一個(gè)具體案例

MD, 學(xué)附 第一醫(yī)報(bào)告內(nèi)胃癌最常見的 之一，致死占第二位。其惡性程較高，轉(zhuǎn)移擴(kuò)散嚴(yán)重，多數(shù)患者就診 率較高。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移的降解是腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的重要步驟。這與細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶（extracellularmatrixmetalloproteinase，MMP）的參與密不可分MMP是一個(gè)鋅離子依賴的蛋白 ，目前已發(fā)現(xiàn)處，MMP往往高表達(dá)。20世紀(jì)80年代 從人肺癌細(xì)胞株LX-1的胞膜上分離得到了一種58kDa的糖蛋白，具有刺激成纖維細(xì)胞合成MMP-1的功能，將其命名為腫瘤膠原酶刺激因子（tumorcollagenasestimulatingfactor，TCSF）。進(jìn)一步研究表明TCSF不僅能刺激MMP-1的產(chǎn)生，還能刺激MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-11等的產(chǎn)生，因此將其重命名為細(xì)胞外基質(zhì)金屬酶誘導(dǎo)因子（extracellularmatrixmetalloproteinaseinducer，EMMPRIN)。第六屆人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組會(huì)議將命名為CD147的4個(gè)半胱氨酸殘基形成2個(gè)二硫鍵，構(gòu)細(xì)胞內(nèi)的CD147存在低糖基化（lowglycosylated，LG）和高糖基化（highglycosylatedCD147，HG）形式，分子量分別是32~44kDa、45~65kDa。只有HG形式能刺激 等多種生理和病理過程，是一個(gè)多功能的分子 包 癌、皮膚癌、肺癌 、淋巴癌和 。并且腫瘤的惡性程度越高，CD147的表達(dá)水平促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)CD147就是通過刺激成纖維細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞本身產(chǎn)生多種來降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)誘導(dǎo)腫瘤血管生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）是很多情況下血管生成過程的主要調(diào)節(jié)因子，包括腫瘤形成過程。CD147促進(jìn)腫瘤細(xì)胞多藥在多種多藥耐藥的腫瘤細(xì)胞中都觀察到CD147的高表達(dá)。CD147可激PI3K/AKT細(xì)胞存活信號(hào)通路。在大多 細(xì)胞中此通路均被激活胃癌中CD147的表Toyama大學(xué)的ZhengHC等研究表明：在正常胃黏膜發(fā)展為生性或化生性胃黏膜，最后發(fā)展為胃癌的過程中，C7的表達(dá)量是逐漸增加的，并且147的表達(dá)與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋轉(zhuǎn)移以及MMP、MMP9和的表達(dá)呈正相關(guān)。胃癌組織中CD147的表CD147CD147在胃癌組織中高表二.株SGC7901中CD147的表達(dá)，研究該沉默后對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲能力及化療藥物敏CD147shRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒 線轉(zhuǎn)染SGC7901細(xì)胞，篩選穩(wěn)定表達(dá)干線↓MTT法檢測(cè)SGC7901細(xì)胞增殖水平的變↓明膠酶譜法檢測(cè)SGC7901細(xì)胞MMP-2、MMP-9分泌的變↓SGC7901細(xì)胞體外侵襲力測(cè)↓MTT檢測(cè)SGC7901細(xì)胞順鉑敏感性的變胃癌細(xì)胞株SGC7901源自一位56歲女性胃 患者的淋轉(zhuǎn)移瘤。研究表明其侵襲能力強(qiáng)，惡性程度高。我們期研究表明，該細(xì)胞表面CD147是高表達(dá)的shRNA（shorthairpinRNA）表達(dá)載體的構(gòu)pSilencer3.1-H1shRNA參 等 ，選取 808-828作為靶序列，相應(yīng)的shRNA分別命名為shRNA1和 RNAi靶序列在CD147mRNA上的位201CTGGCTGAAGGGGGGCGTGGTGCTGAAGGAGGACGCGCTG951 設(shè)計(jì)好的 序shRNA-2、CD147shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建將合成的三對(duì)片段分別用水浴中加熱后退火備用，與經(jīng)BamHIHindIII雙酶切的pSilencer3.1-neo質(zhì)粒連接，構(gòu)建成CD147shRNA表達(dá)載體，重組質(zhì)粒分別命名為pSilencer-shRNA1，pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA-control。重組質(zhì) 鑒定結(jié) 圖（紅線 片段 表明，3個(gè)重正確 controlRelativeCD147mRNAReal-timePCR檢測(cè)CD147RelativeCD147mRNA10SGC7901/shRNA-SGC7901/shRNA110SGC7901/shRNA-SGC7901/shRNA1mRNA相對(duì)表達(dá)量分別下降至72.4%和17.3%

β-

Lane1:Lane2:SGC7901/shRNA-Lane3:Lane4:。Westernblot結(jié)果與Real-timePCR結(jié)果相符結(jié)果計(jì)抑制結(jié)果計(jì)抑制率(%)=(對(duì)照組A值-實(shí)驗(yàn)組A值)／對(duì)照組A接種接種細(xì)培養(yǎng)細(xì) 24h、48h、72h時(shí)培養(yǎng)細(xì) 加入MTT終止培終止培比與SGC7901和SGC7901/shRNA-control相比，培養(yǎng)24h、48h、72hSGC7901/shRNA2細(xì)胞增殖能力均顯著降低. 對(duì)照SGC7901/shRNA-control增殖能力無顯著明膠酶包括72kDa的明膠酶A（基質(zhì)金屬蛋白酶-MMP-2）和92kDa的明膠酶B基質(zhì)金屬蛋白酶-9，MMP-9)。其作用底物為基底膜中的Ⅳ型膠原和變性的間質(zhì)膠原（），其活性與腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)用方法。收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用SDS-聚丙量大小分開，顯示兩條負(fù)染條帶，根據(jù)條帶

9B9B1**0MMP-MMP-MMPsactivity(%ofuntreatedLaneLane2:SGC7901/shRNA-control.Lane3:SGC7901/shRNA2SGC7901/shRNA2細(xì)胞上清液中MMP-2和MMP-9的活性明顯降Transwell原Transwell結(jié)

穿過Transfer侵襲小室的染成紫色的胞B*0B*0SGC7901/shRNA-Invasivecellnumber著降抗腫瘤藥物順鉑的使用濃度以血漿峰濃度（PeakPlasmaConcentration，PPC)為標(biāo)準(zhǔn)。參照Sondak等的，順鉑的PPC為3.0μg/ml。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（%）=[1-－)]InhibitionInhibition***3與***3SGC7901/shRNA2的抑制率顯著