恙蟲病預(yù)防控制技術(shù)指南

恙蟲病預(yù)防把握技術(shù)指南〔試行〕恙蟲病〔bs或ie，又名叢林斑疹傷寒，是由恙蟲病東方體〔tsutsugamsushi，Ot，原稱恙蟲病立克次體〔Rickettsialtsutsugamushioi〕所引起的自然疫源性疾病。以鼠類為主要傳染源，經(jīng)恙螨幼蟲叮咬傳播。臨床以發(fā)熱、焦痂或潰瘍、淋巴結(jié)腫大及皮疹為特征，嚴(yán)峻者可發(fā)生死亡。本病主要流行于熱帶和亞熱帶，東亞各國流行較為廣泛。恙蟲病在我國呈廣泛分布，大局部802500例。1989年后不再列為法定報告?zhèn)魅静?。近年來很多地區(qū)開頭網(wǎng)絡(luò)直報，全國病例報告數(shù)呈上升趨勢，北方地區(qū)流行范圍不斷擴(kuò)大，屢次消滅局部爆發(fā)疫情。由于醫(yī)務(wù)人員對該病缺乏生疏，故易發(fā)生誤診和漏診，導(dǎo)致嚴(yán)峻的并發(fā)癥甚至死亡。為指導(dǎo)臨床醫(yī)生和疾病預(yù)防把握專業(yè)人員做好該病的覺察、報告、診斷、治療、個人防護(hù)、試驗(yàn)室檢測和疫情調(diào)查與處置工作，加強(qiáng)公眾安康教育，制定本技術(shù)指南。一、目的〔一〕指導(dǎo)各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)正確開展恙蟲病的診斷和治療，準(zhǔn)時報告病例。指導(dǎo)各級疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)開展恙蟲病監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查、試驗(yàn)室檢測和疫情把握工作。二、疾病概述〔一〕病原學(xué)該病原體的局部生物學(xué)特性明顯不同于該屬其它立克次體，從而將其另立一屬，稱東方體屬(Orientia)，將恙蟲病立克次體改稱為恙蟲病東方體。生物學(xué)特性形態(tài)構(gòu)造恙蟲病東方體在宿主細(xì)胞的細(xì)胞核四周的胞質(zhì)內(nèi)寄生，行二分裂生殖。經(jīng)GiemsaGuneinez染色光鏡下0.3-0.5μm×1.2-3.0μm，在電鏡下可見其多形態(tài)，呈圓形、橢圓形、短桿狀及啞鈴狀等。培育特性恙蟲病東方體的分別和鑒定常承受小白鼠，培育多承受雞胚卵黃囊和組織細(xì)胞。雞胚培育時，多承受7-9VeroL929培育。恙蟲病東方體的分型血清型恙蟲病東方體存在抗原型的多樣性和混合型。迄今為止，世界各地已從患者、媒介昆蟲及嚙齒動物中分別、KatoGilliam3個血清型，在中國均有分布，據(jù)目前文KarpGilliam型居多。基因型目前恙蟲病東方體的基因分型多以56kD外表蛋白基因作為目的基因，基因分型主要包括Karp、Kato、Kawasaki型為主?！捕沉餍胁W(xué)宿主動物與傳播媒介18種動物中覺察恙蟲病東方體的自然感染，如黃毛鼠、黑線姬鼠、黃胸鼠等；其次為食蟲目動物，如臭鼩鼱、四川短尾鼩。此外，兔、豬、貓和禽類也能感染。本病的傳播媒介是恙螨〔re00多個種，分布普及全國。只有少數(shù)恙螨能成為恙蟲病的傳播媒介，我國已經(jīng)證明的媒介有地里纖恙螨、小盾纖恙螨、微紅纖恙螨、7個時期，僅幼蟲時期營寄生生活，能夠傳播疾病，其它階段都生存于地面淺表層。