醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)

第三章抗體制藥（二）3學(xué)時(shí)2021/7/18星期日1第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!三、多功能抗體及其制備近年來(lái)，在scFv（單鏈抗體）的基礎(chǔ)上，可以把兩個(gè)或兩個(gè)以上的scFv重組在一起，由此可制備成多價(jià)小分子抗體即微型抗體（簡(jiǎn)稱多價(jià)微抗）。包括雙鏈抗體（diabody），三鏈抗體（triabody），微型抗體（minibody）及四鏈抗體（tetrabody）。2021/7/18星期日2第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!多功能抗體及其制備雙鏈抗體制備方法：化學(xué)交聯(lián)法、粘性蛋白結(jié)構(gòu)域融合法和接頭長(zhǎng)度控制法。微型抗體：通過(guò)基因工程手段采用不同的接頭把單鏈抗體（VL-VH)的VH結(jié)構(gòu)域與IG的CH3結(jié)構(gòu)域融合，形成VL-VH-CH3的結(jié)構(gòu)。此種抗體合成后通過(guò)CH3結(jié)構(gòu)域形成穩(wěn)定的二聚體形式，發(fā)揮其雙價(jià)微抗的作用。三鏈抗體：在制備單鏈抗體時(shí)，當(dāng)接頭的長(zhǎng)度為2個(gè)或2個(gè)以下氨基酸殘基時(shí)，或者直接把VH結(jié)構(gòu)域N末端與VL結(jié)構(gòu)域C末端相連，通過(guò)非共價(jià)鍵而形成三聚體，稱三鏈抗體。2021/7/18星期日3第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!

2021/7/18星期日4第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!構(gòu)建抗體融合蛋白的原則

將個(gè)蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第二個(gè)蛋白基因，即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)基因的共表達(dá)?？贵w酶，酶-抗體型融合蛋白，在藥物治療中有廣闊的前景，它可在靶向位置上將前體藥物轉(zhuǎn)化成有效的藥物，從而避免了對(duì)正常組織的損害。2021/7/18星期日5第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!

2021/7/18星期日6第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!獲取目的基因和載體獲取目的基因：提取mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR獲取抗體某一特定基因區(qū)段，抗體基因的組合形式多為單鏈抗體?？贵w庫(kù)技術(shù)的載體：噬菌體載體具有噬菌體和質(zhì)粒的共同特點(diǎn)。

2021/7/18星期日7第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)2021/7/18星期日8第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!噬菌體展示技術(shù)2021/7/18星期日9第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn)模擬天然全套抗體庫(kù)避開(kāi)了人工免疫和雜交瘤技術(shù)可獲得高親和力的人源化抗體。2021/7/18星期日10第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)2021/7/18星期日11第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!基因工程抗體的表達(dá)

原核生物：大腸桿菌，分融合表達(dá)和分泌表達(dá)；真核生物：都是分泌表達(dá)，有酵母、昆蟲細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵細(xì)胞和真菌。轉(zhuǎn)基因植物：煙草轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：?jiǎn)位蛩健?021/7/18星期日12第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!

最理想的單克隆抗體：

100％人源化，由人體免疫系統(tǒng)自然產(chǎn)生。全人抗體的理論基礎(chǔ)：▲癌癥、病毒、細(xì)菌對(duì)機(jī)體而言均為異己物；▲人體不斷受異己物攻擊，但免疫系統(tǒng)通常有清除能力；▲免疫系統(tǒng)通過(guò)體液免疫和細(xì)胞免疫對(duì)異己物做出反應(yīng)；▲體液免疫就是針對(duì)異己物天然地產(chǎn)生抗體。全人抗體面臨的關(guān)鍵問(wèn)題：持續(xù)分泌抗體的人B細(xì)胞、抗體分泌細(xì)胞的保持。2021/7/18星期日13第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!

2021/7/18星期日14第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!

2021/7/18星期日15第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!

2021/7/18星期日16第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!

2021/7/18星期日17第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!抗體診斷藥物分類

三類：血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑導(dǎo)向診斷藥物2021/7/18星期日18第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!鑒定病原菌的抗體試劑用單克隆抗體可以檢測(cè)出多種病毒中非常細(xì)微的株間差異；鑒定細(xì)菌的種型和亞種，這是傳統(tǒng)血清法或動(dòng)物免疫幅所做不到的，而且診斷異常準(zhǔn)確。還可以檢查出某些還尚無(wú)臨床表現(xiàn)的極小腫瘤病灶，檢測(cè)心肌梗死的位置和面積，為有效治療提供方便。2021/7/18星期日19第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!診斷血清的制備步驟制備細(xì)菌抗原：細(xì)菌接種、培養(yǎng)、收集菌苔、制成菌液；免疫動(dòng)物和制備抗體血清：動(dòng)物有家兔、馬、羊、豚鼠；免疫途徑：靜脈、腹腔、皮下。接種次數(shù)3～7次，每次間隔3～4天，末次注射后6～8天取血樣測(cè)效價(jià)，達(dá)到要求，即可采血，離心分離血清。診斷血清的診斷方法：直接凝集反應(yīng)2021/7/18星期日20第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動(dòng)血凝診斷試劑

