干擾素的作用課件

中國科學院微生物研究所劉文軍博士生導師、教授liuwj@干擾素研究進展及臨床應用中國科學院微生物研究所干擾素研究進展及臨床應用1病毒感染后的機體反應干擾素及白介素自然殺傷細胞T細胞免疫非特異性免疫特異性免疫病毒感染后的機體反應干擾素及白介素自然殺傷細胞T細胞免疫非特2干擾素抗病毒作用干擾素抗病毒作用3人類一直沒有找到一個象對抗細菌感染一樣對抗病毒的有力武器，當時免疫學的發(fā)展促成了人類疫苗的研制成功，通過疫苗人們成功的抵御住了天花、麻疹、脊髓灰質炎的侵襲.對于流感病毒感染卻一直沒有取得很好的突破，由于流感病毒容易變種的原因，流感疫苗一直未能研發(fā)成功，但仍有很多科學家在不遺余力的進行著流感病毒疫苗及其免疫接種等相關的研究。從20世紀30年代開始，許多科學家就發(fā)現(xiàn)了在兩個以上病毒混合感染同一宿主細胞時出現(xiàn)在病毒之間的拮抗作用，也就是病毒之間的干擾現(xiàn)象。對于病毒干擾現(xiàn)象的分子機制，以及尋找引起干擾現(xiàn)象的活性物質得研究一直被科學家所關注人類一直沒有找到一個象對抗細菌感染一樣對抗病毒的有力武器，當41957年，Isaacs和Lindenmann在研究流感病毒時，先把流感病毒加溫滅活，然后與雞胚絨毛尿囊膜塊一起培養(yǎng)，把沒有吸附到細胞的滅活病毒徹底洗去，在37℃條件下幾小時之后去掉膜塊，另外加入新鮮的雞胚絨毛尿囊膜塊，37℃培養(yǎng)過夜后用活病毒進行攻擊，結果發(fā)現(xiàn)流感病毒的繁殖明顯的被抑制了這明確地說明滅活的流感病毒的侵入，可誘導細胞產(chǎn)生一種可溶性蛋白質去干繞病毒的繁殖。這種蛋白質命名為干擾素（interferon,IFN）1957年，Isaacs和Lindenmann在研究流感病毒5干擾素基因序列研究結果表明，該序列早在5億～l0億年前就存在于生命細胞的基因序列中，是生物體內一種古老的保護因子。它通過對細胞一系列其它基因組的誘導和抑制作用，調節(jié)細胞功能，防御外來物質特別是異種核酸的侵入，維持細胞的正常生理狀態(tài)。它是細胞功能的一種產(chǎn)物，對生物進化具有普遍意義干擾素基因序列研究結果表明，該序列早在5億～l0億年前就存在6干擾素是誘生蛋白，正常細胞一般不自發(fā)產(chǎn)生干擾素，只具有合成干擾素的潛能。干擾素基因處于被抑制的靜止狀態(tài)，在有誘發(fā)劑存在的條件下，便能擺脫抑制、獲得表達。利用半數(shù)細胞病變抑制法(CPEI50)測到誘導生成的干擾素活性干擾素的分子量一般在2O～100kD，一般在56℃下30min不會被滅活，-20℃下可長期保存。在pH穩(wěn)定性方面，I型干擾素具有耐酸性，在pH2．O～10．0中很穩(wěn)定。Ⅱ型干擾素不耐酸，也不耐熱，即在pH2時不穩(wěn)定，在56℃下30min會被破壞。干擾素一般由13O～17O個氨基酸組成，含17種以上的氨基酸，其中的天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸含量較高。干擾素是誘生蛋白，正常細胞一般不自發(fā)產(chǎn)生干擾素，只具有合成干7干擾素的概念及產(chǎn)生機理概念：干擾素（IFN）是病毒或其它因素如干擾素誘生劑，剌激脊椎動物組織細胞（體外或體內）產(chǎn)生的一種能干擾病毒增殖的特殊蛋白質。產(chǎn)生機理：病毒與細胞DNA中干擾素基因的“抑制物”結合，消除抑制作用，導致產(chǎn)生特異mRNA合成干擾素。干擾素被釋放以后進入另一個細胞，與細胞“作用因子約束物”結合導致產(chǎn)生干擾素。干擾素的概念及產(chǎn)生機理概念：8干擾素的種類細胞來源誘生劑Ⅰ型IFNα白細胞（主要為單核吞噬細胞）病毒，polyI-C(人工合成雙股RNA)IFNβ成纖維細胞Ⅱ型IFNγ活化的Th1細胞、CD8+CTL和NK細胞抗原或有絲分裂原干擾素的種類細胞來源誘生劑Ⅰ型IFNα白細胞（主要為單核吞噬9干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素

（1）抗病毒和抗腫瘤

1）誘導宿主細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，干擾病毒復制；

2）增強NK細胞對病毒感染細胞和腫瘤細胞殺傷；

3）促進MHC-Ⅰ類分子表達，增強CTL對病毒感染細胞和腫瘤等靶細胞的殺傷。

（2）免疫調節(jié)：與Ⅱ型干擾素類似。干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素10干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素（1）主要起免疫調節(jié)作用

