青蒿琥酯抗腫瘤作用研究培訓(xùn)課件

1、青蒿琥酯抗腫瘤作用研究青蒿琥酯抗腫瘤作用研究前 言青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2前 言青蒿琥酯抗腫瘤作用研究21.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分離出的活性物質(zhì)以后我國科學(xué)家成功研制了比青蒿素抗瘧疾作用更強(qiáng)的雙氫青蒿素和青蒿琥酯等多種青蒿素類藥物。近年研究發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物具有抗腫瘤作用。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究31.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分青蒿素類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：含有過氧化物橋結(jié)構(gòu)(C-O-O-C)。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究4青蒿素類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：含有過氧化物橋結(jié)構(gòu)(C-O-O-Molt-4: 人淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞株 青蒿琥酯抗腫瘤作用

2、研究5Molt-4: 人淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞株 青蒿琥酯抗腫青蒿琥酯抗腫瘤作用研究6青蒿琥酯抗腫瘤作用研究6我們設(shè)想：全鐵轉(zhuǎn)鐵運(yùn)蛋白 + 青蒿琥酯 進(jìn)行抗腫瘤實驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究7青蒿琥酯抗腫瘤作用研究7實 驗 目 的觀察全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內(nèi)、體外的抗腫瘤作用。 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究8實 驗 目 的觀察全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內(nèi)、體外的抗實驗分為兩個部分： 體外-細(xì)胞學(xué) 體內(nèi)-動物學(xué)青蒿琥酯抗腫瘤作用研究9實驗分為兩個部分：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究9細(xì)胞學(xué)實驗-材料腫瘤細(xì)胞株：HCT-8（人結(jié)腸癌細(xì)胞株）K-562（人紅白血病細(xì)胞株）MCF-7（人乳腺癌細(xì)胞株）試劑：

3、RPMI 1640胰蛋白酶MTT（噻唑蘭）DMSO（二甲基亞砜） 5-氟脲嘧啶（5-Fu） 青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究10細(xì)胞學(xué)實驗-材料腫瘤細(xì)胞株：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究10細(xì)胞學(xué)實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細(xì)胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MTT氟尿嘧啶青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究11細(xì)胞學(xué)實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細(xì)胞學(xué)實驗-統(tǒng)計學(xué)處理 IC50計算 使用SPSS軟件包的概率單位法(Probit) 組間比較 t 檢驗。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究12細(xì)胞學(xué)實驗-統(tǒng)計學(xué)處理青蒿琥

4、酯抗腫瘤作用研究12動 物 學(xué) 實 驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究13動 物 學(xué) 實 驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究13動物實驗-材料瘤株：小鼠肉瘤S-180。動物：昆明種小鼠（BALB/cnu裸小鼠）,體重1822g,雌雄不限，在同一批試驗中使用性別相同的小鼠。藥物：青蒿琥酯環(huán)磷酰胺(CTX)青蒿琥酯抗腫瘤作用研究14動物實驗-材料瘤株：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究14動物學(xué)實驗-技術(shù)路線給裸鼠接種S180瘤株空白對照靜脈注射全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白計算抑瘤率加剝離瘤塊，稱瘤重處死動物CTX腹腔注射青蒿琥酯腹腔注射青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究15動物學(xué)實驗-技術(shù)路線給裸鼠接種S180瘤株空白對照靜脈注射全動物學(xué)實驗-統(tǒng)

5、計學(xué)處理數(shù)據(jù)分析 使用SPSS V10.0各實驗組與陰性對照組及CTX組間比較采用成組t檢驗。 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究16動物學(xué)實驗-統(tǒng)計學(xué)處理青蒿琥酯抗腫瘤作用研究16細(xì)胞學(xué) 實驗結(jié)果與討論青蒿琥酯抗腫瘤作用研究17細(xì)胞學(xué) 實驗結(jié)果與討論青蒿琥酯結(jié)論 1 1mg/ml濃度全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有促進(jìn)HCT-8、K562及MCF-7細(xì)胞生長的作用青蒿琥酯抗腫瘤作用研究18結(jié)論 1 1mg/ml濃度全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白具有促進(jìn)HCT-8、統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究19統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究1統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2

