藥物雜質檢查藥物分析學習教案學習教案

Contents特殊雜質檢查方法3概述1一般雜質檢查方法2第1頁/共72頁第一頁，共73頁。第一節(jié)概述一、藥物純度的概念與要求1.純度（Purities）藥物的純凈程度2.雜質(Impurities)

藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體健康有害的物質。需綜合考慮藥物的外觀性狀、理化常數(shù)、雜質檢查和含量測定,綜合評定。第2頁/共72頁第二頁，共73頁。3.藥物純度與試劑純度第一節(jié)概述共同點——均規(guī)定所含雜質的種類和限量.不同點①藥物純度從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面考慮,只有合格品和不合格品.②試劑純度是從雜質可能引起的化學變化對使用的影響以及試劑的使用范圍和使用目的加以規(guī)定,它不考慮雜質對生物體的生理作用及毒副作用.化學試劑——一般分為4個等級〔基準試劑、優(yōu)級純或特種試劑(光譜純、色譜純、農藥殘留檢測級)、分析純和化學純〕化學試劑不能代替藥品！第3頁/共72頁第三頁，共73頁。第一節(jié)概述二、雜質的來源與種類雜質的來源生產過程儲藏過程1.合成過程：原料不純或反應不完全，中間體、副產物在精制中未除盡2.制劑過程3.生產過程：試劑、溶劑、還原劑殘留4.異構體、多晶體5.使用的金屬器皿、裝置、工具引入的金屬雜質在溫度、濕度、日光、空氣等外界條件影響下，或因微生物的作用，引起藥物發(fā)生水解、氧化、分解、異構化、晶型轉變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化第4頁/共72頁第四頁，共73頁。第一節(jié)概述三、第5頁/共72頁第五頁，共73頁。四、雜質的限量(LimitTest)藥物中所含雜質的最大允許量。通常用百分之幾或百萬分之幾

(partspermillion,ppm)雜質限量控制限量檢查對照法靈敏度法比較法定量檢查：定量測定雜質含量注意平行原則第一節(jié)概述第6頁/共72頁第六頁，共73頁。第一節(jié)概述注意單位統(tǒng)一！第7頁/共72頁第七頁，共73頁。第一節(jié)概述示例一茶苯拉明中氯化物檢查取本品0.30g

置200ml量瓶中，加水50ml、氨試液3ml和10%硝酸銨溶液6ml，置水浴上加熱5min，加硝酸銀試液25ml，搖勻，再置水浴上加熱15min，并時時振搖，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，濾過，取續(xù)濾液25ml置納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5min，與標準氯化鈉溶液(10μg

Cl-/ml)1.5

ml制成的對照液比較，求氯化物的限量。C=10μg/mlV=1.5mlS=?對照法第8頁/共72頁第八頁，共73頁。示例二腎上腺素上酮體的檢查第一節(jié)概述取本品0.2g,置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9-2000)溶解并稀釋至刻度，搖勻，在310nm處測定吸光度不得超過0.05，酮體的百分吸收系數(shù)為435，求酮體的限量V=100mlC=A/E=0.05/435=1.15×10-4

g/100ml

S=0.2g比較法第9頁/共72頁第九頁，共73頁。習題一磷酸可待因中嗎啡的檢查第一節(jié)概述取本品0.10g，加鹽酸溶液(9→1000)使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15min，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡試液[取無水嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液(9→1000)使溶解成100ml]5.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深。問限量是多少？第10頁/共72頁第十頁，共73頁。習題二苯巴比妥鈉中重金屬的檢查第一節(jié)概述取本品2.0g，加水32ml，溶解后緩緩加入1mol/L鹽酸溶液8ml，充分振搖，靜置數(shù)分鐘，濾過，取濾液20ml，加酚酞指示液1滴與氨試液恰顯粉紅色，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水適量成25ml，依法檢查，含重金屬不得超過10ppm。試計算應取得標準鉛溶液(每1ml相當于10μgPb)的體積。第11頁/共72頁第十一頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法一、氯化物檢查法供試品稀HNO310mlH2OAgNO31ml標準溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗處放置5min(避免AgCl分解)第12頁/共72頁第十二頁，共73頁。氯化物檢查法測定條件C標NaCl=10μg/ml，50ml溶液中含Cl-50~80μg為宜HNO3避免碳酸銀、磷酸銀、氧化銀沉淀（10ml/50ml）先使溶液體積為40ml，再加入硝酸銀暗處放置注意事項供試液渾濁，含硝酸的水洗滌濾紙，再過濾供試液若有顏色，可用內消色或外消色法碘的干擾氨制硝酸銀或升華法不溶于水的藥物，水溶解過濾有機氯：轉化為無機氯第13頁/共72頁第十三頁，共73頁。二、硫酸鹽檢查法第二節(jié)一般雜質的檢查方法測定條件：C標K2SO4=100μg/ml，50ml含100~500μgSO42-為宜HCl避免碳酸鋇或磷酸鋇沉淀，2mlHCl/50ml先使溶液40ml，再加氯化鋇注意事項：供試液渾濁，含HCl的水洗凈濾紙，過濾供試液有顏色，內消色法2ml稀HCl/50ml第14頁/共72頁第十四頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法三、鐵鹽檢查法1.硫氰酸鐵法

