青蒿琥酯抗腫瘤作用研究培訓課件

1、青蒿琥酯抗腫瘤作用研究青蒿琥酯抗腫瘤作用研究前 言青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2前 言青蒿琥酯抗腫瘤作用研究21.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分離出的活性物質以后我國科學家成功研制了比青蒿素抗瘧疾作用更強的雙氫青蒿素和青蒿琥酯等多種青蒿素類藥物。近年研究發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物具有抗腫瘤作用。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究31.青蒿類藥物簡介青蒿素是1972年我國中醫(yī)研究院從青蒿中分青蒿素類藥物的化學結構特點：含有過氧化物橋結構(C-O-O-C)。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究4青蒿素類藥物的化學結構特點：含有過氧化物橋結構(C-O-O-Molt-4: 人淋巴母細胞白血病細胞株 青蒿琥酯抗腫瘤作用

2、研究5Molt-4: 人淋巴母細胞白血病細胞株 青蒿琥酯抗腫青蒿琥酯抗腫瘤作用研究6青蒿琥酯抗腫瘤作用研究6我們設想：全鐵轉鐵運蛋白 + 青蒿琥酯 進行抗腫瘤實驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究7青蒿琥酯抗腫瘤作用研究7實 驗 目 的觀察全鐵轉鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內、體外的抗腫瘤作用。 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究8實 驗 目 的觀察全鐵轉鐵蛋白與青蒿琥酯聯(lián)合在體內、體外的抗實驗分為兩個部分： 體外-細胞學 體內-動物學青蒿琥酯抗腫瘤作用研究9實驗分為兩個部分：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究9細胞學實驗-材料腫瘤細胞株：HCT-8（人結腸癌細胞株）K-562（人紅白血病細胞株）MCF-7（人乳腺癌細胞株）試劑：

3、RPMI 1640胰蛋白酶MTT（噻唑蘭）DMSO（二甲基亞砜） 5-氟脲嘧啶（5-Fu） 青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究10細胞學實驗-材料腫瘤細胞株：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究10細胞學實驗-技術路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MTT氟尿嘧啶青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究11細胞學實驗-技術路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞學實驗-統(tǒng)計學處理 IC50計算 使用SPSS軟件包的概率單位法(Probit) 組間比較 t 檢驗。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究12細胞學實驗-統(tǒng)計學處理青蒿琥

4、酯抗腫瘤作用研究12動 物 學 實 驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究13動 物 學 實 驗青蒿琥酯抗腫瘤作用研究13動物實驗-材料瘤株：小鼠肉瘤S-180。動物：昆明種小鼠（BALB/cnu裸小鼠）,體重1822g,雌雄不限，在同一批試驗中使用性別相同的小鼠。藥物：青蒿琥酯環(huán)磷酰胺(CTX)青蒿琥酯抗腫瘤作用研究14動物實驗-材料瘤株：青蒿琥酯抗腫瘤作用研究14動物學實驗-技術路線給裸鼠接種S180瘤株空白對照靜脈注射全鐵轉鐵蛋白計算抑瘤率加剝離瘤塊，稱瘤重處死動物CTX腹腔注射青蒿琥酯腹腔注射青蒿琥酯青蒿琥酯抗腫瘤作用研究15動物學實驗-技術路線給裸鼠接種S180瘤株空白對照靜脈注射全動物學實驗-統(tǒng)

5、計學處理數(shù)據(jù)分析 使用SPSS V10.0各實驗組與陰性對照組及CTX組間比較采用成組t檢驗。 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究16動物學實驗-統(tǒng)計學處理青蒿琥酯抗腫瘤作用研究16細胞學 實驗結果與討論青蒿琥酯抗腫瘤作用研究17細胞學 實驗結果與討論青蒿琥酯結論 1 1mg/ml濃度全鐵轉鐵蛋白具有促進HCT-8、K562及MCF-7細胞生長的作用青蒿琥酯抗腫瘤作用研究18結論 1 1mg/ml濃度全鐵轉鐵蛋白具有促進HCT-8、統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究19統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究1統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2

