外植體的選擇與培養(yǎng)課件

第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)一、外植體的選擇：種質優(yōu)良植株健壯取材的最適時期適宜的大小選材第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)一、外植體的選擇：種質優(yōu)良植株健壯二、外植體滅菌1：對材料進行預處理2：材料表面滅菌：1）水洗,濾紙吸干;2)70%酒精浸30～60s;3）用滅菌劑處理;4）用無菌水沖洗.第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)二、外植體滅菌1：對材料進行預處理第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)表面滅菌劑的種類較多，可選取1—2種使用。滅菌劑使用濃度(%)持續(xù)時間（min）去除的難易效果次氯酸鈣9~105~30易很好次氯酸鈉25~30易很好氯化汞0.1~12~10較難最好抗菌素4~50mg/L30~60中較好常用滅菌劑使用濃度及效果比較表第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)表面滅菌劑的種類較多，可選取1—2種使用。使用濃度(%)持續(xù)三、外植體的接種與培養(yǎng)（一）接種—無菌操作定義:把經表面滅菌處理后植物材料，切碎或分離出器官、組織、細胞，再經無菌操作轉接到無菌培養(yǎng)基上，這一過程叫做接種。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)三、外植體的接種與培養(yǎng)（一）接種—無菌操作第三節(jié)外植體的選(1)在接種前1-2周用甲醛熏蒸接種室；(2)接種前15-20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈；(3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，及拖鞋等；(4)上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面；(5)先用酒精棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子蘸95%酒精在酒精燈火焰上灼燒，放置冷卻。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種前的準備工作：(1)在接種前1-2周用甲醛熏蒸接種室；第三節(jié)外植體的選擇(1)對接種材料進行消毒；(2)先解開包口紙，將試管等拿成斜角，使試管口在酒精火焰上方轉動，灼燒數(shù)秒鐘；(3)用灼燒過的鑷子夾取外植體送入試管內，輕輕插入或放在培養(yǎng)基表面；(4)接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘；(5)接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；(6)接種工具隨時蘸95%酒精灼燒，避免交叉污染；(7)接種完畢后要清理干凈并用70%酒精擦工作臺。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種時的無菌操作技術：(1)對接種材料進行消毒；第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種時的（二）外植體培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）外植體培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室里，使培養(yǎng)的環(huán)境條件:溫度氧氣濕度光照培養(yǎng)室培養(yǎng)條件第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)培養(yǎng)的環(huán)境條件:溫度氧氣濕度光照培養(yǎng)室第三節(jié)外植體的選擇與定義：培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質枯竭，水分散失，以及代謝產物的積累，必須轉移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng),這個過程叫做繼代培養(yǎng)。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)定義：培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質枯竭，水四、外植體成苗途徑1、外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗①同時長芽和根②先長芽，再長根③先長根，再長芽2、外植體→胚狀體→試管苗（胚狀體途徑）3、外植體→根、芽→試管苗（器官發(fā)生途徑）第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)四、外植體成苗途徑1、外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗第三節(jié)外植體愈傷組織胚狀體芽、根根、芽芽芽根根試管苗外植體成苗途徑：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)BAC外植體愈傷組織胚狀體芽、根根、芽芽芽根根試管苗外植體成苗途徑(1)、直接從器官上發(fā)生

(2)、從愈傷組織發(fā)生

(3)、從游離的單細胞發(fā)生

(4)、從小孢子發(fā)生(1)數(shù)量多(2)速度快(3)結構完整第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)胚狀體的產生途徑：誘導胚狀體比誘導芽的優(yōu)點：(1)、直接從器官上發(fā)生

(2)、從愈傷組織發(fā)生

(3)、從五、培養(yǎng)過程中常出現(xiàn)的問題

及解決方法第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)污染褐變玻璃化現(xiàn)象組織培養(yǎng)三大難題五、培養(yǎng)過程中常出現(xiàn)的問題

第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)1、污染原因細菌污染真菌污染（一）污染真菌污染第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)1、污染原因（一）污染真菌污染2、污染的預防措施第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)(1)減少或防止材料帶菌