1）活化巨噬細胞；

2）促進APC(s)表達MHC-Ⅱ類分子，提高抗原遞呈能力；

3）促進MHC-Ⅰ類分子表達和增強CTL細胞的殺傷活性;4）增強NK細胞的殺傷活性；

5）促進B細胞分化、增殖；

6）抑制Th2細胞分化及細胞因子合成。（2）抗病毒和抗腫瘤作用(與Ⅰ型干擾素類似)。干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素11T細胞巨噬細胞B細胞粒細胞IFNNK細胞內皮細胞T細胞lNK細胞激活提高NK細胞活性分化抑制細胞分裂抗病毒活性抑制細胞分裂抑制血細胞生成促進MHCⅠ和MHCⅡ分子表達多種細胞干擾素的作用T細胞巨噬細胞B細胞粒細胞IFNNK細胞內皮細胞T細胞12作用特點高效性非特異性發(fā)揮作用迅速抗病毒作用具有廣譜性種屬特異性作用特點高效性13干擾素抗病毒機理最初感染的細胞由于病毒核酸剌激被誘導產(chǎn)生干擾素，它透過細胞膜向外擴散并進入血液循環(huán)進入其它細胞。干擾素不能直接阻止病毒吸附、穿入或釋放，而是作用于宿主細胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白質，附著于細胞的核蛋白體上，選擇性地抑制病毒mRNA翻譯為病毒蛋白質，從而影響病毒結構蛋白和酶類的合成，使復制受到阻抑而呈現(xiàn)抗病毒的作用。干擾素抗病毒機理最初感染的細胞由于病毒核酸剌激被誘導產(chǎn)生干擾14干擾素抗病毒機理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細胞種屬特征。即某一種動物產(chǎn)生的干擾素只能保護同種屬或近緣種屬動物細胞。干擾素是一種活性很強的生物制劑，但對沒有抗原性（或抗原性很弱），故既能治療病毒性疾病，亦具有抗腫瘤和調節(jié)免疫機能的作用。干擾素抗病毒機理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細胞種屬特征15干擾素抗病毒機理干擾素抗病毒機理16人干擾素治療病毒性疾病的療效病毒病病毒病原療效慢性活動性肝炎HBV約40%患者HBe陰轉，與激素聯(lián)用可以提高療效丙型肝炎HCV約25%~50%患者ALT下降或正常艾滋病HIV抑制艾滋病患者HBV的復制；延長HIV帶毒無癥狀者發(fā)病的潛伏期;病毒性角膜炎腺病毒HSV—1縮短病程，減少復發(fā),痊愈率>90%巨細胞病毒HCMV尿毒癥消失，降低發(fā)病率普通感冒HRV縮短病程，排毒減少人干擾素治療病毒性疾病的療效病毒病病毒病原療效慢性活動性肝炎17作用機理 不是直接殺滅病毒IFN→

細胞基因→抗病毒蛋白

(蛋白激酶,磷酸二脂酶,2’-5’腺嘌呤核苷合成)

↓自身和鄰近細胞 降解病毒mRNA

抑制病毒蛋白合成抑制病毒組裝、釋放↓

抑制病毒復制中斷病毒感染；限制病毒擴散↓作用機理 不是直接殺滅病毒IFN→細胞基因→抗病18生物學活性:廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止病毒在體內擴散、促進痊愈;調節(jié)免疫功能；抑制腫瘤細胞生長；

IFN作用特點:產(chǎn)生的時間早；中斷受染細胞的病毒感染，限制病毒擴散；IFN誘導的抗病毒蛋白，只對病毒起作用，不影響宿主細胞蛋白質合成。生物學活性:廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止IFN19與抗病毒藥物的比較殘留耐藥性對機體的損傷與抗病毒藥物的比較殘留20與疫苗的比較滅活苗1、不能產(chǎn)生細胞免疫；2、有免疫空白期；3、特異性；4、必須在健康狀態(tài)，應激強。弱毒苗1、特異性；2、潛在返強威脅；3、應激強與疫苗的比較滅活苗21干擾素對于病毒的作用用干擾素處理感染藍耳病毒的豬巨噬細胞，可抑制PRRSV增殖處理Marc-145細胞后，可抑制PRRSV野毒株和細胞適應性毒株增殖豬重組干擾素可抑制感染傳染性胃腸炎冠狀病毒的豬上皮細胞和肺巨噬細胞中病毒復制豬干擾素可抑制感染豬瘟病毒的單核細胞和肺巨噬細胞的病毒復制。動物體內試驗表明，同時注射豬瘟疫苗和干擾素，可增強對豬瘟病毒的防御能力；感染TGEV的仔豬，可在腸道上皮組織中迅速產(chǎn)生抗TGEV的IFN-α。干擾素對于病毒的作用用干擾素處理感染藍耳病毒的豬巨噬細胞，可22聯(lián)合干擾素預防口蹄疫病毒感染豬干擾素α、γ均能抑制口蹄疫病毒在宿主內的增殖Ⅰ型、Ⅱ型干擾素結合起來后具有更佳的抗病毒活性，產(chǎn)生更多干擾素誘導基因（ISGs）體外實驗表明聯(lián)合干擾素能有效地保護動物，被保護的動物不會產(chǎn)生病毒NS蛋白抗體。MauroPiresMoraes,2007聯(lián)合干擾素預防口蹄疫病毒感染豬干擾素α、γ均能抑制口蹄疫病毒23干擾素提高口蹄疫疫苗的免疫效果干擾素提高口蹄疫疫苗的免疫效果24聯(lián)合干擾素抑制口蹄疫病毒血癥聯(lián)合干擾素抑制口蹄疫病毒血癥25干擾素抑制口蹄疫病毒形成的噬斑干擾素抑制口蹄疫病毒形成的噬斑26我們產(chǎn)品的優(yōu)點干擾素是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的第一病毒防御體系，可使機體在1-3周內對病毒重復感染具有抗御作用；經(jīng)過基因工程改造的重組干擾素廣譜抗病毒、增強機體免疫力的作用，混合其他細胞因子同時使用，啟動生物網(wǎng)絡，可增強對病毒的抑制作用，提高機體自身對病毒的清除能力，既可用于治療，也可用于預防。我們產(chǎn)品的優(yōu)點干擾素是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的第一病271.分離RNAsamplesAMVRTcDNA(template)mRNA2.RT-PCR3.interferongene表達載體