恙螨活動范圍微小，呈點(diǎn)狀分布，聚攏于一處，形成“螨島”。傳播途徑本病通過攜帶恙蟲病東方體的恙螨幼蟲叮咬傳播。恙螨幼蟲孵出后，在地面草叢中活動，遇到宿主動物或人時即附著其體表叮咬組織液，3-5天吸飽后落于地面。恙螨一生一般只在幼蟲期叮咬宿主動物一次，獲得東方體后經(jīng)卵垂直傳播，當(dāng)子代恙螨叮咬人時傳播本病。人與人之間不傳染，尚無接觸危重病人或帶菌動物的血液等體液導(dǎo)致傳播的報道。人群易感性為散發(fā)，外來人群進(jìn)入疫區(qū)常易發(fā)生流行?！卜ツ尽⒅饭と?、地質(zhì)勘探人員等、野外訓(xùn)練部隊和野外旅游者等受恙螨侵襲時機(jī)較多，簡潔發(fā)生感染。地理分布和發(fā)病季節(jié)特點(diǎn)多。***外，其余省份都曾有病例報告。我國北方和南方的6-8月為流行頂峰，屬于“夏季型”，宿主動物以黃毛鼠、黃胸鼠、10-11月為流行頂峰，屬于“秋季型”，1-2月也曾消滅流行頂峰，以小盾纖恙螨為主要媒介生物?！踩持饕±磙D(zhuǎn)變及臨床表現(xiàn)病理轉(zhuǎn)變充血、水腫、細(xì)胞變性，以致壞死。性或布滿性心肌炎，肺有出血性肺炎，腎呈間質(zhì)性炎癥，腦膜可消滅淋巴細(xì)胞性腦膜炎。臨床表現(xiàn)天〔10-14天。多急性起病，主要臨床特征為發(fā)熱、特異性焦痂或潰瘍、局部或全〔充血性、斑疹或斑丘疹。由于本病造成全身的小血管廣泛受損，可累及多系統(tǒng)多臟器，以呼吸、消化、神經(jīng)系統(tǒng)和腎臟損害較多見。38.5～41℃。發(fā)病初期于叮咬處消滅紅色丘疹，繼而成為水泡，以后形成黑褐色焦痂?？上麥缛頊\表淋巴結(jié)腫大，以焦痂接近的局部淋巴結(jié)最為明顯。皮疹先于軀干散在性消滅，后集中至四肢，輕癥患者可無皮疹，重癥患者皮疹可密集融合，甚至為出血性。三、診斷、治療和報告醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)依據(jù)《恙蟲病診療技術(shù)要點(diǎn)〔試行〔附件1〕做好診斷和治療。各級醫(yī)療機(jī)構(gòu)覺察符合病例定義的恙蟲病疑似、臨床診斷或確診病例時，可參照乙、丙類傳染病的報告要求于24“其它傳染病”中的“恙蟲病”。疑似病例應(yīng)準(zhǔn)時進(jìn)展訂正。符合《國家突發(fā)公共衛(wèi)生大事相關(guān)信息報告治理工作標(biāo)準(zhǔn)〔試行》要求的，依據(jù)相應(yīng)的規(guī)定進(jìn)展報告。四、試驗(yàn)室檢測〔試行》〔3〕進(jìn)展標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送和試驗(yàn)室檢測。當(dāng)?shù)卦囼?yàn)室無檢測條件或無法鑒定時，可將原始標(biāo)本及病原分別物送上級疾病預(yù)防把握中心進(jìn)展檢測鑒定。五、流行病學(xué)調(diào)查當(dāng)?shù)厥状蜗麥珥οx病疫情或發(fā)病水平明顯增高時，縣區(qū)級疾病預(yù)防把握中心應(yīng)依據(jù)《恙蟲病流行病學(xué)調(diào)查方案〔試行〔2〕馬上組織專業(yè)人員開展流行病學(xué)調(diào)查，主要調(diào)查病人的臨床表現(xiàn)、傳染來源、相〔2。