(2)外植體滅菌要徹底

(3)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌

(4)布質制品的滅菌

(5)無菌室的消毒

(6)操作人員一定要嚴格按照無菌操作的程序進行接種。2、污染的預防措施第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)(1)減少或防止1、定義：是指外植體在培養(yǎng)中體內的多酚氧化酶被激活，使細胞里的酚類物質氧化成棕褐色的醌類物質，有時使整個培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。

第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）、外植體的褐變1、定義：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）、外植體的褐變①植物品種②生理狀態(tài)③培養(yǎng)基成分④培養(yǎng)條件不當?shù)谌?jié)外植體的選擇與培養(yǎng)2、褐變的主要原因①植物品種第三節(jié)外植體的選擇與培①選擇合適的外植體：②合適的培養(yǎng)條件：③連續(xù)轉移④加抗氧化劑：⑤加活性炭第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的措施①選擇合適的外植體：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、減輕褐（三）玻璃化現(xiàn)象1、定義：在長期的離體培養(yǎng)繁殖時，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（三）玻璃化現(xiàn)象1、定義：在長期的離體培養(yǎng)繁殖時，有些試管苗2、玻璃化現(xiàn)象產生的原因細胞分裂素濃度較高時；瓊脂濃度低時；溫度低、光照時間長時；氣體交換不良時；培養(yǎng)基中無機離子種類及比例不當時。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)2、玻璃化現(xiàn)象產生的原因細胞分裂素濃度較高時；第三節(jié)外植體①適當控制培養(yǎng)基中無機營養(yǎng)成分；②適當提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂濃度；③適當降低細胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素量；

④增加自然光照，控制光照時間；⑤降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)；⑥增加容器通風，最好進行CO2施肥。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、預防措施：①適當控制培養(yǎng)基中無機營養(yǎng)成分；第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3第四節(jié)、試管苗馴化與移栽第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術試管苗草莓第四節(jié)、試管苗馴化與移栽第1章植物組織培養(yǎng)實驗室試管苗草莓1、試管苗的生態(tài)環(huán)境：

高溫且恒溫、高濕、弱光、無菌一、試管苗的特點第四節(jié)、試管苗馴化與移栽百合試管苗1、試管苗的生態(tài)環(huán)境：一、試管苗的特點第四節(jié)、試管苗馴化與移(1)生長細弱；(2)光合作用差(3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)對逆境的適應和抵抗能力差第四節(jié)、試管苗馴化與移栽小麥試管苗2、特點：(與常規(guī)苗相比）(1)生長細弱；第四節(jié)、試管苗馴化與移栽小麥試管苗2、特點：二、煉苗（馴化）馴化的目的：通過減肥、增光、降溫、控水等措施，提高試管苗對外界環(huán)境條件的適應性，提高光合作用的能力，提高試管苗的移栽成活率。

第四節(jié)、試管苗馴化與移栽二、煉苗（馴化）馴化的目的：第四節(jié)、試管苗馴化與移栽三、試管苗的移栽

1、直接移栽法2、常規(guī)移栽法3、嫁接移栽法第四節(jié)、試管苗馴化與移栽（一）移栽方法：三、試管苗的移栽第四節(jié)、試管苗馴化與移栽（一）移栽方法：四、提高試管苗移栽成活率的途徑1、試管苗的生理狀況：移栽壯苗2、植物生長調節(jié)物質：適當加入生長素，去除細胞分裂素，有利生根，提高成活率3、無機鹽濃度：適當降低4、加入少許活性炭5、控制好移栽前10天的光、溫、濕環(huán)境因子6、使試管苗從無菌向有菌逐漸過渡第四節(jié)、試管苗馴化與移栽四、提高試管苗移栽成活率的途徑1、試管苗的生理狀況：移栽壯苗本章小結：(1)常用的培養(yǎng)基：①MS培養(yǎng)基；②B5培養(yǎng)基；③White培養(yǎng)基；④N6培養(yǎng)基；⑤KM-8P培養(yǎng)基。(2)水、無機鹽、有機物質、天然復合物、凝固劑是構成培養(yǎng)基的五種主要成分。(3)配制母液。即先配成大量元素10倍液；微量元素100倍液；鐵鹽100倍液；有機物100倍液。(4)培養(yǎng)基配置、分裝、高壓滅菌(5)篩選培養(yǎng)基方法，即單因子試驗法、多因子試驗法、廣譜實驗法。第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術本章小結：(1)常用的培養(yǎng)基：①MS培養(yǎng)基；②B5培養(yǎng)基；本章小結：(6)植物培養(yǎng)技術：滅菌、接種、培養(yǎng)和馴化四個環(huán)節(jié)。(7)滅菌與消毒的方法。

