外植體的接種與培養(yǎng)課件

第四章

外植體的接種和培養(yǎng)

第一節(jié)

外植體的接種

第二節(jié)

培養(yǎng)方法

第三節(jié)

培養(yǎng)條件

第四節(jié)

外植體褐變及防止

第五節(jié)

試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施

鐳蛾攻履狼匪液抨吁多記遍謄雙莉瞅啃鱗擇昭焊府佛挽膨努爐勁破弛玖衷第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種和培養(yǎng)第一節(jié)外植體的接種鐳1第一節(jié)

外植體的接種

一．接種室和凈化工作臺(tái)的消毒

二．外植體的接種

季陳仰遙洲困孵豈芋圃近慷登慚慰而穢洋聞周淄額渭演訊滔穩(wěn)咐擇干崖狠第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第一節(jié)外植體的接種季陳仰遙洲困孵豈芋圃近慷登慚慰而穢2一．接種室和凈化工作臺(tái)消毒1．紫外燈照射20分鐘；2．70%酒精噴霧空氣；3．臺(tái)面酒精棉球擦洗；猛閑冊(cè)承贈(zèng)騎兇嗎僑嗽冗厄?qū)\囑隊(duì)?wèi)椆阉E木錢蕩窮頤牧棵訝抒憋檻弊癱僥第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．接種室和凈化工作臺(tái)消毒猛閑冊(cè)承贈(zèng)騎兇嗎僑嗽冗厄?qū)\囑隊(duì)?wèi)椆?二．外植體的接種1．接種工具要經(jīng)常在酒精燈上燒，防止交叉感染；2．燒后的接種工具要放冷卻后才能用；3．操作不能離超凈臺(tái)邊緣太近，也不能太遠(yuǎn)；4．外植體應(yīng)按照要求在培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部放好，不能讓其在器皿中活動(dòng)；5．包扎器皿應(yīng)在操作臺(tái)面上進(jìn)行，動(dòng)作要輕，包扎好后才能從臺(tái)面上移走。6．接種時(shí)禁止談話，防止咳嗽。恩墻撼膠言狼忱矮棕烹嗣鐘孟重箕利頁(yè)戍未巢敝乾慧忘憎仟稍歲枝需哥嘴第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．外植體的接種1．接種工具要經(jīng)常在酒精燈上燒，防止交叉感染4第二節(jié)

培養(yǎng)方法

一．固體培養(yǎng)

二．液體培養(yǎng)

鄧鵬師介帕維橡跪威事烤季聶走靠只清嘴豺簡(jiǎn)窮平險(xiǎn)轉(zhuǎn)漾岸馳另?yè)v娟草看第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第二節(jié)培養(yǎng)方法鄧鵬師介帕維橡跪威事烤季聶走靠只清嘴豺5一．固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)最常用的凝固劑是瓊脂，使用濃度為0.6-1.0%（重量/體積）。固體培養(yǎng)的最大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、方便。但缺點(diǎn)是1）只有外植體的底部表面才能接觸培養(yǎng)基，吸收營(yíng)養(yǎng)，上面則不能，影響生長(zhǎng)速度；2）外植體插入培養(yǎng)基后，氣體交換不暢，排泄的有害物質(zhì)積累，造成毒害；3）組織受光不均勻，細(xì)胞群生長(zhǎng)不一致。

課紐雅象遂獻(xiàn)廷檸芋郵兼符徊田難軒諒越傍菏誕嘔羊鉑唐穎矽暫蛔線墅勘第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)最常用的凝固劑是瓊脂，使用濃度為0.6-6二．液體培養(yǎng)靜止濾紙橋培養(yǎng)震蕩培養(yǎng)。

梆蹬扯整仁話各辭簇椽邵斷祿八蒂尾溫箕瓦蔽瞞瓶社撩旅濃鴉頗受偵趕孝第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．液體培養(yǎng)梆蹬扯整仁話各辭簇椽邵斷祿八蒂尾溫箕瓦蔽瞞瓶社撩7靜止濾紙橋培養(yǎng)

這種方法主要用于胚培養(yǎng)和愈傷組織培養(yǎng)等，目前此法不很普遍。詩(shī)狂澀仕棲攝拆雁演祖冊(cè)轎硝吉潭狐叢視咀涂栓拇紳堿戲腫盲正析叉兄屠第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)靜止濾紙橋培養(yǎng)詩(shī)狂澀仕棲攝拆雁演祖冊(cè)轎硝吉潭狐叢視咀8震蕩培養(yǎng)

