微生物實驗(第三節(jié)課)課件

微生物學(xué)實驗微生物學(xué)實驗微生物實驗的意義、研究進(jìn)展和實驗內(nèi)容一、研究內(nèi)容研究微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理生化遺傳變異、微生物與其他生物、與自然界之間的關(guān)系

機(jī)理研究：微生物適應(yīng)環(huán)境的機(jī)制鞭毛運(yùn)動的機(jī)理等是生化和分子生物學(xué)研究的重要內(nèi)容

微生物實驗的意義、研究進(jìn)展和實驗內(nèi)容一、研究內(nèi)容2.微生物與實際應(yīng)用微生物與發(fā)酵工程微生物與環(huán)境工程微生物與農(nóng)業(yè)微生物與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域微生物與食品工業(yè)2.微生物與實際應(yīng)用微生物與發(fā)酵工程二、微生物學(xué)研究進(jìn)展微生物基因組學(xué)研究（MicrobialGenomics）不可培養(yǎng)微生物（UnculturedMicroorganisms）DNA芯片（DNAChip）三域?qū)W說（Bacteria,Archae,Eucaryote）二、微生物學(xué)研究進(jìn)展三、微生物學(xué)與Nobel獎

到目前為止，幾十項Nobel生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎，化學(xué)獎都與微生物學(xué)有關(guān)參考：沈萍教授《微生物學(xué)》緒論部分

Nobel獲獎?wù)呷珪?、微生物學(xué)與Nobel獎四、如何進(jìn)行微生物學(xué)實驗

嚴(yán)肅認(rèn)真科學(xué)態(tài)度分析問題搞清原理四、如何進(jìn)行微生物學(xué)實驗五、微生物實驗安排與考核基礎(chǔ)實驗：4次大實驗設(shè)計實驗方案實驗操作總結(jié)匯報五、微生物實驗安排與考核基礎(chǔ)實驗：4次大實驗課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)章制度嚴(yán)肅課堂紀(jì)律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（3次）工作服課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)章制度實驗室安全和衛(wèi)生安全實驗室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器衛(wèi)生每次實驗需留下6位同學(xué)值日，協(xié)助保持實驗室清潔實驗室安全和衛(wèi)生安全衛(wèi)生實驗一實驗室環(huán)境和人體體表微生物的檢測實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧蠈嶒灢襟E實驗結(jié)果思考題實驗一實驗室環(huán)境和人體體表微生物的檢測實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗驗證在實驗室內(nèi)的空氣、器、物和人體表面上存在著微生物。觀察不同微生物的菌落形態(tài)特征。比較不同取樣處微生物的類型和數(shù)量。學(xué)習(xí)從自然環(huán)境中采集微生物的方法，了解并掌握無菌操作技術(shù)。一、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗驗證在實驗室內(nèi)的空氣、器、物和人體表面上二、實驗原理空氣中的微生物菌體和霉菌孢子→無處不在接種于含有豐富營養(yǎng)，不帶有任何其它微生物的瓊脂固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下，微生物吸收各種營養(yǎng)，可形成肉眼可見的群體——菌落。不同微生物形成的菌落差異很大。二、實驗原理空氣中的微生物菌體和霉菌孢子→無處不在三、實驗材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂平板用具：接種環(huán)、酒精燈、無菌水、滅菌棉簽、試管架、記號筆、廢物缸、吸水紙等。三、實驗材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂平板四、實驗步驟一、平板皿底標(biāo)記姓名、日期、組別、樣品來

源等，字體要小。二、實驗室空氣及空氣傳播微生物的檢查：（1）空氣（2）口腔（3）頭發(fā)四、實驗步驟一、平板皿底標(biāo)記姓名、日期、組別、樣品來四、實驗步驟三、人體體表及錢幣上微生物的檢查（1）無菌操作技術(shù)各種培養(yǎng)基、玻璃器皿等進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；接種環(huán)、接種針用火焰灼燒滅菌。實驗臺用0.25%新潔爾滅溶液擦拭?；鹧?cm區(qū)是無菌區(qū)，無菌操作均需在此范圍內(nèi)。四、實驗步驟三、人體體表及錢幣上微生物的檢查四、實驗步驟三、人體體表及錢幣上微生物的檢查（2）人體體表和錢幣上微生物的檢查平板標(biāo)注；無菌操作法取無菌水、皮膚表面、手指、鼻腔、錢幣上微生物，劃線培養(yǎng)。四、實驗步驟三、人體體表及錢幣上微生物的檢查四、實驗步驟四、記錄結(jié)果菌落計數(shù)；菌落形態(tài)觀察。四、實驗步驟四、記錄結(jié)果五、實驗報告一、按下表所列各項將實驗結(jié)果填入二、與其它同學(xué)所做的結(jié)果進(jìn)行比較五、實驗報告一、按下表所列各項將實驗結(jié)果填入六、思考題比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類型最多：實驗室空氣與飛沫的樣品有無類型相同的菌落？為什么？通過本次實驗，你對環(huán)境中的微生物分布有何認(rèn)識？為什么在進(jìn)行微生物學(xué)時要嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行？六、思考題比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類實驗二細(xì)菌形態(tài)的觀察實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧蠈嶒灢襟E實驗結(jié)果思考題實驗二細(xì)菌形態(tài)的觀察實驗?zāi)康囊弧嶒災(zāi)康恼J(rèn)識細(xì)菌的基本形態(tài)；學(xué)習(xí)掌握細(xì)菌壓滴片和懸滴片的制作方法。一、實驗?zāi)康恼J(rèn)識細(xì)菌的基本形態(tài)；二、實驗原理壓滴法：將細(xì)菌懸液滴于載玻片中央，加上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察?！芯课⑸镄螒B(tài)最簡單、最基本的方法之一。懸滴法：將細(xì)菌懸液滴于蓋玻片中央，翻轉(zhuǎn)，置于凹玻片的凹窩中央。——用于觀察并區(qū)別細(xì)菌運(yùn)動的方式，也可觀察細(xì)菌的繁殖方式、孢子萌發(fā)等。二、實驗原理壓滴法：將細(xì)菌懸液滴于載玻片中央，加上蓋玻片，置三、實驗材料菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、福氏志賀氏菌。用具：顯微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、紗布、鏡頭紙、鑷子、特種鉛筆、無菌水、凡士林油、打火機(jī)、火柴、酒精燈、玻片架、香柏油、二甲苯、0.85%NaCl。三、實驗材料菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、福四、實驗步驟一、壓滴標(biāo)本制作（1）記號筆標(biāo)記載玻片；（2）點燃酒精燈，無菌水滴于撥片中央；（3）無菌操作取菌，與無菌水中，涂勻；（4）用鑷子取蓋玻片，由一端與載玻片菌液

接觸，輕輕放下，注意不要有氣泡；（5）置于顯微鏡下觀察。四、實驗步驟一、壓滴標(biāo)本制作四、實驗步驟二、懸滴標(biāo)本制作（1）取清潔的凹玻片和蓋玻片各一枚；（2）用火柴去少許凡士林涂于蓋玻片的四角；（3）在蓋玻片的中央用接種環(huán)蘸取一小滴無

菌水，然后無

菌操作去少許菌苔在水滴上輕沾一下，注意水滴大小要

適宜，放菌苔時不要使水滴破散；（4）將凹玻片翻轉(zhuǎn)向下，使凹窩中央對準(zhǔn)蓋玻片中央液滴，然后輕壓，使凹玻片與蓋玻片粘合緊密，避免蒸發(fā)，然后很快將凹玻片翻轉(zhuǎn)，使蓋片向上；（5）置于顯微鏡下觀察。四、實驗步驟二、懸滴標(biāo)本制作五、實驗報告一、試述油鏡的使用方法；二、描述所觀察的細(xì)菌菌苔形態(tài)；三、繪圖表示細(xì)菌的形態(tài)。五、實驗報告一、試述油鏡的使用方法；六、思考題一、怎樣觀察細(xì)菌形態(tài)？細(xì)菌未染色時，用油