(8)接種程序：①植物材料表面的消毒；②切割外植體；③將外植體移人培養(yǎng)基。(9)培養(yǎng)方法：固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法。(10)接種材料的培養(yǎng)：①初代培養(yǎng)；②繼代培養(yǎng)；③生根培養(yǎng)(11)試管苗馴化：注意基質、溫、光、水、肥、氣的綜合管理。第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術本章小結：(6)植物培養(yǎng)技術：滅菌、接種、培養(yǎng)和馴化四個環(huán)謝謝!第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術謝謝!第1章植物組織培養(yǎng)實驗室第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)一、外植體的選擇：種質優(yōu)良植株健壯取材的最適時期適宜的大小選材第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)一、外植體的選擇：種質優(yōu)良植株健壯二、外植體滅菌1：對材料進行預處理2：材料表面滅菌：1）水洗,濾紙吸干;2)70%酒精浸30～60s;3）用滅菌劑處理;4）用無菌水沖洗.第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)二、外植體滅菌1：對材料進行預處理第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)表面滅菌劑的種類較多，可選取1—2種使用。滅菌劑使用濃度(%)持續(xù)時間（min）去除的難易效果次氯酸鈣9~105~30易很好次氯酸鈉25~30易很好氯化汞0.1~12~10較難最好抗菌素4~50mg/L30~60中較好常用滅菌劑使用濃度及效果比較表第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)表面滅菌劑的種類較多，可選取1—2種使用。使用濃度(%)持續(xù)三、外植體的接種與培養(yǎng)（一）接種—無菌操作定義:把經表面滅菌處理后植物材料，切碎或分離出器官、組織、細胞，再經無菌操作轉接到無菌培養(yǎng)基上，這一過程叫做接種。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)三、外植體的接種與培養(yǎng)（一）接種—無菌操作第三節(jié)外植體的選(1)在接種前1-2周用甲醛熏蒸接種室；(2)接種前15-20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈；(3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，及拖鞋等；(4)上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面；(5)先用酒精棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子蘸95%酒精在酒精燈火焰上灼燒，放置冷卻。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種前的準備工作：(1)在接種前1-2周用甲醛熏蒸接種室；第三節(jié)外植體的選擇(1)對接種材料進行消毒；(2)先解開包口紙，將試管等拿成斜角，使試管口在酒精火焰上方轉動，灼燒數(shù)秒鐘；(3)用灼燒過的鑷子夾取外植體送入試管內，輕輕插入或放在培養(yǎng)基表面；(4)接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘；(5)接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；(6)接種工具隨時蘸95%酒精灼燒，避免交叉污染；(7)接種完畢后要清理干凈并用70%酒精擦工作臺。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種時的無菌操作技術：(1)對接種材料進行消毒；第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)接種時的（二）外植體培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）外植體培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室里，使培養(yǎng)的環(huán)境條件:溫度氧氣濕度光照培養(yǎng)室培養(yǎng)條件第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)培養(yǎng)的環(huán)境條件:溫度氧氣濕度光照培養(yǎng)室第三節(jié)外植體的選擇與定義：培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質枯竭，水分散失，以及代謝產物的積累，必須轉移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng),這個過程叫做繼代培養(yǎng)。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)定義：培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質枯竭，水四、外植體成苗途徑1、外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗①同時長芽和根②先長芽，再長根③先長根，再長芽2、外植體→胚狀體→試管苗（胚狀體途徑）3、外植體→根、芽→試管苗（器官發(fā)生途徑）第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)四、外植體成苗途徑1、外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗第三節(jié)外植體愈傷組織胚狀體芽、根根、芽芽芽根根試管苗外植體成苗途徑：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)BAC外植體愈傷組織胚狀體芽、根根、芽芽芽根根試管苗外植體成苗途徑(1)、直接從器官上發(fā)生

