鄰二氮菲分光光度法測定鐵含量課件

2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)了解分光光度法的基本原理和基本方法。2.掌握鄰二氮菲吸光光度法測定鐵的方法。3.學(xué)習(xí)吸光光度法測定鐵吸收曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法。4.了解分光光度計(jì)的構(gòu)造、性能及使用方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)了解分光光度法的基本原理和基本方法。一、分光光度法分光光度法(spectrophotometry):根據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，是應(yīng)用分光光度計(jì)測量溶液在某一波長下的吸光度以確定溶液中被測物質(zhì)含量的分析方法。一、分光光度法分光光度法(spectroph透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItIaI0=Ia+

It

透光率入射光透射光T的取值范圍：0.0%~100.0%全部吸收：0.0%全部透射：100%結(jié)論：溶液的透光率越大，表示它對(duì)光的吸收越?。环粗腹舛仍叫?，對(duì)光吸收越大。透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItI吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實(shí)驗(yàn)證明：溶液吸光度，與溶液濃度、液層厚度和入射光波長等因素有關(guān)。I0ItIa入射光透射光吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實(shí)驗(yàn)證明：物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對(duì)不同波長的光的吸收程度不同，吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長為最大吸收波長λmax。不同濃度的同一物質(zhì)，其吸收曲線性質(zhì)相似λmax不變。而對(duì)于不同物質(zhì)它們的吸收曲線形狀和λmax不同。吸收曲線可以提供物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。以波長λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)作圖，可得吸收光譜(吸收曲線)物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對(duì)不同波長的光的吸收程二、

Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Beer定律數(shù)學(xué)表達(dá)式：A=εbcb—液層厚度（光程長度，cm）c—是溶液的物質(zhì)的量濃度ε—是摩爾吸光系數(shù)（單位為L·mol-1·cm-1），與入射光波長及物質(zhì)本性有關(guān)若溶液組成量度以質(zhì)量濃度(g·L-1)表示，數(shù)學(xué)表達(dá)式還可以表示為：A=abc，式中a為吸光系數(shù)（單位為L·g-1·cm-1）。二、Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Bee在分光光度法中，當(dāng)條件一定時(shí)，吸光系數(shù)（ε、a）均為常數(shù)，此時(shí)溶液的吸光度（A）與有色物質(zhì)的濃度成正比。三、

比較法求未知品濃度同一實(shí)驗(yàn)中所使用的比色杯厚度b相等，相同的被測物，其a亦相同，將兩式相除得：在分光光度法中，當(dāng)條件一定時(shí)，吸光系數(shù)（ε、a）均為四、標(biāo)準(zhǔn)曲線法求未知品濃度A標(biāo)

=abc標(biāo)Y=k·XA標(biāo)(Y)c標(biāo)(X)A未c未四、標(biāo)準(zhǔn)曲線法求未知品濃度A標(biāo)=abc標(biāo)Y=k·五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法722s可見分光光度計(jì)預(yù)熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長方形按鈕為開關(guān)，開啟進(jìn)行預(yù)熱）機(jī)器調(diào)零：開蓋調(diào)零模式，按以下步驟操作：將樣品池蓋子打開-（面板上）“模式”按鍵調(diào)到透射比-“0%”按鍵（透射率為零）-關(guān)上蓋子按“100%”按鍵（透射率100%），調(diào)零工作結(jié)束。

如果沒有進(jìn)行測試，樣品池蓋子一定處于開蓋狀態(tài)?。∥?、分光光度計(jì)使用方法722s可見分光光度計(jì)預(yù)熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長測試樣品步驟：（整個(gè)過程樣品池蓋關(guān)閉）空白樣品調(diào)零：1號(hào)溶液為空白樣品（1號(hào)溶液透光率為100%），利用拉桿（輕輕調(diào)節(jié)拉桿即可）使光路對(duì)準(zhǔn)空白樣品進(jìn)行調(diào)零，“模式”按鍵調(diào)到透射比-“100%”按鍵（光全部退通過1號(hào)溶液，相當(dāng)于將背景吸光度扣除掉）

注意：只要波長λ有變動(dòng)，就要進(jìn)行1號(hào)空白樣品調(diào)零操作

調(diào)零結(jié)束后，進(jìn)入吸光度模式，就可以將樣品調(diào)到與光路對(duì)應(yīng)位置進(jìn)行吸光度測試。讀取吸光度數(shù)值、記錄。