MCS4.clone5.蛋白表達6.純化7.劑型8.治療病毒感染基因工程干擾素的概念1.分離RNAsamplesAMVcDNA(temp28基因工程干擾素的抗病毒機理作用于機體細胞內的干擾素受體，經(jīng)信號傳導等一系列的生物化學過程，啟動基因合成抗病毒蛋白，抑制病毒多肽鏈的合成，阻斷了病毒的繁殖，使病毒不能在機體內生長、繁殖，從而起到抗病毒的作用?；蚬こ谈蓴_素的免疫增強機理增強免疫器官巨噬細胞的吞噬作用和消毀能力，調節(jié)細胞和體液免疫而達到免疫自穩(wěn)功能，降低應激反應等目的?；蚬こ谈蓴_素的抗病毒機理29干擾素對豬瘟的作用效果觀察注射干擾素：146頭發(fā)?。?8

(12%)死亡：7(38%)僵豬：2未注射干擾素：29發(fā)?。?(27%)死亡：5(63%)僵豬：3某發(fā)病豬場情況：產(chǎn)房15-20日齡仔豬，體溫40.6-412℃，腹瀉，用各類抗生素治療無效，皮膚有壞死現(xiàn)象，特別是耳尖部，部分仔豬出現(xiàn)便秘，精神不振，吃奶無力，皮毛無光澤。剖檢：全身淋巴結出血，脾臟邊緣可見梗死灶，腎臟腫大，被膜下可見數(shù)量不等針尖狀出血，病程稍長，回盲瓣可見潰瘍。經(jīng)實驗室抗原檢測和臨床解剖情況，確診為豬瘟，發(fā)病初期，十窩仔豬，共98頭，十天共死亡42頭，形成僵豬16頭，其余豬耐過。采用新生仔豬超前免疫和已生仔豬10-15頭份細胞苗緊急免疫，配合干擾素，在免疫后4-5天注射1-1.5ml，間隔一周再注一次的方法。干擾素對豬瘟的作用效果觀察注射干擾素：146頭未注射干擾30干擾素對藍耳病治療效果觀察某場發(fā)病情況：生長前期豬出現(xiàn)體溫40.6-412℃，被毛粗亂，精神狀況奇差，皮膚發(fā)紅，食欲廢絕，眼簾水腫。剖檢情況：全身淋巴結以水腫為主，有少量出血，腎臟水腫，腸道輕微出血，肺部出現(xiàn)各類病變，有間質增寬、水腫，有出血性、纖維素性滲出等。經(jīng)實驗室檢測普通株及變異株均為藍耳病陽性。連續(xù)三天注射2-3ml，一周后重復注射一次，并在前二天每天注射一次頭孢噻呋納。干擾素治療組：62頭發(fā)?。凰劳觯奉^，死亡率：１１％未治療組：164發(fā)?。凰劳觯海叮?，死亡率：３７％干擾素對藍耳病治療效果觀察某場發(fā)病情況：生長前期豬出現(xiàn)體溫31產(chǎn)品介紹【規(guī)格】10支/盒，6毫升/支?！具m用范圍】斷乳仔豬母源抗體水平逐漸下降以及機體自身的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，因此在此階段，機體的抗病及免疫能力低下，容易感染各種疾病。本品適用于斷乳后仔豬保育、育肥等生長階段，能夠改善機體的總體免疫狀況，提高仔豬抗病能力和成活率，對病毒性感染具有一定的預防及治療作用，同時可減少由于換料、轉群而導致的應激反應?！居梅ê陀昧俊坑糜趧倲嗄套胸i，肌肉注射，每次注射2毫升，每7天注射1次，連續(xù)3次為1個療程。根據(jù)仔豬的健康狀況可以進行第2個療程的保健。如需要可用滅菌生理鹽水稀釋?！咀⒁馐马棥吭谑褂帽酒?2小時之內，請勿使用活疫苗，但可與滅活疫苗分部位同時注射?！举A藏】4℃冷藏保存，有效期24個月。20℃以下室溫可短期保存?！拘誀睢繜o色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3。豬保健型干擾素使用說明書產(chǎn)品介紹【規(guī)格】10支/盒，6毫升/支?！拘?2豬疫苗增強型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3?！旧飳W功能】通過與細胞受體的作用，產(chǎn)生相關細胞因子及白介素，提高免疫器官巨噬細胞的吞噬作用和抗原遞呈能力，提高自然殺傷細胞對于病原體的殺傷作用，加強免疫細胞對于疫苗的免疫反應?！疽?guī)格】10支/盒，6毫升/支。【適用范圍】本品可與豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病等多種疫苗聯(lián)合使用，強化疫苗免疫效果，改善機體的總體免疫水平，提高機體的抗病能力。同時可減少由于換料、轉群而導致的應激反應?！居梅ê陀昧俊考∪庾⑸?，每50公斤體重每次注射2毫升干擾素。滅活疫苗可與干擾素分部位同時注射，活疫苗需在干擾素注射72小時后使用。如需要稀釋可用滅菌生理鹽水?！咀⒁馐马棥吭谑褂帽酒?2小時之內，請勿使用活疫苗?！举A藏】4℃冷藏保存，有效期24個月。20℃以下室溫可短期保存。