(Ch.P

和USP采用)紅色4ml稀HCl/50ml，目的？供試品顯色，立即與同法制成的對照溶液比較加水溶解25ml稀HCl4ml過硫酸銨50mg加水稀釋35ml30%硫氰酸銨溶液3ml加水定容第15頁/共72頁第十五頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法測定條件：C標Fe=10μg/ml，用硫酸鐵銨配制時加入硫酸防止鐵鹽水解。10~50μgFe/50ml稀HCl：防止Fe3+水解。4ml/50ml過硫酸銨：氧化Fe2+成Fe3+，防止硫氰酸鐵見光分解或還原過量硫氰酸銨：增加配位離子穩(wěn)定性注意事項：稀硝酸：氧化Fe2+成Fe3+，剩余加熱除去（亞硝酸能與硫氰酸根離子生成紅色亞硝酰硫氰化物）色調不一致或顏色淺：正丁醇或異戊醇提取，醇層比色環(huán)狀結構：有機破壞第16頁/共72頁第十六頁，共73頁。2.巰基醋酸法

(BP采用)第二節(jié)一般雜質的檢查方法紅色注意：由于反應體系在氨堿性條件下進行，為避免氫氧化鐵沉淀，應先加入枸櫞酸與鐵離子形成配位離子第17頁/共72頁第十七頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法四、重金屬檢查法(Pb)第18頁/共72頁第十八頁，共73頁。1.第一法

硫代乙酰胺法第二節(jié)一般雜質的檢查方法條件：

介質：醋酸鹽緩沖液

(pH3.5)

2ml

試劑：硫代乙酰胺(CH3CSNH2)

2ml雜質對照液：Pb(NO3)2

(10μg/ml)靈敏度范圍：10~20g/27ml黃色至棕黑色混懸液注意：

供試品有色：加有色溶液或改用第二法含微量高鐵鹽：加Vc供試品為鐵鹽：除去供試品能形成不溶性硫化物：加掩蔽劑第19頁/共72頁第十九頁，共73頁。2.第二法熾灼后的硫代乙酰胺法第二節(jié)一般雜質的檢查方法

緩緩熾灼

放冷

H2SO40.5-1.0ml供試品

炭化

加熱

HNO3

500-600℃H2SO4

除盡

放冷

完全灰化

蒸干HCl2ml水15ml

中性

按第一法檢查

蒸干氨試液注意：熾灼溫度；硝酸蒸干；其他試劑干擾（做空白試驗）；含鈉鹽或氟的有機藥物（鉑坩鍋或硬質玻璃）

第20頁/共72頁第二十頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法3.第三法硫化鈉法4.第四法微孔濾膜法CABFE濾器下部濾器上蓋連接頭輔助濾板D濾膜(直徑10mm,孔徑3.0μm)墊圈(外徑10mm,內徑6mm)第21頁/共72頁第二十一頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法五、砷鹽檢查法(一)古蔡氏法(Gutzeit)黃色棕色黑色+As2Hg32As(HgBr)3+AsH3