鏡觀察有何困難？二、試述無菌操作的步驟和要領(lǐng)。六、思考題一、怎樣觀察細(xì)菌形態(tài)？細(xì)菌未染色時，用油本次實驗課結(jié)束

請確保油鏡頭擦拭干凈！

請值日生留下值日

下次課再見！本次實驗課結(jié)束

請確保油鏡頭擦拭干凈！

請值日生留下值日

用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負(fù)電荷的物質(zhì)結(jié)合。因細(xì)菌蛋電質(zhì)等電點較低，當(dāng)它生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負(fù)電荷，所以通常采用堿性染料(如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅或孔雀綠等)使其著色。酸性染料的離子帶負(fù)電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結(jié)合。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH值下降時，細(xì)菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料著色。中性染料是前兩者的結(jié)合物又稱復(fù)合染料．如伊紅美藍(lán)、伊紅天青等。

實驗二

細(xì)菌染色法及微生物的觀察

用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性

簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)的方法難于辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。

簡單染色法簡單染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)的方法難于莢膜染色法的原理是因為莢膜和染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染莢膜，即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90％以上，固染色時一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。

莢膜染色法莢膜染色法的原理是因為莢膜和染料間的親和力弱，不易著色，芽胞染色法:

細(xì)菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽胞不著色(芽胞呈無色透明狀)。芽胞染色法就是根據(jù)芽胞既難以染色而一旦染上色后又難以脫色這一特點而設(shè)計的。所有的芽胞染色法都基于同一個原則：除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽胞著色。當(dāng)染芽胞時，菌體也會著色，然后水洗，芽胞染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強(qiáng)的染料對菌體復(fù)染，使菌體和芽胞呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽胞，便于觀察。芽胞染色法:細(xì)菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易著細(xì)菌的鞭毛極細(xì)，直徑一般為10~20nm，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色的方法很多．但其基本原理相同，即在染色前充用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上．使鞭毛直徑加粗。然后再進(jìn)行染色。鞭毛染色法細(xì)菌的鞭毛極細(xì)，直徑一般為10~20nm，只有用電子顯微革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G－)和革蘭氏陰性菌(G＋)兩大類，是細(xì)菌學(xué)上是常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細(xì)菌分為G－菌和G＋菌。G－菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。G＋菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時的顏色。

革蘭氏染色法革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌(G－)和革一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容目的：鞏固無菌操作技求，掌握細(xì)菌及其結(jié)

構(gòu)的染色技術(shù)。內(nèi)容：1、學(xué)習(xí)細(xì)菌單染色操作技術(shù)。

2、學(xué)習(xí)革蘭氏染色技術(shù)。3、學(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜、芽孢及鞭毛染色

方法。

一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容

二、實驗材料和用具

1、單染色法：（1）菌種：細(xì)菌：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌放線菌：真菌：酵母霉菌：黑曲霉、黑根霉菌（2）染料：呂氏美藍(lán)染色液、齊氏石炭酸復(fù)紅染色液、乳酸石碳酸棉蘭、香柏油、二甲苯、無菌水（3）顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、吸水紙、無菌牙簽。

二、實驗材料和用具2、莢膜染色：

(1)菌種：褐球固氮菌

(2)硼酸鈉美蘭染色液、石炭酸復(fù)紅染色液、黑色素液；繪圖墨水(3)載玻片、接種環(huán)、洗瓶。(4)顯微鏡。2、莢膜染色：3、芽孢染色：(1)菌種：培養(yǎng)24~36小時的枯草芽孢桿菌(2)染料：

孔雀綠染色液、蕃紅染色液(3)載玻片、接種環(huán)、酒精燈、洗瓶、鑷子、顯微鏡(4)香柏油、二甲苯、擦鏡紙。3、芽孢染色：4、鞭毛染色：(1)菌種：

培養(yǎng)19-24小時的大腸桿菌；普通變形菌(2)染料：

新配制的費氏及康氏鞭毛染色液A和B。(3)無菌水、無菌空試管、凹玻片。蓋玻片、潔凈載玻片、接種環(huán)、洗瓶。(4)顯微鏡4、鞭毛染色：

5、革蘭氏染色：（1）菌種：金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌（E.coli）菌液，待測菌菌液l~2種；（2）染料：革蘭氏染色試劑盒(結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95％乙醇、石炭酸復(fù)紅液等)、（3）香柏油、二甲苯；顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、載玻片、吸水紙、試管、小滴管、酒精燈。5、革蘭氏染色：三、操作步驟

1、單染色法

（1）涂片

在潔凈無脂的載玻片中央滴一小滴無菌水（圖4-10a），用無菌操作方法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成薄膜，涂布面積約1～1.5cm2。

（2）干燥

將涂片于室溫中自然干燥。

（3）固定

手執(zhí)載片—端，使涂菌的一面向上，將載片通過微火2~3次。在火上固定時，用手摸涂片反面，以不燙手為宜。不能將載片在火上烤，否則細(xì)菌形態(tài)毀壞(圖4-10c)。三、操作步驟

（4）染色

將涂片置于水平位置，滴加染色液覆蓋于涂菌處，染色約2min(圖4-10d)。

（5）水洗

傾去染色液，斜置載片，用自來水的細(xì)水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無染色液的顏色為止(圖4-10e)。

（6）干燥

自然晾干或用吸水紙輕輕地吸干，注意不要擦掉菌體(圖4-10f)。（7）待標(biāo)本完全干燥后，先用低倍鏡和高倍鏡觀察，將典型部位移至視野中央，再用油鏡觀察。（4）染色將涂片置于水平位置，滴加染色液覆蓋于涂菌處，

圖4－10單染色方法

圖4（二）莢膜染色法1．石炭酸復(fù)紅染色(1)取培養(yǎng)了72h的褐球固氮菌制成涂片，自然干燥(莢膜是多糖類物質(zhì)，不可用火焰烘干)。(2)滴入1~2滴95％乙醇固定(不可加熱固定)。(3)加石炭酸復(fù)紅染液染色1～2min，水洗，自然干燥。(4)在載玻片一端加一滴墨汁，另取一塊邊緣光滑的載玻片與墨汁接觸，在以勻速推向另一端，涂成均勻的一薄層，自然干燥。(5)干燥后用油鏡觀察。菌體紅色，莢膜無色，背景黑色。

（二）莢膜染色法2．莢膜背景染色法(1)先加1滴墨水于潔凈的玻片上，并挑少量褐球固氮菌與之充分混合均勻。(2)放一清潔蓋玻片于混合液上，然后在蓋玻片上放一張濾紙，向下輕壓，吸收多余的菌液。(3)干燥后用油鏡觀察。背景灰色，菌體較暗．在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即莢膜。

2．莢膜背景染色法（三）

革蘭氏染色法

1、制片

（1）

涂菌

用無菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種環(huán)在潔凈無脂的載玻片上做一薄而均勻、直徑約1cm的菌膜。涂菌后將接種環(huán)火焰滅菌。

（2）干燥

于空氣中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加溫加速干燥(溫度不宜過高)。

（3）固定

目的是殺死細(xì)菌并使細(xì)菌粘附在玻片上，便于染料著色，常用加熱法，即將細(xì)菌涂片面向上，通過火焰3次，以熱而不燙為宜，防止菌體燒焦、變形。此制片可用于染色。（三）革蘭氏染色法2、染色（1）初染：于制片上滴加結(jié)晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。（2）滴加盧戈氏碘液，1min后水洗：（3）滴加95％乙醇脫色，搖動玻片至紫色不再為乙醇脫退為止(根據(jù)涂片之厚薄需時30s至1min)。（4）復(fù)染

滴加石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1min，水洗。（5）用濾紙吸干，油鏡鏡檢。

2、染色3、結(jié)果革蘭氏陽性菌染成籃紫色，革蘭氏陰性菌染成淡紅色。4、檢測未知菌用以上方法對未知面進(jìn)行革蘭氏染色，并繪圖、記錄染色結(jié)果。