豬疫苗增強型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值33豬抗病毒型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3?！旧飳W功能】作用于機體細胞表面的干擾素受體，經(jīng)信號傳導等一系列的生物化學過程，啟動有關基因合成抗病毒蛋白，抑制病毒多肽鏈的合成，阻斷病毒的繁殖，使病毒不能在機體內生長與繁殖，從而起到抗病毒的作用。【規(guī)格】10支/盒，6毫升/支。【適用范圍】本品適用于豬的各個生長階段，對豬病毒性流行性腹瀉、豬流感、豬水皰病、豬輪狀病毒感染、豬傳染性胃腸炎及臨床常見的豬傳染性病毒病具有一定的預防和治療效果，感染潛伏期或感染初期應用效果尤佳。同時可減小由于換料、轉群引起的應激反應，提高機體免疫力。【用法和用量】肌肉注射，每50公斤體重每次注射2毫升，每天1次，連續(xù)3次為1個療程。重癥加量，連續(xù)使用1~2個療程。如需要稀釋可用滅菌生理鹽水?！咀⒁馐马棥吭谑褂帽酒?2小時之內，請勿使用活疫苗，但可與滅活疫苗分部位同時注射?！举A藏】4℃冷藏保存，有效期24個月。20℃以下室溫可短期保存。豬抗病毒型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值634明慧豬場概況哺乳仔豬2400頭保育豬3600頭育肥豬6000頭基礎母豬1520頭后備豬480頭干擾素臨床試驗河北省最大的民營企業(yè)現(xiàn)存欄豬4萬頭，年出欄6萬頭其中北區(qū)豬場存欄豬14000頭，包括：明慧豬場概況哺乳仔豬2400頭干擾素臨床試驗河北省最大的民營350-30日30-75日哺乳仔豬保育豬育肥豬干擾素40萬單位（共3個療程，10天為1個療程）預防治療前癥狀以發(fā)熱癥狀為主，伴有精神沉郁、食欲不振等。預防治療組使用干擾素后精神明顯好轉，食欲增加。分組試驗豬頭數(shù)死亡豬頭數(shù)死亡率殘豬頭數(shù)預防組1750304%0預防組2750395.33%0未預防組75020126.67%98干擾素仔豬保健臨床試驗結果3040500-30日30-75日哺乳仔豬保育豬育肥豬干擾素40萬單36與疫苗聯(lián)用，能起到彌補免疫空白期、緩解疫苗應激反應、增強免疫效果的作用；無藥殘、無副作用；不產(chǎn)生耐藥性、可反復使用；可與各種獸藥聯(lián)合使用；中科院微生物所先進工藝技術：最先進的表達、純化和分子改造技術，可以大批量生產(chǎn)高活性、高純度的重組干擾素。與疫苗聯(lián)用，能起到彌補免疫空白期、緩解疫苗應激反應、增強免疫37干擾素治療腎型傳染性支氣管炎（河北邯鄲某雞場)臨床癥狀發(fā)病初期病雞表現(xiàn)為精神不振，食欲減退，甩鼻，咳嗽，張口呼吸，體溫升高，飲水量增加。2-3天后癥狀似乎有所好轉（典型的腎型傳染性支氣管炎爆發(fā)前的表面恢復期），然后雞群突然精神沉郁、喘息、怕冷，氣管出現(xiàn)明顯啰音，同時伴有腹瀉；發(fā)病中期嚴重脫水，病雞多拱背、呆立、厭食，重癥者食欲廢絕，冠髯發(fā)紫，羽毛松亂，翅下垂，排出大量白色石灰水樣稀糞。因長期脫水，出現(xiàn)腳趾干癟，不能站立，很快因脫水和代謝紊亂而衰竭死亡。該場技術人員經(jīng)過診斷判定為腎型傳染性支氣管炎。治療方案選用我們的干擾素，每瓶加水（水溫不超過20度）稀釋后給500羽雞飲用，每天一次，1-2小時內飲完，連用4天。并從第2天開始在水中加入黃芪多糖和電解多維（與干擾素分開飲用），連用3天。治療效果用藥第二天，雞群精神好轉，體溫下降，呼吸道癥狀減輕，拉稀減少，采食量有所增加。第三天食欲上升，死亡減少，5~7天后恢復正常，一般7~10天可基本康復。干擾素治療腎型傳染性支氣管炎（河北邯鄲某雞場)臨床癥狀382007年12月16日，河北石家莊某村民王某飼養(yǎng)的3000只肉雞開始發(fā)病，羽毛松亂，精神不振，聚堆，厭食，拉白色或水樣糞便，經(jīng)解剖三只病死雞發(fā)現(xiàn)：胸肌肉呈斑塊狀或刷狀出血，腺胃、肌胃交界處有暗紅色出血帶，法氏囊明顯腫脹，如花生米粒大，呈暗紅色，切開后外翻明顯，法氏囊漿膜面有膠凍狀淺黃色滲出液，縱紋增厚，疑似法氏囊炎。