無(wú)菌檢查課件

無(wú)菌檢查陳晨2018.07.021PPT課件無(wú)菌檢查一、無(wú)菌檢查環(huán)境保證培養(yǎng)基保證有效的方法SOP操作有效的結(jié)果無(wú)菌性檢查靈敏度檢查方法確認(rèn)可靠的結(jié)論結(jié)果判斷2PPT課件一、無(wú)菌檢查環(huán)境保證培養(yǎng)基保證有效的方法SOP操作有效的結(jié)果二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部1101無(wú)菌檢查法GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法ISO11737-22009醫(yī)療設(shè)備的滅菌－微生物學(xué)方法第二部分：滅菌過(guò)程中無(wú)菌測(cè)試的定義，驗(yàn)證及維護(hù)3PPT課件二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部1三、檢測(cè)環(huán)境2015版藥典要求1101無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求。9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則：無(wú)菌檢査應(yīng)在B級(jí)背景下的A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，單向流空氣

、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。GB/T14233.2-2005：無(wú)菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求。4PPT課件三、檢測(cè)環(huán)境2015版藥典要求單向流空氣、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)四、菌種的選擇注：菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5次。5PPT課件四、菌種的選擇注：菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5次。5PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1、實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基及稀釋液（2015版藥典）①胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基——用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)②流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基——用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)。③胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基——用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)④沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基——用于霉菌的計(jì)數(shù)6PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1、實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基及稀釋液（2015版藥典五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備2、培養(yǎng)基配制①直接購(gòu)買(mǎi)配制好的干粉培養(yǎng)基，按照培養(yǎng)基包裝上的說(shuō)明，取規(guī)定量的干粉培養(yǎng)基及純化水進(jìn)行配制，按121℃，15min進(jìn)行滅菌，滅菌后冷卻至室溫備用。②藥典規(guī)定：配制好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃，非密閉容器，一般三周以?xún)?nèi)使用。7PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備2、培養(yǎng)基配制7PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查①無(wú)菌性檢查——排出培養(yǎng)基本身的污染，避免無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中由培養(yǎng)基引起的假陽(yáng)性②靈敏度檢查——確保培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)性良好，對(duì)微生物具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用，排出無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中由培養(yǎng)基引起的假陰性注：用于無(wú)菌檢查的培養(yǎng)基必須經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基適用性檢查。8PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查8PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查9PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查9PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備4、其他實(shí)驗(yàn)材料①帶濾芯槍頭②量筒（100ml）③剪刀、鑷子④無(wú)塵布以上物品可采樣濕熱滅菌121℃，30min。10PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備4、其他實(shí)驗(yàn)材料10PPT課件六、實(shí)驗(yàn)設(shè)備1、電子天平——用于培養(yǎng)基干粉的稱(chēng)量2、壓力蒸汽滅菌器——用以培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)物品的滅菌3、生化培養(yǎng)箱——用于細(xì)菌的培養(yǎng)4、霉菌培養(yǎng)箱——用于霉菌及酵母菌的培養(yǎng)5、生物安全柜——用于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的提供11PPT課件六、實(shí)驗(yàn)設(shè)備1、電子天平——用于培養(yǎng)基干粉的稱(chēng)量11PPT課七、菌液的制備菌株的準(zhǔn)備：取1瓶復(fù)溶液和1瓶定量菌株，平衡至室溫。在生物安全柜內(nèi)，撕開(kāi)菌株瓶的鋁塑組合蓋，在無(wú)菌操作下，取鑷子過(guò)火焰滅菌后，待其冷卻，用鑷子打開(kāi)菌株瓶的凍干塞，打開(kāi)復(fù)溶液的螺旋蓋并把菌株凍干粉倒入復(fù)溶液中，重新旋緊螺旋蓋并漩渦震蕩至少10秒確保菌株完全溶解，即得所需菌懸液（每0.1mL的菌懸液即含10~99cfu）。12PPT課件七、菌液的制備菌株的準(zhǔn)備：取1瓶復(fù)溶液和1瓶定量菌株，平衡至八、驗(yàn)證方法目的：確認(rèn)無(wú)菌試驗(yàn)的產(chǎn)品是否具有抑菌性；如果有，如何去除，并被證實(shí)。無(wú)菌檢查方法有直接培養(yǎng)法和薄膜過(guò)濾法兩種。醫(yī)療器械最常使用的方法為直接培養(yǎng)法，薄膜過(guò)濾法適用于液體類(lèi)產(chǎn)品或供試品已轉(zhuǎn)化為供試液的產(chǎn)品，本公司的產(chǎn)品制備成供試液后仍有顆粒雜質(zhì)無(wú)法過(guò)濾，故選用直接培養(yǎng)法。13PPT課件八、驗(yàn)證方法目的：確認(rèn)無(wú)菌試驗(yàn)的產(chǎn)品是否具有抑菌性；如果有，八、驗(yàn)證方法——直接培養(yǎng)法14PPT課件八、驗(yàn)證方法——直接培養(yǎng)法14PPT課件八、驗(yàn)證方法——薄膜過(guò)濾法15PPT課件八、驗(yàn)證方法——薄膜過(guò)濾法15PPT課件八、驗(yàn)證方法——結(jié)果判斷與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢査。如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。16PPT課件八、驗(yàn)證方法——結(jié)果判斷與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試九、產(chǎn)品有抑菌性的措施1、增加沖洗量2、增加培養(yǎng)基的用量?3、使用中和劑或滅菌劑4、更換濾膜品種注：消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)日常無(wú)菌檢查陽(yáng)性對(duì)照菌的選擇：無(wú)抑菌作用及抗革蘭氏陽(yáng)性菌為主的供試品，選擇金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌。17PPT課件九、產(chǎn)品有抑菌性的措施1、增加沖洗量17PPT課件十、日常無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查室供試品接入培養(yǎng)基FTM+供:2管TSB+供:1管陰性:各1管（FTM、TSB）準(zhǔn)備間培養(yǎng)基、供試品、滅菌物品的準(zhǔn)備陽(yáng)性對(duì)照室取其中一管FTM+供，加入1~100cfu金黃色葡萄球菌準(zhǔn)備間FTM+陰:30~35℃TSB+陰:20~25℃培養(yǎng)14天陽(yáng):30~35℃培養(yǎng)72小時(shí)以?xún)?nèi)結(jié)果判斷陽(yáng)性：生長(zhǎng)良好陰性：無(wú)菌生長(zhǎng)供：無(wú)菌生長(zhǎng)18PPT課件十、日常無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查室準(zhǔn)備間陽(yáng)性對(duì)照室準(zhǔn)備間結(jié)果判斷18