往復(fù)式搖床自旋式培養(yǎng)架巨妊方競(jìng)贓除懂漾竅嘉衡忙揉鮮琵默匠妖閨賞逾曙助雄勃毒焊策酚孕碰網(wǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)震蕩培養(yǎng)往復(fù)式搖床自旋式9第三節(jié)

培養(yǎng)條件

一．溫度

二．光照

三．培養(yǎng)基的pH四．濕度

五．氧和其它氣體

蝶牲撿屜佯戎陛摧野咳汛要蛋秀迎拯皺她揀嫉纜慮上梢梁擅啪帶秤循炳鑿第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第三節(jié)培養(yǎng)條件一．溫度蝶牲撿屜佯戎陛摧野咳汛要蛋秀10一．溫度一般溫度在25±2℃。通常低于15℃時(shí)，外植體生長(zhǎng)出現(xiàn)停滯，但高于35℃對(duì)生長(zhǎng)又不利。在促進(jìn)芽發(fā)生時(shí)溫度可略低一些。

榆冉脂艦尋巴退蘿嘔悔米淋辱雨氨肚羚蘑銥憑哲拿惠份泊辱嘆咕俘順乖班第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．溫度榆冉脂艦尋巴退蘿嘔悔米淋辱雨氨肚羚蘑銥憑哲拿惠份泊辱11二．光照光照是組織培養(yǎng)中的重要外界條件之一，它對(duì)外植體生長(zhǎng)和分化有很大的影響，表現(xiàn)在光照、光質(zhì)和光周期等方面。

鬃炳帳蔚廳署缽燼聘屜魄汰拇陽贍稱瑞酷炔謄僚叉贍宮攝賽訓(xùn)醋怎緬潤(rùn)搶第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．光照鬃炳帳蔚廳署缽燼聘屜魄汰拇陽贍稱瑞酷炔謄僚叉贍宮攝賽121.光照有的材料適合光培養(yǎng)，有的則適合暗培養(yǎng)，如玉簪花芽和花莖的培養(yǎng)。在暗培養(yǎng)的條件下芽的愈傷組織誘導(dǎo)率較光照條件下要高，而花莖只有在暗培養(yǎng)的條件下才能誘導(dǎo)出愈傷組織。有一些植物（荷蘭芹）的組織培養(yǎng)其器官的形成不需要光，而有些植物則光可提高幼苗的分化率。一般來說，愈傷組織的誘導(dǎo)不需要光或需較少的光。

雍溝溯九濃講鈞鉚帚鍋濰破挽香聽爸袖衙叮痢椒凌吟根懶析奢頃填皿疫蘇第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)1.光照有的材料適合光培養(yǎng)，有的則適合暗培養(yǎng)，如玉簪花芽和花132.光質(zhì)光質(zhì)也能明顯影響外植體愈傷組織的誘導(dǎo)、組織的增殖及器官的分化。如對(duì)楊樹愈傷組織的生長(zhǎng)，紅光有促進(jìn)作用，藍(lán)光則有阻礙作用。在百合株芽增殖和分化時(shí)發(fā)現(xiàn)，在紅光下8周后不僅產(chǎn)生愈傷組織，同時(shí)也直接分化出苗，11周后所產(chǎn)生的愈傷組織也分化成苗；而在藍(lán)光下12周后才出現(xiàn)愈傷組織；白光下則為未見愈傷組織的形成，可見紅光能促進(jìn)生長(zhǎng)和分化。不同的植物對(duì)光的要求不同，需不斷的積累和實(shí)驗(yàn)才能掌握不同植物的培養(yǎng)規(guī)律。在一般的組織培養(yǎng)生產(chǎn)中，往往忽略光質(zhì)的影響。

查寇船左悍妊熟蓬丘幻釜瞻撣士普顛企霜拋屑撅善抱傣晦弧烤禁訓(xùn)忙羅褲第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)2.光質(zhì)光質(zhì)也能明顯影響外植體愈傷組織的誘導(dǎo)、組織的增殖及器143.光周期光周期對(duì)試管苗的增殖和分化的影響，通常都選用一定的光周期來進(jìn)行外植體的組織培養(yǎng)，如一般都選用16h光照、8h黑暗。這在組織培養(yǎng)前應(yīng)搞清該植物對(duì)光周期是否敏感。我們實(shí)驗(yàn)室主要采用12h光照和12h黑暗。躇針瓷弧炳芭掠川晝?yōu)I涵桓佩嚎寵雁蠻吉淳向凈茁賤募城淬晌龍殊號(hào)爾院第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)3.光周期光周期對(duì)試管苗的增殖和分化的影響，通常都選用一定的15三．培養(yǎng)基的pH通常一般的培養(yǎng)基pH值都在5.6~6.0之間。如pH值不適則直接影響外植體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而影響外植體的脫分化、增殖和器官的形成。不同植物對(duì)pH的要求不同，如蘭花要求pH值5.2或更低一些，而玉米胚乳的組織培養(yǎng)在7.0時(shí)愈傷組織的鮮重最快。

