人類性染色質(zhì)小體的制備與觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

人類性染色質(zhì)小體的制備與觀察1949年，Barr在貓神經(jīng)元核仁附近發(fā)現(xiàn)一種染色很深的小體。仔細(xì)研究發(fā)現(xiàn)這種小體出現(xiàn)在多數(shù)雌貓神經(jīng)元中，而在雄貓的神經(jīng)元中則極少出現(xiàn)。他以更多的動(dòng)物組織做了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)食肉類、偶蹄類、靈長(zhǎng)類（包括人類）等動(dòng)物的不同組織的體細(xì)胞中，同樣顯示這種性別差異。Barr稱這種小體為核仁隨體（現(xiàn)在我們通常稱之為Barr小體，性染色質(zhì)小體，或X染色質(zhì)。下文統(tǒng)稱這種小體為X染色質(zhì)），并推論這種小體是由性染色體的異染色質(zhì)衍化來(lái)的。Barr的推論是正確的，但他并沿岸有弄清這小體競(jìng)是1條X染色體還是2條X染色體的異染色質(zhì)形成的。這是因?yàn)殚g期的染色體在核中伸展成絲狀，異染色質(zhì)雖可染上較深的顏色，但無(wú)法辨別它究竟是一條染色體或僅是一條染色體或僅是染色體的一個(gè)片段。20世紀(jì)60年代前后，根據(jù)對(duì)性染色體異常病人的X染色體與X染色質(zhì)數(shù)目的關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，X染色質(zhì)數(shù)等于一個(gè)個(gè)體的X染色體數(shù)減1。進(jìn)一步的研究表明，一個(gè)X染色質(zhì)是一條異染色質(zhì)化的X染色，在間期其DNA的復(fù)制要比其他的染色體晚（Morishima，1962）。在一個(gè)個(gè)體中，究竟是來(lái)自父本還是來(lái)自母本的X染色體失活，則是隨機(jī)的，這種隨機(jī)失活是生物體內(nèi)的劑量補(bǔ)償機(jī)制（LYON，M.，1962）。從上述我們可以看出X染色質(zhì)是一種包含結(jié)構(gòu)基因的異染色質(zhì)，這種異染色質(zhì)通常稱為兼性異染色質(zhì)（facultativechromatin）。通常用口腔粘膜、頭發(fā)根鞘、外周血細(xì)胞等制備X染色質(zhì)。由于取材方便，方法簡(jiǎn)單，X染色質(zhì)檢測(cè)廣泛應(yīng)用于性別畸形的診斷中。檢查羊水細(xì)胞的X染色質(zhì)，還可在產(chǎn)前診斷胎兒性別。在人類細(xì)胞中，還存在另一種異染色質(zhì)小體，這就是Y染色質(zhì)，Y染色體在間期也呈現(xiàn)異固縮狀態(tài)。Y染色質(zhì)如何檢測(cè)呢？研究發(fā)現(xiàn)，Y染色體長(zhǎng)臂的遠(yuǎn)端經(jīng)過(guò)熒光染料喹吖因（quinacrine）染色后，可發(fā)出明亮的熒光，這種熒光在間期細(xì)胞中表現(xiàn)為一個(gè)明亮的熒光點(diǎn)，直徑約在0.3-1um。在多數(shù)情況下，其他的染色體不顯熒光或不具有如此強(qiáng)的熒光，因此，這種熒光亮點(diǎn)就成了檢測(cè)Y染色質(zhì)的一種方法。用于制備X染色質(zhì)的材料同樣可用于制備Y染色質(zhì)。制備兩種染色質(zhì)的方法有多種，Schwarzacher（1974）曾對(duì)此做過(guò)詳盡的綜述。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將選擇兩種材料、兩種染色方法制備并觀察X染色質(zhì)小體。實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠⒄莆者\(yùn)用卡寶品紅染色制備并觀察X染色質(zhì)小體的方法。了解并掌握選擇兩種材料制備并觀察X染色質(zhì)小體的方法。獲取實(shí)驗(yàn)材料口腔黏膜細(xì)胞：取一干凈的載玻片，用記號(hào)筆在即將涂細(xì)胞的一面作個(gè)標(biāo)記。先用水將口漱凈，盡可能除去口中的雜物。然后用牙簽鈍頭在口腔一側(cè)用力刮取，棄去第一次得到的刮取物，在同一部位繼續(xù)刮?。ㄟ@樣就可取得深層的表皮細(xì)胞），將刮得的細(xì)胞涂抹在干凈載玻片上，反復(fù)幾將從，使玻片上的材料盡量厚些。勿令玻片上的材料干燥，迅速將玻片插入裝固定液的染色缸中固定30分鐘以上。如果讓材料在空氣中干燥，會(huì)使細(xì)胞變形。拿剛涂抹的玻片直接插入固定液中，當(dāng)然會(huì)使許多材料丟失，但粘在玻片面上的細(xì)胞足夠觀察之需。固定后將載玻片在空氣中晾干，這樣，細(xì)胞就可以緊貼在玻片的表面。獲取實(shí)驗(yàn)材料2.毛囊細(xì)胞（Hairfolliclecell）：拔取一根毛根比較大的毛發(fā)（頭發(fā)或其他部位，如手臂上的毛發(fā)均可；如可能，盡量選用白色或淺顏色的毛發(fā)，這樣在制片中就可減少色素的干擾）。在一張干凈的載玻片中央滴一滴45%的醋酸，將毛根浸漬其中。靜置約5分鐘，待毛根稍軟后用鑷子尖或解剖針尖將外層毛囊的組織細(xì)胞輕輕刮下（用力太大，則可能將毛發(fā)上的色素細(xì)胞一起刮下，影響制片效果）。棄去毛干。用解剖針將載玻片上的組織細(xì)胞均勻攤平。攤平的材料在空氣中晾干。染色卡寶品紅染色?在晾干的玻片上直接滴上染料，染色10分鐘。?在95%的酒精中分色1-3分鐘。?在無(wú)水酒精中繼續(xù)分色兩次，每次1分鐘。?用二甲苯透明兩次，每次約3分鐘，直接加蓋玻片封片（或用樹(shù)膠封片）后觀察。觀察?觀察X染色質(zhì)要用油鏡。結(jié)果辨析在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)到X染色質(zhì)為一結(jié)構(gòu)致密、輪廓清楚染色較深的小體。人類的X染色質(zhì)常附著于核膜內(nèi)側(cè)，這個(gè)位置就是晚復(fù)制的X染色體所處的位置(Morishima,1962)。大小約在卻m左右，呈三角形、卵形、短棒形或者雙球形。一般說(shuō)來(lái)，在動(dòng)物細(xì)胞中，X染色質(zhì)可以處于三個(gè)位置：靠近核仁，靠近核膜，或者自由地處于核區(qū)內(nèi)。這種位置，對(duì)于每一種來(lái)說(shuō)是相對(duì)固定的。處于核膜內(nèi)側(cè)的X染色質(zhì)在壓片時(shí)完全可能被壓在核的中央。這種情形下，X染色質(zhì)容易與核中其他的著色的結(jié)構(gòu)相混。為保險(xiǎn)計(jì)，我們通常只計(jì)數(shù)接近于核膜的小體。