南醫(yī)大藥物分析喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析

1、練習(xí)與思考鹽酸氯丙嗪片的含量測定：取本品（標(biāo)示量為25mg/片）10片，去糖衣后精密稱定，重0.5130g，研細(xì)，稱取片粉0.0206g，置100mL量瓶中，加鹽酸溶液（9-1000）70mL，振搖使鹽酸氯丙嗪溶解，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置100mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，于254nm波長處測定吸光度為0.453，按百分吸收系數(shù)E=915計算每片的含量。第一頁，共六十五頁。藥物分析第十二章 喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析第二頁，共六十五頁。教學(xué)目的與要求 掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的鑒別試驗(yàn)和含量測定方法。掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的基本結(jié)構(gòu)和主要性質(zhì)。

2、了解喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的雜質(zhì)檢查要求。第三頁，共六十五頁。第一節(jié):喹啉類藥物結(jié)構(gòu)特征喹啉類藥物吡啶苯環(huán)稠和而成第四頁，共六十五頁。典型藥物pKa 8.8,可與強(qiáng)酸成鹽pKa 4.2,不與硫酸成鹽第五頁，共六十五頁。第六頁，共六十五頁。典型藥物第七頁，共六十五頁。典型藥物第八頁，共六十五頁。典型藥物第九頁，共六十五頁。典型藥物磷酸咯萘啶第十頁，共六十五頁。典型藥物第十一頁，共六十五頁。主要性質(zhì)堿性含有N原子,一般都有堿性旋光性含有手性原子,一般都有旋光性熒光特性具有平面共軛結(jié)構(gòu),一般具有熒光紫外吸收光譜特性吡啶與苯環(huán)具有共軛結(jié)構(gòu),也有紫外吸收光譜特性第十二頁，共六十五頁。第十三頁，共六十五

3、頁。1.堿性 奎寧、奎尼?。憾崃蛩幔ㄠ藟A含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)） 奎寧 (左旋體)：pKb1為5.07 pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶于氯仿無水乙醇(2:1) 奎尼丁 (右旋體)：pKb1為5.4pKb2為10，易溶于沸水或乙醇喹核堿上的N原子具有堿性，與強(qiáng)酸成鹽主要化學(xué)性質(zhì)第十四頁，共六十五頁。主要化學(xué)性質(zhì)第十五頁，共六十五頁。主要化學(xué)性質(zhì)3.熒光特性硫酸奎寧和二鹽酸奎寧在稀硫酸中顯藍(lán)色熒光。4.紫外吸收光譜特征 含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系第十六頁，共六十五頁。第十七頁，共六十五頁。二、鑒別反應(yīng)Identification（一）、綠奎寧反應(yīng)（Thalleio

4、quin） 含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng)，奎寧和奎尼丁鑒別二醌基亞胺的胺鹽（綠色） 取其水溶液加溴試液23滴和氨試液1ml，即顯翠綠色； 加酸至中性顯藍(lán)色； 酸性則呈紫紅色； 翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。第十八頁，共六十五頁?？岫〉谑彭?，共六十五頁。二、鑒別試驗(yàn)（二）、光譜特征 UV磷酸氯喹：取本品，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含10g的溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在222，257，329 nm與343nm的波長處有最大吸收。 熒光光譜 FLD硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。IR 紅外光譜也可以應(yīng)用于鑒

5、別 第二十頁，共六十五頁。二、鑒別試驗(yàn)（三）基于無機(jī)酸鹽的鑒別硫酸鹽加BaCl2生成白色沉淀不溶于鹽酸和稀硝酸加醋酸鉛生成白色沉淀溶于醋酸銨或NaOH加HCl不產(chǎn)生沉淀（區(qū)別于硫代硫酸鹽）第二十一頁，共六十五頁。二、鑒別試驗(yàn)（三）基于無機(jī)酸鹽的鑒別氯化物加稀硝酸和硝酸銀生成白色凝乳狀沉淀加銨試液溶解,加硝酸再沉淀加二氧化錳產(chǎn)生氯氣使KI試紙遇淀粉變藍(lán)第二十二頁，共六十五頁。二、鑒別試驗(yàn)（三）基于無機(jī)酸鹽的鑒別磷酸鹽反應(yīng)加硝酸銀生成淺黃色沉淀在銨試液或稀硝酸中均易溶解加氯化銨鎂生成白色結(jié)晶性沉淀加鉬酸銨試液與硝酸后,加熱生成黃色沉淀在銨試液中溶解第二十三頁，共六十五頁。三、純度檢查一、硫酸奎寧奎