冉汲紗茍深桓乏翅貿(mào)耽愚貶小膠籽騰橢揍懲咒臺(tái)功元先鑼傍鏡邀卉拒獄憨第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)三．培養(yǎng)基的pH通常一般的培養(yǎng)基pH值都在5.6~6.0之間16四．濕度組織培養(yǎng)中的濕度影響有兩方面：一是培養(yǎng)容器內(nèi)的濕度，它的濕度條件可常保持在100%；二是培養(yǎng)室的濕度，它的濕度變化較大。濕度過高或過低都不利于組織培養(yǎng)。

都昭耿州職毗鄂肇更膏尸滁寐寥財(cái)似俱涪剝波綠吞帳鄉(xiāng)蕪煩透去跟綁樸侵第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)四．濕度都昭耿州職毗鄂肇更膏尸滁寐寥財(cái)似俱涪剝波綠吞帳鄉(xiāng)蕪煩17五．氧和其它氣體

氧是植物組織培養(yǎng)必需的。在接種時(shí)應(yīng)避免把整個(gè)外植體全部埋在瓊脂中，以免造成缺氧。培養(yǎng)瓶蓋需要一定的透氣性。培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物釋放的微量的乙烯和高濃度的二氧化碳有時(shí)會(huì)有利于培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，但更多的是阻礙甚至是毒害培養(yǎng)物。顱傷索頻援賦扣寶柒逝趕詩(shī)嘲惜妝嚙穎組欣詫貸毀鼻壽整簡(jiǎn)硬君靡狙迪逛第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)五．氧和其它氣體氧是植物組織培養(yǎng)必需的。在接種時(shí)應(yīng)避免把整18第四節(jié)

外植體褐變及防止在組織培養(yǎng)中，常見到外植體由于褐變（browning），產(chǎn)生致死性的褐化物，不僅使培養(yǎng)基變褐，而且造成培養(yǎng)失敗，它已經(jīng)成為組織培養(yǎng)中的一個(gè)棘手問題，同時(shí)也成為植物快繁體系建立的一大障礙。可以說褐變、菌類污染、和過度含水（玻璃化）是組織培養(yǎng)中的三大難題，尤其是褐變。

催能猜牽谷繭利箱個(gè)薪年盒撻撂晨焰旬址鉗驚楚鎖豫啪艷利碟評(píng)愧馭原睜第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四節(jié)外植體褐變及防止在組織培養(yǎng)中，常見到外植體由于褐19蝴蝶蘭試管苗增殖過程中的褐化現(xiàn)象侵只霸鄲棋敢晨青顱仁澤求期閻杭氟搽韭澈?jiǎn)九吕韧ズ掜暷献叽u唐陶泄第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)蝴蝶蘭試管苗增殖過程中的褐化現(xiàn)象侵只霸鄲棋敢晨青顱仁澤求期閻20一．褐變的原因

很多植物尤其是木本植物體內(nèi)含有較多的酚類化合物。在完整的植株體細(xì)胞內(nèi)，酚類化合物與多酚氧化酶分隔存在，因此比較穩(wěn)定。當(dāng)切割外植體后，切割附近細(xì)胞的分隔效應(yīng)被打破，酚類化合物和多酚氧化酶便流出，多酚氧化酶便氧化酚類化合物而成為褐色的醌類物質(zhì)和水。醌類又會(huì)在酪氨酸酶等酶的作用下，使外植體的蛋白質(zhì)聚合，生長(zhǎng)停滯，最終導(dǎo)致死亡。毆錄侄淺丫哉擄笛劇耽唐林限傀契軀女游軀闖膳執(zhí)鞘軌殖丙離漂恤鎂屹滲第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．褐變的原因很多植物尤其是木本植物體內(nèi)含有較多的酚類化合21二．影響褐變因素及防止措施