→3AsH(HgBr)2第22頁/共72頁第二十二頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法

古蔡氏法檢砷器8cm有孔玻璃旋塞導氣管AsH3發(fā)生瓶溴化汞試紙醋酸鉛棉花(60mg)HClZn粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液生成砷斑吸收硫化氫氣體第23頁/共72頁第二十三頁，共73頁。注意事項砷斑不穩(wěn)定，應干燥、避光、立即比較。有機結合態(tài)的砷應破壞后檢查（加酸或堿），但溫度應低于600C。供試品若為鐵鹽，能消耗碘化鉀和氯化亞錫，可加酸性氯化亞錫，使高鐵離子還原后檢查。供試品（硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽）若在酸性條件下生成硫化氫或二氧化硫，與溴化汞試紙作用生成黑色硫化汞和金屬汞，可先用硝酸處理，使其氧化為硫酸鹽。銻鹽含量較多時，可改用白田道夫（Bettendorff）法檢查砷第24頁/共72頁第二十四頁，共73頁。(二)二乙基二硫代氨基甲酸銀法[Ag(DDC)法]第二節(jié)一般雜質的檢查方法紅色膠態(tài)銀目視比色法510nm測定A值第25頁/共72頁第二十五頁，共73頁。線性范圍：1～10μg/40ml含銻藥物不干擾測定用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測定第26頁/共72頁第二十六頁，共73頁。(三)次磷酸法

第二節(jié)一般雜質的檢查方法棕色1)用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物的砷鹽檢查，不產生干擾。

2）靈敏度較古蔡法低。第27頁/共72頁第二十七頁，共73頁。注意四種砷鹽檢查法生產的產物古蔡法生成的是黃色至棕色的砷斑Ag（DDC）法生成的是紅色膠態(tài)銀白田道夫法生成的是棕褐色的膠態(tài)砷次磷酸法生成的是棕色的游離砷

第28頁/共72頁第二十八頁，共73頁。六、溶液顏色檢查法——有色雜質Ch.P采取三種檢查方法：①目視比色法：藥物溶液的顏色——標準比色液的顏色

標準比色液：比色用重鉻酸鉀、硫酸銅、氯化鈷+水②分光光度法

某波長處的吸收度③色差計法

藥物溶液的三刺激值（在給定的三色系統(tǒng)中與待測色達到色匹配所需要的三個原刺激量）直接比較、與水之間的色差值第二節(jié)一般雜質的檢查方法第29頁/共72頁第二十九頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法七、易炭化物檢查法含義：藥物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有機雜質檢查方法：目視比較法供試品炭化后，與對照液（視品種而定）目視比較

對照液：溶液顏色檢查項下的不同色調的標準比色液比色用氯化鈷、重鉻酸鉀、硫酸銅配成高錳酸鉀液第30頁/共72頁第三十頁，共73頁。八、溶液澄清度檢查法含義：檢查藥品溶液的渾濁程度。意義：反映藥物中微量不溶性雜質的存在情況，反映藥

品的質量和生產工藝水平。方法：Ch.P比濁法藥典中澄清的定義為：供試品溶液的澄清度相同于所用的溶劑，或不超過0.5號濁度標準液。濁度標準液：烏洛托品在偏酸性條件下水解產生甲醛，甲醛與肼縮合，生產不溶于水的甲醛腙白色渾濁，以不同量的水稀釋可得不同濁度的標準液。注意事項：光線及溫度、不同藥品溶劑會不同。第二節(jié)一般雜質的檢查方法第31頁/共72頁第三十一頁，共73頁。九、熾灼殘渣檢查法熾灼殘渣（residueonignition）：有機藥物經炭化或揮發(fā)性無機藥物加熱分解后，高溫熾灼，所產生的非揮發(fā)性無機雜質的硫酸鹽。方法：1.0~2.0g供試品熾灼至恒重的坩鍋精密稱定緩緩熾灼至完全炭化防冷至室溫加硫酸0.5~1ml

低溫除去硫酸700~800℃熾灼完全灰化移置干燥器放冷至室溫后精密稱定700~800℃熾灼至恒重熾灼溫度：Ch.P700~800℃USP800±25℃BP800℃JP450~550℃第二節(jié)一般雜質的檢查方法1～2mg0.1%～0.2%第32頁/共72頁第三十二頁，共73頁。熾灼殘渣檢查法注意點1、操作及稱重方法：1）坩堝要事先恒重，精密稱定，所得的殘渣要恒重；2）坩堝應斜置，防止暴沸和濺出；3）有機藥物在坩堝中加熱開始時應緩緩加熱，加入硫酸后也應緩緩加熱，防止藥物暴沸、濺出和硫酸腐蝕;4）坩堝熾灼后要放于干燥器中冷卻后稱重。

