電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用 (2)課件

電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用使用范圍和檢測原理電泳技術(shù)就是利用在電場的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小,形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對樣品進行分離,鑒定或提純的技術(shù).在生化檢測中,主要用于分離各類蛋白分子.發(fā)展歷程1809年俄國科學(xué)家列伊斯首先發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1937年瑞典科學(xué)家Tiselius(提塞留斯）建立了界面電泳技術(shù),并首次證明了血清是由白蛋白及α,β,γ球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學(xué)獎.1950年后,區(qū)帶電泳從發(fā)展到成熟.1980年以來,毛細管電泳逐漸受到重視電泳技術(shù)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)電泳分析是實驗室必備的檢測手段,可全面精確,描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌.對疾病的早期診斷,療效觀察及預(yù)后判斷具有非常重要的臨床價值.蛋白的電泳檢測根據(jù)使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測到不同類型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(運送脂類)

各種酶類(CK-MB，LDH) 血紅蛋白(地中海貧血）尿蛋白（選擇性蛋白尿，非選擇性蛋白尿）電泳技術(shù)在臨檢中的應(yīng)用急,慢性炎癥造血系統(tǒng)疾病:多發(fā)性骨髓瘤,巨免疫球蛋白血癥腎臟疾病肝臟疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病:多發(fā)性硬化癥遺傳性疾病:地中海貧血代謝性疾病:糖尿病心血管疾病:心梗,動脈粥樣硬化惡性腫瘤正確解釋電泳結(jié)果

為臨床對疾病的判斷提供可靠參考臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測之一,基于蛋白含量的變化,有助于我們對以下疾病的篩查:

炎癥 營養(yǎng)不良 肺氣腫

電泳結(jié)果的臨床應(yīng)用及常見電泳結(jié)果分析電泳檢測電泳區(qū)帶分析

雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現(xiàn)附屬條帶可能是由以下原因造成:遺傳性雙白蛋暫時性的雙白蛋白血癥可能是由于藥物刺激導(dǎo)致的急性胰腺炎導(dǎo)致的雙白蛋白血癥:大量的胰酶的出現(xiàn)可以導(dǎo)致白蛋白降解白蛋白區(qū)帶雙白蛋白血癥在下列情況中白蛋白會出現(xiàn)增加: -脫水癥狀

-血液濃縮

-白蛋白注射A1AT不同的基因型A1AT等電聚焦電泳Alpha2globulins(α2球蛋白區(qū)帶)主要有α2巨球蛋白，結(jié)合珠蛋白下列情況中出現(xiàn)下降:

-肝功能不全 -血管內(nèi)溶血

出現(xiàn)兩個條帶: -溶血標本(結(jié)合珠蛋白-血紅蛋白復(fù)合體)

-結(jié)合珠蛋白不同基因型 -出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白(帶有大量負電荷)

*Alpha2條帶在電泳圖譜中,是一個很特殊的條帶.因為這一條帶中含有五種蛋白:HDL,Haptoglobin（結(jié)合珠蛋白）,Alpha2Macroglobulin,Ceruloplasmin（銅藍蛋白）andGcglobulin.由于結(jié)合珠蛋白有不同的基因表現(xiàn)型,增加了這一條帶的復(fù)雜程度.結(jié)合珠蛋白非?？拷麬lpha1條帶;出現(xiàn)溶血時結(jié)合珠蛋白的遷移率會發(fā)生改變.同時,由于HDL的含量或者是存放過久的標本,HDL的遷移速度可能會更快.下列情況下Alpha2區(qū)域會出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-炎癥癥狀 -腎病綜合征 -出現(xiàn)游離輕鏈

腎病綜合征Betaglobulins(β球蛋白區(qū)帶)主要有血紅素結(jié)合蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，β脂蛋白，補體C3、C4,纖維蛋白原在下列情況下會出現(xiàn)下降:

-肝功能不全

-C3長期缺乏或者C3代謝過快

在下列情況下會出現(xiàn)兩個條帶:

-長期存放的標本或者是高膽固醇的標本,LDL有不同的遷移率;從而導(dǎo)致LDL電泳是偏移Beta位置

Beta球蛋白在下列情況下會出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-膽管阻塞

-腎病綜合征

-肝硬化

-缺鐵性貧血

-血球蛋白異常

-高脂蛋白血癥

-大量溶血

酒精性肝硬化中的β-γ

橋出現(xiàn)在b

區(qū)域的單克隆免疫球蛋白游離輕鏈病Gammaglobulins(γ免疫球蛋白區(qū)帶)主要有IgA,IgM,IgG,CRP在下列情況中會出現(xiàn)下降現(xiàn)象:

-部分的或全部的免疫缺陷

-免疫抑制治療

-游離輕鏈病或非分泌型骨髓瘤低免疫球蛋白血癥多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎癥

-肝硬化

-亞急性和慢性感染檢測到其他條帶

-單克隆免疫球蛋白

-寡克隆免疫球蛋白

高免疫球蛋白血癥血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-r橋與下列各類疾病相關(guān)的寡克隆免疫球蛋白(多個條帶):-自身免疫病-先天性免疫缺陷癥-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV(巨細胞病毒),EBV,…)-免疫抑制治療Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)血清蛋白電泳是

M蛋白(MonoclonalProtein)多克隆(polyclonalProtein)

寡克隆(OligoclonalProtein)