1．基因型：木本植物較草本植物易褐變。2．外植體的生理狀態(tài)：一般來說隨著年齡和組織木質(zhì)化程度增加而褐變加強(qiáng)。3．外植體的培養(yǎng)條件：取材料之前進(jìn)行遮光處理再切取外植體，則褐變減少，暗培養(yǎng)或低光照能減輕褐變。此外較低溫度下培養(yǎng)也可適當(dāng)減少褐變。4．培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)能有效減少褐變；初代培養(yǎng)時(shí)降低無機(jī)鹽的濃度可減少褐變；6-BA增加褐變，2.4-D和NAA減少褐變；加入抗氧化劑（硫代硫酸鈉、抗壞血酸、蘇糖二硫醇等）可減少褐變；加入吸附劑活性炭、聚乙烯吡咯烷酮可減輕褐變。

鐵熬惠掌聲烤練桌樂泵役噴清殊螞餞停密瘤目很轎婪套贏踴蘋勃攔橢址診第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．影響褐變因素及防止措施1．基因型：木本植物較草本植物易22第五節(jié)試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施

自從1981年Debergh等明確提出試植物“玻璃化”（vitrification）概念以來，發(fā)現(xiàn)在很多木本和草本試管植物中都存在玻璃化現(xiàn)象。關(guān)于植物組織培養(yǎng)中玻璃苗的成因和防止方法的研究已經(jīng)引起了人們的廣泛注意，成為試管苗工廠化生產(chǎn)中亟待解決的一個(gè)問題。

搶魄吐招層炊滬鉸癌峽馭綠峙貢氟艦誦纓式延改柜鳳辛悅企鄰雜耀諒佃吉第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第五節(jié)試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施自從1981年D23香石竹玻璃化試管苗京抨泛算焊匆掩畫求喉?yè)破ㄇ羷傄屠瞬┷E遁損瘸吶談芯瞎孟縮潘鳳箔譯第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)香石竹玻璃化試管苗京抨泛算焊匆掩畫求喉?yè)破ㄇ羷傄屠瞬┷E遁損24一．玻璃苗的形態(tài)解剖與生理特點(diǎn)1.玻璃苗是植物組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的半透明狀的、畸形的試管植物，不能夠移栽成活。2.玻璃苗的葉、嫩梢呈水晶透明或半透明，水浸狀，植株矮小、腫脹，失綠，葉片皺縮呈縱向卷曲，脆弱易碎；3.葉表皮缺少角質(zhì)層蠟質(zhì)，無功能性氣孔，不具有柵欄組織，僅有海綿組織；4.體內(nèi)含水量高，但干物質(zhì)、葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素、木質(zhì)素含量低；5.組織畸形，吸收和光合作用功能不全，分化能力低，難以繼代、擴(kuò)大繁殖；6.生根困難，難移栽成活。艷騾闖顏騰嫡衙淺生馱睡種臨豈蚜竊纂金寓帝玫企經(jīng)悲搖斧拷斥縮貉牲兔第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．玻璃苗的形態(tài)解剖與生理特點(diǎn)1.玻璃苗是植物組織培養(yǎng)中出現(xiàn)25二．玻璃苗發(fā)生的因素

1.玻璃化不同部位的節(jié)段外植體也與玻璃化有關(guān)。可能與培養(yǎng)基滲透勢(shì)不當(dāng)有關(guān)；2.培養(yǎng)基中的激素也和玻璃化呈正相關(guān)；3.培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氣體和外界交換不暢與玻璃化有一定的關(guān)系；4.高的銨態(tài)氮也是導(dǎo)致玻璃化的原因之一；5.不同部位的節(jié)段外植體也與玻璃化有關(guān)。

弊脾板黑蝎蔡權(quán)訃破鉆堤奪娃叮污孜貌殃疲淡拓?fù)Q管馳他址遵缸留幻歉也第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．玻璃苗發(fā)生的因素1.玻璃化不同部位的節(jié)段外植體也與玻璃26三．玻璃苗發(fā)生的機(jī)理

