微生物接種方法比較

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細(xì)菌的接種方法有很多種，如劃線(xiàn)法、涂布法、傾注法、斜面接種法、液體培養(yǎng)基接種法、螺旋接種法等，其方法和應(yīng)用各有不同，下面就這幾種方法進(jìn)行解釋以幫助實(shí)驗(yàn)人員選擇操作。

劃線(xiàn)法

此法主要用于菌種分純，獲得單菌落。

用接種環(huán)沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線(xiàn)、扇形劃線(xiàn)或其他形式的連續(xù)劃線(xiàn)，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線(xiàn)適宜的話(huà)，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。

優(yōu)點(diǎn)：可以觀(guān)察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離。

缺點(diǎn)：不能用于菌落計(jì)數(shù)。

涂布法

此法主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。

先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中，然后用無(wú)菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無(wú)菌L型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻，將涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，可以觀(guān)察菌落特征。

缺點(diǎn)：接種前需梯度稀釋?zhuān)樟枯^少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

傾注法

此法主要用于菌落總數(shù)的計(jì)數(shù)。

吸取1mL菌液加入平板中，倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷卻后倒置，適溫培養(yǎng)。至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。

優(yōu)點(diǎn)：可以計(jì)數(shù)，較方便。

缺點(diǎn)：接種前需梯度稀釋?zhuān)荒苡^(guān)察菌落特征，不適用于嚴(yán)格好氧菌和熱敏感菌。

斜面接種法

此法主要用于保存菌種，或觀(guān)察細(xì)菌的某些生化特性和動(dòng)力。

用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi)，挑取用來(lái)移種的菌落。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線(xiàn)，再自下而上蜿蜒劃線(xiàn)，或直接自下而上地蜿蜒劃線(xiàn)。接種完成之后，用火焰滅菌培養(yǎng)管口，并塞上棉塞，置于37℃培養(yǎng)。

液體培養(yǎng)基接種法

此法主要用于菌液比濁實(shí)驗(yàn)。

用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本，在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細(xì)菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中。

螺旋接種法

此法主要用于菌落總數(shù)計(jì)數(shù)。

可以在無(wú)任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種。對(duì)數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線(xiàn)的形式被自動(dòng)分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準(zhǔn)。菌液的濃度可以通過(guò)培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來(lái)計(jì)算。

優(yōu)點(diǎn)：螺旋接種法菌液無(wú)需稀釋?zhuān)ㄆ渌臃N方法均需經(jīng)過(guò)梯度稀釋才能計(jì)