微生物實驗注意事項

微生物實驗注意事項微生物實驗注意事項微生物實驗注意事項微生物實驗注意事項實驗過程中要及時詳細(xì)標(biāo)除去產(chǎn)物和日期，實驗做完今后要對以前的過分產(chǎn)品做個清理，省得東西累積過多。實驗后的DNA和RNA要及時放回冰箱，省得時間長降解，特別是用水溶解的時候。3.要及時甘油保存你判斷出的細(xì)菌，每個細(xì)菌保存兩份，存放在-80度冰箱里。實驗用的酶類固然在室溫下放一段時間也沒什么問題，但還是要及時放回冰箱，省得活性降低。要及時清理實驗臺面，保持干凈，整齊，有序。無菌操作臺用后及時清理干凈，操作真菌和細(xì)菌等最好不要交織使用。培育基使用的時候要注意無菌操作，移液器不要插入培育基中，之允許無菌槍頭進(jìn)入瓶子腔體，如培育基較少，可以傾斜瓶子，移液器取液體最好不要用到最大批程，省得吸液過猛以致與移液器接觸。滅好的培育基標(biāo)簽必定要寫好，包含名稱，日期，能否加抗生素，能否加抗生素特別重要，特別是在共用培育基的實驗室。實驗用過的試劑蓋子必定要蓋好，省得揮發(fā)。特別是有毒的物件，如氯仿，苯酚等，用完后的瓶子及時取出實驗室。帶手套接觸有毒物件后，要及時辦理掉手套。無論能否接觸過有毒物件，，不要戴著手套亂接觸其余東西，如開窗等。11.做實驗過程中不要接電話，說話，考慮其余事情。特別是PCR和配溶液的時候。做PCR和配溶液的時候要把所用的試劑找全，一字排開，加完一種東西就把這類東西放到一邊，可防范自己少加錯東西。同時作幾個實驗的時候必定要有準(zhǔn)時器，防范自己忘掉，特別是在煮東西，加熱熔解溶液等危險操作的時候，切忌。飯前，有活動前不要做實驗，這時候趕忙忙忙特別簡單出錯，特別是作有危險的實驗，更要注意。作好試驗記錄，無論有沒有結(jié)果，必定要堅持。還有點用圖片，測序結(jié)果等，假如不清楚記錄東西多了，就亂了，混了。這個必定要仔細(xì)做好。要隨時寫下自己的想法，由于有些想法片刻即逝。微生物實驗注意事項一、無菌操作要求接種細(xì)菌時一定穿工作服、戴工作帽。進(jìn)行接種食品樣品時，一定穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。接種食品樣品時，應(yīng)在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，而后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛?。進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培育基等一定經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不可以擱置后再使用，金屬器具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點燃炙烤三次后使用。從包裝中取出吸管時，吸管尖部不可以涉及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時，吸管尖不得涉及試管或平皿邊。接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌一定在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要經(jīng)過分焰消毒。接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰炙烤所有金屬絲，必需時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在開水中煮沸5min，再經(jīng)火焰炙烤。吸管汲取菌液或樣品時，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭汲取，不得直接用口吸。二、無菌間使用要求1.無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門，另設(shè)有的小窗，以備進(jìn)入無菌間后傳達(dá)物件。無菌間內(nèi)應(yīng)保持潔凈，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦抹工作臺面，不得存放與實驗沒關(guān)的物件。3.無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外燈，如采納室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，30W需紫外燈，距離在1.0m處，照耀時間許多于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，省得引起傷害，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦抹，除去上邊灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。4.辦理和接種食品標(biāo)本時，進(jìn)入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳達(dá)物件，可經(jīng)過小窗傳達(dá)。5.在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時，則應(yīng)有過濾裝置。三、消毒滅菌要求微生物檢測用的玻璃器皿、金屬器具及培育基、被污染和接種的培育物等，一定經(jīng)滅菌后方能使用。（一）干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法1．滅菌前準(zhǔn)備（1）所有需要滅菌的物件第一應(yīng)沖洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)實，如用金屬筒應(yīng)將上邊通氣孔打開。（2）裝培育基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。2．裝放1）干熱滅菌器：裝放物件不行過擠，且不可以接觸箱的四壁。2）大型高壓蒸氣鍋：擱置滅菌物件分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物件之間不可以過擠。3．設(shè)備檢查1）檢查門的開關(guān)能否靈巧，橡皮圈有無損壞，能否平坦。2）檢查壓力表蒸氣排盡時能否逗留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察能否漏氣，壓力表與溫度計所標(biāo)示的狀況能否吻合，管道有無擁堵。3）對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，能否吻合于進(jìn)行滅菌辦理的要求。4．滅菌辦理干熱滅菌法：此法適應(yīng)于在干熱狀況下，不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物件、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。器材器皿應(yīng)沖洗后再干烤，以防附著在表面的污物炭化。②滅菌時安置物件不可以過擠，不要直接接觸底和箱壁，物件之間留有空隙。③菌時將箱門關(guān)緊，接上電源，先將排氣孔打開約氣，溫度升至160℃調(diào)理指示燈，保持1.5–2h。④滅菌達(dá)成后或溫度升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。30min，除去滅菌器中的冷空氣。手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變污濁需更換）.②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破碎的滅菌器不得使用）。③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。④關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并保持規(guī)準(zhǔn)時間（按滅菌物件性質(zhì)與相關(guān)狀況而定）。⑤達(dá)到規(guī)準(zhǔn)時間后，對需干燥的物件，馬上打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物件，不要打開排氣閥，而應(yīng)馬上將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到體激烈沸騰或容器爆破。60℃以下再開蓋取物，以防忽然減壓。(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按以下步驟進(jìn)行：①關(guān)緊鍋門，打開進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。②夾層達(dá)到預(yù)約溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。③待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時，調(diào)理進(jìn)氣閥，使保持恒定至④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防忽然降壓，液體激烈沸騰或容器爆破。⑤使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物件關(guān)緊門后，應(yīng)依據(jù)物件種類按動相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動進(jìn)行滅菌，滅菌時一定利用附設(shè)儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格依照廠家說明書進(jìn)行。5．滅菌溫度與時間：干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。(2)（二）間歇滅菌方法壓力蒸氣滅菌滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌簡單損壞，可用此法滅菌。（1）將欲滅菌物件置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內(nèi)余水排盡。（2）關(guān)閉排水口，打開進(jìn)氣門，依據(jù)需要消毒10～20min。（3）滅菌達(dá)成關(guān)閉進(jìn)氣門，取出物件待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，這樣三次，即可達(dá)到滅菌目的。2．血清凝固器使用方法，培育基中含有血清或雞蛋特別成份時，因高熱會損壞其營養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達(dá)到滅菌目的。(1)使用。在使用該法滅菌的血清均分裝時，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后(2)將培育基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫

75～90℃1h

滅菌，放

37℃溫箱過夜，再這樣滅菌三次。3．煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5min，加入0.02﹪甲醛,80℃煮60min均可達(dá)到滅菌目的,煮沸消毒的增消劑時,應(yīng)注意對物件的腐化性.但采納4．滅菌辦理:滅菌后物件,按正常狀況已屬無菌,從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查擱置,省得再度污染。物件取出,隨即檢查包裝的完好性,如有損壞或棉塞脫掉,不行作為無菌物件使用。取出的物件,如為包裝有明顯的水浸者,不行作為無菌物件使用。培育基或試劑等,應(yīng)檢查能否吻合達(dá)到滅菌后的色彩或狀態(tài),未達(dá)到者應(yīng)荒棄。啟閉式容器,在取出時應(yīng)將篩孔關(guān)閉。取出的物件掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為遇到污染,不行作為無菌物件使用。取出的合格滅菌物件,應(yīng)存放于儲藏室或防塵柜內(nèi),禁止與未滅菌物件混放。凡屬合格物件,應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效限期。每批滅菌辦理達(dá)成后,記錄滅菌品名、數(shù)目、溫度、時間、操作者。四、有毒有菌污物辦理要求微生物實驗所用實驗器材、培育物等未經(jīng)消毒辦理，一律不得帶出實驗室。1.經(jīng)培育的污染資料及荒棄物應(yīng)放在嚴(yán)實的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點，待一致進(jìn)行高壓滅菌。經(jīng)微生物污染的培育物，一定經(jīng)121℃30min高壓滅菌。3.染菌后的吸管，使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒min高壓滅菌。液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng)121℃304.涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液一定沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24沸清洗。做凝集試驗用的玻片或平皿，一定高壓滅菌后清洗。5.打碎的培育物，