翟智谷鴕吼吃厄聯(lián)埔誡舒呢止踞烷莆瞳垛樞炕股樁朽勒簾嘯鴛吶迸曼播銜第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)三．玻璃苗發(fā)生的機(jī)理翟智谷鴕吼吃厄聯(lián)埔誡舒呢止踞烷莆瞳垛樞27有關(guān)試管苗玻璃化的機(jī)理到目前為止仍未得出一致得看法。1．張洪勝認(rèn)為乙烯對(duì)玻璃苗的形成起啟動(dòng)作用；但張昆瑜等在香石竹的培養(yǎng)基中添加ACC和乙烯利（乙烯釋放劑）則有利于蛋白質(zhì)的合成和干物質(zhì)的含量，有利于組織器官發(fā)育?？梢娨蚁?duì)玻璃苗作用的是較為復(fù)雜的。2．李云等發(fā)現(xiàn)植物磷酸戊糖（HMP）途徑與玻璃苗的產(chǎn)生有關(guān)。密封瓶口、高溫、高濃度細(xì)胞分裂素等因子加快生長(zhǎng)速度，增加了瓶中CO2濃度，于是抑制HMP進(jìn)程，核酸、蛋白質(zhì)、纖維素等合成就減少。濃度細(xì)胞分裂素等因子加快生長(zhǎng)速度，增加了瓶中CO2濃度，于是抑制HMP進(jìn)程，核酸、蛋白質(zhì)、纖維素等合成就減少。

涯槍呢裂鐘薛輕犢怠師賤渴爪碘陰日罕杯誓怠拓己舅該樁楔餒餾樁禾駱騷第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)有關(guān)試管苗玻璃化的機(jī)理到目前為止仍未得出一致得看法。1．張洪28四．控制和克服玻璃苗的措施

1．適當(dāng)提高培養(yǎng)基的蔗糖含量或加入滲透劑，減少培養(yǎng)基中水分對(duì)試管苗的脅迫；2．適當(dāng)降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度，降低銨態(tài)氮濃度，提高硝態(tài)氮含量；3．增加自然光照。自然光中的紫外線能促進(jìn)試管苗的成熟加快木質(zhì)化，減少玻璃化?？刂茰囟?，防止玻璃化。4．改善培養(yǎng)器皿的透氣狀況；5．培養(yǎng)基中添加其它物質(zhì)。如間苯三酚或根皮苷、矮壯素、土豆汁、青霉素（40萬U/L）等在不同的組織培養(yǎng)中均有一定的效果。

慧笑替餾單聘蚊霞異怪窒七情屎骨覆上也伊硯枉則暮蛇勸垂寫碾帛蠻潮叔第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)四．控制和克服玻璃苗的措施1．適當(dāng)提高培養(yǎng)基的蔗糖含量或加29第四章

外植體的接種和培養(yǎng)

第一節(jié)

外植體的接種

第二節(jié)

培養(yǎng)方法

第三節(jié)

培養(yǎng)條件

第四節(jié)

外植體褐變及防止

第五節(jié)

試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施

鐳蛾攻履狼匪液抨吁多記遍謄雙莉瞅啃鱗擇昭焊府佛挽膨努爐勁破弛玖衷第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種和培養(yǎng)第一節(jié)外植體的接種鐳30第一節(jié)

外植體的接種

一．接種室和凈化工作臺(tái)的消毒

二．外植體的接種

季陳仰遙洲困孵豈芋圃近慷登慚慰而穢洋聞周淄額渭演訊滔穩(wěn)咐擇干崖狠第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第一節(jié)外植體的接種季陳仰遙洲困孵豈芋圃近慷登慚慰而穢31一．接種室和凈化工作臺(tái)消毒1．紫外燈照射20分鐘；2．70%酒精噴霧空氣；3．臺(tái)面酒精棉球擦洗；猛閑冊(cè)承贈(zèng)騎兇嗎僑嗽冗厄?qū)\囑隊(duì)?wèi)椆阉E木錢蕩窮頤牧棵訝抒憋檻弊癱僥第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．接種室和凈化工作臺(tái)消毒猛閑冊(cè)承贈(zèng)騎兇嗎僑嗽冗厄?qū)\囑隊(duì)?wèi)椆?2二．外植體的接種1．接種工具要經(jīng)常在酒精燈上燒，防止交叉感染；2．燒后的接種工具要放冷卻后才能用；3．操作不能離超凈臺(tái)邊緣太近，也不能太遠(yuǎn)；4．外植體應(yīng)按照要求在培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部放好，不能讓其在器皿中活動(dòng)；5．包扎器皿應(yīng)在操作臺(tái)面上進(jìn)行，動(dòng)作要輕，包扎好后才能從臺(tái)面上移走。6．接種時(shí)禁止談話，防止咳嗽。恩墻撼膠言狼忱矮棕烹嗣鐘孟重箕利頁(yè)戍未巢敝乾慧忘憎仟稍歲枝需哥嘴第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．外植體的接種1．接種工具要經(jīng)常在酒精燈上燒，防止交叉感染33第二節(jié)

培養(yǎng)方法

一．固體培養(yǎng)

二．液體培養(yǎng)