素等進(jìn)展調(diào)查分析，準(zhǔn)時提出有針對性的預(yù)防把握措施。六、專題調(diào)查〔試行〔組織開展人群血清流行病學(xué)、宿主動物和傳播媒介等方面的專題調(diào)查。七、預(yù)防把握措施〔一〕加強(qiáng)病例的診斷和標(biāo)準(zhǔn)性治療病例的發(fā)生?！捕乘拗鲃游锱c媒介的把握作業(yè)場所及道路兩側(cè)的雜草、填平坑洼，以增加日照，降低濕度，使之不適于恙螨的生長生殖。對不能除〔三〕做好個人防護(hù)衣扎入褲腰內(nèi)，削減恙螨的附著或叮咬。陰等皮膚松軟部位，可削減被恙螨叮咬的時機(jī)?！菜摹匙龊霉姲部到逃巴饣顒邮氛?，一旦消滅疑似病癥或體征，應(yīng)及早就醫(yī)，并告知醫(yī)生相關(guān)暴露史。恙蟲病診療技術(shù)要點(diǎn)〔試行〕為指導(dǎo)各地準(zhǔn)時、有效、標(biāo)準(zhǔn)地開展恙蟲病的診斷和救治工作，削減危重病例的發(fā)生，特制定本方案。臨床表現(xiàn)和皮疹。38.5～4142℃，呈弛張熱或稽留熱，多有畏寒，偶有寒戰(zhàn)。50%以上。恙螨幼蟲叮咬處首先消滅粉紅色小丘疹，3～10mm大小，其后漸漸變?yōu)樗?，水泡裂開后中心部位發(fā)生壞死，形成褐色或黑色焦痂。焦痂多為圓形或橢圓形，其邊緣稍隆起，四周有紅暈，痂皮脫落后中心凹陷形成小潰瘍，無膿性分泌物；一般無痛12～310個以上者。因此認(rèn)真查找疑似恙蟲病病人的特異性焦痂或潰瘍是臨床診斷恙蟲病必需的。淋巴結(jié)腫大：全身淺表淋巴結(jié)腫大是恙蟲病常見的體征之一，焦痂或潰瘍接近的淺表淋巴結(jié)腫大較為有壓痛，觸之可動，多如黃豆或蠶豆大小、也有鴿蛋大小者，有的甚至于隆起皮膚外表。皮疹：皮疹的發(fā)生率有較大差異，可能與病原體的型別不同、病情輕重、就診早晚等因素有關(guān)。多出3～7日后漸漸消退。皮疹呈暗紅色，壓之退色。形態(tài)大小3～5mm，散在性分布，以胸、背和腹部較多，向四肢進(jìn)展，面部很少，手掌腳底無皮疹。其他表現(xiàn)：全身不適、頭昏頭痛、肌肉酸痛、惡心嘔吐、腹痛腹脹、納差乏力等，可有咳嗽咳痰，肝脾腫大、結(jié)膜充血。并發(fā)癥：有支氣管肺炎、腦炎或腦膜炎、中耳炎、腮腺炎、血栓性靜脈炎、肝腎功能損害、心肌炎、DIC2～3周。試驗(yàn)室檢查血常規(guī)：白細(xì)胞計數(shù)多正常，中性粒細(xì)胞分類正?；蛳鳒p，淋巴細(xì)胞分類增多或正常，可有單核細(xì)胞分類增多或血小板削減。尿常規(guī)：尿液中常見少量蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞或上皮細(xì)胞，生化表現(xiàn)：肝功能正?；蜉p度特別，可有心肌酶譜特別，血沉或C反響蛋白上升。OXK效價≥1:1601/3的病例呈陽性反響，90%，至第四周后陽性率又開頭下降，2～3個月后轉(zhuǎn)為陰性。間接免疫熒光試驗(yàn)檢測病人血清中的特異性IgM、IgG抗體。病程第一周末即可檢出特異性抗體，IgM抗體滴度≥1:32、IgG抗體滴度≥1:64有診斷意義。分子生物學(xué)檢測：PCR檢測恙蟲病東方體特異基因片段，具有敏感性高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可用于早期診斷。0.5～1ml，接種小鼠腹腔、雞胚或細(xì)胞，培育分別病原體。