3、結(jié)果（四）鞭毛染色法

1．方法一：（1）用接種環(huán)由培養(yǎng)18～20h的平板上取大腸桿菌菌體少許，用菌滴制片法檢查細(xì)菌的運(yùn)動性。如果菌體的運(yùn)動性很強(qiáng)，則可作鞭毛染色。（2）用3~4mL無菌水，將培養(yǎng)體洗下，移入另一無菌試管中，適溫培養(yǎng)10min，再檢查運(yùn)動性。（四）鞭毛染色法（3）用無菌吸管由懸液上部取一小滴，置于一清潔載玻片的一端，將玻片傾斜。使菌液由一端流向另外一端。于是在玻片上做成2～3條菌液帶。待水膜自然干燥（切勿用火焰烘）。（4）用剛剛過濾的鞭毛染色液A染色5min(不要加熱)。（5）傾去A液，加鞭毛染色液B染色10min。用蒸餾水輕輕沖洗，晾干。（6）用齊氏石炭酸復(fù)紅染色2～3min。輕輕沖洗，晾干(不能用吸水紙吸干)。（7）先用低倍鏡，再用高倍鏡，最后用油鏡檢查。

（3）用無菌吸管由懸液上部取一小滴，置于一清潔載玻片的一端，2．方法二：（1）制涂片：先加少量無菌蒸餾水于凹載玻片的凹窩中．再從培養(yǎng)10h左右的斜面菌苔上取菌一環(huán)，輕放在凹窩水面上(不要攪動)，放30度溫箱靜置5～10min．取出，從凹窩水面上輕輕取菌液一環(huán)，輕放在干凈的載玻片上(不要涂抹)，放回溫箱，讓其自然干燥(不要加熱固定)。（2）染色：在自然干燥的涂片上，滴加含石炭酸的鞭毛染色液一滴，染色5min，用水輕輕沖洗，讓其自然干燥。（3）鏡檢：用油鏡觀察。

2．方法二：五）芽孢染色法1．方法一：(1)取37℃培養(yǎng)18~24h的枯草芽孢桿菌作涂片，并干燥，固定。(2)于載片上滴人3~5滴5％孔雀綠水溶液。(3)用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時，開始計算時間約4～5min。加熱過程中切勿使染料蒸干，必要時可添加少許染料。(4)傾去染液，待玻片冷卻后，用自來水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(5)用0.5％沙黃水溶液(或0.05％堿性復(fù)紅)復(fù)染1min，水洗。(6)制片干燥后用油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色。五）芽孢染色法2．方法二：(1)加1～2滴自來水于小試管中，用接種環(huán)從斜面上挑取2～3環(huán)培養(yǎng)18～24h的枯草芽孢桿菌菌苔于試管中，并充分均勻打散，制成濃稠的菌液。

(2)加5％孔雀綠水溶液2～3滴于小試管中．用接種環(huán)攪拌使染料與菌液充分混合。

(3)將此試管浸干沸水浴(燒杯)中，加熱15～20min。(4)用接種環(huán)從試管底部挑數(shù)環(huán)菌于潔凈的載玻片上，并涂成薄膜，將涂片經(jīng)過微火3次固定。(5)水洗，至流出的水中無孔雀綠顏色為止。(6)加番紅水溶液，染2～3min后，傾去染液，不用水洗。(7)干燥后用油鏡觀察。芽孢綠色，菌體紅色。

2．方法二：四、注意事項1．載玻片要潔凈無脂，否則菌液涂不開。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌過厚。2．在染色過程中，不可使染液干涸。3．在革蘭氏染色過程中脫色時間十分重要，過長，則脫色過度，會使陽性菌被染成陰性菌，另外，老齡菌因體內(nèi)核酸減少，會使陽性菌被染成陰性菌，故不能選用。3．

莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。4．

鞭毛染色液最好當(dāng)日配置，次日使用則鞭毛染色淺，觀察效果差。染色時一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景不清晰。5．供芽孢染色用的菌種應(yīng)控制菌齡，使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜。

四、注意事項五、實驗報告(一)繪圖1．單染色后觀察到的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的形態(tài)圖。2．大腸桿菌革蘭氏染色視野圖。3．金黃色葡萄球菌革蘭氏染色視野圖。4．褐球固氮菌菌體及莢膜的形態(tài)。4．繪出你所觀察到的細(xì)菌的形態(tài)及鞭毛著生情況。6．枯草芽孢桿菌及巨大芽孢桿菌的菌體及芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。(二)單染色法操作要點。(三)記錄革蘭氏染色法法步驟，并進(jìn)行結(jié)果分析。

五、實驗報告六、問題和思考1．涂片在染色前為什么要先進(jìn)行固定?固定時應(yīng)注意什么問題?2．制備染色裝片時應(yīng)注意哪些事項，為什么?制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3．什么是革蘭氏染色法?染色過程應(yīng)注意什么?4．試分析革蘭氏染色法在細(xì)菌分類中的意義。5．組成莢膜的成分是什么?涂片一般用什么固定方法，為什么?6．鞭毛染色的菌種為什么要先連續(xù)傳幾代，并且要采用幼齡菌種?7．根據(jù)你的實驗體會，哪些因素影響鞭毛染色的效果?如何控制?六、問題和思考一、實驗?zāi)繕?biāo)與基本要求學(xué)習(xí)并掌握酵母菌觀察方法。二、實驗內(nèi)容制作酵母菌常規(guī)涂片，染色并用油鏡觀察菌體。實驗三酵母菌的形態(tài)觀察

一、實驗?zāi)繕?biāo)與基本要求實驗三酵母菌的形態(tài)觀察個體形態(tài)與出芽生殖用水浸片法觀察，根據(jù)酵母菌是否染上蘭色可以區(qū)別細(xì)胞的死活（這里的利用美藍(lán)是一種弱的氧化劑，還原后變?yōu)闊o色的特性，活細(xì)胞具有還原力，故將其還原變?yōu)闊o色）。酵母菌的芽殖過程1．泡；2．小管；3．核；4．液泡

三、實驗步驟：個體形態(tài)與出芽生殖酵母菌的芽殖過程1．泡；2．小管；3．核四、實驗報告繪圖數(shù)個酵母菌細(xì)胞，示觀察到的結(jié)構(gòu)。四、實驗報告一、實驗教學(xué)目標(biāo)基本與要求

1、明確培養(yǎng)基的配制原理。

2、掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。二、實驗內(nèi)容

1、介紹培養(yǎng)基的配制原理和方法步驟

2、動手稱量試劑、配制牛肉蛋白胨培養(yǎng)基等。實驗四微生物培養(yǎng)基的制備一、實驗教學(xué)目標(biāo)基本與要求實驗四微生物培養(yǎng)基的制備三、實驗材料每組準(zhǔn)備：試管：14個(8個制備斜面培養(yǎng)基)(6個各裝9mL純凈水高壓)三角燒瓶：4個(1個裝90mL純凈水高壓,其它三個分別裝三種培養(yǎng)基高壓)平板：9個(營養(yǎng)瓊脂，高氏一號，馬丁氏培養(yǎng)基平板各三個)

吸管：5支(頂部塞好棉花，用牛皮紙包好高壓)三角涂棒：3支(牛皮紙包好高壓)三、實驗材料每組準(zhǔn)備：培養(yǎng)基配方：四、實驗內(nèi)容牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂）：培養(yǎng)細(xì)菌用取樣品3.8g加蒸餾水至100mL加熱溶解，分裝斜面，剩下的高壓倒平板。（共配液體100mL）倒3個平板（每個平板倒20mL，共60mL）剩下的制備斜面培養(yǎng)基（每管5mL）。培養(yǎng)基配方：四、實驗內(nèi)容牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂）：培高氏一號平板：培養(yǎng)放線菌

取樣品3.53g

加蒸餾水至100mL加熱溶解，分裝斜面，剩下的高壓倒平板。（共配液體100mL）倒3個平板（每個平板倒20mL，共60mL）剩下的制備斜面培養(yǎng)基（每管5mL）。高氏一號平板：培養(yǎng)放線菌馬丁氏培養(yǎng)基：培養(yǎng)霉菌用取樣品4.17g