注意：一定要耐心等待約1分鐘左右，讀數(shù)穩(wěn)定后才可按動(dòng)按鍵進(jìn)行0%或100%調(diào)節(jié)操作！！五、分光光度計(jì)使用方法測試樣品步驟：（整個(gè)過程樣品池蓋關(guān)閉）五、分光光度計(jì)使用方法鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在pH=3~9的溶液中，試劑與Fe2+生成穩(wěn)定的橙紅色配合物該顯色反應(yīng)中鐵必須是亞鐵狀態(tài)，因此，在顯色前要加入還原劑，如鹽酸羥胺，反應(yīng)如下：2Fe3++2NH2OH·HCl+2H2O=2Fe2++N2↑+4H3O++2Cl-六、顯色劑鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在表5-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液配制實(shí)驗(yàn)序號(hào)1（空白）234567標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液/mL00.200.400.600.801.0010.00（水樣）鹽酸羥胺/mL0.500.500.500.500.500.500.50鄰二氮菲/mL1.001.001.001.001.001.001.00醋酸鈉溶液/mL2.502.502.502.502.502.502.50V總（稀釋）/mL25.0025.0025.0025.0025.0025.0025.00c稀釋（Fe2+）/mmol·L-1表5-2吸收光譜的測定λ/nm450460470480490500510520530540550560Aλmax/nm用4號(hào)樣品找到具有最大吸光度的波長后，可在其左右5nm處，再測一下。七、實(shí)驗(yàn)步驟表5-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液配制實(shí)驗(yàn)序號(hào)1（空白）23456選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號(hào)溶液透射比100%后，測出2-7號(hào)溶液的吸光度：六、實(shí)驗(yàn)步驟表5-3標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液的吸光度數(shù)據(jù)記錄容量瓶編號(hào)1（空白）234567（水樣）c稀釋（Fe2+）/mmol·L-10.00？？吸光度A0.00根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出濃度數(shù)值選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號(hào)溶液透射比七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（1）繪制吸收光譜并確定λmax：根據(jù)表5-2所記錄的數(shù)據(jù)，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)在坐標(biāo)紙上繪制吸收光譜，從而找出測量用的最大吸收波長λmax。吸收光譜：（附圖）（2）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：根據(jù)表5-1所記錄的數(shù)據(jù)，以標(biāo)準(zhǔn)Fe2+離子的濃度（μmol·L-1）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)繪制濃度對(duì)吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線：（附圖）直線七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（1）繪制吸收光譜并確定λmax：根據(jù)（3）待測溶液中Fe3+（或Fe2+）離子濃度的確定：根據(jù)所測的待測溶液的吸光度，利用比較法和標(biāo)準(zhǔn)曲線法分別計(jì)算出原未知溶液Fe3+（或Fe2+）濃度（mg·L-1）。標(biāo)準(zhǔn)曲線：（附圖）

1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接讀出Fe2+的含量為＿＿＿（mg·L-1）；原水樣中鐵離子含量為＿＿＿＿＿＿（mg·L-1）。2）比較法：所選取Fe2+標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度＿＿＿＿＿＿；水樣的吸光度＿＿＿＿＿＿＿＿＿；原水樣中鐵離子含量為＿＿＿＿＿＿（mg·L-1）。七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（3）待測溶液中Fe3+（或Fe2+）離子濃度的確定：根據(jù)所注意吸量管上“吹或快”字注意吸量管上“吹或快”字鄰二氮菲分光光度法測定鐵含量課件2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)了解分光光度法的基本原理和基本方法。2.掌握鄰二氮菲吸光光度法測定鐵的方法。3.學(xué)習(xí)吸光光度法測定鐵吸收曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法。4.了解分光光度計(jì)的構(gòu)造、性能及使用方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)了解分光光度法的基本原理和基本方法。一、分光光度法分光光度法(spectrophotometry):根據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，是應(yīng)用分光光度計(jì)測量溶液在某一波長下的吸光度以確定溶液中被測物質(zhì)含量的分析方法。一、分光光度法分光光度法(spectroph透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItIaI0=Ia+

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透光率入射光透射光T的取值范圍：0.0%~100.0%全部吸收：0.0%全部透射：100%結(jié)論：溶液的透光率越大，表示它對(duì)光的吸收越?。环粗腹舛仍叫?，對(duì)光吸收越大。透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItI吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實(shí)驗(yàn)證明：溶液吸光度，與溶液濃度、液層厚度和入射光波長等因素有關(guān)。I0ItIa入射光透射光吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實(shí)驗(yàn)證明：物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對(duì)不同波長的光的吸收程度不同，吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長為最大吸收波長λmax。不同濃度的同一物質(zhì)，其吸收曲線性質(zhì)相似λmax不變。而對(duì)于不同物質(zhì)它們的吸收曲線形狀和λmax不同。吸收曲線可以提供物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。以波長λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)作圖，可得吸收光譜(吸收曲線)物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對(duì)不同波長的光的吸收程二、

Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Beer定律數(shù)學(xué)表達(dá)式：A=εbcb—液層厚度（光程長度，cm）c—是溶液的物質(zhì)的量濃度ε—是摩爾吸光系數(shù)（單位為L·mol-1·cm-1），與入射光波長及物質(zhì)本性有關(guān)若溶液組成量度以質(zhì)量濃度(g·L-1)表示，數(shù)學(xué)表達(dá)式還可以表示為：A=abc，式中a為吸光系數(shù)（單位為L·g-1·cm-1）。二、Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Bee在分光光度法中，當(dāng)條件一定時(shí)，吸光系數(shù)（ε、a）均為常數(shù)，此時(shí)溶液的吸光度（A）與有色物質(zhì)的濃度成正比。三、

比較法求未知品濃度同一實(shí)驗(yàn)中所使用的比色杯厚度b相等，相同的被測物，其a亦相同，將兩式相除得：在分光光度法中，當(dāng)條件一定時(shí)，吸光系數(shù)（ε、a）均為四、標(biāo)準(zhǔn)曲線法求未知品濃度A標(biāo)

=abc標(biāo)Y=k·XA標(biāo)(Y)c標(biāo)(X)A未c未四、標(biāo)準(zhǔn)曲線法求未知品濃度A標(biāo)=abc標(biāo)Y=k·五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法五、分光光度計(jì)使用方法722s可見分光光度計(jì)預(yù)熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長方形按鈕為開關(guān)，開啟進(jìn)行預(yù)熱）機(jī)器調(diào)零：開蓋調(diào)零模式，按以下步驟操作：將樣品池蓋子打開-（面板上）“模式”按鍵調(diào)到透射比-“0%”按鍵（透射率為零）-關(guān)上蓋子按“100%”按鍵（透射率100%），調(diào)零工作結(jié)束。

如果沒有進(jìn)行測試，樣品池蓋子一定處于開蓋狀態(tài)！！五、分光光度計(jì)使用方法722s可見分光光度計(jì)預(yù)熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長測試樣品步驟：（整個(gè)過程樣品池蓋關(guān)閉）空白樣品調(diào)零：1號(hào)溶液為空白樣品（1號(hào)溶液透光率為100%），利用拉桿（輕輕調(diào)節(jié)拉桿即可）使光路對(duì)準(zhǔn)空白樣品進(jìn)行調(diào)零，“模式”按鍵調(diào)到透射比-“100%”按鍵（光全部退通過1號(hào)溶液，相當(dāng)于將背景吸光度扣除掉）

注意：只要波長λ有變動(dòng)，就要進(jìn)行1號(hào)空白樣品調(diào)零操作

調(diào)零結(jié)束后，進(jìn)入吸光度模式，就可以將樣品調(diào)到與光路對(duì)應(yīng)位置進(jìn)行吸光度測試。讀取吸光度數(shù)值、記錄。

注意：一定要耐心等待約1分鐘左右，讀數(shù)穩(wěn)定后才可按動(dòng)按鍵進(jìn)行0%或100%調(diào)節(jié)操作?。∥?、分光光度計(jì)使用方法測試樣品步驟：（整個(gè)過程樣品池蓋關(guān)閉）五、分光光度計(jì)使用方法鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在pH=3~9的溶液中，試劑與Fe2+生成穩(wěn)定的橙紅色配合物該顯色反應(yīng)中鐵必須是亞鐵狀態(tài)，因此，在顯色前要加入還原劑，如鹽酸羥胺，反應(yīng)如下：2Fe3++2NH2OH·HCl+2H2O=2Fe2++N2↑+4H3O++2Cl-六、顯色劑鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在表5-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液配制實(shí)驗(yàn)序號(hào)1（空白）234567標(biāo)準(zhǔn)Fe2+溶液/mL00.200.400.600.801.0010.00（水樣）鹽酸羥胺/mL0.500.500.500.500.500.500.50鄰二氮菲/mL1.001.001.001.001.001.001.00醋酸鈉溶液/mL2.502.502.502.502.502.502.50V總（稀釋）/mL25.0025.0025.0025.0025.0025.0025.00c稀釋（Fe2+）/mmol·L-1表5-2吸收光譜的測定λ/nm450460470480490500510520530540550560Aλmax/nm用4號(hào)樣品找到具有最大吸光度的波長后，可在其左右5nm處，再測一下。七、實(shí)驗(yàn)步驟表5-1標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液配制實(shí)驗(yàn)序號(hào)1（空白）23456選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號(hào)溶液透射比100%后，測出2-7號(hào)溶液的吸光度：六、實(shí)驗(yàn)步驟表5-3標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測溶液的吸光度數(shù)據(jù)記錄容量瓶編號(hào)1（空白）