6、0統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究21統(tǒng)計學(xué)分析有顯著性（P0.05P0.05P0.05青蒿琥酯抗腫瘤作用研究30各劑量組間t檢驗：P0.05青蒿琥酯抗腫瘤作用研究30與Henry等的研究結(jié)果不一致與Henry等的研究的相似點(diǎn)：藥物類似：化學(xué)結(jié)構(gòu)、抗瘧疾作用、毒副作用以及抗腫瘤作用細(xì)胞株：同為人惡性腫瘤細(xì)胞株使用的培養(yǎng)液相同： RPMI 1640加入的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度相同- 1ug/ml=12.6uM結(jié)果不同，Why？青蒿琥酯抗腫瘤作用研究31與Henry等的研究結(jié)果不一致與Henry等的研究的相似點(diǎn)：我們的分析

7、青蒿琥酯的抗腫瘤作用機(jī)制可能不是鐵離子介導(dǎo)的過氧基斷裂產(chǎn)生大量的氧自由基而殺死腫瘤細(xì)胞，而可能是其他機(jī)制。 全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白為腫瘤細(xì)胞提供了生長繁殖所需的Fe2+-促進(jìn)生長 青蒿琥酯殺傷腫瘤細(xì)胞-抑制生長 聯(lián)合使用-作用相互抵消青蒿琥酯抗腫瘤作用研究32我們的分析青蒿琥酯的抗腫瘤作用機(jī)制可能不是鐵離子介導(dǎo)的過氧基理由 一人骨髓中的造血細(xì)胞、粘膜上皮細(xì)胞均生長快、代謝旺盛，其細(xì)胞內(nèi)Fe2+的含量高。而動物學(xué)研究及臨床實踐發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物很安全，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯的骨髓抑制和粘膜損傷。說明青蒿素類藥物不是直接與Fe2+發(fā)生反應(yīng)而釋放出大量氧自由基。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究33理由 一人骨髓中的造血細(xì)胞、粘膜

8、上皮細(xì)胞均生長快、代謝旺盛，理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白顯著增強(qiáng)雙氫青蒿素對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用的文獻(xiàn)，分別是： 1、1995年Henry Lai和Narendra P. Singh的 Selective cancer cell cytotoxicity from exposure to dihydroartemisinin and holotransferrin. 2、2001年Narendra P. Singh和Henry Lai的Selective toxicity of dihydroartemisinin and holotransferrin toward human bre

9、ast cancer cells.而上述2篇文獻(xiàn)的作者均相同。近10年未再見有類似報道。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究34理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白顯著增強(qiáng)雙氫青蒿素對腫瘤結(jié)論4 青蒿琥酯在體內(nèi)對S180肉瘤有明顯的抗腫瘤作用青蒿琥酯抗腫瘤作用研究35結(jié)論4 青蒿琥酯在體內(nèi)對S180肉瘤有明顯的抗腫與陰性對照組比較P0.05P0.05P0.05P0.05P0.01青蒿琥酯結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致青蒿琥酯抗腫瘤作用研究37結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致青蒿琥酯抗腫瘤作用研究37結(jié) 論 1 濃度為1mg/ml的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白有促進(jìn)HCT-8、K562和MCF-7腫瘤細(xì)胞生長的作用。 2 青蒿琥酯對人腫瘤細(xì)胞株HCT

10、-8、K562和MCF-7具有一定的體外抑瘤作用，IC50值為1.9910.54g/ml。3 我們發(fā)現(xiàn)加用濃度為1mg/ml的全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白不能增強(qiáng)青蒿琥酯對HCT-8、K562和MCF-7瘤株的生長抑制作用。4 腹腔注射青蒿琥酯對小鼠S180肉瘤具有一定的抑制作用。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究38結(jié) 論 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究38致 謝感謝xxxxxxxx青蒿琥酯抗腫瘤作用研究39致 謝感謝xxxxxxxx青蒿琥酯抗腫瘤作用研究3謝 謝 ！青蒿琥酯抗腫瘤作用研究40謝 謝 ！青蒿琥酯抗腫瘤作用研究40細(xì)胞學(xué)實驗-技術(shù)路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細(xì)胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MMT氟尿嘧啶青蒿琥酯只有細(xì)胞沒有藥物本底孔測試孔OD需減去本底OD4h，使用96孔板培養(yǎng)3h終濃度1mg/ml終濃度1mg/ml培養(yǎng)96h培養(yǎng)4h5mg/ml的MTT 10ul150ul震蕩3分鐘用全自動酶標(biāo)儀于550nm波長青蒿