病例診斷熱或淋巴結(jié)腫大者，應(yīng)考慮恙蟲病可能。流行病學(xué)史訓(xùn)練、草地坐臥、接觸和使用秸桿等。臨床表現(xiàn)發(fā)熱淋巴結(jié)腫大皮疹特異性焦痂或潰瘍試驗(yàn)室檢查OXK效價≥1:160；IgG4倍及以上上升；PCR核酸檢測陽性分別到病原體診斷標(biāo)準(zhǔn)疑似病例、3.2.3任何一條，且明確排解其他疾病；3.2.1、3.2.23.2.3三項；臨床診斷病例3.1、3.2.1、3.2.4三項；試驗(yàn)室診斷病例、3.3.3、3.3.4中的任何一項；3.3中的任何一項；鑒別診斷本病應(yīng)與傷寒、斑疹傷寒、鉤端螺旋體病、流行性出血熱等疾病相鑒別。OX19陽性，OXk陰性。流行性斑疹傷寒患者，普氏立克次體為抗原的補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽性。地方性斑疹傷寒患者，莫氏立克次體為抗原的補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽性。陽性。流行性出血熱：起病急，典型表現(xiàn)有發(fā)熱、出血、腎臟損害。外周血白細(xì)胞增多或正常，血小板削減，蛋白尿。流行性出血熱病毒抗體陽性。瘧疾：在流行季節(jié)有流行區(qū)居住或旅行史，消滅間歇性或規(guī)律性發(fā)作的寒戰(zhàn)、高熱、大汗，伴有貧血和肝脾腫大，惡性瘧熱型不規(guī)章，可引起兇險發(fā)作。外周血或骨髓涂片瘧原蟲陽性。鉤端螺旋體?。喊l(fā)病前有疫水接觸史，眼結(jié)膜充血、出血，腓腸肌苦痛明顯，無焦痂和潰瘍。血清鉤端螺旋體凝集溶解試驗(yàn)陽性。傳染性單核細(xì)胞增多癥：青少年多見，有發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、咽痛、皮疹，外周血單核細(xì)胞增多，可見特別淋巴細(xì)胞，嗜異凝集試驗(yàn)陽性，EB病毒抗體陽性。傷寒：起病緩慢，表情冷淡，相對緩脈，胸、腹皮膚可見玫瑰疹，無焦痂與潰瘍。標(biāo)本中培育出傷寒桿菌，肥達(dá)氏反響陽性，外斐氏試驗(yàn)陰性。皮膚炭疽：有牲畜接觸史，毒血病癥較輕，外周血白細(xì)胞計數(shù)多增高。潰瘍性黑色焦痂多位于面、頸、手或前臂等暴露部位，取焦痂或潰瘍的分泌物染色鏡檢可覺察炭疽桿菌。粟粒性肺結(jié)核：由結(jié)核桿菌發(fā)生血行播散引起，臨床表現(xiàn)簡單而無特異性，但通常有結(jié)核病的全身中毒病癥，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、肝脾腫大、淋巴結(jié)腫大等。敗血癥：全身中毒病癥明顯，外周血白細(xì)胞計數(shù)明顯增多，中性粒細(xì)胞核左移，血培育陽性。治療一般治療加強(qiáng)護(hù)理和觀看，以便盡早覺察各種并發(fā)癥。病原治療恙蟲病東方體為專性細(xì)胞內(nèi)寄生，應(yīng)選用脂溶性抗生素。-無效。目前臨床上較常應(yīng)用的抗生素有強(qiáng)力霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類和氯霉素，一般以多西環(huán)素為首選。強(qiáng)力霉素目前較常應(yīng)用的是強(qiáng)力霉素〔多西環(huán)素類g21d81212.2mg/kg1次。