加蒸餾水至100mL加熱溶解，分裝斜面，剩下的高壓倒平板。（共配液體100ml）倒3個平板（每個平板倒20mL，共60mL）剩下的制備斜面培養(yǎng)基（每管5mL）。馬丁氏培養(yǎng)基：培養(yǎng)霉菌用四、實驗內(nèi)容（一）、培養(yǎng)基的配制：同學(xué)們先將試管貼好標(biāo)簽。注明培養(yǎng)基名稱，組別，日期。標(biāo)簽粘貼位置在離管口1/3管身處。注意：標(biāo)簽用鉛筆書寫，以防高溫滅菌時蒸汽模糊字跡。

操作圖示：四、實驗內(nèi)容（一）、培養(yǎng)基的配制：

1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。2.配調(diào)

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。稱量--配置--調(diào)節(jié)pH值--過濾--分裝--滅菌

1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。Tips：如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失水分。如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補(bǔ)足所失水分。Tips：3.調(diào)節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH試紙測pH，然后根據(jù)要求加酸或堿（一般用1MHcl和1MNaOH），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pH時，不用調(diào)節(jié)。（我們使用的是合成的干粉培養(yǎng)基，無需調(diào)ph）

4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。（合成干粉培養(yǎng)基無需過濾）

3.調(diào)節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH試紙5.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)、平板或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：

（1）斜面：裝量為管長的1/4-1/5（8mL）。

（2）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不超過管長的1/3。

（3）三角瓶：裝量不超過容積1/2。5.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)、平板或三角瓶內(nèi)6.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進(jìn)行，加熱使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密閉，增加了器內(nèi)的壓力，使水的沸點升高，從而獲得高于100度的蒸汽溫度（一般采用121℃20min滅菌）。6.滅菌

塞棉塞，包扎，滅菌。

高壓蒸汽滅菌法：是在3．注意事項：

本實驗使用調(diào)配好的“干燥培養(yǎng)基”，這種培養(yǎng)基是將新鮮配制的液體培養(yǎng)基用噴霧干燥法，真空干燥法，低溫干燥法或蒸發(fā)干燥法等將培養(yǎng)基內(nèi)所含的水分去掉；或?qū)⑴囵B(yǎng)基內(nèi)的各種固形成分，經(jīng)適當(dāng)處理，充分混勻，便成干燥粉末而成。使用時只要按比例加入一定量的水，經(jīng)溶解，無需調(diào)pH，分裝，高壓蒸汽滅菌，即可使用?！案稍锱囵B(yǎng)基”成品很容易吸潮，在稱量時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把藥匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再取另一種藥品。瓶蓋也不要蓋錯。在燒杯融化瓊脂的過程中，人要在電爐旁看著，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出燒杯。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。注意帶上棉紗手套防止?fàn)C傷。分裝過程中，注意不要使培養(yǎng)基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。四、實驗內(nèi)容3．注意事項：四、實驗內(nèi)容（二）培養(yǎng)基滅菌

培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮紙，便可滅菌。滅菌的時間和溫度按各培養(yǎng)基規(guī)定進(jìn)行，以保證滅菌效果和不損壞培養(yǎng)基的必要成分。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，可放在37恒溫箱培養(yǎng)24小時，無菌者方可使用。在實驗室里用得最多的加熱滅菌法是高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌。一般培養(yǎng)基和滅菌水等用高壓蒸汽滅菌，而玻璃器皿常用干熱滅菌。蒸汽滅菌為105-121℃，15-20分鐘，干熱滅菌為160-170℃，1-2小時。目的都是使細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。

在同一溫度下，濕熱殺菌效力比干熱大，因為在濕熱情況下，菌體吸收水分，使蛋白質(zhì)易于凝固，同時濕熱穿透力強(qiáng)，而且當(dāng)蒸汽與被滅菌物體接觸凝成水分時，又可放出熱量，使溫度迅速增高，從而增加滅菌效力。四、實驗內(nèi)容（二）培養(yǎng)基滅菌四、實驗內(nèi)容（三）包扎1．培養(yǎng)皿：以牛皮紙包緊，一般以6套做一包，待滅菌。2．吸管：在距其粗頭頂端約0.5cm處，塞一小段1.5cm長的棉花。棉花要塞得松緊恰當(dāng)（過緊，吹吸液體太費勁；過松，吹氣時棉花會下滑），然后分別將每支吸管尖端斜放在舊報紙條的的近左端，與報紙約呈60o角，并將右端多余的報紙打一小結(jié)。3．三角涂棒：跟包扎吸管相似，將三角部分斜放在報紙條的近左端，與報紙約呈45o角，并將右端多余的報紙打一小結(jié)。四、實驗內(nèi)容（三）包扎四、實驗內(nèi)容四、實驗報告記錄本實驗配制培養(yǎng)基的名稱、數(shù)量，并圖解說明其配制過程，指明要點。五、問題和思考

l．配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟?在操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?2．培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應(yīng)如何處理?已滅菌的培養(yǎng)基如何進(jìn)行無菌檢查?四、實驗報告實驗六消毒與滅菌一、實驗教學(xué)目標(biāo)與基本要求了解消毒和滅菌的原理，掌握各種滅菌方法的操作步驟。

二、實驗內(nèi)容：

1．干熱滅菌法

2．高壓蒸汽滅菌

3．紫外線滅菌法實驗六消毒與滅菌一、實驗教學(xué)目標(biāo)與基本要求三、實驗步驟（一）干熱滅菌法1、原理利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。所需溫度(160-170℃)，時間長(1-2h)。注：干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會燒焦，甚至引起燃燒。

2、步驟恒溫降溫開箱取物升溫裝入待滅菌物品三、實驗步驟恒溫降溫開箱取物升溫裝入待滅菌物品（二）高壓蒸汽滅菌

1、原理利用加熱一個密閉的加壓滅菌鍋，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌鍋內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。一般培養(yǎng)基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min2、步驟加水裝待滅菌物品加蓋加熱滅菌時間到后斷電源壓力降為零開箱取物（二）高壓蒸汽滅菌加水裝待滅加蓋加熱滅菌時間到后壓力降為零（三）紫外線滅菌法1、原理

紫外線殺菌機(jī)理主要是因為它誘導(dǎo)了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復(fù)制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成[O]，再使O2氧化生成臭氧或使水氧化生成H2O2。O3和H2O2均有殺菌作用。

適用于無菌室，接種箱，手術(shù)室內(nèi)的空氣及物體表面的滅菌。（三）紫外線滅菌法2、步驟

1）單用紫外燈在無菌室內(nèi)或在接種箱內(nèi)打開紫外線燈開關(guān)，照射30min，將開關(guān)關(guān)閉。

2）化學(xué)消毒劑與紫外線照射結(jié)合使用在無菌室內(nèi)，先噴灑化學(xué)消毒劑溶液，再用紫外線燈照射15imn2、步驟四、實驗報告記錄無菌檢查結(jié)果五、問題和思考

1.高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡?滅菌完畢后，為什么待壓力降低“0”時才能打開排氣閥，開蓋取物？

2.過濾除菌應(yīng)注意哪些問題?四、實驗報告實驗七微生物接種技術(shù)一、教學(xué)目標(biāo)與基本要求：掌握各種微生物接種的基本操作技術(shù)。