謝謝！19PPT課件19PPT課件

無(wú)菌檢查陳晨2018.07.0220PPT課件無(wú)菌檢查一、無(wú)菌檢查環(huán)境保證培養(yǎng)基保證有效的方法SOP操作有效的結(jié)果無(wú)菌性檢查靈敏度檢查方法確認(rèn)可靠的結(jié)論結(jié)果判斷21PPT課件一、無(wú)菌檢查環(huán)境保證培養(yǎng)基保證有效的方法SOP操作有效的結(jié)果二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部1101無(wú)菌檢查法GB/T14233.2-2005醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法ISO11737-22009醫(yī)療設(shè)備的滅菌－微生物學(xué)方法第二部分：滅菌過(guò)程中無(wú)菌測(cè)試的定義，驗(yàn)證及維護(hù)22PPT課件二、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》2015版四部1三、檢測(cè)環(huán)境2015版藥典要求1101無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求。9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則：無(wú)菌檢査應(yīng)在B級(jí)背景下的A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，單向流空氣

、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。GB/T14233.2-2005：無(wú)菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求。23PPT課件三、檢測(cè)環(huán)境2015版藥典要求單向流空氣、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)四、菌種的選擇注：菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5次。24PPT課件四、菌種的選擇注：菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)5次。5PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1、實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基及稀釋液（2015版藥典）①胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基——用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)②流乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基——用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)。③胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基——用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)④沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基——用于霉菌的計(jì)數(shù)25PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1、實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基及稀釋液（2015版藥典五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備2、培養(yǎng)基配制①直接購(gòu)買(mǎi)配制好的干粉培養(yǎng)基，按照培養(yǎng)基包裝上的說(shuō)明，取規(guī)定量的干粉培養(yǎng)基及純化水進(jìn)行配制，按121℃，15min進(jìn)行滅菌，滅菌后冷卻至室溫備用。②藥典規(guī)定：配制好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2~25℃，非密閉容器，一般三周以?xún)?nèi)使用。26PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備2、培養(yǎng)基配制7PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查①無(wú)菌性檢查——排出培養(yǎng)基本身的污染，避免無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中由培養(yǎng)基引起的假陽(yáng)性②靈敏度檢查——確保培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)性良好，對(duì)微生物具有生長(zhǎng)促進(jìn)作用，排出無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中由培養(yǎng)基引起的假陰性注：用于無(wú)菌檢查的培養(yǎng)基必須經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基適用性檢查。27PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查8PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查28PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備3、培養(yǎng)基適用性檢查9PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備4、其他實(shí)驗(yàn)材料①帶濾芯槍頭②量筒（100ml）③剪刀、鑷子④無(wú)塵布以上物品可采樣濕熱滅菌121℃，30min。29PPT課件五、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備4、其他實(shí)驗(yàn)材料10PPT課件六、實(shí)驗(yàn)設(shè)備1、電子天平——用于培養(yǎng)基干粉的稱(chēng)量2、壓力蒸汽滅菌器——用以培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)物品的滅菌3、生化培養(yǎng)箱——用于細(xì)菌的培養(yǎng)4、霉菌培養(yǎng)箱——用于霉菌及酵母菌的培養(yǎng)5、生物安全柜——用于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的提供30PPT課件六、實(shí)驗(yàn)設(shè)備1、電子天平——用于培養(yǎng)基干粉的稱(chēng)量11PPT課七、菌液的制備菌株的準(zhǔn)備：取1瓶復(fù)溶液和1瓶定量菌株，平衡至室溫。在生物安全柜內(nèi)，撕開(kāi)菌株瓶的鋁塑組合蓋，在無(wú)菌操作下，取鑷子過(guò)火焰滅菌后，待其冷卻，用鑷子打開(kāi)菌株瓶的凍干塞，打開(kāi)復(fù)溶液的螺旋蓋并把菌株凍干粉倒入復(fù)溶液中，重新旋緊螺旋蓋并漩渦震蕩至少10秒確保菌株完全溶解，即得所需菌懸液（每0.1mL的菌懸液即含10~99cfu）。31PPT課件七、菌液的制備菌株的準(zhǔn)備：取1瓶復(fù)溶液和1瓶定量菌株，平衡至八、驗(yàn)證方法目的：確認(rèn)無(wú)菌試驗(yàn)的產(chǎn)品是否具有抑菌性；如果有，如何去除，并被證實(shí)。無(wú)菌檢查方法有直接培養(yǎng)法和薄膜過(guò)濾法兩種。醫(yī)療器械最常使用的方法為直接培養(yǎng)法，薄膜過(guò)濾法適用于液體類(lèi)產(chǎn)品或供試品已轉(zhuǎn)化為供試液的產(chǎn)品，本公司的產(chǎn)品制備成供試液后仍有顆粒雜質(zhì)無(wú)法過(guò)濾，故選用直接培養(yǎng)法。32PPT課件八、驗(yàn)證方法目的：確認(rèn)無(wú)菌試驗(yàn)的產(chǎn)品是否具有抑菌性；如果有，八、驗(yàn)證方法——直接培養(yǎng)法33PPT課件八、驗(yàn)證方法——直接培養(yǎng)法14PPT課件八、驗(yàn)證方法——薄膜過(guò)濾法34PPT課件八、驗(yàn)證方法——薄膜過(guò)濾法15PPT課件八、驗(yàn)證方法——結(jié)果判斷與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢査。如