2、如供試品為重金屬，熾灼溫度應為500-600C，防止重金屬逸失。

3、藥物的熾灼殘渣限量一般為0.1%-0.2%（1g供試品不超過1-2mg）。含氟藥物用鉑坩堝第二節(jié)一般雜質的檢查方法第33頁/共72頁第三十三頁，共73頁。十、干燥失重測定法第二節(jié)一般雜質的檢查方法干燥失重：藥品在規(guī)定的條件下，經干燥后所減失的量。用于檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質。恒重：供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下。（干燥至恒重的第二次及以后每次稱重都應在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1h后進行）第34頁/共72頁第三十四頁，共73頁。（一）常壓恒溫干燥法注意事項樣品厚度含較多結晶水：提高溫度熔點低：逐漸升溫易吸濕或受熱發(fā)生相變而達不到恒重：T、h一定減失的重量供試品膏狀：事先放入粗沙?；虿０簦ǘp壓干燥法與恒溫減壓干燥法常用干燥劑的吸收能力：五氧化二磷硅膠無水氯化鈣硫酸（三）干燥劑干燥第二節(jié)一般雜質的檢查方法第35頁/共72頁第三十五頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法(四)熱分析法（Thermalanalysis）

測定物質的物理化學性質與溫度關系的儀器分析方法。熱重分析法(ThermogravimetricAnalysis,TGA)差熱分析法(Differential

ThermalAnalysis,DTA)差示掃描量熱法

(Differential

ScanningCalorimetry,DSC)第36頁/共72頁第三十六頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法1.熱重分析法(TGA)供試品TGA熱重曲線WW結晶水失重臺階

應用熱天平在程序控溫的條件下測量物質的質量隨溫度變化的熱分析技術,可計算出樣品在相應溫度范圍內減失質量的百分率.第37頁/共72頁第三十七頁，共73頁。特點分析樣品用量少,適用于貴重藥材或在空氣中容易氧化藥物干燥失重測定.靈敏度高,可達1g以下測定速度快可用于判斷結晶水或吸附水,并推斷結晶水含量.第38頁/共72頁第三十八頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法2.差熱分析法(DTA)在程序控制溫度下，測量供試品和惰性參比物(常用石英砂、煅制MgO)之間的溫度差與溫度(或時間)關系的熱分析技術T△T供試品發(fā)生吸熱反應溫度低于參比物質從而產生吸熱峰參比物質供試品發(fā)生放熱反應溫度高于參比物質從而產生放熱峰第39頁/共72頁第三十九頁，共73頁。DTA用途(1)熔點測定熔程T△T=0第40頁/共72頁第四十頁，共73頁。(2)

定性和純度檢定——根據(jù)峰的數(shù)目、形狀、位置對供試品進行純度判別T供試品對照品第41頁/共72頁第四十一頁，共73頁。ΔG1ΔG2ΔG310008006004002000WT1T2T3398838635478134226T(℃)草酸鈣(CaC2O4·H2O)的熱重曲線在溫度T1時CaC2O4·H2OCaC2O4+H2O在溫度T2時CaC2O4CaCO3+CO在溫度T3時CaCO3CaO+CO2第42頁/共72頁第四十二頁，共73頁。10090807060DTAT(℃/min)196℃233℃鹽酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲線第43頁/共72頁第四十三頁，共73頁。3.差示掃描量熱法(DSC)第二節(jié)一般雜質的檢查方法

測量保持供試品和惰性參比物的溫度相同,系統(tǒng)所需輸給供試品或參比物的能量差隨溫度(或時間)變化的熱分析技術.···樣品參比加熱爐至信號放大器加熱器導線爐溫控制器第44頁/共72頁第四十四頁，共73頁。用于待測物質的鑒別、晶型鑒別、純度檢查以及熔點和水分等的測定，更適合于測量物質在物理變化或化學變化中焓的變化。不純物質的DSC圖t(min)△T第45頁/共72頁第四十五頁，共73頁。不同純度苯甲酸的DSC曲線溫度97.2%98.6%標準品低共熔雜質第46頁/共72頁第四十六頁，共73頁。應用熱分析法檢查藥物純度的條件樣品純度在98.0%以上雜質不與主成分反應雜質不與主成分形成共晶或固熔體雜質與熔融試樣有化學相似性藥物在熔融過程中化學性質穩(wěn)定藥物如存在多晶現(xiàn)象則必須全部轉變成某一晶型第47頁/共72頁第四十七頁，共73頁。甲磺酸二氫麥角毒堿的DSC-TGA曲線℃50100150200DSCTGA失溶劑失水分解第48頁/共72頁第四十八頁，共73頁。十一、水分測定法（卡爾費休法）第二節(jié)一般雜質的檢查方法A——供試品消耗的Fisher試液的體積B——空白消耗的Fisher試液的體積F——每1mlFisher試劑相當于水的重量(mg)W——供試品的重量第49頁/共72頁第四十九頁，共73頁。指示終點方法：①Fisher試液顏色