當即用干擾素飲水服用，并配以先鋒輔助治療連用三天，第三天雞群基本恢復正常2007年12月16日，河北石家莊某村民王某飼養(yǎng)的3000只39更廣譜的抗病毒作用，對DNA和RNA病毒都有很好的殺傷效果；此外還具有增強機體免疫等良好的生物活性是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的防御體系，可在短時間內使機體處于抗病毒狀態(tài)，使機體在1-3周內對病毒重復感染具有抗御作用可與滅活疫苗、抗體類藥物聯(lián)用，能起到彌補免疫空白期、緩解疫苗應激反應、增強免疫效果的作用無藥殘、無副作用，不產(chǎn)生耐藥性、可反復使用，是新型的“綠色獸藥”基因工程干擾素優(yōu)點更廣譜的抗病毒作用，對DNA和RNA病毒都有很好的殺傷效果；40中國科學院微生物研究所劉文軍博士生導師、教授liuwj@干擾素研究進展及臨床應用中國科學院微生物研究所干擾素研究進展及臨床應用41病毒感染后的機體反應干擾素及白介素自然殺傷細胞T細胞免疫非特異性免疫特異性免疫病毒感染后的機體反應干擾素及白介素自然殺傷細胞T細胞免疫非特42干擾素抗病毒作用干擾素抗病毒作用43人類一直沒有找到一個象對抗細菌感染一樣對抗病毒的有力武器，當時免疫學的發(fā)展促成了人類疫苗的研制成功，通過疫苗人們成功的抵御住了天花、麻疹、脊髓灰質炎的侵襲.對于流感病毒感染卻一直沒有取得很好的突破，由于流感病毒容易變種的原因，流感疫苗一直未能研發(fā)成功，但仍有很多科學家在不遺余力的進行著流感病毒疫苗及其免疫接種等相關的研究。從20世紀30年代開始，許多科學家就發(fā)現(xiàn)了在兩個以上病毒混合感染同一宿主細胞時出現(xiàn)在病毒之間的拮抗作用，也就是病毒之間的干擾現(xiàn)象。對于病毒干擾現(xiàn)象的分子機制，以及尋找引起干擾現(xiàn)象的活性物質得研究一直被科學家所關注人類一直沒有找到一個象對抗細菌感染一樣對抗病毒的有力武器，當441957年，Isaacs和Lindenmann在研究流感病毒時，先把流感病毒加溫滅活，然后與雞胚絨毛尿囊膜塊一起培養(yǎng)，把沒有吸附到細胞的滅活病毒徹底洗去，在37℃條件下幾小時之后去掉膜塊，另外加入新鮮的雞胚絨毛尿囊膜塊，37℃培養(yǎng)過夜后用活病毒進行攻擊，結果發(fā)現(xiàn)流感病毒的繁殖明顯的被抑制了這明確地說明滅活的流感病毒的侵入，可誘導細胞產(chǎn)生一種可溶性蛋白質去干繞病毒的繁殖。這種蛋白質命名為干擾素（interferon,IFN）1957年，Isaacs和Lindenmann在研究流感病毒45干擾素基因序列研究結果表明，該序列早在5億～l0億年前就存在于生命細胞的基因序列中，是生物體內一種古老的保護因子。它通過對細胞一系列其它基因組的誘導和抑制作用，調節(jié)細胞功能，防御外來物質特別是異種核酸的侵入，維持細胞的正常生理狀態(tài)。它是細胞功能的一種產(chǎn)物，對生物進化具有普遍意義干擾素基因序列研究結果表明，該序列早在5億～l0億年前就存在46干擾素是誘生蛋白，正常細胞一般不自發(fā)產(chǎn)生干擾素，只具有合成干擾素的潛能。干擾素基因處于被抑制的靜止狀態(tài)，在有誘發(fā)劑存在的條件下，便能擺脫抑制、獲得表達。利用半數(shù)細胞病變抑制法(CPEI50)測到誘導生成的干擾素活性干擾素的分子量一般在2O～100kD，一般在56℃下30min不會被滅活，-20℃下可長期保存。在pH穩(wěn)定性方面，I型干擾素具有耐酸性，在pH2．O～10．0中很穩(wěn)定。Ⅱ型干擾素不耐酸，也不耐熱，即在pH2時不穩(wěn)定，在56℃下30min會被破壞。干擾素一般由13O～17O個氨基酸組成，含17種以上的氨基酸，其中的天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸含量較高。干擾素是誘生蛋白，正常細胞一般不自發(fā)產(chǎn)生干擾素，只具有合成干47干擾素的概念及產(chǎn)生機理概念：干擾素（IFN）是病毒或其它因素如干擾素誘生劑，剌激脊椎動物組織細胞（體外或體內）產(chǎn)生的一種能干擾病毒增殖的特殊蛋白質。產(chǎn)生機理：病毒與細胞DNA中干擾素基因的“抑制物”結合，消除抑制作用，導致產(chǎn)生特異mRNA合成干擾素。干擾素被釋放以后進入另一個細胞，與細胞“作用因子約束物”結合導致產(chǎn)生干擾素。干擾素的概念及產(chǎn)生機理概念：48干擾素的種類細胞來源誘生劑Ⅰ型IFNα白細胞（主要為單核吞噬細胞）病毒，polyI-C(人工合成雙股RNA)IFNβ成纖維細胞Ⅱ型IFNγ活化的Th1細胞、CD8+CTL和NK細胞抗原或有絲分裂原干擾素的種類細胞來源誘生劑Ⅰ型IFNα白細胞（主要為單核吞噬49干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素

