無菌檢查法修訂版課件

無菌檢查法樊春玲2013.6無菌檢驗

無菌實驗的概念

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無菌檢查試驗是消費者和監(jiān)督機構(gòu)對無菌產(chǎn)品進行微生物學檢查的唯一方法。無菌試驗是用于檢驗一次性使用無菌醫(yī)療器械是否染有活菌的一種方法。本實驗系將醫(yī)療器械或其浸提液接種于培養(yǎng)基內(nèi)，以檢驗供試品是否有細菌和真菌污染其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。無菌檢驗無菌(活菌對人體的影響)如醫(yī)療器械消毒不徹底，即有活菌存在，當這些醫(yī)療器具使用人體，細菌即可進入血液或無菌組織中生長繁殖，造成繼發(fā)性感染，可引發(fā)局部膿腫或全身感染，如菌血癥和敗血癥等。使病人發(fā)生高熱以及系列中毒癥狀，甚至危及病人生命，所以無菌性醫(yī)療器具標準規(guī)定了無菌。即指經(jīng)消毒滅菌處理后，無任何活的微生物的存在，無菌檢驗應為無菌生長。無菌檢驗滅菌：滅菌室指殺滅或除去全部微生物。無菌；指產(chǎn)品上檢不出活的微生物。產(chǎn)品滅菌有三種方法；熱力滅菌(包括干熱濕熱)輻射滅菌環(huán)氧乙烷滅菌。實驗室常用的幾種方法：干熱滅菌：火焰、燒灼、干烤高壓蒸汽滅菌：耐高溫和潮濕的物品紫外線滅菌：穿透力弱，用于無菌室、工作區(qū)空氣滅菌或物體表面滅菌無菌試驗消毒：對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物。消毒室不徹底的，不能代替滅菌。主要消毒藥有：乙醇、碘伏、新吉爾滅、氯和次氯酸鹽無菌室要求無菌室環(huán)境潔凈度10000級，無菌室操作臺或超凈工作臺局部應符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室應在每周和每次操作前用75%乙醇或0.1%新潔爾滅或其他適宜消毒液擦拭工作臺面及可能污染的死角，開啟空氣過濾器及紫外燈1小時。操作完畢，用消毒液擦拭工作臺面，用紫外線燈殺菌不小于半小時。實驗過程中應檢查空氣中的菌落數(shù)。無菌檢驗醫(yī)療器械的無菌檢查目前依據(jù)GB∕T14233.2-2005和《中國藥典》2005年二部附錄中規(guī)定的方法。直接進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)，肌肉，皮下組織或接觸創(chuàng)傷，潰瘍等部位二發(fā)生作用的制品或要求無菌的材料，滅菌器具等都要進行無菌檢查。無菌檢查并不是絕對的沒有活菌，而是在產(chǎn)品一定的抽樣數(shù)量中，考察其滅菌工藝，最滅菌達到10-6的微生物存活概率，就認定產(chǎn)品無菌。微生物限度檢查包括細菌，真菌。陽性對照細菌陽性對照菌，以金黃色葡萄球菌為對照菌，真菌陽性對照以白色念珠菌為對照菌。用具試管，注射器，量筒，三角瓶，移液管，集菌培養(yǎng)器，剪刀，鑷子，接種環(huán)，酒精燈，無菌衣，帽，口罩，牛皮紙等。試劑75﹪酒精，新潔爾滅溶液，0.9﹪氯化鈉，其他符合2010年版《中國藥典》附錄無菌檢查法要求的稀釋液和沖洗液樣品實驗前的處理試管，注射器，量筒，三角瓶，移液管，集菌培養(yǎng)器，剪刀，鑷子，接種環(huán)，酒精燈，無菌衣，帽，口罩，牛皮紙等。試劑75﹪酒精，新潔爾滅溶液，0.9﹪氯化鈉，其他符合2010年版《中國藥典》附錄無菌檢查法要求的稀釋液和沖洗液無菌檢查常用方法：

薄膜過濾法

直接接種法無菌檢查法

直接接種法1配養(yǎng)基的制備

細菌，霉菌，按培養(yǎng)基的說明書根據(jù)需要稱取干粉，按比列加蒸餾水，加熱溶解在大燒杯中進行調(diào)節(jié)PH值，然后分裝到試管中滅菌121℃40分鐘。2預配養(yǎng)；細菌30-35℃培養(yǎng)48小時霉菌20-25℃培養(yǎng)72小時，如果無菌就可以使用。陰性對照不得有菌生長。3供試液的制備

管類器具；按管內(nèi)表面積每10㎝流過管內(nèi)腔1ml約10ml

容器類器具；如注射器可直接抽取公稱容量做為供試液

小型配件；

如注射針可直接投放到培養(yǎng)基內(nèi)。4取細菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基各接入一定量的供試液﹙各10管﹚培養(yǎng)及觀察陽性對照培養(yǎng)48-72小時應生長良好，陰性對照不得有菌生長；細菌培養(yǎng)基在30-35℃培養(yǎng)，真菌培養(yǎng)基在23-28℃培養(yǎng)，各14天。培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。

如果再接種后，或在在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細菌培養(yǎng)2天，真菌培養(yǎng)3天。觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。結(jié)果判斷當陽性對照顯渾濁并確有細菌生長時，可根據(jù)觀察所得的結(jié)果判定。如細菌及真菌均為橙清或渾濁并非有菌生長判供試品符合規(guī)定。

如細菌及真菌培養(yǎng)基中任何1管顯渾濁并證明有菌生長，應重試。若有菌生長判供試品不合格。薄膜過濾法利用集菌儀和3個一次性使用集菌培養(yǎng)器對供試液進行薄膜過濾。然后分別將100ml