,肝功能損害,脂肪肝變性,同時應(yīng)留意過敏反響的發(fā)生。孕婦不宜服用強(qiáng)力霉素，8歲以下兒童制止服用強(qiáng)力霉素。大環(huán)內(nèi)酯類常用的是羅紅霉素、克拉霉素和阿奇霉素。2次，退熱后劑量減半。7.5mg/kg121次。服，退熱后劑量減半，亦可靜脈滴注阿奇霉素。(ALTAST上升)、頭暈和頭痛等。孕婦及哺乳期婦女需慎用。40.5g/d2次口服；危重病人亦可靜脈滴注。兒童25mg/kg4次服用。等。在泰國、緬甸和我國都曾覺察對氯霉素耐藥的恙蟲病東方體株。7～107日者，可消滅復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)者療程宜適3～4日。對癥治療當(dāng)使用激素。病人治理不需要對病人實(shí)施隔離。預(yù)后早期選用有效的抗生素治療，預(yù)后良好，極少發(fā)生死亡。高齡、孕婦、有其他慢性疾病者預(yù)后相對較差。恙蟲病流行病學(xué)調(diào)查方案〔試行〕定本方案。一、調(diào)查目的〔一〕了解病例臨床特征、暴露史和感染危急因素。為核實(shí)診斷和制定有針對性防控措施供給依據(jù)。二、調(diào)查內(nèi)容和方法〔一〕個案調(diào)查和標(biāo)本采集〔，并采集相關(guān)標(biāo)本〔3《恙蟲病試驗(yàn)室檢測方案〔試行。根本狀況包括年齡、性別、住址、職業(yè)和文化程度等。臨床資料臨床表現(xiàn)、試驗(yàn)室檢查結(jié)果、診斷、治療、疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)歸等狀況。病例家庭及居住環(huán)境狀況通過詢問及現(xiàn)場調(diào)查，了解病例狀況、家庭居住位置、環(huán)境等。暴露史及病例發(fā)病前活動范圍恙螨叮咬史。〔二〕爆發(fā)調(diào)查要時采集相關(guān)標(biāo)本進(jìn)展檢測。3周內(nèi)當(dāng)?shù)氐那f稼收種等農(nóng)事活動狀況等。三、調(diào)查要求〔一〕調(diào)查者及調(diào)查對象詢問。如病人病情較重或其他緣由無法直接調(diào)查時，可通過其醫(yī)生、親友、同事或其他知情者進(jìn)展調(diào)查、核實(shí)或補(bǔ)充?！捕痴{(diào)查時間及調(diào)查內(nèi)容。試驗(yàn)室檢測結(jié)果、病人轉(zhuǎn)歸等狀況應(yīng)準(zhǔn)時填補(bǔ)到調(diào)查表中，以完善相關(guān)信息?！踩痴{(diào)查者的個人防護(hù)。螨叮咬。四、調(diào)查資料的分析、總結(jié)和利用在疫情調(diào)查處理進(jìn)程中或完畢后，應(yīng)準(zhǔn)時對流行病學(xué)調(diào)查資料進(jìn)展整理、分析，撰寫調(diào)查報告，并準(zhǔn)時向上級疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)及同級衛(wèi)生行政部門報告。省級疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)在接到當(dāng)?shù)丶部貦C(jī)構(gòu)報告后，應(yīng)準(zhǔn)時將疫情調(diào)查報告上報中國疾病預(yù)防把握中心。