二、實驗內(nèi)容

1．斜面接種

2．液體接種

3．穿刺接種

4．平板接種實驗七微生物接種技術(shù)三、實驗步驟將有菌的材料或純粹的菌種轉(zhuǎn)移到另一無菌的培養(yǎng)基上，這個過程就稱為接種。常用的幾種方法如下：斜面接種液體接種穿刺接種平板接種三、實驗步驟1.斜面接種：從已長好微生物的菌種管移接到另一斜面管的方法。此法用于好氣性微生物的接種。左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平。用右手先將棉塞擰轉(zhuǎn)松動，再拿接種環(huán)，用右手的小指、無名指和手掌撥下棉塞并夾緊，同時將管口在火焰上燃燒一圈，接種環(huán)灼燒滅菌后插入管內(nèi)，冷卻、挑菌，立即轉(zhuǎn)入斜面管底部，沿斜面劃曲線或直線。1.斜面接種：斜面接種示意圖斜面接種示意圖2.液體接種：由斜面菌接種到液體培養(yǎng)基（如試管或三角瓶等）中的方法。操作與上法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基中時使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，然后塞上棉塞，再輕輕搖動均勻，即可培養(yǎng)。如果菌種是培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基中時，一般用移液管或滴管接種。微生物實驗(第三節(jié)課)課件3.穿刺接種：用接種針挑取菌種后，插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厭氣性細(xì)菌接種、檢查細(xì)菌的運(yùn)動能力。4.平板接種：將菌種接至培養(yǎng)皿的方法，平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)、分離純化菌種，活菌計數(shù)以及在平板上進(jìn)行各種試驗時采用的一種接種方法，可分為下面幾種：

3.穿刺接種：1)斜面接平板a.劃線法：見平板劃線分離法。b.點種法：一般用于觀察霉菌和酵母細(xì)胞，輕輕點在平板的表面（根霉點一點，曲霉、酵母可點3-4點）即可。

2)平板接斜面：一般是將經(jīng)平板分散培養(yǎng)得到的單菌落接種到斜面，以便作鑒定或擴(kuò)大培養(yǎng)、保存之用。

1)斜面接平板實驗五微生物生長，數(shù)量及大小的檢測

實驗五微生物生長，數(shù)量及大小的檢測一、目的要求

學(xué)會用血球計數(shù)器測定酵母菌細(xì)胞數(shù)學(xué)習(xí)和掌握用測微尺測量微生物細(xì)胞大小的方法一、目的要求學(xué)會用血球計數(shù)器測定酵母菌細(xì)胞數(shù)二、基本原理

微生物個體生長的時間較短，很快進(jìn)入分裂繁殖階段，個體生長難以測定。它們的生長一般以繁殖即群體生長作為微生物生長的指標(biāo)。群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測定數(shù)目的方法有顯微鏡直接計數(shù)法、平板計數(shù)法、光電比濁法等。顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測量工具即測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺。二、基本原理微生物個體生長的時間較短，很快進(jìn)入分三、實驗材料酵母菌液顯微鏡、血球計數(shù)器、目鏡測微尺、鏡臺測微尺3.載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、膠頭吸管等三、實驗材料酵母菌液

圖5-1Thoma血球計數(shù)板

A.正面圖B.縱切面圖

1.血球計數(shù)板2.蓋玻片3.計數(shù)室圖5-1Thoma血球計數(shù)板圖5-2計數(shù)室的刻度形式16小格×25大格計數(shù)室圖5-2計數(shù)室的刻度形式93四、實驗內(nèi)容一.酵母菌數(shù)量的檢測1.顯微鏡直接計數(shù)法（每人1片）注意事項:

取樣時先要搖勻菌液;加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。B.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5*25*104*BA:為五個方格中的總菌數(shù)B:菌液的稀釋倍數(shù)四、實驗內(nèi)容一.酵母菌數(shù)量的檢測四、實驗內(nèi)容二.酵母菌大小的檢測注意事項：觀察時光線不宜過強(qiáng),否則難以找到鏡臺測微尺的刻度;換高倍鏡和油鏡校正時,務(wù)必十分小心,防止接物鏡壓壞鏡臺測微尺和損壞鏡頭。1.測微尺的校正（標(biāo)定）：兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)Ⅹ10目鏡測微尺每格長度(μm)=

兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2．酵母菌大小的測定：利用制好的血球器浸片，用高倍鏡測出寬和長各占目鏡測微尺的格數(shù)，再將測到的格數(shù)乘以目鏡測微尺（用高倍鏡時標(biāo)定的）每格所代表的長度，即為酵母菌的實際大小。四、實驗內(nèi)容二.酵母菌大小的檢測五、實驗報告1、結(jié)果記錄：(1)將計數(shù)結(jié)果記錄下表。A表示五個中方格中的總菌數(shù)。B稀釋倍數(shù)為102。注:1mL菌液總數(shù)=A/5×25×104×B五、實驗報告1、結(jié)果記錄：注:1mL菌液總數(shù)=A/5×25五、實驗報告（2）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表:

接目鏡放大倍數(shù)：-10×-五、實驗報告（2）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表:五、實驗報告(3)將酵母菌大小測定結(jié)果填入下表：五、實驗報告(3)將酵母菌大小測定結(jié)果填入下表：五、實驗報告2.思考題：根據(jù)你的體會，說明用血球計數(shù)板計數(shù)的誤差主要來自哪些方面？應(yīng)如何盡量減少誤差，力求準(zhǔn)確？某單位要求知道一種干酵母粉的活菌存活率，請設(shè)計1-2種可行的檢測方法。比較平板菌落計算法和顯微鏡下直接計算法的優(yōu)缺點幾應(yīng)用。在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細(xì)菌的大小時，其測定結(jié)果是否相同？為什么？為什么更換不同放大倍率目鏡和物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進(jìn)行校正？五、實驗報告2.思考題：五、實驗報告思考題：培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?

在培養(yǎng)基配制操作過程中應(yīng)注意什么問題?為什么?

培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?

高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵為什么是高溫而不是高壓?高壓蒸汽滅菌前為什么要將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡?滅菌完畢后什么情況下才可以開鍋蓋取出滅菌物品?

玻璃器皿為什么在滅菌前要先行干燥?

對含糖(如含葡萄糖或乳糖等)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時，應(yīng)采用多大壓力，多長時間滅菌為宜?

加熱蒸汽滅菌為什么比干熱滅菌所要求的溫度低、時間短？干熱滅菌完畢后，在什么情況下才可開箱取物？為什么？五、實驗報告思考題：四、問題和思考1.稀釋分離時，為何要將融化的培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，才倒入裝有菌液的培養(yǎng)皿內(nèi)？2.接種時，為何要盡量使試管平放？微生物實驗(第三節(jié)課)課件實驗九微生物的分離純化技術(shù)

實驗九微生物的分離純化技術(shù)一、目的要求

學(xué)習(xí)從混雜的微生物群體中分離與純化微生物菌種的方法。綜合練習(xí)微生物學(xué)實驗的各種無菌操作技術(shù)一、目的要求學(xué)習(xí)從混雜的微生物群體中分離與純化微生物二、基本原理

自然界中各種微生物混雜生活在一起，即使取很少量的樣品也是許多微生物共存的群體。人們要研究某種微生物的特性，首先須使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。微生物的分離、純化技術(shù)是指從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程。微生物的平板分離純化技術(shù)自1880年被發(fā)明以來以有100多年的歷史，該技術(shù)的建立和發(fā)展為人類獲得豐富的微生物資源以及在工、農(nóng)、醫(yī)、環(huán)境、動物細(xì)胞培養(yǎng)等方面的應(yīng)用作出了巨大的貢獻(xiàn)。平板稀釋涂布、平板稀釋混合、平板劃線法是分離和純化微生物的常規(guī)方法。分離純化技術(shù)其實是進(jìn)行平板接種，即用接種環(huán)將菌種接至平板培養(yǎng)基上，或用移液管、滴管將一定體積的菌液移至平板培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)。平板接種的目的是觀察菌落形態(tài)，分離純化菌種，活菌計數(shù)及在平板上進(jìn)行各種實驗時采用的一種接種方法。本實驗是利用分離純化技術(shù)來獲得三大類微生物的平板純培養(yǎng)物，為下次實驗微生物的形態(tài)觀察提供菌落形態(tài)的部分（形態(tài)觀察主要包括群體形態(tài)（菌落形態(tài)）和個體形態(tài)觀察兩個方面。

