流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用

關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第1頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五2世界衛(wèi)生組織血液腫瘤分類方案（1999年）“新分類方案的基本原則是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來(lái)鑒定疾病的‘真實(shí)’本質(zhì)”。“這為世界各國(guó)腫瘤學(xué)家和病理學(xué)家提供了一個(gè)全新的與令人興奮的合作交流新篇章，必將極大促進(jìn)人們對(duì)血液腫瘤的治療與認(rèn)識(shí)?！保绹?guó)臨床腫瘤協(xié)會(huì)，臨床腫瘤雜志17卷3835-3849頁(yè)，1999年）更重要的是提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷的較明確關(guān)聯(lián)性，開(kāi)啟了血液腫瘤靶向性治療和個(gè)性化方案的新時(shí)代。第2頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五3白血病分子診斷的意義系統(tǒng)診斷白血病初發(fā)異常標(biāo)記精確診斷準(zhǔn)確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料殘留監(jiān)測(cè)靶向治療免疫/遺傳學(xué)靶標(biāo)MICM診斷第3頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五4WHO血液腫瘤新分類實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)實(shí)施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細(xì)胞、細(xì)胞遺傳和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)以及掌握這類實(shí)驗(yàn)技能并具有專業(yè)知識(shí)的人員。第4頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五5第5頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五6InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

診斷

單克隆蛋白數(shù)量和特征

血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量 24小時(shí)尿蛋白；總蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由輕鏈和比例

骨髓檢查和骨髓活檢Bonemarrowaspirationandbiopsy

組化

免疫分型-克隆檢定，及通過(guò)CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余例患者正常漿細(xì)胞中找到檢測(cè)殘留MM細(xì)胞

終末器官損害評(píng)價(jià)

全血細(xì)胞計(jì)數(shù)；生化檢查:血清肌酐和骨鈣測(cè)定

預(yù)后評(píng)估

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓細(xì)胞遺傳學(xué)和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

針對(duì)某些特定患者的特殊研究

第6頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五7傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用細(xì)胞計(jì)數(shù)：CD4、CD34DNA含量：多倍數(shù)、S期結(jié)果是數(shù)據(jù)、準(zhǔn)確性依賴于良好的質(zhì)控傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)在白血病免疫表型中的應(yīng)用單參“白血病表型”，陽(yáng)性比率大多數(shù)細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞多為形態(tài)學(xué)/細(xì)胞化學(xué)后的確認(rèn)數(shù)據(jù)由臨床醫(yī)師判斷高分辨流式細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)以多參數(shù)正?？乖磉_(dá)為基礎(chǔ)結(jié)果類似病理報(bào)告用于原發(fā)性診斷與鑒別診斷用于疾病分期，治療選擇療效監(jiān)測(cè)，預(yù)后判斷流式細(xì)胞術(shù)第7頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五8骨髓-異質(zhì)性系統(tǒng)中的應(yīng)用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列細(xì)胞處于連續(xù)性成熟階段必須能涵蓋所有細(xì)胞第8頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五9應(yīng)該使用何種抗體？所有抗體必須為標(biāo)準(zhǔn)的商業(yè)化試劑沒(méi)有什么“秘密武器”或者專門(mén)特異的抗體抗體的聯(lián)合應(yīng)用能使你從有限的標(biāo)本中得到最大化的信息量對(duì)正?？乖磉_(dá)的正確認(rèn)識(shí)能幫助你有效地鑒別疾病狀態(tài)相關(guān)的改變第9頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五10高分辨流式細(xì)胞術(shù)能夠鑒別和分類所有骨髓細(xì)胞可以對(duì)每一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多特征性的檢測(cè)并對(duì)其相應(yīng)的系列和成熟的階段進(jìn)行分類至少檢測(cè)一萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，分辨率達(dá)到0.5%第10頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五11第11頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五12CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-576第12頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五13正常粒系成熟模式第13頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576第14頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五15表達(dá)交叉系列的抗原非同步抗原共表達(dá)：CD34與CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的過(guò)度表達(dá)：早前B-ALL中CD10抗原表達(dá)缺失：泛T抗原易位抗原表達(dá)：CSF中TdT+淋巴細(xì)胞，骨髓中胸腺發(fā)育階段的T淋巴細(xì)胞光散射異常：FSC和SSC白血病相關(guān)的免疫表型特點(diǎn)第15頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五16AML-M0第16頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五17AML-M2第17頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五18AML-M3第18頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五19AML-M4第19頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五20AML-M5第20頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五21B-ALL第21頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五22Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL第22頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五23MALT+GMALT+B第23頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五24AUL第24頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五25B-CLL/SLL第25頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五26HCL第26頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五27大B細(xì)胞淋巴瘤第27頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五28MM第28頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五29T-ALL第29頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五30NK-LGL第30頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五31報(bào)告包括出現(xiàn)或缺乏的異常細(xì)胞群異常免疫表型相比正常細(xì)胞群的抗原強(qiáng)度增強(qiáng)，減弱，缺失定量層面的判斷相對(duì)于全部CD45陽(yáng)性細(xì)胞(WBCs)出現(xiàn)的其它細(xì)胞群第31頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五32第32頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五33TCRVβ克隆第33頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五34小結(jié)流式細(xì)胞術(shù)有助于血液系統(tǒng)異常疾病的診斷更加確定的診斷排除其他疾病有助于細(xì)分亞型更準(zhǔn)確的原始細(xì)胞辨別和定量有助于預(yù)后判斷治療后監(jiān)測(cè)快速第34頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五35免疫表型分析與FAB分型基于不同的參數(shù)對(duì)白血病進(jìn)行分型，兩者的結(jié)果可一致或不一致；對(duì)有些病例，尤其是髓系白血病亞型，免疫表型分析并非特異；對(duì)于復(fù)雜的病例，需結(jié)合多種檢查，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。第35頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五36MRD背景目前由于多種化療藥的聯(lián)合應(yīng)用，使多數(shù)白血病患者可以獲得形態(tài)學(xué)的完全緩解（CR）。但多數(shù)患者不能維持長(zhǎng)期緩解，仍有相當(dāng)多的患者再次復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)的主要原因是患者體內(nèi)存在少量的形態(tài)學(xué)難以辨認(rèn)的殘存白血病細(xì)胞。如果能夠準(zhǔn)確檢測(cè)患者體內(nèi)殘存的白血病狀態(tài)，可以有的放矢地進(jìn)行治療，使患者避免許多不必要的痛苦。第36頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五37MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 第37頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五38第38頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五39MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(2008ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