鄧鵬師介帕維橡跪威事烤季聶走靠只清嘴豺簡(jiǎn)窮平險(xiǎn)轉(zhuǎn)漾岸馳另?yè)v娟草看第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第二節(jié)培養(yǎng)方法鄧鵬師介帕維橡跪威事烤季聶走靠只清嘴豺34一．固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)最常用的凝固劑是瓊脂，使用濃度為0.6-1.0%（重量/體積）。固體培養(yǎng)的最大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、方便。但缺點(diǎn)是1）只有外植體的底部表面才能接觸培養(yǎng)基，吸收營(yíng)養(yǎng)，上面則不能，影響生長(zhǎng)速度；2）外植體插入培養(yǎng)基后，氣體交換不暢，排泄的有害物質(zhì)積累，造成毒害；3）組織受光不均勻，細(xì)胞群生長(zhǎng)不一致。

課紐雅象遂獻(xiàn)廷檸芋郵兼符徊田難軒諒越傍菏誕嘔羊鉑唐穎矽暫蛔線墅勘第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)最常用的凝固劑是瓊脂，使用濃度為0.6-35二．液體培養(yǎng)靜止濾紙橋培養(yǎng)震蕩培養(yǎng)。

梆蹬扯整仁話各辭簇椽邵斷祿八蒂尾溫箕瓦蔽瞞瓶社撩旅濃鴉頗受偵趕孝第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．液體培養(yǎng)梆蹬扯整仁話各辭簇椽邵斷祿八蒂尾溫箕瓦蔽瞞瓶社撩36靜止濾紙橋培養(yǎng)

這種方法主要用于胚培養(yǎng)和愈傷組織培養(yǎng)等，目前此法不很普遍。詩(shī)狂澀仕棲攝拆雁演祖冊(cè)轎硝吉潭狐叢視咀涂栓拇紳堿戲腫盲正析叉兄屠第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)靜止濾紙橋培養(yǎng)詩(shī)狂澀仕棲攝拆雁演祖冊(cè)轎硝吉潭狐叢視咀37震蕩培養(yǎng)

往復(fù)式搖床自旋式培養(yǎng)架巨妊方競(jìng)贓除懂漾竅嘉衡忙揉鮮琵默匠妖閨賞逾曙助雄勃毒焊策酚孕碰網(wǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)震蕩培養(yǎng)往復(fù)式搖床自旋式38第三節(jié)

培養(yǎng)條件

一．溫度

二．光照

三．培養(yǎng)基的pH四．濕度

五．氧和其它氣體

蝶牲撿屜佯戎陛摧野咳汛要蛋秀迎拯皺她揀嫉纜慮上梢梁擅啪帶秤循炳鑿第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第三節(jié)培養(yǎng)條件一．溫度蝶牲撿屜佯戎陛摧野咳汛要蛋秀39一．溫度一般溫度在25±2℃。通常低于15℃時(shí)，外植體生長(zhǎng)出現(xiàn)停滯，但高于35℃對(duì)生長(zhǎng)又不利。在促進(jìn)芽發(fā)生時(shí)溫度可略低一些。

榆冉脂艦尋巴退蘿嘔悔米淋辱雨氨肚羚蘑銥憑哲拿惠份泊辱嘆咕俘順乖班第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．溫度榆冉脂艦尋巴退蘿嘔悔米淋辱雨氨肚羚蘑銥憑哲拿惠份泊辱40二．光照光照是組織培養(yǎng)中的重要外界條件之一，它對(duì)外植體生長(zhǎng)和分化有很大的影響，表現(xiàn)在光照、光質(zhì)和光周期等方面。

鬃炳帳蔚廳署缽燼聘屜魄汰拇陽贍稱瑞酷炔謄僚叉贍宮攝賽訓(xùn)醋怎緬潤(rùn)搶第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．光照鬃炳帳蔚廳署缽燼聘屜魄汰拇陽贍稱瑞酷炔謄僚叉贍宮攝賽411.光照有的材料適合光培養(yǎng)，有的則適合暗培養(yǎng)，如玉簪花芽和花莖的培養(yǎng)。在暗培養(yǎng)的條件下芽的愈傷組織誘導(dǎo)率較光照條件下要高，而花莖只有在暗培養(yǎng)的條件下才能誘導(dǎo)出愈傷組織。有一些植物（荷蘭芹）的組織培養(yǎng)其器官的形成不需要光，而有些植物則光可提高幼苗的分化率。一般來說，愈傷組織的誘導(dǎo)不需要光或需較少的光。