2021/7/18星期日21第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!抗ABO血型系統(tǒng)血清按照人紅細(xì)胞帶有的A或B種凝集原，可將血型分為A、B、AB和O型4種。ABO血型抗血清的制備：1、人源性ABO血型抗血清是采集健康獻(xiàn)血人的血液，凝固后，置4度過(guò)夜，使冷抗體吸附在血塊上一起除掉。2、動(dòng)物源性ABO血型抗血清是用人血型物質(zhì)A和B免疫馬得到的。3、單克隆抗體是應(yīng)用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)抗A或抗B血清。血型鑒定的方法：玻片直接凝集法。

2021/7/18星期日22第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑給抗體標(biāo)記放射性核素、熒光素或酶活性，能將抗原抗體反應(yīng)放大，使常規(guī)不能觀察的反應(yīng)得以顯現(xiàn)，可對(duì)微量抗體進(jìn)行定性定量測(cè)定，靈敏度高。結(jié)合顯微鏡技術(shù)，還可對(duì)抗原物質(zhì)作出組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)的定位測(cè)定。除臨床診斷外，還能為探討發(fā)病機(jī)制提供手段。2021/7/18星期日23第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!免疫酶抗體診斷試劑用酶標(biāo)記抗體來(lái)檢測(cè)抗原，有免疫酶染法和酶免疫測(cè)定。目前有：HBsAg酶標(biāo)診斷試劑、HBeAg酶標(biāo)診斷試劑、HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標(biāo)診斷試劑、測(cè)定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)抗體診斷試劑、甲胎蛋白（AFP）酶標(biāo)抗體診斷試劑、癌胚抗原（CEA）的酶標(biāo)抗體診斷試劑。2021/7/18星期日24第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!導(dǎo)向診斷藥物以抗體為載體的導(dǎo)向診斷藥物的研究比導(dǎo)向治療更接近臨床應(yīng)用階段。放射性免疫顯像的優(yōu)點(diǎn)：在體內(nèi)有確切定位腫瘤的作用；在體內(nèi)可檢出0.5厘米大小的病灶；小分子抗體容易到達(dá)腫瘤部位；抗體在腫瘤部位可保留6-9日；能觀察抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。2021/7/18星期日25第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!放射性核素標(biāo)記的抗體治療藥物抗體作為放射性核素的導(dǎo)向載體。操作簡(jiǎn)單、用量小，且能觀察到藥物在體內(nèi)的分布和藥物動(dòng)力學(xué)。放射性標(biāo)記的抗體有較大的殺傷范圍，有利于克服腫瘤表面抗原的異質(zhì)性，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷也不依賴抗原抗體結(jié)合后的吸收作用，由于分子量小，容易穿透到達(dá)腫瘤部位。

2021/7/18星期日26第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性腫瘤細(xì)胞對(duì)抗原藥物可產(chǎn)生多藥耐藥性（MDR）。MDR是由基因調(diào)控的，其編碼蛋白稱為P糖蛋白，其中P170是與腫瘤耐藥相關(guān)的主要蛋白，由Mdr1基因編碼，1280氨基酸殘基，分子量170K。認(rèn)為P蛋白是ATP酶依賴性藥泵，藥物進(jìn)入細(xì)胞后與P蛋白結(jié)合，利用ATP水解釋放的能量將藥物泵出胞外，使胞內(nèi)藥物蓄積減少，因而產(chǎn)生耐藥性。2021/7/18星期日27第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!免疫毒素的制備

來(lái)源：主要是細(xì)菌毒素和植物毒素。載體種類：小分子抗體FV和SCFV；細(xì)胞生長(zhǎng)因子可與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合；激素，可識(shí)別細(xì)胞表面的受體；CD4可識(shí)別HIV表達(dá)的糖蛋白。先克隆出細(xì)胞基因，再利用基因重組技術(shù)去除毒素中非特異性結(jié)合部位基因，經(jīng)過(guò)改造的毒素基因再與載體基因的互補(bǔ)DNA重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達(dá)，形成融合蛋白，再經(jīng)純化可得到重組的免疫毒素。2021/7/18星期日28第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!單克隆抗體生產(chǎn)工藝實(shí)例