（1）抗病毒和抗腫瘤

1）誘導宿主細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，干擾病毒復制；

2）增強NK細胞對病毒感染細胞和腫瘤細胞殺傷；

3）促進MHC-Ⅰ類分子表達，增強CTL對病毒感染細胞和腫瘤等靶細胞的殺傷。

（2）免疫調節(jié)：與Ⅱ型干擾素類似。干擾素的作用一、Ⅰ型干擾素50干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素（1）主要起免疫調節(jié)作用

1）活化巨噬細胞；

2）促進APC(s)表達MHC-Ⅱ類分子，提高抗原遞呈能力；

3）促進MHC-Ⅰ類分子表達和增強CTL細胞的殺傷活性;4）增強NK細胞的殺傷活性；

5）促進B細胞分化、增殖；

6）抑制Th2細胞分化及細胞因子合成。（2）抗病毒和抗腫瘤作用(與Ⅰ型干擾素類似)。干擾素的作用二、Ⅱ型干擾素51T細胞巨噬細胞B細胞粒細胞IFNNK細胞內皮細胞T細胞lNK細胞激活提高NK細胞活性分化抑制細胞分裂抗病毒活性抑制細胞分裂抑制血細胞生成促進MHCⅠ和MHCⅡ分子表達多種細胞干擾素的作用T細胞巨噬細胞B細胞粒細胞IFNNK細胞內皮細胞T細胞52作用特點高效性非特異性發(fā)揮作用迅速抗病毒作用具有廣譜性種屬特異性作用特點高效性53干擾素抗病毒機理最初感染的細胞由于病毒核酸剌激被誘導產(chǎn)生干擾素，它透過細胞膜向外擴散并進入血液循環(huán)進入其它細胞。干擾素不能直接阻止病毒吸附、穿入或釋放，而是作用于宿主細胞，使其產(chǎn)生抗病毒蛋白質，附著于細胞的核蛋白體上，選擇性地抑制病毒mRNA翻譯為病毒蛋白質，從而影響病毒結構蛋白和酶類的合成，使復制受到阻抑而呈現(xiàn)抗病毒的作用。干擾素抗病毒機理最初感染的細胞由于病毒核酸剌激被誘導產(chǎn)生干擾54干擾素抗病毒機理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細胞種屬特征。即某一種動物產(chǎn)生的干擾素只能保護同種屬或近緣種屬動物細胞。干擾素是一種活性很強的生物制劑，但對沒有抗原性（或抗原性很弱），故既能治療病毒性疾病，亦具有抗腫瘤和調節(jié)免疫機能的作用。干擾素抗病毒機理干擾素具有廣譜抗病毒作用，又具有細胞種屬特征55干擾素抗病毒機理干擾素抗病毒機理56人干擾素治療病毒性疾病的療效病毒病病毒病原療效慢性活動性肝炎HBV約40%患者HBe陰轉，與激素聯(lián)用可以提高療效丙型肝炎HCV約25%~50%患者ALT下降或正常艾滋病HIV抑制艾滋病患者HBV的復制；延長HIV帶毒無癥狀者發(fā)病的潛伏期;病毒性角膜炎腺病毒HSV—1縮短病程，減少復發(fā),痊愈率>90%巨細胞病毒HCMV尿毒癥消失，降低發(fā)病率普通感冒HRV縮短病程，排毒減少人干擾素治療病毒性疾病的療效病毒病病毒病原療效慢性活動性肝炎57作用機理 不是直接殺滅病毒IFN→

