肺癌個(gè)體化治療課件

1、 肺癌個(gè)體化治療相關(guān)分子標(biāo)記的研究進(jìn)展 北京協(xié)和醫(yī)院 曾瑄肺癌的驅(qū)動(dòng)基因 90酪氨酸激酶（TKs） 56跨膜 （i.e.受體酪氨酸激酶, RTKs） 518蛋白激酶 34非跨膜 絲氨酸/蘇氨酸激酶（STKs） 脂質(zhì)激酶 NSCLC中，驅(qū)動(dòng)突變的關(guān)鍵基因大多數(shù)為信號(hào)傳導(dǎo)蛋白 (如蛋白激酶) 編碼基因， 信號(hào)傳導(dǎo)蛋白通過(guò)將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移至特異性靶蛋白，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和生存。 NSCLC中，驅(qū)動(dòng)突變也常見(jiàn)于編碼GTP結(jié)合蛋白的基因， G蛋白通過(guò)與下游分子的相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡。肺癌驅(qū)動(dòng)基因酪氨酸激酶絲氨酸/蘇氨酸激酶脂質(zhì)激酶RASRAFMEKERK pathwayPI3KAKTmT

2、OR pathwayLung CancerAdenocarcinoma 50% in ChineseSquamous Cell Cancer驅(qū)動(dòng)基因異常及臨床意義12345678910111213J Clin Oncol 31:1097-1104, 2013J Clin Oncol 31:1097-1104, 2013分子檢測(cè)技術(shù)RNA檢測(cè)chromosomeDNA檢測(cè)3730XL (2002)GS-FLX/Titanium 454 (2005)G1/G2Illumina(2006) SOLiD v2.03/3.0 ABI(2007)HeliscopeHelicose (2008)Pacifi

3、c Bio(2009) Complete Genomics (2009)Seq. Chem.SangerPyroseqSBSSBLSBSSBSSBLRead length (bp)800 225-40033-7533-502580032# of reads/run96-384400,000 1 x 10640-100 x 10640-100 x 106500 x 106TBDNAAccuracy99.999%99.5%99.0%99.94%99.95%TBDTBDCost/Mb$800$80$5$4$3TBD$2各種NGS比較NGS: Next Generation Sequencing分子檢

4、測(cè)方法的選擇檢測(cè)試劑方法：伴隨診斷 Companin diagnoticsV1E13;A20E20;A20E20ins18;A20E6;A20E6ins33;A20E14;ins11del49A20T3;A20KI24;A20KI15;A20E6;A19E2;A20E2;ins117A20E3;ins69A20E14;del12A20E14;del36A20E17;ins30A20E17ins61;ins34A20E15del19;del20A20E18;A20V2V3aV3bV4V5bV5aV7V6V8aV8b“V5”“V4”E17ins68;A20EML4-ALKKIF5B-ALKTFG-

5、ALKKI17;A20ALK-PTPN3KLC1-ALKKL9;A20ALK Kinase domain在非小細(xì)胞肺癌中已確定了幾種EML4-ALK 融合變異體，并證明其具有功能活性轉(zhuǎn)化需要ALK酪氨酸激酶的活性。證據(jù)表明ALK抑制劑可致體內(nèi)腫瘤縮小 ，提示癌基因依賴(lài)，可以作為潛在的靶點(diǎn)非小細(xì)胞肺癌中的ALK基因 融合ALK激酶結(jié)構(gòu)域（80%, 其中81%， 未知19%）（20%）HIP1-ALK . . J Thorac Oncol. 2014;9: 285294舉例 ALCL: 間變性大細(xì)胞淋巴瘤 IMT: 炎性肌纖維母細(xì)胞瘤 DLBCL: 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤 NSCLC: 非小細(xì)胞肺癌K

6、IF5B-ALKt(2;10)(p23;p11)腫瘤中已知的ALK融合基因類(lèi)型熒光原位雜交ALK (+) Fluorescence in situ hybridization, FISHALK: Anaplastic Lymphoma Kinase2p21 EML4Positive: 15% ALK臨床研究的數(shù)據(jù)均使用FISH診斷PROFILE 1001PROFILE 1005PROFILE 1007PROFILE 1014PROFILE 1029I期臨床II期臨床III期臨床分離探針FISHNCT00932893 NCT00932451 NCT01154140Phase III clinic

7、al trialsCrizotinibFDA將FISH作為克唑替尼的伴隨診斷方法其它融合基因Virchows Arch (2014) 464:347358各種靶分子的檢測(cè)方法分子檢測(cè)的要點(diǎn) 規(guī)范化操作（SOPs） 人員 實(shí)驗(yàn)室 標(biāo)本 設(shè)備 試劑 流程 多學(xué)科合作 臨床 病理 影像 新技術(shù)平臺(tái)病理評(píng)估與質(zhì)量控制腫瘤組織標(biāo)本病理學(xué)評(píng)估組織切片非小細(xì)胞性肺癌診斷及類(lèi)型腫瘤細(xì)胞比例腫瘤細(xì)胞總數(shù)標(biāo)識(shí)腫瘤豐富的區(qū)域富集腫瘤細(xì)胞H&E 染色片用于病理評(píng)估白片用于提取DNA建議最少切片數(shù)：-手術(shù)標(biāo)本，5 m X4-小活檢標(biāo)本，5 m X8 組織標(biāo)本來(lái)源手術(shù)標(biāo)本支氣管下活檢經(jīng)皮穿刺活檢 標(biāo)本處理及貯存新鮮凍存：

8、液氮或-80CFFPE選擇合適的檢測(cè)方法及流程的優(yōu)化-SOP包括.實(shí)驗(yàn)室人員試劑設(shè)備標(biāo)本庫(kù)存文件操作36PCR實(shí)驗(yàn)室空間ReagentPreparationSpecimenPreparationReaction Set-up andAmplificationProductAnalysis試劑準(zhǔn)備DNA提取PCR產(chǎn)物分析Workflow新技術(shù)平臺(tái)201120122013檢測(cè)率6%14%20%陽(yáng)性率30%32%33%檢測(cè)中心數(shù)395070平均檢測(cè)時(shí)間(天)1076中國(guó)EGFR突變檢測(cè)現(xiàn)狀Data form AstraZeneca China internal截至2013年4月，全國(guó)共有58家醫(yī)院建立了院內(nèi)EGFR基因突變檢測(cè)平臺(tái)2012年院內(nèi)檢測(cè)中心2013年新建的院內(nèi)檢測(cè)中心中國(guó)院內(nèi)EGFR基因突變檢測(cè)中心針對(duì)驅(qū)動(dòng)基因靶點(diǎn)的新藥研究1J Carcinog. 2013; 12: 22. Published online Dec 31, 2013. doi: 10.4103/1477-3163.123972212345678910111213141516A s