抗HBsAg的單克隆抗體生產(chǎn)工藝抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)單克隆抗體是專一性識(shí)別HBsAg的單一抗體，能與HBsAg產(chǎn)生免疫反應(yīng)。臨床上用于檢測(cè)乙型肝炎病毒的感染并用于生產(chǎn)預(yù)防乙肝的免疫制劑。目前生產(chǎn)抗HBsAg的單克隆抗體技術(shù)有基因工程與細(xì)胞工程。2021/7/18星期日29第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!工藝流程

大鼠骨髓瘤細(xì)胞免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞融合混合物雜種細(xì)胞混合物雜交瘤克隆系細(xì)胞種質(zhì)培養(yǎng)液粗制McAb層析液濃縮液McAb精品2021/7/18星期日30第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!

飼養(yǎng)細(xì)胞制備：

在細(xì)胞融合前2～3天，取健康大鼠處死，向腹腔內(nèi)注入10mlDMEM培養(yǎng)液．輕壓腹腔使細(xì)胞懸浮，打開(kāi)腹壁皮膚，暴露腹膜，提起腹膜中心，插入注射針頭，吸出全部細(xì)胞懸液，500g離心5min，用pH7.4，0.1mol／L磷酸緩沖液洗滌2-3次，收集細(xì)胞，用含10％小牛血清、100U／ml青霉素和鏈霉素及HAT的DMEM培養(yǎng)液制成106細(xì)胞／ml懸浮液，使用24孔板時(shí)，每孔加0.1ml，當(dāng)使用96孔板時(shí)，則制成2x105細(xì)胞／ml的懸浮液，每孔加0.1m!，然后置37℃的CO，培養(yǎng)箱中溫育，備用。

2021/7/18星期日31第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!

于細(xì)胞融合前處死大鼠，用碘酒棉球及酒精棉球先后對(duì)右上腹部消毒，剖開(kāi)腹部，用無(wú)菌剪刀與鑷子取出脾臟，用pH7.4，0.1mol／L磷酸緩沖液洗去血液，在無(wú)菌燒杯或培養(yǎng)皿中切成1mm3小塊，再用磷酸緩沖液洗滌3～4次，直至澄清，傾去洗滌液，加入組織塊5～6倍體積(質(zhì)量／體積)的0.25%胰蛋白酶溶液(pH7.6—7.8)于37度保溫，消化20一40min，每10min輕搖消化瓶1次，直至組織塊松軟為止，傾去胰蛋白酶溶液，再用上述磷酸緩沖液洗滌3～5次，然后加入少量磷酸緩沖液用10ml吸管吹打分散，至大部分組織塊分散為細(xì)胞，用兩層無(wú)菌紗布過(guò)濾，未分散的組織塊再加少量磷酸緩沖液吹打和分散，合并細(xì)胞濾液，離心收集細(xì)胞并用磷酸緩沖液洗滌2—3次，然后用無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋制成細(xì)胞懸浮液，即為免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞親本，備用。2021/7/18星期日32第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!

細(xì)胞融合：

取107個(gè)IR983F細(xì)胞與108個(gè)免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞于50mi離心管中，混勻，在4度下，1500r／min離心8—10min，用巴斯德吸管小心吸去上清液，輕彈管底，使沉淀的細(xì)胞松動(dòng)，于37度水浴中保溫，并于lmin內(nèi)輕輕滴加0.8ml50%PEG4000，同時(shí)用吸管尖輕輕攪動(dòng)60～90s，然后于2min內(nèi)緩慢滴加20mlDMEM培養(yǎng)液，1500r／min離心8～10min，吸去上清液，然后再用含20%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋至50ml，制成細(xì)胞懸浮液，得細(xì)胞融合混合物。

2021/7/18星期日33第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!

抗HBsAg單克隆抗體的生產(chǎn)：

抗HBsAg的單克隆抗體可采用人工生物反應(yīng)器培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行生產(chǎn)，也可采用動(dòng)物體作為生物反應(yīng)器進(jìn)行生產(chǎn)，后者又可通過(guò)誘發(fā)實(shí)體瘤及腹水瘤進(jìn)行生產(chǎn)。

敘述腹水瘤生產(chǎn)技術(shù)：向健康的Lou／c大鼠腹腔注射1ml降植烷(Pristane)，飼養(yǎng)1—9周后，向大鼠腹腔接種5x106

個(gè)雜交瘤細(xì)胞，飼養(yǎng)9～11天后即可明顯產(chǎn)生腹水，待腹水量達(dá)到最大限度而大鼠又瀕于死亡之前時(shí)，處死動(dòng)物，用毛細(xì)管抽取腹水，一般可得50ml左右。同時(shí)也可取其血清分離抗體，此外也可不處死動(dòng)物，而是每1～3天抽取1次腹水，通常每一動(dòng)物可抽取10次以上，從而獲得更多單克隆抗體。