細胞基因→抗病毒蛋白

(蛋白激酶,磷酸二脂酶,2’-5’腺嘌呤核苷合成)

↓自身和鄰近細胞 降解病毒mRNA

抑制病毒蛋白合成抑制病毒組裝、釋放↓

抑制病毒復制中斷病毒感染；限制病毒擴散↓作用機理 不是直接殺滅病毒IFN→細胞基因→抗病58生物學活性:廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止病毒在體內擴散、促進痊愈;調節(jié)免疫功能；抑制腫瘤細胞生長；

IFN作用特點:產(chǎn)生的時間早；中斷受染細胞的病毒感染，限制病毒擴散；IFN誘導的抗病毒蛋白，只對病毒起作用，不影響宿主細胞蛋白質合成。生物學活性:廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止IFN59與抗病毒藥物的比較殘留耐藥性對機體的損傷與抗病毒藥物的比較殘留60與疫苗的比較滅活苗1、不能產(chǎn)生細胞免疫；2、有免疫空白期；3、特異性；4、必須在健康狀態(tài)，應激強。弱毒苗1、特異性；2、潛在返強威脅；3、應激強與疫苗的比較滅活苗61干擾素對于病毒的作用用干擾素處理感染藍耳病毒的豬巨噬細胞，可抑制PRRSV增殖處理Marc-145細胞后，可抑制PRRSV野毒株和細胞適應性毒株增殖豬重組干擾素可抑制感染傳染性胃腸炎冠狀病毒的豬上皮細胞和肺巨噬細胞中病毒復制豬干擾素可抑制感染豬瘟病毒的單核細胞和肺巨噬細胞的病毒復制。動物體內試驗表明，同時注射豬瘟疫苗和干擾素，可增強對豬瘟病毒的防御能力；感染TGEV的仔豬，可在腸道上皮組織中迅速產(chǎn)生抗TGEV的IFN-α。干擾素對于病毒的作用用干擾素處理感染藍耳病毒的豬巨噬細胞，可62聯(lián)合干擾素預防口蹄疫病毒感染豬干擾素α、γ均能抑制口蹄疫病毒在宿主內的增殖Ⅰ型、Ⅱ型干擾素結合起來后具有更佳的抗病毒活性，產(chǎn)生更多干擾素誘導基因（ISGs）體外實驗表明聯(lián)合干擾素能有效地保護動物，被保護的動物不會產(chǎn)生病毒NS蛋白抗體。MauroPiresMoraes,2007聯(lián)合干擾素預防口蹄疫病毒感染豬干擾素α、γ均能抑制口蹄疫病毒63干擾素提高口蹄疫疫苗的免疫效果干擾素提高口蹄疫疫苗的免疫效果64聯(lián)合干擾素抑制口蹄疫病毒血癥聯(lián)合干擾素抑制口蹄疫病毒血癥65干擾素抑制口蹄疫病毒形成的噬斑干擾素抑制口蹄疫病毒形成的噬斑66我們產(chǎn)品的優(yōu)點干擾素是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的第一病毒防御體系，可使機體在1-3周內對病毒重復感染具有抗御作用；經(jīng)過基因工程改造的重組干擾素廣譜抗病毒、增強機體免疫力的作用，混合其他細胞因子同時使用，啟動生物網(wǎng)絡，可增強對病毒的抑制作用，提高機體自身對病毒的清除能力，既可用于治療，也可用于預防。我們產(chǎn)品的優(yōu)點干擾素是目前所知機體發(fā)揮抗病毒作用最快的第一病671.分離RNAsamplesAMVRTcDNA(template)mRNA2.RT-PCR3.interferongene表達載體

MCS4.clone5.蛋白表達6.純化7.劑型8.治療病毒感染基因工程干擾素的概念1.分離RNAsamplesAMVcDNA(temp68基因工程干擾素的抗病毒機理作用于機體細胞內的干擾素受體，經(jīng)信號傳導等一系列的生物化學過程，啟動基因合成抗病毒蛋白，抑制病毒多肽鏈的合成，阻斷了病毒的繁殖，使病毒不能在機體內生長、繁殖，從而起到抗病毒的作用?；蚬こ谈蓴_素的免疫增強機理增強免疫器官巨噬細胞的吞噬作用和消毀能力，調節(jié)細胞和體液免疫而達到免疫自穩(wěn)功能，降低應激反應等目的。基因工程干擾素的抗病毒機理69干擾素對豬瘟的作用效果觀察注射干擾素：146頭發(fā)?。?8