二、基本原理自然界中各種微生物混雜生活在一起，即使取三、實驗材料2、平板的制備：

將融化的瓊脂培養(yǎng)基,冷卻至50℃左右(以手背能忍受的溫度為準(zhǔn))溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于45℃時，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，右手掌心握住三角瓶的底部，左手打開三角瓶棉塞，以右手的無名指和末指夾持瓶塞，灼燒瓶口。左手拿培養(yǎng)皿，用左手的大拇子將皿蓋掀開一縫，至瓶口剛好伸入，向皿內(nèi)注入培養(yǎng)基（約15~20mL,厚度約0.5mL左右），迅速蓋好皿蓋。左手持培養(yǎng)皿稍加旋轉(zhuǎn)搖動，使培養(yǎng)基均勻分布于整個培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即為平板。三、實驗材料2、平板的制備：四、實驗內(nèi)容1.平板混合分離法：大腸桿菌，枯草桿菌，單球菌（3皿）

將菌液分離樣品搖勻，用無菌移液管取1ml的菌液移至無菌培養(yǎng)皿中，然后將融化，涼至50℃左右的培養(yǎng)基，在每個培養(yǎng)皿內(nèi)各倒入約15ml，搖勻，凝固，制成平板。圖3-1混合倒平板操作法示意圖四、實驗內(nèi)容1.平板混合分離法：大腸桿菌，枯草桿菌，單球菌四、實驗內(nèi)容2.平板劃線分離法：（3皿）

將菌液分離樣品搖勻，以無菌操作用接種環(huán)直接取試管中待分離純化的菌液，將菌液點種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約30℃）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線，劃線時平板面與接種環(huán)面成30-40℃，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線,接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基,線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。

圖3-2平板劃線分離操作法示意圖四、實驗內(nèi)容2.平板劃線分離法：（3皿）圖3-2平板劃圖3-3平板劃線菌落分離效果圖圖3-3平板劃線菌落分離效果圖3.平板涂布分離法(3皿)：土壤中的微生物

將經(jīng)過不同稀釋的菌液分離樣品搖勻，將0.1ml菌懸液小心地滴在平板培養(yǎng)基表面中央位置。右手拿無菌三角玻扒在平板培養(yǎng)基表面上,將菌懸液先沿一條直線輕輕地來回推動,使之分布均勻，然后改變方向沿另一垂直來回推動,平板內(nèi)邊緣處可改變方向用三角玻扒再涂布幾次。四、實驗內(nèi)容圖3-4涂布平板操作法示意圖四、實驗內(nèi)容圖3-4涂布平板操作法示意圖四、實驗內(nèi)容5.生物的培養(yǎng)技術(shù)：培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)法

將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-2d，平板倒置培養(yǎng)。高氏一號培養(yǎng)基和馬丁氏培養(yǎng)基于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3d，平板倒置培養(yǎng)。四、實驗內(nèi)容5.生物的培養(yǎng)技術(shù)：培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)法五、實驗報告1、觀察記錄實驗結(jié)果：土壤中微生物的菌落特征

注:菌落特征描寫方法參考如下：大?。捍螅?小,針尖狀形態(tài)：圓形，不規(guī)則等干濕情況：干燥，濕潤，粘稠高度：扁平，隆起，凹下透明度：透明度，半透明，不透明顏色：黃色，金黃色，灰色，乳白色，紅色，粉紅色，黑色等邊緣：整齊，不整齊五、實驗報告1、觀察記錄實驗結(jié)果：土壤中微生物的菌落特征2、思考題:如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)？請寫出實驗的主要步驟.你所做的涂布平板法和劃線法是否較好地得到了單菌落?如果不是,請分析其原因。在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)微生物時為何培養(yǎng)皿需倒置?五、實驗報告2、思考題:五、實驗報告實驗六微生物的生理生化反應(yīng)

實驗六微生物的生理生化反應(yīng)一、目的要求

了解不同細(xì)菌對含氮及含碳化合物的分解和利用情況進(jìn)一步掌握微生物的接種方法一、目的要求了解不同細(xì)菌對含氮及含碳化合物的分解和二、基本原理

微生物代謝與其他生物代謝有著許多相似之處，也有不同之處。微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性，因此使得微生物在自然界的物質(zhì)循環(huán)中起著重要的作用，同時也為人類開發(fā)利用微生物資源提供更多的機(jī)會與途徑。人們在微生物的分類鑒定工作中，常利用其生理生化反應(yīng)作用作為重要依據(jù)。本實驗分別安排微生物對生物大分子的分解利用（淀粉水解實驗水解試驗、明膠液化試驗），對含碳化合物的分解利用（糖發(fā)酵試驗）以及對含氮化化合物的分解利用（吲哚試驗），讓同學(xué)們對微生物的代謝類型多樣性有一個初步和感性的了解，同時學(xué)習(xí)利用微生物形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及生化反應(yīng)的特征對某些細(xì)菌進(jìn)行初步的分類。本實驗進(jìn)一步學(xué)習(xí)平板接種法、穿刺接種法、液體接種法。二、基本原理微生物代謝與其他生物代謝有著許多相三、實驗材料

1．培養(yǎng)基：淀粉水解培養(yǎng)基：2皿明膠液化培養(yǎng)基：2支糖類發(fā)酵培養(yǎng)基：4支蛋白胨水培養(yǎng)基：2支2.接種用具：接種環(huán)（針、鉤），酒精燈，鑷子，消毒棉球，打火機(jī)，標(biāo)簽貼紙，廢物杯，一次性口罩，紙巾，油性筆。3.實驗菌種：枯草桿菌、大腸桿菌、單球菌4.配置培養(yǎng)基的工具：1套三、實驗材料1．培養(yǎng)基：四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容圖6-1糖類發(fā)酵試驗

圖6-1糖類發(fā)酵試驗四、實驗內(nèi)容操作步驟：1.淀粉水解試驗：（2皿）（1）翻轉(zhuǎn)平板使底皿背面向上，用油性筆在其背面玻璃上畫上三個圓圈。（2）用接種環(huán)在圓圈中間以點植的方式接上菌種。一皿接枯草桿菌，另一皿接大腸桿菌。（3）將接完種的平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。（4）觀察結(jié)果時，可打開皿蓋，滴加少量的碘液于平板上，輕輕旋轉(zhuǎn)，是碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，則說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大小，說明該菌水解淀粉能力的強(qiáng)弱，即產(chǎn)生胞外酶活力的高低。（以“+”、“—”表示有無透明圈）四、實驗內(nèi)容操作步驟：四、實驗內(nèi)容（1）以穿刺接種法分別接種枯草桿菌和大腸桿菌于明膠培養(yǎng)基中。（2）接種后置于20℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)2-5d。（3）觀察結(jié)果時，注意培養(yǎng)基有無液化現(xiàn)象。（以“+”、“—”表示有無液化現(xiàn)象）

注意：如果細(xì)菌在20℃時不能生長，則必須培養(yǎng)在所需的最適溫度下，觀察結(jié)果時需將試管從恒溫箱里取出，置于冰浴中，才能觀察液化程度。2.明膠液化試驗：（2支）四、實驗內(nèi)容2.明膠液化試驗：（2支）四、實驗內(nèi)容（1）以液體接種的方式分別接種枯草桿菌和大腸桿菌于同種糖類培養(yǎng)基中，以作比較。（2）接種后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。（3）觀察結(jié)果時，看各管顏色變化及杜氏小管有無氣泡。產(chǎn)酸產(chǎn)氣用“⊕”表示；只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣用“+”表示；不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣用“—”表示。3.糖類發(fā)酵試驗：（4支）四、實驗內(nèi)容3.糖類發(fā)酵試驗：（4支）四、實驗內(nèi)容（1）以液體接種的方式分別接種枯草桿菌和大腸桿菌于蛋白胨水培養(yǎng)基中。（2）接種后置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。（3）觀察結(jié)果時，在培養(yǎng)液中加入乙醚約1毫升（使呈明顯的乙醚層）。充分振蕩，使吲哚溶于乙醚中，靜置片刻，待乙醚浮于培養(yǎng)液上面時，沿管壁慢慢加入吲哚試劑10滴。如吲哚存在，則乙醚層呈玫瑰紅色（注意：加入吲哚試劑后，不可再搖動，否則紅色不明顯）。以“+”、“—”表示有無紅色的玫瑰吲哚。4.吲哚試驗：（2支）四、實驗內(nèi)容4.吲哚試驗：（2支）四、實驗內(nèi)容