6、寧從金雞納樹皮中提取，提取分離過程中可能帶入其他金雞納堿雜質(zhì)。臨床上使用的藥物為硫酸奎寧片和二鹽酸奎寧注射劑。硫酸鹽難溶于水二鹽酸鹽水溶性好第二十四頁，共六十五頁。三、純度檢查一、硫酸奎寧1.酸度酸性雜質(zhì) 取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應(yīng)為5.76.6 。 2.氯仿乙醇不溶物 取本品2g，加氯仿無水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5 次洗滌，每次10ml ，在105 干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。 3.其他金雞納堿 (TLC、HPLC)主成分自身對照法或?qū)φ掌穼φ辗ǎ?guī)定限度為0.5%第二十五頁，共六十

7、五頁。垂熔坩堝垂熔坩堝也叫砂芯坩堝，是一種坩堝式濾器，用玻璃粉壓制成砂芯濾板，適用定量分析對實(shí)驗(yàn)物可作過濾，干燥，稱量的聯(lián)合操作。造型為一只上口大下口小無底的錐形杯，在杯內(nèi)的下截部位焊有一片砂芯片，或稱為濾片，代替濾紙作過濾溶液用，濾片孔徑有粗細(xì)之分，1 號最粗，6 號最細(xì)，除砂芯濾片粗細(xì)區(qū)分之外，還有容量大小之分。由于它的底是平的，適合對過濾后滯留在砂芯片上的殘渣直接移烘箱內(nèi)干燥，稱量時也可直接放入天平上稱量。 第二十六頁，共六十五頁。三、純度檢查1.酸度 取本品1.0g，加水25ml溶解，測定pH值應(yīng)大于2.4。 2.水中不溶物 取本品加水溶解后，稍放置即有黃色不溶物產(chǎn)生,影響品質(zhì).3.氯

8、化物 系生產(chǎn)工藝帶入.檢查時為了避免溶液顏色干擾, 先加堿使咯萘啶沉淀析出, 過濾后進(jìn)行檢查. 磷酸咯萘啶的純度檢查第二十七頁，共六十五頁。三、純度檢查磷酸咯萘啶的純度檢查紫色第二十八頁，共六十五頁。四 含量測定硫酸奎寧含量測定非水溶液滴定法CHPUSPHPLC法體內(nèi)測定注意樣品處理第二十九頁，共六十五頁。四 含量測定第三十頁，共六十五頁。含量測定 硫酸奎寧測定第三十一頁，共六十五頁。第三十二頁，共六十五頁。 硫酸奎寧測定第三十三頁，共六十五頁。見示例12-8每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L)相當(dāng)于19.75mg的（C20H24N2O2) H2SO4H2O。1mol硫酸奎寧消耗4mol高

9、氯酸。硫酸奎寧片的含量測定P321第三十四頁，共六十五頁。硫酸奎寧片的含量測定 第三十五頁，共六十五頁。硫酸奎寧片的含量測定 第三十六頁，共六十五頁。USPHPLC法甲磺酸的作用?醋酸的作用?乙二胺的作用?硫酸奎寧片的含量測定 第三十七頁，共六十五頁。含量測定Ion-Pair 原理測定雜環(huán)類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時，主要采用烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。影響條件：流動相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對試劑的非極性部分越大，形成的離子對分配系數(shù)越大，保留時間越長（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）。第三十八頁，共六十五頁。第三十九頁，共六十五頁。第二節(jié):青蒿素類藥

10、物的分析青蒿素又名黃蒿素,是我國從菊花科植物青蒿中提取分離得到的一個含過氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯。青蒿素是一種高效、速效、低毒的新型抗瘧藥。第四十頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 中國抗瘧新藥的研究源于1967年成立的五二三項(xiàng)目，其全稱為中國瘧疾研究協(xié)作項(xiàng)目，成立于1967年的5月23日,因絕密軍事項(xiàng)目,遂設(shè)代號523。 第四十一頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 歷經(jīng)380多次鼠瘧篩選，1971年10月取得中藥青蒿素篩選的成功。1972年從中藥青蒿中分離得到抗瘧有效單體，命名為青蒿素，對鼠瘧、猴瘧的原蟲抑制率達(dá)到100%。 1973年經(jīng)臨床研究取得與實(shí)驗(yàn)室一致的結(jié)果、