雍溝溯九濃講鈞鉚帚鍋濰破挽香聽爸袖衙叮痢椒凌吟根懶析奢頃填皿疫蘇第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)1.光照有的材料適合光培養(yǎng)，有的則適合暗培養(yǎng)，如玉簪花芽和花422.光質(zhì)光質(zhì)也能明顯影響外植體愈傷組織的誘導(dǎo)、組織的增殖及器官的分化。如對(duì)楊樹愈傷組織的生長(zhǎng)，紅光有促進(jìn)作用，藍(lán)光則有阻礙作用。在百合株芽增殖和分化時(shí)發(fā)現(xiàn)，在紅光下8周后不僅產(chǎn)生愈傷組織，同時(shí)也直接分化出苗，11周后所產(chǎn)生的愈傷組織也分化成苗；而在藍(lán)光下12周后才出現(xiàn)愈傷組織；白光下則為未見愈傷組織的形成，可見紅光能促進(jìn)生長(zhǎng)和分化。不同的植物對(duì)光的要求不同，需不斷的積累和實(shí)驗(yàn)才能掌握不同植物的培養(yǎng)規(guī)律。在一般的組織培養(yǎng)生產(chǎn)中，往往忽略光質(zhì)的影響。

查寇船左悍妊熟蓬丘幻釜瞻撣士普顛企霜拋屑撅善抱傣晦弧烤禁訓(xùn)忙羅褲第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)2.光質(zhì)光質(zhì)也能明顯影響外植體愈傷組織的誘導(dǎo)、組織的增殖及器433.光周期光周期對(duì)試管苗的增殖和分化的影響，通常都選用一定的光周期來進(jìn)行外植體的組織培養(yǎng)，如一般都選用16h光照、8h黑暗。這在組織培養(yǎng)前應(yīng)搞清該植物對(duì)光周期是否敏感。我們實(shí)驗(yàn)室主要采用12h光照和12h黑暗。躇針瓷弧炳芭掠川晝?yōu)I涵桓佩嚎寵雁蠻吉淳向凈茁賤募城淬晌龍殊號(hào)爾院第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)3.光周期光周期對(duì)試管苗的增殖和分化的影響，通常都選用一定的44三．培養(yǎng)基的pH通常一般的培養(yǎng)基pH值都在5.6~6.0之間。如pH值不適則直接影響外植體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而影響外植體的脫分化、增殖和器官的形成。不同植物對(duì)pH的要求不同，如蘭花要求pH值5.2或更低一些，而玉米胚乳的組織培養(yǎng)在7.0時(shí)愈傷組織的鮮重最快。

冉汲紗茍深桓乏翅貿(mào)耽愚貶小膠籽騰橢揍懲咒臺(tái)功元先鑼傍鏡邀卉拒獄憨第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)三．培養(yǎng)基的pH通常一般的培養(yǎng)基pH值都在5.6~6.0之間45四．濕度組織培養(yǎng)中的濕度影響有兩方面：一是培養(yǎng)容器內(nèi)的濕度，它的濕度條件可常保持在100%；二是培養(yǎng)室的濕度，它的濕度變化較大。濕度過高或過低都不利于組織培養(yǎng)。

都昭耿州職毗鄂肇更膏尸滁寐寥財(cái)似俱涪剝波綠吞帳鄉(xiāng)蕪煩透去跟綁樸侵第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)四．濕度都昭耿州職毗鄂肇更膏尸滁寐寥財(cái)似俱涪剝波綠吞帳鄉(xiāng)蕪煩46五．氧和其它氣體

氧是植物組織培養(yǎng)必需的。在接種時(shí)應(yīng)避免把整個(gè)外植體全部埋在瓊脂中，以免造成缺氧。培養(yǎng)瓶蓋需要一定的透氣性。培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)物釋放的微量的乙烯和高濃度的二氧化碳有時(shí)會(huì)有利于培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，但更多的是阻礙甚至是毒害培養(yǎng)物。顱傷索頻援賦扣寶柒逝趕詩(shī)嘲惜妝嚙穎組欣詫貸毀鼻壽整簡(jiǎn)硬君靡狙迪逛第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)五．氧和其它氣體氧是植物組織培養(yǎng)必需的。在接種時(shí)應(yīng)避免把整47第四節(jié)

外植體褐變及防止在組織培養(yǎng)中，常見到外植體由于褐變（browning），產(chǎn)生致死性的褐化物，不僅使培養(yǎng)基變褐，而且造成培養(yǎng)失敗，它已經(jīng)成為組織培養(yǎng)中的一個(gè)棘手問題，同時(shí)也成為植物快繁體系建立的一大障礙?？梢哉f褐變、菌類污染、和過度含水（玻璃化）是組織培養(yǎng)中的三大難題，尤其是褐變。