淡黃色——紅棕色②永停法第50頁/共72頁第五十頁，共73頁。十二、殘留溶劑測定法第二節(jié)一般雜質的檢查方法殘留溶劑：在合成原料藥，輔料或制劑生產的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機溶劑。第51頁/共72頁第五十一頁，共73頁。第二節(jié)一般雜質的檢查方法色譜系統(tǒng)與系統(tǒng)適用性試驗(SystemSuitabilityTests;SSTs)

⑴用待測物的色譜峰計算的N應大于1000（或5000）；⑵內標物與待測物的兩個色譜峰的R≥1.5；⑶每個標準溶液進樣5次，所得待測物與內標物峰面積之比的RSD≤5%；若以外標法測定，所得待測物峰面積的RSD≤10%

第52頁/共72頁第五十二頁，共73頁。進行有機溶劑限度測定時，根據(jù)殘留溶劑的限度規(guī)定來確定對照品溶液的濃度；進行定量測定時，應根據(jù)供試品中實際殘留溶劑的實際殘留量確定對照品溶液的濃度。對照品溶液的色譜峰面積與供試品溶液中對應的殘留溶劑的色譜峰面積以不超過2倍為宜。第二節(jié)一般雜質的檢查方法第53頁/共72頁第五十三頁，共73頁。第54頁/共72頁第五十四頁，共73頁。第三節(jié)特殊雜質的檢查方法一、色譜分析法(一)TLC法比移值一般要求：顆粒直徑10~40μm薄層涂布：無粘合劑含粘合劑：常加入10~15%

煅石膏(CaSO4·2H2O,180℃烘4h)

或0.5~0.7%羧甲基纖維素鈉水溶液第55頁/共72頁第五十五頁，共73頁。第三節(jié)特殊雜質的檢查方法①雜質對照法

適用于已知雜質并能夠得到雜質對照品的情況②供試品溶液自身稀釋法適用于雜質的結構不能確定或無雜質對照品的情況(僅限于二者的顏色相近或相同的情況)③雜質對照法與供試品溶液自身稀釋法對照使用④對照藥物法無合適的雜質對照品，或者是供試品顯示的雜質斑點顏色和主成分顏色有差異，難以判斷限量。第56頁/共72頁第五十六頁，共73頁。第三節(jié)特殊雜質的檢查方法(二)HPLC法第57頁/共72頁第五十七頁，共73頁。主要方法內標法加校正因子法：用于有雜質對照品時能夠測定雜質的校正因子雜質的含量測定。外標法：用于有雜質對照品或雜質對照品易制備的情況。加校正因子的主成分自身對照法：用于有雜質對照品時，雜質的含量測定不加校正因子的主成分自身對照法：用于沒有雜質對照品的情況峰面積歸一化法：粗略測量供試品中雜質的含量

第三節(jié)特殊雜質的檢查方法第58頁/共72頁第五十八頁，共73頁。220260300nm腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線λmax310nm二、光譜分析法第三節(jié)特殊雜質的檢查方法第59頁/共72頁第五十九頁，共73頁。第60頁/共72頁第六十頁，共73頁。雜質與一定試劑產生沉淀雜質與一定試劑產生顏色反應雜質與一定試劑反應產生氣體第三節(jié)特殊雜質的檢查方法三、化學分析法呋塞米中芳香第一胺的檢查呋塞米2-氨基-4-氯-5-氨磺酸基苯甲酸重氮化-耦合反應顯色第61頁/共72頁第六十一頁，共73頁。氯硝柳胺中5-氯水楊酸的檢查氯硝柳胺5-氯水楊酸三氯化鐵顯色第62頁/共72頁第六十二頁，共73頁。第三節(jié)特殊雜質的檢查方法四、物理分析法

嗅味及揮發(fā)性的差異：乙醇中雜醇油顏色的差異：鹽酸胺碘酮中游離碘溶解行為