室溫下放置30min~1hour后，于700nm波長處，使用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標準曲線上對照得到總磷含量。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、7、10mL磷標準溶液于消化罐中，用蒸餾水補足至15mL，分別加入過硫酸鉀溶液。旋緊后放入烘箱中，將溫度調至125℃，當溫度達到125℃時開始計時，30min后停止加熱。待消化罐冷卻后，取10mL消解液于25mL比色管中，分別加入1mL抗壞血酸溶液和2mL鉬酸鹽溶液，用蒸餾水稀釋至25mL，搖勻。于700nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度可溶P——鉬酸銨分光光度法1.原理 在酸性介質中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應，在銻鹽存在下生成磷鉬雜多酸后，立即被抗壞血酸還原，生成藍色的絡合物。其測定原理與總P類似，但省卻了消解過程。注意，本法測定的可溶P是可經濾紙過濾的水樣中的正磷酸鹽和一小部分被水解的縮合磷酸鹽。2.主要儀器三角瓶（250mL和150mL）、漏斗、定量濾紙（）、移液管、移液槍、比色管、分光光度計3.試劑鉬酸鹽溶液：溶解13g鉬酸銨〔（NH4）6Mo7O24·4H2O〕于100mL水中。溶解酒石酸銻鉀〔KSbC4H4O7·1/2H2O〕于100mL水中。在不斷攪拌下把鉬酸銨溶液徐徐加到300mL硫酸（1+1）中，加酒石酸銻鉀溶液并且混合均勻。注意事項見水樣總P測定?？箟难幔?00g/L）：溶解10g抗壞血酸（C6H8O6）于水中，并稀釋至100mL，使用當天配制。磷貯備液：稱取烘干的KH2PO4溶于水，加入濃硫酸（H2SO4），定容于1L，則P濃度為50mg/L。磷標準液：測定當天將10mL磷貯備液轉移至250mL容量瓶中，用水稀釋至標線，即為磷標準液（2mg/L）。4.步驟過濾水樣后，取10mL樣品于25mL比色管中，依次加入1mL抗壞血酸溶液和2mL鉬酸鹽溶液，用蒸餾水稀釋至刻度（25mL）。同時做空白試驗。在室溫下放置30min~1hour后，于700nm波長處，使用1cm玻璃比色皿測定吸光度，從標準曲線上對照得到可溶磷含量。標準曲線：分別取0、、、1、2、5、7、10mL磷標準溶液于25mL的比色管中，依次加入1mL抗壞血酸溶液和加入2mL鉬酸鹽溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。于700nm波長處，用1cm玻璃比色皿測定吸光度，繪制標準曲線。高錳酸鹽指數(shù)（CODMn）1.原理 樣品中加入已知量的高錳酸鉀和硫酸，在沸水浴中加熱30min，高錳酸鉀將樣品中的某些有機物和無機還原性物質氧化，反應后加入過量的草酸鈉還原剩余的高錳酸鉀，再用高錳酸鉀標準溶液回滴過量的草酸鈉。通過計算得到樣品中的高錳酸鹽指數(shù)。2.主要儀器移液管、三角瓶（250mL）、水浴鍋、酸式滴定管3.試劑硫酸（1+3）：將125mL濃硫酸（H2SO4）緩慢加入到300mL水中，并用蒸餾水定容至500mL。草酸鈉標準溶液（1/2Na2C2O4為L）：稱取經105℃烘干2h并放冷的草酸鈉溶解于水中，用蒸餾水定容至1L，混勻，置高錳酸鉀貯備液（1/5KMnO4約為L）：稱取高錳酸鉀溶解于水并稀釋至1L。分裝至2個500mL的磨口錐形瓶中，蓋上玻璃塞，于90~95℃水浴中加熱此溶液2h，冷卻。倒入棕色瓶中，并用報紙或黑色不透明的塑料袋包裹，存于暗處，以防其光解。存放一周后，傾出清液，貯于棕色瓶中，仍于暗處保存高錳酸鉀標準溶液（1/5KMnO4約為L）：吸取100mL高錳酸鉀貯備液于1L的容量瓶中，用水稀釋至標線，混勻。此溶液可在暗處保存幾個月。4.步驟吸取100mL經充分搖動、混合均勻的樣品（或分取適量，用水稀釋至100mL），置于250mL三角瓶中，加入5mL硫酸（1+3），用滴定管加入10mL高錳酸鉀標準溶液，搖勻。將錐形瓶置于沸水浴中，從水沸騰開始計時，加熱30min±2min。注意，一般認為水浴鍋溫度至98℃即為沸騰。取出后用大肚移液管加入10mL草酸鈉標準溶液至溶液變?yōu)闊o色。趁熱用高錳酸鉀標準溶液滴定至剛出現(xiàn)粉紅色，并保持30s不退，記錄消耗的高錳酸鉀溶液體積V1?？瞻自囼灒河?00mL蒸餾水代替樣品，置于250mL錐形瓶中，加入5mL硫酸和10mL高錳酸鉀標準溶液，并在沸水浴中加熱30min。趁熱加入10mL草酸鈉標準溶液，并用高錳酸鉀標準溶液滴定，記錄消耗的高錳酸鉀溶液體積V0。