肉湯培養(yǎng)基：100mL，裝在250mL三角瓶（加入1.5%瓊脂）

乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基：100mL分裝10支大試管(加杜氏發(fā)酵管)，10mL/支

生理鹽水：250mL,其中225mL裝在500mL三角瓶(加適量玻珠)；18mL分裝2支大試管，9mL/支，剩余的丟棄

吸管：2支10mL，5支1mL

培養(yǎng)皿：6皿準(zhǔn)備實驗七的培養(yǎng)基和玻璃器皿：四、實驗內(nèi)容準(zhǔn)備實驗七的培養(yǎng)基和玻璃器皿：五、實驗報告1.細(xì)菌對各種生理生化試驗反應(yīng)的原理：五、實驗報告1.細(xì)菌對各種生理生化試驗反應(yīng)的原理：五、實驗報告2．細(xì)菌對各種生理生化試驗反應(yīng)的結(jié)果：五、實驗報告2．細(xì)菌對各種生理生化試驗反應(yīng)的結(jié)果：五、實驗報告（1）淀粉、明膠等生物大分子物質(zhì)能否不經(jīng)分解而直接被細(xì)菌吸收？為什么？（2）接種后的明膠試管可以置于37℃恒溫培養(yǎng)箱箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)后你必須做什么才能證明水解的存在？（3）假如某種微生物可以有氧代謝葡萄糖，發(fā)酵試驗應(yīng)該出現(xiàn)什么結(jié)果？（4）解釋在細(xì)菌培養(yǎng)中吲哚試驗的化學(xué)原理，為什么在這個試驗中用吲哚的存在作為色氨酸酶活性的指示劑，而不用丙酮酸？

2.思考題五、實驗報告（1）淀粉、明膠等生物大分子物質(zhì)能否不經(jīng)分解而直實驗七水和食品中微生物的檢測

實驗七水和食品中微生物的檢測一、目的要求了解食品衛(wèi)生微生物學(xué)的重要性及其原理學(xué)會水和食品中細(xì)菌菌落總數(shù)的測定方法和平板活菌計數(shù)法3.學(xué)會水和食品中大腸菌群數(shù)的測定方法一、目的要求了解食品衛(wèi)生微生物學(xué)的重要性及其原理二、基本原理

水和食品中的微生物數(shù)量主要考慮到的是細(xì)菌特別是病原菌的數(shù)量。這些細(xì)菌主要來源于土壤、垃圾、糞便等，尤其是后者。若飲用水、釀造水和食品中發(fā)現(xiàn)有大腸群細(xì)菌，就有可能存在腸道病原菌，可能會危害人們的健康，因此，進(jìn)行食品衛(wèi)生的微生物學(xué)檢驗是十分重要的。一般情況下，主要是測定水和食品中細(xì)菌菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)。細(xì)菌菌落總數(shù)是指水中或食品檢樣經(jīng)處理后，在一定條件培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)，其主要作為判定水和食品被污染程度的標(biāo)志。大腸菌群是腸道最普遍存在和數(shù)量最多的一群細(xì)菌、常將其作為人畜糞便污染的標(biāo)志。水和食品中大腸菌群數(shù)是以每100mL（g）檢樣中大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示的。二、基本原理水和食品中的微生物數(shù)量主要考慮到的是三、實驗材料水樣的采取：池水，河水或湖水應(yīng)距水面10-15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛滿后,將瓶塞蓋好,再從水中取出,最好立即檢查,否則需放入冰箱保存,時間不要超過六小時。2.其他實驗材料參考實驗講義P47三、實驗材料水樣的采取：四、實驗內(nèi)容（一）、食品中細(xì)菌菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)的檢測食品中細(xì)菌總數(shù)：用平板菌落計數(shù)法測定（即菌種分離純化技術(shù)的平板混合法）平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞,取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品的一個單細(xì)胞.統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細(xì)胞，所以,長成的一個單菌落也可能來自樣品中2-3或更多個細(xì)胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果,現(xiàn)在已傾向使用菌落形成的單位(colony-formingunits,cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。四、實驗內(nèi)容（一）、食品中細(xì)菌菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)的檢測四、實驗內(nèi)容2．食品中大腸菌群數(shù):用多管發(fā)酵法測定.包括初(步)發(fā)酵試驗,平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗三個部分(略)

發(fā)酵管內(nèi)裝有乳糖蛋白胨液體培養(yǎng)基,并倒置一杜氏發(fā)酵小管.乳糖能起選擇作用,因為很多細(xì)菌不能發(fā)酵乳糖,而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣.為便于觀察細(xì)菌產(chǎn)酸情況，培養(yǎng)基內(nèi)加有溴甲酚紫作為PH指示劑,細(xì)菌產(chǎn)酸后,培養(yǎng)基即由原來的紫色變?yōu)辄S色.溴甲酚紫還有抑制其他細(xì)菌如芽孢菌生長的作用。

四、實驗內(nèi)容2．食品中大腸菌群數(shù):用多管發(fā)酵法測定.包括初圖7-1食品檢樣稀釋及傾注平板示意圖圖7-1食品檢樣稀釋及傾注平板示意圖四、實驗內(nèi)容操作圖示：四、實驗內(nèi)容操作圖示：四、實驗內(nèi)容（二）、準(zhǔn)備下次實驗培養(yǎng)基（P30-31）(1)肉湯瓊脂培養(yǎng)基：100mL，裝在250mL三角瓶(加2%瓊脂)(2)肉湯上層培養(yǎng)基：50mL，分裝8小試管，每支5mL（1/4試管）（加0.8%瓊脂）(3)蛋白胨水：30mL分裝5支小試管,每支4.5mL(4)吸管：1mL6支(5)培養(yǎng)皿：12皿，包成兩包，6個/包（三）、觀察上次實驗結(jié)果記錄四、實驗內(nèi)容（二）、準(zhǔn)備下次實驗培養(yǎng)基（P30-31）五、實驗報告1．食品微生物學(xué)檢測結(jié)果的報告(格式)：

微生物學(xué)檢測結(jié)果的報告送檢單位:×××有限公司送檢樣品:×××檢測項目:細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)檢測方法:(1)食品中細(xì)菌總數(shù):用平板菌落計數(shù)法測定.(根據(jù)國標(biāo)GB4789．2-94)(2)食品中大腸菌群數(shù):用多管發(fā)酵法測定.(根據(jù)國標(biāo)GB4789．3-94)檢測結(jié)果:(1)食品中細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果:(2)食品中大腸菌群數(shù)檢測結(jié)果:陽性結(jié)果記“+”;陰性結(jié)果記“_”。一支管一個記號。結(jié)論:

檢測單位:華工生物工程××××級檢測人(報告人):×××

日期:200×-××-××五、實驗報告1．食品微生物學(xué)檢測結(jié)果的報告(格式)：五、實驗報告2.思考題為什么融化后培養(yǎng)基要冷卻至50℃左右才能倒平板？要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵？為什么？試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)缺點及應(yīng)用。當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認(rèn)為問題在哪里？用傾注平板法和涂布平板法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長時間（48小時）后觀察結(jié)果？大腸菌群的定義是什么？大腸菌群中的細(xì)菌種類，一般并非是病原菌，為什么要選用大腸菌群作為食品被污染的指標(biāo)？五、實驗報告2.思考題實驗八噬菌體效價的測定

