血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定

血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力測定【目的要求】1.掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的基本原理。2.熟悉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的具體操作方法。3.了解血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測定的臨床意義。原理轉(zhuǎn)氨作用：將α-氨基酸的氨基通過酶促作用轉(zhuǎn)移到α-酮基上，生成相應(yīng)的酮酸與氨基酸的反應(yīng)。催化這一反應(yīng)的酶稱為轉(zhuǎn)氨酶。轉(zhuǎn)氨酶廣泛存在于機體的各種組織中。在肝、心、腎等組織中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性均較高。在正常的新陳代謝過程中，血清內(nèi)兩種酶維持一定水平的轉(zhuǎn)氨酶活性（即正常值）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶

glutamic-pyruvictransminaseGPT

谷草轉(zhuǎn)氨酶

glutamicoxaloacetictransaminaseGOT當(dāng)肝、心、腎等組織發(fā)生病變時，由于組織細胞腫脹、壞死導(dǎo)致大量的酶釋放到血流中，從而引起血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性顯著升高。因此測定這些酶的活性對某些疾病的臨床診斷具有重要的參考價值。

本試驗用丙氨酸和α-酮戊二酸為底物(基質(zhì)液成分)經(jīng)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸可與起終止和顯色作用的2,4二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng)，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，進而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量，亦即與ALT活性的高低成正比關(guān)系。據(jù)此與同樣處理的丙酮酸標準液相比較，便可算出或通過標準曲線查出血清中ALT的活性。反應(yīng)過程如下：0COOHCOCH3NO2H2NHNNO2COOHCCH3NO2NHNNO2+丙酮酸-2，4-二硝基苯腙

棕紅色，520nm處具特征光吸收，顏色深淺（OD520值）與丙酮酸含量成正比，可據(jù)此進行比色測定。2，4-二硝基苯肼COOHCNH2CH3COOHCO(CH2)2COOHCOOHCOCH3

COOHCNH2(CH2)2COOH++谷丙轉(zhuǎn)氨酶AlaGluα-KG丙酮酸King氏法谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位：每毫升血清在37℃與pH7.4的基質(zhì)液作用60分鐘，生成1umol丙酮酸為一個活力單位。臨床檢驗取血清量為0.1，報告數(shù)據(jù)以100ml血清計算，因此實際側(cè)得結(jié)果乘1000即可。實驗材料及試劑實驗材料：動物或人血清實驗試劑：丙酮酸標準液要求臨用前配制；四、實驗操作標準曲線的繪制試劑管號012345丙酮酸標準液，ml基質(zhì)液溶液，ml磷酸緩沖液，ml相當(dāng)于酶活力卡門氏單位0.000.500.1000.050.450.10280.100.400.10570.150.350.10970.200.300.101500.250.250.102002,4-二硝基苯肼ml

0.500.500.500.500.500.5037℃水浴保溫20min氫氧化鈉ml5.05.05.05.05.05.0室溫下靜置10min

0號管調(diào)零，于520nm處測吸光度GPT活力測定：潔凈干燥試管2支，即測定管、對照管各1支

試劑測定管對照管血清，ml基質(zhì)液溶液，ml0.10.5----0.537℃水浴30min2,4-二硝基苯肼溶液，ml血清，ml0.5____0.50.137℃水浴20min0.4mol/L氫氧化鈉溶液，ml5.05.0室溫下靜置10min，對照管調(diào)零，于520nm處測吸光度⑴、標準曲線的制作以表1中的A520為縱坐標，酶活性單位為橫坐標，繪制標準曲線。⑵、樣品中轉(zhuǎn)氨酶活性的計算

根據(jù)樣品管的A520查標準曲線，即得每100ml血清轉(zhuǎn)氨酶的活性單位數(shù)。注意事項1.2，4-二硝基苯肼可與有酮基的化合物作用形成苯腙2.吸量應(yīng)準確，嚴格控制反應(yīng)時間和溫度。3.在測定GP