催能猜牽谷繭利箱個(gè)薪年盒撻撂晨焰旬址鉗驚楚鎖豫啪艷利碟評(píng)愧馭原睜第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四節(jié)外植體褐變及防止在組織培養(yǎng)中，常見到外植體由于褐48蝴蝶蘭試管苗增殖過程中的褐化現(xiàn)象侵只霸鄲棋敢晨青顱仁澤求期閻杭氟搽韭澈?jiǎn)九吕韧ズ掜暷献叽u唐陶泄第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)蝴蝶蘭試管苗增殖過程中的褐化現(xiàn)象侵只霸鄲棋敢晨青顱仁澤求期閻49一．褐變的原因

很多植物尤其是木本植物體內(nèi)含有較多的酚類化合物。在完整的植株體細(xì)胞內(nèi)，酚類化合物與多酚氧化酶分隔存在，因此比較穩(wěn)定。當(dāng)切割外植體后，切割附近細(xì)胞的分隔效應(yīng)被打破，酚類化合物和多酚氧化酶便流出，多酚氧化酶便氧化酚類化合物而成為褐色的醌類物質(zhì)和水。醌類又會(huì)在酪氨酸酶等酶的作用下，使外植體的蛋白質(zhì)聚合，生長(zhǎng)停滯，最終導(dǎo)致死亡。毆錄侄淺丫哉擄笛劇耽唐林限傀契軀女游軀闖膳執(zhí)鞘軌殖丙離漂恤鎂屹滲第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)一．褐變的原因很多植物尤其是木本植物體內(nèi)含有較多的酚類化合50二．影響褐變因素及防止措施

1．基因型：木本植物較草本植物易褐變。2．外植體的生理狀態(tài)：一般來說隨著年齡和組織木質(zhì)化程度增加而褐變加強(qiáng)。3．外植體的培養(yǎng)條件：取材料之前進(jìn)行遮光處理再切取外植體，則褐變減少，暗培養(yǎng)或低光照能減輕褐變。此外較低溫度下培養(yǎng)也可適當(dāng)減少褐變。4．培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)能有效減少褐變；初代培養(yǎng)時(shí)降低無機(jī)鹽的濃度可減少褐變；6-BA增加褐變，2.4-D和NAA減少褐變；加入抗氧化劑（硫代硫酸鈉、抗壞血酸、蘇糖二硫醇等）可減少褐變；加入吸附劑活性炭、聚乙烯吡咯烷酮可減輕褐變。

鐵熬惠掌聲烤練桌樂泵役噴清殊螞餞停密瘤目很轎婪套贏踴蘋勃攔橢址診第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)二．影響褐變因素及防止措施1．基因型：木本植物較草本植物易51第五節(jié)試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施

自從1981年Debergh等明確提出試植物“玻璃化”（vitrification）概念以來，發(fā)現(xiàn)在很多木本和草本試管植物中都存在玻璃化現(xiàn)象。關(guān)于植物組織培養(yǎng)中玻璃苗的成因和防止方法的研究已經(jīng)引起了人們的廣泛注意，成為試管苗工廠化生產(chǎn)中亟待解決的一個(gè)問題。

搶魄吐招層炊滬鉸癌峽馭綠峙貢氟艦誦纓式延改柜鳳辛悅企鄰雜耀諒佃吉第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)第五節(jié)試管苗的玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施自從1981年D52香石竹玻璃化試管苗京抨泛算焊匆掩畫求喉?yè)破ㄇ羷傄屠瞬┷E遁損瘸吶談芯瞎孟縮潘鳳箔譯第四章外植體的接種與培養(yǎng)第四章外植體的接種與培養(yǎng)香石竹玻璃化試管苗京抨泛算焊匆掩畫求喉?yè)破ㄇ羷傄屠瞬┷E遁損53一．玻璃苗的形態(tài)解剖與生理特點(diǎn)1.玻璃苗是植物組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的半透明狀的、畸形的試管植物，不能夠移栽成活。2.玻璃苗的葉、嫩梢呈水晶透明或半透明，水浸狀，植株矮小、腫脹，失綠，葉片皺縮呈縱向卷曲，脆弱易碎；3.葉表皮缺少角質(zhì)層蠟質(zhì)，無功能性氣孔，不具有柵欄組織，僅有海綿組織；4.體內(nèi)含水量