實驗八噬菌體效價的測定一、目的要求

學(xué)會噬菌體的檢查及其效價測定方法學(xué)會觀察識別噬菌斑一、目的要求學(xué)會噬菌體的檢查及其效價測定方法二、基本原理

噬菌體的效價就是1mL培養(yǎng)液中所含活噬菌體的數(shù)量。效加測定的方法，一般應(yīng)用雙層瓊脂平板法。由于在含有特異宿主細(xì)菌的瓊脂平板上，噬菌體長生肉眼可見的噬菌斑。因此，能進(jìn)行噬菌體的計數(shù)。但因噬菌斑計數(shù)方法其實效率難以接近100%（一般偏低，因為有少數(shù)活噬菌體可能未引起感染），所以為了準(zhǔn)確地表達(dá)病毒菌懸液的濃度（效價）一般不用病毒粒子的絕對數(shù)量而是用噬菌斑形成單位（plague-formingunits，簡寫成pfu）二、基本原理噬菌體的效價就是1mL培養(yǎng)液中所三、實驗材料菌種（1）噬菌體待檢液的制備：參照實驗講義P35（2）指示菌液的制備：參照實驗講義P35培養(yǎng)基及玻璃器皿

已在實驗七預(yù)先準(zhǔn)備其它器材

水浴鍋、電爐、酒精燈、接種環(huán)等三、實驗材料菌種四、實驗內(nèi)容圖8-1平板點滴法噬檢操作過程四、實驗內(nèi)容圖8-1平板點滴法噬檢操作過程四、實驗內(nèi)容圖8-2單層瓊脂法噬檢操作過程四、實驗內(nèi)容圖8-2單層瓊脂法噬檢操作過程四、實驗內(nèi)容圖8-3雙層瓊脂法測定噬菌體效價操作過程四、實驗內(nèi)容圖8-3雙層瓊脂法測定噬菌體效價操作過程四、實驗內(nèi)容1、噬菌體的效價雙層法：

(每組做3個稀釋度，每個稀釋度做2皿；另加對照1皿，共7皿)注意事項：噬菌體對溫度極其敏感，一般噬菌體60℃下5分鐘絕大部分失活.因此加入上層培養(yǎng)基的溫度要嚴(yán)格保持50℃以下，為防止瓊脂凝固,此步操作要快,均勻鋪滿，不能出氣泡。為保證獲得單一，彼此分離的噬菌斑，培養(yǎng)皿蓋上和培養(yǎng)基表面不得有凝結(jié)水滴。正置培養(yǎng)，不能倒置。每皿噬菌體數(shù)量不能太多，維持100-300個為宜,否則噬菌斑不能分開而連成一片。同組同學(xué)分工合作協(xié)調(diào)好，一位稀釋噬菌體同時移噬菌體液以及移指示菌液；一位倒制底層平板同時拿上層試管接好移液。四、實驗內(nèi)容1、噬菌體的效價四、實驗內(nèi)容噬菌體效價測定操作圖示:四、實驗內(nèi)容噬菌體效價測定操作圖示:四、實驗內(nèi)容2、準(zhǔn)備下次實驗配培養(yǎng)基和玻璃器皿(每實驗臺)1）完全培養(yǎng)基2）再生培養(yǎng)基3）生理鹽水4）緩沖液

A.0.1mol/L,PH6.0磷酸緩沖液.B.高滲緩沖液,于上述緩沖液中加入0.8mol/L甘露醇5）原生質(zhì)體穩(wěn)定液(SMM)5mol/L蔗糖,20mol/LMgCl20.02mol/L順丁烯二酸,調(diào)PH6.56）促融合劑

40%聚乙二醇(PEG-4000)SMM溶液

7）玻璃器皿包扎：

A．培養(yǎng)皿：18皿，6皿/包，包成3包

B．小試管：20支

C．吸嘴：1盒（約60個）3、觀察上次實驗結(jié)果四、實驗內(nèi)容2、準(zhǔn)備下次實驗配培養(yǎng)基和玻璃器皿(每實驗臺)五、實驗報告1、記錄雙層平板上的噬菌斑數(shù)目，計算噬菌體效價注:噬菌體校價=pfu數(shù)×稀釋倍數(shù)×10五、實驗報告1、記錄雙層平板上的噬菌斑數(shù)目，計算噬菌體效價注五、實驗報告2、思考題：

測定噬菌體的效價，操作時要注意些什么才能測定準(zhǔn)確？計算噬菌體效價時，選擇30-300個pfu的平板計數(shù)較好，為什么？如果在你的測定平板上，偶爾出現(xiàn)其他細(xì)菌的菌落，是否影響你的噬菌體效價測定？五、實驗報告2、思考題：微生物學(xué)實驗微生物學(xué)實驗微生物實驗的意義、研究進(jìn)展和實驗內(nèi)容一、研究內(nèi)容研究微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理生化遺傳變異、微生物與其他生物、與自然界之間的關(guān)系

機(jī)理研究：微生物適應(yīng)環(huán)境的機(jī)制鞭毛運(yùn)動的機(jī)理等是生化和分子生物學(xué)研究的重要內(nèi)容

微生物實驗的意義、研究進(jìn)展和實驗內(nèi)容一、研究內(nèi)容2.微生物與實際應(yīng)用微生物與發(fā)酵工程微生物與環(huán)境工程微生物與農(nóng)業(yè)微生物與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域微生物與食品工業(yè)2.微生物與實際應(yīng)用微生物與發(fā)酵工程二、微生物學(xué)研究進(jìn)展微生物基因組學(xué)研究（MicrobialGenomics）不可培養(yǎng)微生物（UnculturedMicroorganisms）DNA芯片（DNAChip）三域?qū)W說（Bacteria,Archae,Eucaryote）二、微生物學(xué)研究進(jìn)展三、微生物學(xué)與Nobel獎

到目前為止，幾十項Nobel生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎，化學(xué)獎都與微生物學(xué)有關(guān)參考：沈萍教授《微生物學(xué)》緒論部分

Nobel獲獎?wù)呷珪?、微生物學(xué)與Nobel獎四、如何進(jìn)行微生物學(xué)實驗

嚴(yán)肅認(rèn)真科學(xué)態(tài)度分析問題搞清原理四、如何進(jìn)行微生物學(xué)實驗五、微生物實驗安排與考核基礎(chǔ)實驗：4次大實驗設(shè)計實驗方案實驗操作總結(jié)匯報五、微生物實驗安排與考核基礎(chǔ)實驗：4次大實驗課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)章制度嚴(yán)肅課堂紀(jì)律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（3次）工作服課堂紀(jì)律嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)章制度實驗室安全和衛(wèi)生安全實驗室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器衛(wèi)生每次實驗需留下6位同學(xué)值日，協(xié)助保持實驗室清潔實驗室安全和衛(wèi)生安全衛(wèi)生實驗一實驗室環(huán)境和人體體表微生物的檢測實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧蠈嶒灢襟E實驗結(jié)果思考題實驗一實驗室環(huán)境和人體體表微生物的檢測實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗驗證在實驗室內(nèi)的空氣、器、物和人體表面上存在著微生物。觀察不同微生物的菌落形態(tài)特征。比較不同取樣處微生物的類型和數(shù)量。學(xué)習(xí)從自然環(huán)境中采集微生物的方法，了解并掌握無菌操作技術(shù)。一、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗驗證在實驗室內(nèi)的空氣、器、物和人體表面上二、實驗原理空氣中的微生物菌體和霉菌孢子→無處不在接種于含有豐富營養(yǎng)，不帶有任何其它微生物的瓊脂固體培養(yǎng)基上，在適宜條件下，微生物吸收各種營養(yǎng)，可形成肉眼可見的群體——菌落。不同微生物形成的菌落差異很大。二、實驗原理空氣中的微生物菌體和霉菌孢子→無處不在三、實驗材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂平板用具：接種環(huán)、酒精燈、無菌水、滅菌棉簽、試管架、記號筆、廢物缸、吸水紙等。三、實驗材料培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂平板四、實驗步驟一、平板皿底標(biāo)記姓名、日期、組別、樣品來

源等，字體要小。二、實驗室空氣及空氣傳播微生物的檢查：（1）空氣（2）口腔（3）頭發(fā)四、實驗步驟一、平板皿底標(biāo)記姓名、日期、組別、樣品來四、實驗步驟三、人體體表及錢幣上微生物的檢查（1）無菌操作技術(shù)各