檢測(cè)治療早期的反應(yīng)佳 加強(qiáng)治療檢測(cè)治療早期的反應(yīng)差

無(wú)需加強(qiáng)治療

檢測(cè)復(fù)發(fā) 加強(qiáng)治療，準(zhǔn)備HSCT

HSCT前MRD評(píng)估 優(yōu)化HSCT的時(shí)間HSCT后MRD評(píng)估 調(diào)整免疫抑制治療時(shí)間，等

臨床試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的MRD評(píng)估 評(píng)價(jià)新的抗ALL藥物或治療的結(jié)果

第39頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五40MRD與預(yù)后當(dāng)殘存白血病細(xì)胞>10-2，3年復(fù)發(fā)率為76-94%10-3<殘存白血病細(xì)胞<10-2,3年復(fù)發(fā)率為37-53%殘存白血病細(xì)胞<10-3,3年復(fù)發(fā)率為8-20%殘存白血病細(xì)胞<10-4,3年無(wú)復(fù)發(fā)第40頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五41各種MRD檢測(cè)方法檢測(cè)殘存白血病細(xì)胞的主要依據(jù)是在患者發(fā)病時(shí)找到患者的特殊表現(xiàn)，包括遺傳學(xué)、分子生物學(xué)以及免疫學(xué)的特征。這些特征往往是正常血細(xì)胞所沒(méi)有的，因此可利用這些標(biāo)志鑒別正常細(xì)胞與異常細(xì)胞，特異地檢測(cè)殘存白血病細(xì)胞。評(píng)價(jià)這些方法的有效性及應(yīng)用性主要依據(jù)該方法的特異性、敏感性、簡(jiǎn)單性、重復(fù)性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍體、PCR、FISH是較好的方法。第41頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五42MRD流式分析原則違背正常分化模式診斷時(shí)辨別出背離正常發(fā)育階段的免疫表型相對(duì)特異的抗原組合隨訪辨別出不同于正常免疫表型的不連續(xù)群體以診斷的免疫表型作為出發(fā)點(diǎn)第42頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五43免疫表型異常適合MRD檢測(cè)ALL>95%兒童ALL>90-95%成人ALLAML85%兒童AML80-95%成人AML第43頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五44報(bào)告模板第44頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五45病例一AML病例資料：女，3歲，2009.6初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門(mén)分析，原始細(xì)胞分布區(qū)域可見(jiàn)異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞的26%，主要表達(dá)HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴細(xì)胞比例降低。提示：急性髓系細(xì)胞白血病（AML-M2可能）?；颍篈ML1/ETO陽(yáng)性。第45頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五46病例一（續(xù)1）2009.7化療D33：FCM：可見(jiàn)殘留，CD33+CD19+細(xì)胞約占0.04%?；颍篈ML1/ETO陽(yáng)性。第46頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五472009.9D70：FCM：未做?；颍篈ML1/ETO陰性。2010.3D245：FCM：未見(jiàn)免疫表型明顯異常的細(xì)胞?；颍篈ML1/ETO陰性。病例一（續(xù)2）第47頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五48病例二B-ALL病例資料：男，3歲，2007.3初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門(mén)分析，CD45弱表達(dá)分布區(qū)域可見(jiàn)異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞的45%，表達(dá)HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴細(xì)胞白血?。ㄆ胀ㄐ虰-ALL）?；颍築CR/ABL陰性。第48頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五492008.11化療第20個(gè)月：FCM：未見(jiàn)明顯表型異常的殘留白血病細(xì)胞。（未附圖）基因：未做。2009.09化療第30個(gè)月：FCM：可見(jiàn)殘留，在CD45dim/-區(qū)域可見(jiàn)約1.87%的CD10+CD19+CD20-細(xì)胞和約1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+細(xì)胞，考慮為殘留白血病細(xì)胞。（見(jiàn)右圖）基因：未做。病例二（續(xù)1）第49頁(yè)，共53頁(yè)，2022年，5月20日，5點(diǎn)56分，星期五50病例二（續(xù)2）2010.03化療+DC-CIK第36個(gè)月：FCM印象：在CD45/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門(mén)分析，CD45陰性略向原始延伸的分布區(qū)域可