馬上用

5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位，

浸泡半小時后再擦抹干凈。

污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi)，經(jīng)

高壓滅菌后方能清洗。

五、培育基制備要求

培育基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長。由于各種微生物對其營養(yǎng)要求不完好同樣，培育目的的不一樣，各種培育基制備要求以下：1．依據(jù)培育基配方的成分按量稱取，而后溶于蒸餾水中，在使用前對應(yīng)用的試劑藥品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗。2．PH其測定及調(diào)理：PH測定要在培育基冷至室溫時進(jìn)行，因在熱或冷的狀況下，PH有必定差異，當(dāng)測定好時，按計算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測試一次。培育基PH值必定要正確，不然會影響微生物的生長或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培育基的PH降低或高升，故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多，省得影響培育基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入。3．培育基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長狀況，培育基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過濾，以除去積淀物，必需時可用雞蛋白澄清辦理，所用瓊脂條要早先洗凈晾干后使用，防范因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。4．盛裝培育基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。5．培育基的滅菌既要達(dá)到完好滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值，一般121℃15min即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培育基如糖類、血清、明膠等，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不可以加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。6．每批培育基制備好后，應(yīng)做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。假如是生化培育基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培育，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng)，培育基不該儲存過久，必需時可置4℃冰箱存放。7．目前各種干燥培育基許多，每批需用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長試驗或生化反應(yīng)觀察，各種培育基用相應(yīng)菌株生長試驗優(yōu)異后方可應(yīng)用，新購進(jìn)的或存放過久的干燥培育基，在配制時也應(yīng)測PH，使用時需依據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進(jìn)行。8．每批制備的培育基所用化學(xué)試劑、滅菌狀況及菌株生長試驗結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備盤問。六、樣品收集及辦理要求1．所收集的檢驗樣品必定要擁有代表性，采樣時應(yīng)第一對該批食品原料、加工、運輸、儲藏方法條件、四周環(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)檢查，檢查能否有污染源存在。2．依據(jù)食品的種類及數(shù)目，采樣數(shù)目及方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法的要求進(jìn)行。3．采樣應(yīng)注意無菌操作，容器一定滅菌，防范環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌，更不可以含有此類消毒藥物或抗生素類藥物，以防范殺死樣品中的微生物，所用剪、刀、匙器具也需滅菌方可應(yīng)用。4．樣品收集后應(yīng)馬上送往檢驗室進(jìn)行檢驗，送檢過程中一般不超出3h，如行程較遠(yuǎn)，可保存在1～5℃環(huán)境中，如需冷凍者，則在凍存狀態(tài)下送檢。5．檢驗室收到樣品后，進(jìn)行登記（樣品名稱、送檢單位、數(shù)目、日期、編號等）觀察樣品的外觀，假如發(fā)現(xiàn)有以下狀況之一者，可拒絕檢驗。樣品經(jīng)過特別高壓、煮沸或其余方法殺菌者，失掉代表原食品檢驗意義者。(2)瓶、袋裝食品已啟開者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完好者，即失掉原食品形狀者（食品中毒樣品除外）。按規(guī)定采樣數(shù)目不足者。對送檢吻合要求的樣品，檢驗室收到后，應(yīng)馬上進(jìn)行檢驗，假如條件不具備，應(yīng)置4℃冰箱存放，及時準(zhǔn)備創(chuàng)立條件，而后進(jìn)行檢驗。6．樣品檢驗時，依據(jù)其不一樣性狀，進(jìn)行合適辦理。