的首選檢測項目什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapathies,MG)是由于單一克隆漿細胞無限增殖產(chǎn)生的均一單克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所導(dǎo)致的一組疾病M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma(骨髓瘤）,Macroglobulinemia（巨球蛋白血癥）,Malignantlymphoma（惡性淋巴瘤）和MonoclonalGammapathies（單克隆免疫球蛋白?。┚浴癕”開頭.M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰.表1646例M蛋白類型分類型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,占整個惡性腫瘤的1%常見于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見).以往對此病認識不足，漏診、誤診可達到70%以上.隨著壽命的延長對此病認識的提高病例數(shù)顯著增加.MM臨床表現(xiàn)特點骨痛,骨骼腫塊與病理性骨折,骨質(zhì)疏松和溶骨現(xiàn)象貧血免疫功能低下,反復(fù)感染腎臟損害高鈣,高粘(血漿相對黏度6以上)高尿酸血癥表現(xiàn)MM的臨床表現(xiàn)多樣化,常常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等,延誤診治多發(fā)性骨髓瘤的免疫學(xué)特征血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細胞明顯增加無免疫活性Ig導(dǎo)致免疫功能低下多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(骨盆)多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報告(顱骨)臨床實例意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:BenignMC在法國,在對獻血者進行檢測時,會檢測到0,15%比例的單克隆免疫球蛋白攜帶者.

在老齡人群中檢測到的攜帶者比例更高(80歲以上人群).在對60到99歲人群的檢測顯示,出現(xiàn)Ig的比例從2,6%上升至19,2%.(平均值=5%)MGUSMGUS攜帶者特征:

-未出現(xiàn)臨床和影像學(xué)特征 -未出現(xiàn)不良反應(yīng),未檢測到血鈣升高,也未出現(xiàn)腎功能衰竭

-未見骨髓瘤的臨床特征 -單克隆免疫球蛋白<20g/l-其他免疫球蛋白都是正常的,同時在患者尿液中未檢測到本周氏蛋白 -單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時間的推移未發(fā)生增加現(xiàn)象 -其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時間推移而出現(xiàn)下降

在20%的情況中,MGUS將會轉(zhuǎn)化成惡性疾病(6-10years)Kylereport顯示,通過對1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟蹤監(jiān)測發(fā)現(xiàn),24%的患者最終演變成惡性的淋巴細胞增生癥(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).從檢測到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報告,這段時間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).大量報告顯示,在下列情況中,發(fā)展成為惡性淋巴細胞增生疾病的可能性很小: -單克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出現(xiàn)本周氏蛋白

-其他類型的免疫球蛋白未出現(xiàn)下降寡克隆免疫球蛋白

由于藥物原因?qū)е碌拿庖呷毕? -在器官或者骨移植之后 -自身免疫病:

(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,干燥綜合征(66%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡….)

由于細菌或病毒感染導(dǎo)致的免疫缺陷:

-病毒:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -細菌,寄生蟲感染:

(腦膜炎,腦炎,…)在一些腫瘤中:(慢性淋巴細胞性白血病CLL:29%)

在5%正常群體中(MGUS)

在多發(fā)性硬化患者中:(CSF90%)檢測結(jié)果闡述電泳的結(jié)果是以%的形式給出的,但是對于臨床診斷,結(jié)果必須要以濃度的形式給出g/L蛋白濃度出現(xiàn)異常時,必須要進行其它的補充檢測患者的隨訪

首次被發(fā)現(xiàn)的患者:

如果檢測到的異常M蛋白峰值不多,同時其他免疫球蛋白的含量未發(fā)生變化,也沒有臨床癥狀,懷疑可能是MGUS,

第一年每4至6個月對患者進行隨訪,從第二年起,每年進行一次隨訪.

已確診的患者:

如果電泳結(jié)果和先前檢測相同,利用異常峰值進行量化以便于檢測異常M蛋白的濃度是否發(fā)生變化.

這種情況下的隨訪檢測,一定要選擇相同的技術(shù)方法.

如果隨訪結(jié)果顯示出現(xiàn)異常區(qū)帶,一定要進行免疫固定電泳確認這些異常蛋白的成分.異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征血清蛋白質(zhì)的圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ1.低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑2.腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋4.急性炎癥或急性時相反應(yīng)癥N↓N↑↑N5.慢性炎癥型

↓↑↑↑6.彌漫性肝損害型↓N↓↓↑↓↑7.彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑8.M蛋白血癥型

在α-γ區(qū)帶中出現(xiàn)M蛋白峰-M區(qū)帶峰9.高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N11.蛋白質(zhì)缺陷型個別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏謝謝！免疫固定電泳

結(jié)果分析指南

在血清蛋白電泳時,檢測到異常條帶的出現(xiàn),或者是某一個條帶的蛋白出現(xiàn)異常增加

電泳結(jié)果顯示為低免疫球蛋白血癥,或者免疫球蛋白定量結(jié)果顯示可能是游離輕鏈病

尿蛋白檢測結(jié)果異常(檢測到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過血清蛋白電泳,如果有必要需要進行血清的免疫固定電泳

什么情況下必須要進行免疫固定電泳檢測?正常血清標本IgGl單克隆免疫球蛋白(近負極端)IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)IgG

k

單克隆免疫球蛋白,伴隨有k

型游離輕鏈本周氏蛋白檢測BENCEJONES蛋白檢測結(jié)果出現(xiàn)在a2區(qū)域的IgAl

出現(xiàn)兩個異常蛋白帶:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgA

l單克隆免疫球蛋白BME/FluidiltreatmentBME/Fluidiltreatment檢測結(jié)果顯示為3個IgAl:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgAl單克隆免疫球蛋白IgA

k單克隆免疫球蛋白伴隨有k

型游離