11、抗瘧新藥青蒿素由此誕生。 第四十二頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 1981年10月在北京召開的由世界衛(wèi)生組織主辦的“青蒿素”國際會議上，中國青蒿素的化學(xué)研究的發(fā)言，引起與會代表極大的興趣，并認(rèn)為“這一新的發(fā)現(xiàn)更重要的意義是在于將為進(jìn)一步設(shè)計合成新藥指出方向”。 1986年，青蒿素獲得新一類新藥證書，雙氫青蒿素也獲一類新藥證書。這些成果分別獲得國家發(fā)明獎和全國十大科技成就獎。 第四十三頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 2011年9月，中國女藥學(xué)家屠呦呦因創(chuàng)制新型抗瘧藥青蒿素和雙氫青蒿素的貢獻(xiàn)，獲得被譽(yù)為諾貝爾獎“風(fēng)向標(biāo)”的拉斯克獎。這是中國生物醫(yī)學(xué)界迄今為止獲得的世

12、界級最高級大獎。 第四十四頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 屠呦呦，女，1930年12月30日生，藥學(xué)家，中國中醫(yī)研究院終身研究員兼首席研究員，青蒿素研究開發(fā)中心主任。1980年聘為碩士生導(dǎo)師，2001年聘為博士生導(dǎo)師。多年從事中藥和中西藥結(jié)合研究，突出貢獻(xiàn)是創(chuàng)制新型抗瘧藥青蒿素和雙氫青蒿素。第四十五頁，共六十五頁。研究歷史:資料來源于baidu 填補(bǔ)了華人十年未獲此獎的空白，也造就了第一位在中國獨(dú)立完成研究的獲獎?wù)摺?第四十六頁，共六十五頁。研究歷史:很遺憾的事情 這個藥物雖然由我國發(fā)現(xiàn),但我國卻沒有取得專利.因此,雖然這個藥物每年在全球產(chǎn)生巨大的效益,但我國還是處于原料供應(yīng)的

13、地位,而這個地位還受到嚴(yán)重威脅.遺憾第四十七頁，共六十五頁。青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第四十八頁，共六十五頁。青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)是青蒿素經(jīng)還原制得，同時也是青蒿琥酯的體內(nèi)活性代謝物質(zhì)第四十九頁，共六十五頁。青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)是青蒿素的水溶性衍生物第五十頁，共六十五頁。青蒿素類藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)是青蒿素的脂溶性衍生物第五十一頁，共六十五頁。青蒿素類藥物化學(xué)性質(zhì)氧化性過氧橋鍵具有氧化性旋光性手性原子,具有旋光性紫外吸收特性環(huán)狀結(jié)構(gòu)雖然不具有共軛特性,但取代基具有一定吸收特性水解反應(yīng)青蒿素結(jié)構(gòu)中有內(nèi)酯，在堿性條件下水解，其余藥物結(jié)構(gòu)中沒有內(nèi)酯，不發(fā)生水解第五十二頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)

14、呈色反應(yīng)過氧橋鍵具有氧化性酸性條件下能將碘離子氧化成碘與淀粉指示液顯藍(lán)紫色第五十三頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)羥肟酸鐵反應(yīng)含內(nèi)酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯類化合物在堿性條件下與羥胺反應(yīng)生成羥肟酸。在稀酸溶液中與高鐵離子呈色顯紫色例：青蒿素、青蒿琥酯第五十四頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)香草醛-硫酸反應(yīng)使分子中的羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合反應(yīng)生成其軛系統(tǒng)，在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色ChP青蒿琥酯的鑒別：取本品約50mg，加三氯甲烷1mL溶解后，取34滴置白瓷板上，等三氯甲烷揮發(fā)后，加2%香草醛硫酸溶液1滴，顯紅色。第五十五頁，共六十五頁。青蒿素類藥物

15、的鑒別試驗(yàn)吸收光譜特征紅外，與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照紫外，取代基末端吸收以資鑒別第五十六頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)色譜法HPLC法保留時間定性第五十七頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的鑒別試驗(yàn)純度檢查HPLC法TLC法青蒿素是以天然藥材分離提取為主，藥品中通常存在結(jié)構(gòu)類似的有關(guān)物質(zhì)第五十八頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的含量測定HPLC法第五十九頁，共六十五頁。青蒿素類藥物的體內(nèi)藥物分析HPLC/MS/MS注意樣品處理第六十頁，共六十五頁。練習(xí)與思考1、用溶劑提取后非水溶液滴定法測定奎寧片的含量時，1mol的硫酸奎寧可消耗高氯酸的摩爾數(shù)是A、0.5molB、1molC、2molD、3molE、4mol第六十一頁，共六十五頁。練習(xí)與思考2、非水溶液滴定法測定硫酸奎寧原料藥的含量時，1mol的硫酸奎寧可消耗高氯酸的摩爾數(shù)是A、0.5molB、1molC、2molD、3molE、4mol第六十二頁，共六十五頁。練習(xí)與思考3、具有綠奎寧反應(yīng)的藥物是A