疫情調(diào)查完畢后，相關(guān)疾病預(yù)防把握機(jī)構(gòu)應(yīng)將流行病學(xué)調(diào)查的原始資料、分析結(jié)果及調(diào)查報告準(zhǔn)時整理歸檔。地區(qū)國標(biāo)編碼口口口口口口口口1．一般狀況〔14〕〔歲〕職業(yè)：○10○11○12○13○14漁(船)○15○16公務(wù)人員及職○17○18家政家務(wù)及待業(yè)○19○20其他文化程度：現(xiàn)住址：工作/學(xué)習(xí)單位：聯(lián)系：發(fā)病狀況發(fā)病地點(diǎn)：首診單位：〔病名〕〔〕臨床資料臨床表現(xiàn)發(fā)熱持續(xù)天，最高體溫.℃3.1.1.3熱型：①稽留熱②馳張熱③不規(guī)章寒戰(zhàn)：①有②無頭痛：①有②無結(jié)膜充血：①有②無皮疹：①有②無特異性焦痂和潰瘍：①有〔〕②無部位〔多項選擇⑥胸部〔或乳房〕3.1.6.1選項〕口口口口有無以下表現(xiàn)：脾大口肝大口譫妄口昏迷口嘔吐口有無以下并發(fā)癥？其它〔注明：試驗(yàn)室檢測結(jié)果臨床檢驗(yàn)結(jié)果血常規(guī)檢測檢測日期白細(xì)胞計數(shù)〔×109/升〕中性粒細(xì)胞〔%〕淋巴細(xì)胞〔%〕嗜酸性粒細(xì)胞〔%〕紅細(xì)胞計數(shù)〔109/升〕血小板計數(shù)〔109/升〕其它尿常規(guī)/腎功檢測檢測日期尿蛋白白細(xì)胞紅細(xì)胞肌酐〔μmol/〕尿素氮〔L〕其它肝功能檢測μmol/Lmm/hCmg/L特異性檢測檢測日期檢測單位標(biāo)本類型檢測方法*檢測結(jié)果備注*PCR〔注明具體方法〕暴露及危急因素〔發(fā)病前3周內(nèi)〕()②無〔〕11*22*33*①田間作業(yè)②放牧③接觸柴禾④釣魚⑤野營訓(xùn)練⑥坐臥草地⑦野外或公園晨練⑧草地晾曬衣物123居住環(huán)境居住位置①村邊②村中住房類型①樓房②平房③草房院內(nèi)地面①水泥地②泥地生長雜草③泥地?zé)o雜草住宅四周〔20米內(nèi)〕是否有草地、菜地或溝塘?①是②否是否飼養(yǎng)家禽、家畜?①是②否家禽家畜是否養(yǎng)在居住屋內(nèi)?①是(動物種類)②否家庭是否有鼠類活動?最終診斷〔病名〕診斷醫(yī)院：恙蟲病試驗(yàn)室檢測方案〔試行〕提高檢測質(zhì)量，為明確診斷或開展相關(guān)的科學(xué)爭辯供給試驗(yàn)室依據(jù)，特制定本方案。一、樣本采集對象〔一〕〔二〕〔三〕二、標(biāo)本種類及采集方法〔一〕全血標(biāo)本〔PCR檢測〕或肝素〔適用于細(xì)胞分別培育〕抗凝3～5mlPCR檢測。應(yīng)盡可能在病人使用抗生素前進(jìn)展血液標(biāo)本的采集。血清標(biāo)本3～5ml，用于血清抗體檢測。采集后，應(yīng)準(zhǔn)時分別血清；血清標(biāo)本4℃保存，假設(shè)超過48小時，需-201周內(nèi)采集，發(fā)病2～4周內(nèi)，采集恢復(fù)期血清〔血凝塊于-20℃保存?zhèn)溆谩２∪私桂?.5ml無菌離心管中，-20PCR檢測?！捕呈箢悩?biāo)本采集IgG抗體檢測。承受無菌方法解剖鼠，取其脾、肝、腎標(biāo)本，置入相應(yīng)編號的無菌凍存管內(nèi)，應(yīng)盡快送回試驗(yàn)室分別病原體。