2021/7/18星期日34第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!抗體融合蛋白抗體的一部分被非抗體序列替代，所形成的融合蛋白具有新的特性，稱之為抗體融合蛋白。根據(jù)構(gòu)建方式的不同，抗體融合蛋白主要分為兩種形式：2021/7/18星期日35第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!四、基因工程抗體和抗體工程抗體研究的三大階段：

1890年白喉抗毒素－－多克隆抗體；

1975年雜交瘤技術(shù)－－單克隆抗體；

1994年開(kāi)始－－基因工程抗體基因工程抗體：不用人工免疫動(dòng)物和細(xì)胞融合技術(shù)，完全用基因工程技術(shù)制備人源性抗體，而且還能利用基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)技術(shù)，通過(guò)細(xì)菌發(fā)酵或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、植物大規(guī)模生產(chǎn)抗體。2021/7/18星期日36第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法

獲取目的基因抗體庫(kù)技術(shù)的載體淘篩表達(dá)與鑒定2021/7/18星期日37第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!淘篩、表達(dá)與鑒定淘篩：抗原固相化后，對(duì)噬菌粒群的吸附、洗滌和洗脫后再感染擴(kuò)增，與輔助噬菌體超感染獲得大容量次級(jí)文庫(kù)，反復(fù)使目的克隆大量擴(kuò)增。表達(dá)與鑒定：目的克隆經(jīng)過(guò)鑒定后，再導(dǎo)入感受態(tài)菌，進(jìn)行可溶性表達(dá)。2021/7/18星期日38第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁(yè)!噬菌體抗體庫(kù)的分類2021/7/18星期日39第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁(yè)!

2021/7/18星期日40第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁(yè)!噬菌體展示技術(shù)最關(guān)鍵的優(yōu)勢(shì)2021/7/18星期日41第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁(yè)!單克隆抗體雜交瘤技術(shù)和噬菌體抗體展示技術(shù)比較2021/7/18星期日42第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁(yè)!抗體在體外人源化存在的問(wèn)題操作過(guò)程復(fù)雜成本高抗體的親和力降低抗體不是人體免疫系統(tǒng)自然產(chǎn)生異源抗體與免疫系統(tǒng)的配合2021/7/18星期日43第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁(yè)!

2021/7/18星期日44第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁(yè)!

2021/7/18星期日45第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁(yè)!

2021/7/18星期日46第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁(yè)!

2021/7/18星期日47第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁(yè)!五、抗體診斷試劑抗原和抗體的特異性結(jié)合在體內(nèi)和體外都可呈現(xiàn)某種反應(yīng)。在體內(nèi)可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，可作為藥物用于治療；在體外可發(fā)生凝集或沉淀等反應(yīng)，可用已知抗體來(lái)鑒定抗原，作病原學(xué)的診斷和血型測(cè)定。2021/7/18星期日48第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁(yè)!血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑

血清學(xué)鑒定

是指用已知抗體來(lái)鑒定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌的診斷和血型鑒定。常用凝集反應(yīng)。2021/7/18星期日49第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁(yè)!常用品種和用途

診斷血清分群血清分型血清因子血清沙門氏菌屬診斷血清志賀氏菌屬診斷血清病原性大腸埃希氏菌診斷血清2021/7/18星期日50第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁(yè)!

2021/7/18星期日51第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁(yè)!妊娠診斷試劑

婦女妊娠后，血液和尿液中的HCG（humanchorionicgonadotrophin，人絨毛膜促性腺激素）含量增高，在3個(gè)月內(nèi)達(dá)到高峰。此時(shí)檢測(cè)尿液中的HCG，就可確定是否懷孕。2021/7/18星期日52第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁(yè)!