(2)、從愈傷組織發(fā)生

(3)、從游離的單細胞發(fā)生

(4)、從小孢子發(fā)生(1)數(shù)量多(2)速度快(3)結構完整第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)胚狀體的產生途徑：誘導胚狀體比誘導芽的優(yōu)點：(1)、直接從器官上發(fā)生

(2)、從愈傷組織發(fā)生

(3)、從五、培養(yǎng)過程中常出現(xiàn)的問題

及解決方法第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)污染褐變玻璃化現(xiàn)象組織培養(yǎng)三大難題五、培養(yǎng)過程中常出現(xiàn)的問題

第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)1、污染原因細菌污染真菌污染（一）污染真菌污染第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)1、污染原因（一）污染真菌污染2、污染的預防措施第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)(1)減少或防止材料帶菌

(2)外植體滅菌要徹底

(3)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌

(4)布質制品的滅菌

(5)無菌室的消毒

(6)操作人員一定要嚴格按照無菌操作的程序進行接種。2、污染的預防措施第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)(1)減少或防止1、定義：是指外植體在培養(yǎng)中體內的多酚氧化酶被激活，使細胞里的酚類物質氧化成棕褐色的醌類物質，有時使整個培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。

第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）、外植體的褐變1、定義：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（二）、外植體的褐變①植物品種②生理狀態(tài)③培養(yǎng)基成分④培養(yǎng)條件不當?shù)谌?jié)外植體的選擇與培養(yǎng)2、褐變的主要原因①植物品種第三節(jié)外植體的選擇與培①選擇合適的外植體：②合適的培養(yǎng)條件：③連續(xù)轉移④加抗氧化劑：⑤加活性炭第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的措施①選擇合適的外植體：第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、減輕褐（三）玻璃化現(xiàn)象1、定義：在長期的離體培養(yǎng)繁殖時，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)（三）玻璃化現(xiàn)象1、定義：在長期的離體培養(yǎng)繁殖時，有些試管苗2、玻璃化現(xiàn)象產生的原因細胞分裂素濃度較高時；瓊脂濃度低時；溫度低、光照時間長時；氣體交換不良時；培養(yǎng)基中無機離子種類及比例不當時。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)2、玻璃化現(xiàn)象產生的原因細胞分裂素濃度較高時；第三節(jié)外植體①適當控制培養(yǎng)基中無機營養(yǎng)成分；②適當提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂濃度；③適當降低細胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素量；

④增加自然光照，控制光照時間；⑤降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)；⑥增加容器通風，最好進行CO2施肥。第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3、預防措施：①適當控制培養(yǎng)基中無機營養(yǎng)成分；第三節(jié)外植體的選擇與培養(yǎng)3第四節(jié)、試管苗馴化與移栽第1章

植物組織培養(yǎng)實驗室構建及操作技術試管苗草莓第四節(jié)、試管苗馴化與移栽第1章植物組織培養(yǎng)實驗室試管苗草莓1、試管苗的生態(tài)環(huán)境：

高溫且恒溫、高濕、弱光、無菌一、試管苗的特點第四節(jié)、試管苗馴化與移栽百合試管苗1、試管苗的生態(tài)環(huán)境：一、試管苗的特點第四節(jié)、試管苗馴化與移(1)生長細弱；(2)光合作用差(3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)對逆境的適應和抵抗能力差第四節(jié)、試管苗馴化與移栽小麥試管苗2、特點：(與常規(guī)苗相比）(1)生長細弱；第四節(jié)、試管苗馴化與移栽小麥試管苗2、特點：二、煉苗（馴化）馴化的目的：通過減肥、增光、降溫、控水等措施，提高試管苗對外界環(huán)境條件的適應性，提高光合作用的能力，提高試管苗的移栽成活率。

第四節(jié)、試管苗馴化與移栽二、煉苗（馴化）馴化的目的：第四節(jié)、試管苗馴化與移栽三、試管苗的移栽

1、直接移栽