否則應(yīng)置于液氮罐內(nèi)或－80℃超低溫冰箱內(nèi)保存?！踩稠︱龢?biāo)本的采集43~5天，讓恙螨自行爬下，切忌硬挑使標(biāo)本受到破壞。待恙螨幼蟲爬下后，在解剖鏡下將鼠耳上的恙螨全部挑入盛有蒸餾水的培育皿中，每只鼠耳的恙螨放一培育皿，計數(shù)，將不同外部形態(tài)的恙螨按抽取肯定比例，用改進(jìn)的幼蟲封藏液〔25g35ml35g12ml，50%3ml〕封片，鑒1和鏈霉素的生理鹽水洗滌數(shù)次后，研磨制成懸液，馬上接種小鼠分別恙蟲病東方體。如進(jìn)展PCR檢測，恙螨于-80℃或-20℃冰箱中保存。三、標(biāo)本采集和保存留意事項4℃環(huán)境保存〔3天，避開冰凍。非抗凝血應(yīng)準(zhǔn)時分別血清。4中附表。四、試驗(yàn)室檢測〔一〕血清學(xué)檢測恙蟲病的血清學(xué)檢測方法較多，目前應(yīng)用較廣的主要有外斐氏反響和間接免疫熒光試驗(yàn)。外斐氏反響OXK抗原檢測血清抗恙蟲病東方體抗體，方法簡潔、快速，便利基層使用，但特異性較差。1/390%，至第四周后陽性率又開頭下降，2～3個月后轉(zhuǎn)為陰性。間接免疫熒光試驗(yàn)病程第一周末即可檢出特異性抗體，至其次、三周陽性率最高，兩月后漸漸下降，但仍維持肯定水平達(dá)數(shù)4抗體滴度≥1:32、IgG抗體滴度≥1:64有診斷意義。〔二〕PCR檢測PCR擴(kuò)增陽性率較高。DNA提取DNA。檢測1600ntPCRPCR1。PCR檢測恙蟲病東方體引物引物序列擴(kuò)增片段306～339bpb5”-CCAGCATAATTCTTCAACCAAG-3”a′5”-GAGCAGAGCTAGGTGTTATGTA-3”150～168bpb′5”-TAGGCATTATAGTAGGCTGAGG-3”ab，DNA5μl。PCR反響體系總體25μl，其它成分的濃度按常規(guī)進(jìn)展。反響程序如下：PCR檢測恙蟲病東方體反響參數(shù)945072℃15min351min1min1min1 5minPCR1～2μl1μl為模板。反響程序同第一輪反響。電泳：擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳。處消滅擴(kuò)增條帶，則所檢樣品為陽性，即初步推斷有DNA檢出，進(jìn)一步確定應(yīng)將擴(kuò)增產(chǎn)物測序驗(yàn)證?！踩巢≡w分別培育。恙蟲病東方體是專性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，其分別培育有直接動物分別、雞胚培育和組織細(xì)胞培育。1．動物分別法分別率最高。采集全血分別病原體的操作步驟如下：3-50.52～34℃保存。14～19天內(nèi)死亡。鼠死前呈現(xiàn)顯著病態(tài)，如皮毛松豎，不活潑，閉目，腹部膨大，有波動，呼吸短促、急迫等現(xiàn)象。解剖肉眼觀看，腹腔內(nèi)常積有大量滲出液，脾腫大，淋巴結(jié)腫大和皮下充血常見。承受環(huán)磷酰胺處理過的小鼠可提高恙蟲病東方體弱毒株的分別效果。具體方法為，接種標(biāo)本約482mg72小時后再給小鼠注射環(huán)磷酰胺2mg。有一些成簇存在的顆粒，其形態(tài)多為球狀或短桿狀，顏色與細(xì)胞核染色一樣，呈紅色至紫紅色，即可推斷為病原體檢查陽性〔1。