(12%)死亡：7(38%)僵豬：2未注射干擾素：29發(fā)?。?(27%)死亡：5(63%)僵豬：3某發(fā)病豬場情況：產(chǎn)房15-20日齡仔豬，體溫40.6-412℃，腹瀉，用各類抗生素治療無效，皮膚有壞死現(xiàn)象，特別是耳尖部，部分仔豬出現(xiàn)便秘，精神不振，吃奶無力，皮毛無光澤。剖檢：全身淋巴結出血，脾臟邊緣可見梗死灶，腎臟腫大，被膜下可見數(shù)量不等針尖狀出血，病程稍長，回盲瓣可見潰瘍。經(jīng)實驗室抗原檢測和臨床解剖情況，確診為豬瘟，發(fā)病初期，十窩仔豬，共98頭，十天共死亡42頭，形成僵豬16頭，其余豬耐過。采用新生仔豬超前免疫和已生仔豬10-15頭份細胞苗緊急免疫，配合干擾素，在免疫后4-5天注射1-1.5ml，間隔一周再注一次的方法。干擾素對豬瘟的作用效果觀察注射干擾素：146頭未注射干擾70干擾素對藍耳病治療效果觀察某場發(fā)病情況：生長前期豬出現(xiàn)體溫40.6-412℃，被毛粗亂，精神狀況奇差，皮膚發(fā)紅，食欲廢絕，眼簾水腫。剖檢情況：全身淋巴結以水腫為主，有少量出血，腎臟水腫，腸道輕微出血，肺部出現(xiàn)各類病變，有間質增寬、水腫，有出血性、纖維素性滲出等。經(jīng)實驗室檢測普通株及變異株均為藍耳病陽性。連續(xù)三天注射2-3ml，一周后重復注射一次，并在前二天每天注射一次頭孢噻呋納。干擾素治療組：62頭發(fā)??；死亡７頭，死亡率：１１％未治療組：164發(fā)??；死亡：６０，死亡率：３７％干擾素對藍耳病治療效果觀察某場發(fā)病情況：生長前期豬出現(xiàn)體溫71產(chǎn)品介紹【規(guī)格】10支/盒，6毫升/支?！具m用范圍】斷乳仔豬母源抗體水平逐漸下降以及機體自身的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，因此在此階段，機體的抗病及免疫能力低下，容易感染各種疾病。本品適用于斷乳后仔豬保育、育肥等生長階段，能夠改善機體的總體免疫狀況，提高仔豬抗病能力和成活率，對病毒性感染具有一定的預防及治療作用，同時可減少由于換料、轉群而導致的應激反應。【用法和用量】用于剛斷奶仔豬，肌肉注射，每次注射2毫升，每7天注射1次，連續(xù)3次為1個療程。根據(jù)仔豬的健康狀況可以進行第2個療程的保健。如需要可用滅菌生理鹽水稀釋?！咀⒁馐马棥吭谑褂帽酒?2小時之內，請勿使用活疫苗，但可與滅活疫苗分部位同時注射。【貯藏】4℃冷藏保存，有效期24個月。20℃以下室溫可短期保存?！拘誀睢繜o色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3。豬保健型干擾素使用說明書產(chǎn)品介紹【規(guī)格】10支/盒，6毫升/支。【性72豬疫苗增強型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3。【生物學功能】通過與細胞受體的作用，產(chǎn)生相關細胞因子及白介素，提高免疫器官巨噬細胞的吞噬作用和抗原遞呈能力，提高自然殺傷細胞對于病原體的殺傷作用，加強免疫細胞對于疫苗的免疫反應?！疽?guī)格】10支/盒，6毫升/支。【適用范圍】本品可與豬瘟、豬口蹄疫、豬藍耳病等多種疫苗聯(lián)合使用，強化疫苗免疫效果，改善機體的總體免疫水平，提高機體的抗病能力。同時可減少由于換料、轉群而導致的應激反應?！居梅ê陀昧俊考∪庾⑸?，每50公斤體重每次注射2毫升干擾素。滅活疫苗可與干擾素分部位同時注射，活疫苗需在干擾素注射72小時后使用。如需要稀釋可用滅菌生理鹽水?！咀⒁馐马棥吭谑褂帽酒?2小時之內，請勿使用活疫苗?！举A藏】4℃冷藏保存，有效期24個月。20℃以下室溫可短期保存。豬疫苗增強型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值73豬抗病毒型干擾素使用說明書【性狀】無色液體，pH值6.0~7.0，滲透壓比為1.0~1.3。【生物學功能】作用于機體細胞表面的干擾素受體，經(jīng)信號傳導等一系列的生物化學過程，啟動有關基因合成抗病毒蛋白，抑制病毒多肽鏈的合成，阻斷病毒的繁殖，使病毒不能在機體內生長與繁殖，從而起到抗病毒的作用?！疽?guī)格】10支/盒，6毫升/支?！具m用范圍】本品適用于豬的各個生長階段，對豬病毒性流行性腹瀉、豬流感、豬水皰病、豬輪狀病毒感染、豬傳染性胃腸炎及臨床常見的豬傳染性病毒病具有一定的預防和治療效果，感染潛伏期或感染初期應用效果尤佳。同時可減小由于換料、轉群引起的應激反應，提高機體免疫力?！居梅ê陀昧俊考∪庾⑸?，每50公斤體重每次注射2毫升，每天1次，連續(xù)3次為1個療程。重