向滴定后的溶液中再加入10mL草酸鈉標準溶液，然后用高錳酸鉀標準溶液滴定，記錄其消耗的體積V2。5.計算高錳酸鹽指數(shù)（IMn,mg/L）可用下式計算：IMn=[(10+V1)*10/V2-10]**8*1000/100若吸取樣品V（mL）稀釋至100mL，按下式計算：IMn={[(10+V13植物植物樣品制備 植物采樣一般按照X線分籽實和莖葉部分分別采集具有代表性的樣品。采集到的樣品馬上稱其鮮重，風干后稱其風干重。如果風干后水分含量不高，經植物粉碎機粉碎，然后過孔徑篩，即可進行全量養(yǎng)分的測定。否則，還應經過相應的烘干處理。全N——開氏法1.原理 植物中的氮經濃硫酸-催化劑消煮分解，消煮液中的NH4+在堿化后成為NH3，經蒸餾用硼酸溶液吸收，再用標準酸滴定，由其消耗量計算出氨量。植物全N測定的方法和原理與土壤全N一樣，因此，試劑配制和具體實驗操作的注意事項請參照土壤全N的半微量開氏法測定。2.主要儀器消煮管、消煮爐、定氮儀、酸式滴定管、三角瓶3.試劑混合催化劑：硫酸鉀（K2SO4）、硫酸銅（CuSO4）、硒（Se）按照100:10:1的比例混合，在研缽中研細后，混合。濃硫酸（H2SO4，cm3）氫氧化鈉溶液（10mol/L）：稱取氫氧化鈉（NaOH）溶于水中，用蒸餾水定容至約4L。硼酸溶液（約%）：稱取硼酸（H3BO3）溶于水中，用蒸餾水定容至約3L。定氮混合指示劑：稱取溴甲酚綠和甲基紅于研缽中，加入少量95％乙醇，研磨至指示劑全部溶解后，加95％乙醇至100ml。鹽酸標準溶液（L）：吸取濃鹽酸，用蒸餾水定容至1L。滴定前用碳酸鈉（Na2CO3）溶液或四硼酸鈉（Na2B4O7·10H2O）溶液標定，即吸取10mL碳酸鈉標準溶液于錐形瓶中，滴入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標準溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，即為終點，由此計算鹽酸濃度。.相對而言，植物的全N含量高于土壤，因此，為滴定方便，適當調整鹽酸標準溶液的濃度?？筛鶕?jù)實際情況自行調整。4.步驟稱取通過篩的植物樣品，小心地送入開氏管底部。加入混合催化劑，滴加幾滴蒸餾水濕潤樣品，再加濃硫酸10mL，搖勻后將其置于溫控消煮爐上。設定溫度為200℃1小時，而后380在試樣蒸餾之前，先檢查定氮儀，執(zhí)行0程序，空蒸2~3次清洗管道。待消煮液冷卻后，將開氏管置于定氮儀上，吸收池置于定氮儀冷凝器承接管下，向池內注入適量硼酸，使液面沒過冷凝管末端，執(zhí)行1程序。程序執(zhí)行完成之后，取下吸收池，加入兩滴定氮混合指示劑，用鹽酸標準溶液進行滴定，顏色由藍綠色剛轉變?yōu)樽霞t色即達到終點。與此同時進行空白消煮液的蒸餾和滴定，以校正試劑等誤差。5.計算全氮（N），g·kg－1＝[c·（V-VO）×14]/mV：滴定待測液消耗酸標準溶液體積，ml；VO：滴定空白消耗酸標準溶液體積，ml；C：酸標準溶液濃度，mol·L－1；m：烘干樣品質量，g；全P、全K——光譜法1.原理 植物中的K以離子態(tài)存在，樣品處理比較簡單。簡易的醋酸銨溶液浸提、鹽酸溶液浸提或用水煮沸提取都可以。但在測定過程中往往和P一起測定，因此大多采用濃HNO3+H2O2消煮的方式。植物中的P以有機態(tài)為主，采用以上方式進行處理時，其中的有機物經脫水碳化、氧化分解，變成CO2和H2O，使有機磷轉化為磷酸鹽。2.主要儀器消化罐+鋼外套、比色管、ICP等離子發(fā)射光譜儀（分析測試中心）3.試劑濃硝酸（HNO3）雙氧水（H2O2）4.步驟稱取通過孔徑的植物樣品置于消化罐中，依次加入2mL濃硝酸和1mL雙氧水，敞開放置3個小時，讓其充分反應。將消化罐放入鋼外套中，旋緊后放入烘箱，將溫度調制160℃，當溫度達到160℃用蒸餾水將消化罐內的消解液洗入50mL的比色管內，用蒸餾水定容至25mL，搖勻，靜置。而后送至學校分析測試中心用ICP等離子發(fā)射光譜儀測定P、K濃度。其實，分別用鉬酸銨分光光度法和火焰光度計法進行P、K的測定也可以，具體請參照前文土壤對應指標的測試方法。4注意事項 其實很多注意事項都只是老生常談，這里再不厭其煩地說一遍，順便再附上一些常用儀器的說明，希望大家可以少走彎路，實驗順利~反復強調的.（1）要尊重實驗室的老師，他們很多時候會反復強調某一件事情，一定要認真聽。因為這肯定是他們長期實驗操作、教學和管理總結出來的經驗。一個細節(jié)處理不好很可能會讓你對實驗結果崩潰，進而再花很多時間重做。（2）使用新的儀器或開始一項新的實驗前一定要仔細閱讀說明書或操作規(guī)程，如果沒有，不要怕麻煩，請教老師或者做過的師兄師姐。我們學院的老師和同學都很團結，都很樂于助人的。不然很可能要么