2021/7/18星期日53第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁(yè)!熒光抗體診斷試劑是用熒光色素，如異硫氰酸熒光素（FITC）、羅丹明（RB200）、藻紅素（PE）等標(biāo)記抗體蛋白，即成熒光抗體。用熒光抗體浸染含有抗原物質(zhì)的組織切片或細(xì)胞，熒光抗體就與抗原結(jié)合，在顯微鏡下成為發(fā)光的可視物，從而達(dá)到診斷和定位的目的。2021/7/18星期日54第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁(yè)!放射免疫用抗體診斷試劑

放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)建立的檢測(cè)技術(shù)。能測(cè)出ng/ml，甚至pg/ml水平的微量抗原物質(zhì)。2021/7/18星期日55第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第55頁(yè)!六、抗體治療藥物以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物研究已有20多年的歷史，已制備出百余種單克隆抗體，鑒定出數(shù)十種與腫瘤有關(guān)的抗原，受試病人超過(guò)數(shù)千例。但治療用的制劑尚沒(méi)有一種達(dá)到商品化的程度。在治療藥物中，單克隆抗體與毒素的偶聯(lián)物治療淋巴瘤效果最佳，但有效率僅30％。目前的客觀現(xiàn)實(shí)：研究進(jìn)展迅速，但未達(dá)到常規(guī)治療的應(yīng)用階段。原因：抗體相對(duì)分子量大，穿透力低，不能達(dá)到靶部位或攝取量低；鼠源性抗體的排斥反應(yīng)。2021/7/18星期日56第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第56頁(yè)!抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物

常用抗癌藥氨甲喋呤、阿霉素、絲裂霉素、環(huán)磷酰胺等，以人血清白蛋白為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的氨甲喋呤量，使體外細(xì)胞毒性提高倍。抗體類藥物的逆轉(zhuǎn)耐藥性腫瘤細(xì)胞對(duì)抗原藥物可產(chǎn)生多藥耐藥性。

2021/7/18星期日57第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第57頁(yè)!毒素偶聯(lián)的抗體藥物

免疫毒素及其換代制品

毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素。代免疫毒素是包含有A、B鏈的完整的毒素和抗體的交聯(lián)物，應(yīng)用有限，第二代免疫毒素利用抗體或抗體片段與毒素作用，在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用；第三代免疫毒素－重組免疫毒素，特異性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，滲透性好，免疫原性低，可大量制備。2021/7/18星期日58第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第58頁(yè)!免疫毒素的臨床應(yīng)用

可用于治療腫瘤、自身免疫病、并能克服組織移植排斥反應(yīng)。可單獨(dú)給藥也可包裹在脂質(zhì)體及其他微粒中給藥，在胞漿物質(zhì)代謝中發(fā)揮作用。對(duì)分子量小，滲透力強(qiáng)、效果好。

2021/7/18星期日59第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第59頁(yè)!

免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞與大鼠骨髓瘤的IR983F細(xì)胞融合技術(shù)制造抗HBsAg單克隆抗體的工藝。2021/7/18星期日60第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第60頁(yè)!工藝過(guò)程

培養(yǎng)基

大鼠骨髓瘤IR983F細(xì)胞系的培養(yǎng)基為改良的DMEM培養(yǎng)甚。是使Eagle培養(yǎng)基中15種氨基酸濃度增加l倍，8種維生素濃度增加3倍而成，用于細(xì)胞培養(yǎng)，提高了細(xì)胞生長(zhǎng)效果。其中尚需10%滅活小牛血清，1%非必需氨基酸，0.1mol／L丙酮酸鈉，1%谷氨酰胺及50mg／mI慶大霉素；雜交瘤細(xì)胞篩選系統(tǒng)用含HAT的DMEM培養(yǎng)基。

2021/7/18星期日61第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第61頁(yè)!

親本細(xì)胞準(zhǔn)備：

取對(duì)8—氮鳥(niǎo)嘌呤抗性的Lou／c大鼠非分泌型漿細(xì)胞瘤IR983F細(xì)胞，用常規(guī)方法制成細(xì)胞懸浮液，按1.5x105細(xì)胞／ml接種量接種于DMEM培養(yǎng)液中，于37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，經(jīng)常規(guī)消化分散法用DMEM培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液，即為待融合用骨髓瘤細(xì)胞親本，備用。另取HBsAg用pH7.4，0.1mol／L磷酸緩沖液溶解并稀釋成20μg／ml的溶液，加等體積福氏完全佐劑充分乳化后，取2ml注入Lou／c大鼠腹腔，2周后進(jìn)行第2次免疫，3個(gè)月后于融合前3—4天進(jìn)行加強(qiáng)免疫。2021/7/18星期日62第三章抗體制藥醫(yī)學(xué)資料6第三章-抗體制藥(二)共65頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第62頁(yè)!

固定化抗大鼠K輕鏈單抗的制備：

載體也為Sepharose4B，其活化方法與制備固定化t-PA相同。取30g活化的Sepharose4B懸浮于100ml，pH10.2，0.025mol/L硼酸緩沖液中，另取1g抗大鼠K輕鏈的McAb(MARK-1)溶于25ml硼酸緩沖液，然后加至上述已活化的Sepharose4B懸浮物中，于