Giemsa染色形態(tài)〔1000×〕2．組織細(xì)胞分別小鼠取腹水、肝、脾或腎研磨制成懸液接種細(xì)胞。細(xì)胞分別恙蟲病東方體應(yīng)留意嚴(yán)格無菌操作。以L929細(xì)胞為例，分別恙蟲病東方體的操作步驟如下：L929RPMI1640洗兩次后，再把RPMI1640吸凈。12小時，換維持液〔2%血清〕后連續(xù)培育。〔l，使其完全解凍，mn，棄去上清液。0.1mlL9291〔2%血清〕3天換維持液一次，7～10天。3．雞胚培育恙蟲病東方體可接種至7～9日齡雞胚的卵黃囊中，并能在其中生長，在雞胚瀕死時收獲卵黃囊膜，可獲得生殖豐富的菌體。PCR鑒定。五、生物安全關(guān)要求進(jìn)展?！惨弧吃囼?yàn)室生物安全I(xiàn)級試驗(yàn)室進(jìn)展?！捕逞簶?biāo)本采集安全留意事項采集病例的標(biāo)本時，應(yīng)做好個人防護(hù)。〔三〕采集動物宿主與媒介恙螨標(biāo)本個人防護(hù)動的人員可使用驅(qū)避劑或防蚊油噴涂皮膚?！菜摹硺?biāo)本運(yùn)輸安全留意事項應(yīng)參照《病原微生物試驗(yàn)室生物安全治理條例》中的有關(guān)要求〔B類〕進(jìn)展。在診療及標(biāo)本的采集、包裝和試驗(yàn)室檢測等過程中所產(chǎn)生的醫(yī)療廢物，應(yīng)依據(jù)《醫(yī)療廢物治理條例》和《醫(yī)療衛(wèi)生氣構(gòu)醫(yī)療廢物治理方法》等相關(guān)規(guī)定處理。恙蟲病專題調(diào)查方案〔試行〕一、調(diào)查目的〔一〕了解恙蟲病疫區(qū)人群感染狀況及抗體水平?！捕沉私猱?dāng)?shù)厥箢惖姆N類、密度及帶菌狀況。了解當(dāng)?shù)仨οx病傳播的主要恙螨種類、數(shù)量、分布及帶菌狀況。二、調(diào)查內(nèi)容與方法〔一〕人群血清流行病學(xué)調(diào)查調(diào)查方法5mlIgG抗體并對〔試行〔3。資料的分析與利用依據(jù)檢測結(jié)果計算調(diào)查人群的血清抗體陽性率和抗體水平〔幾何平均滴度，分析人群既往感染的狀況?！捕乘拗鲃游镎{(diào)查調(diào)查地點(diǎn)和時間情發(fā)生后或宿主動物活動頂峰季節(jié)。鼠類捕獲及密度調(diào)查推舉承受籠夜法進(jìn)展。205〔鼠籠盡量放置家中不同房間3天，每日早晨取回捕獲鼠的鼠籠，放入白色布袋內(nèi)，系緊袋口，做好記錄，并編號。誘餌用花生米或油條、油餅等〔同一地區(qū)應(yīng)選用同一種誘餌。30030m5m，并做好標(biāo)記。誘餌應(yīng)統(tǒng)一。次日早晨取回鼠籠，將捕獲鼠的鼠籠放入白色布袋內(nèi)，系緊袋口，做好標(biāo)記，并編號。動物的分類、鑒定參考《中國重要醫(yī)學(xué)動物鑒定手冊》等相關(guān)專業(yè)資料，鑒定宿主動物的種類、學(xué)名等。標(biāo)本采集及處理體表寄生物檢查將鼠置于密閉容器內(nèi)，用乙醚麻醉。將鼠置于白瓷盤中，梳子梳理鼠類體毛，用稍濕的毛筆將掉在瓷盤中的寄生物，如蚤、蜱、螨等，同一只鼠的寄生物按類別分別置入盛有75％乙醇的凍存管中，并標(biāo)記相應(yīng)鼠只的編號，以待鑒定，假設(shè)需要對寄生物進(jìn)展病原學(xué)