6、0統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究2統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05）。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究21統(tǒng)計學分析有顯著性（P0.05P0.05P0.05青蒿琥酯抗腫瘤作用研究30各劑量組間t檢驗：P0.05青蒿琥酯抗腫瘤作用研究30與Henry等的研究結果不一致與Henry等的研究的相似點：藥物類似：化學結構、抗瘧疾作用、毒副作用以及抗腫瘤作用細胞株：同為人惡性腫瘤細胞株使用的培養(yǎng)液相同： RPMI 1640加入的全鐵轉鐵蛋白濃度相同- 1ug/ml=12.6uM結果不同，Why？青蒿琥酯抗腫瘤作用研究31與Henry等的研究結果不一致與Henry等的研究的相似點：我們的分析

7、青蒿琥酯的抗腫瘤作用機制可能不是鐵離子介導的過氧基斷裂產生大量的氧自由基而殺死腫瘤細胞，而可能是其他機制。 全鐵轉鐵蛋白為腫瘤細胞提供了生長繁殖所需的Fe2+-促進生長 青蒿琥酯殺傷腫瘤細胞-抑制生長 聯(lián)合使用-作用相互抵消青蒿琥酯抗腫瘤作用研究32我們的分析青蒿琥酯的抗腫瘤作用機制可能不是鐵離子介導的過氧基理由 一人骨髓中的造血細胞、粘膜上皮細胞均生長快、代謝旺盛，其細胞內Fe2+的含量高。而動物學研究及臨床實踐發(fā)現(xiàn)青蒿素類藥物很安全，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯的骨髓抑制和粘膜損傷。說明青蒿素類藥物不是直接與Fe2+發(fā)生反應而釋放出大量氧自由基。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究33理由 一人骨髓中的造血細胞、粘膜

8、上皮細胞均生長快、代謝旺盛，理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉鐵蛋白顯著增強雙氫青蒿素對腫瘤細胞的殺傷作用的文獻，分別是： 1、1995年Henry Lai和Narendra P. Singh的 Selective cancer cell cytotoxicity from exposure to dihydroartemisinin and holotransferrin. 2、2001年Narendra P. Singh和Henry Lai的Selective toxicity of dihydroartemisinin and holotransferrin toward human bre

9、ast cancer cells.而上述2篇文獻的作者均相同。近10年未再見有類似報道。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究34理由 二至今只有兩篇報道全鐵轉鐵蛋白顯著增強雙氫青蒿素對腫瘤結論4 青蒿琥酯在體內對S180肉瘤有明顯的抗腫瘤作用青蒿琥酯抗腫瘤作用研究35結論4 青蒿琥酯在體內對S180肉瘤有明顯的抗腫與陰性對照組比較P0.05P0.05P0.05P0.05P0.01青蒿琥酯結果與文獻報道一致青蒿琥酯抗腫瘤作用研究37結果與文獻報道一致青蒿琥酯抗腫瘤作用研究37結 論 1 濃度為1mg/ml的全鐵轉鐵蛋白有促進HCT-8、K562和MCF-7腫瘤細胞生長的作用。 2 青蒿琥酯對人腫瘤細胞株HCT

10、-8、K562和MCF-7具有一定的體外抑瘤作用，IC50值為1.9910.54g/ml。3 我們發(fā)現(xiàn)加用濃度為1mg/ml的全鐵轉鐵蛋白不能增強青蒿琥酯對HCT-8、K562和MCF-7瘤株的生長抑制作用。4 腹腔注射青蒿琥酯對小鼠S180肉瘤具有一定的抑制作用。青蒿琥酯抗腫瘤作用研究38結 論 青蒿琥酯抗腫瘤作用研究38致 謝感謝xxxxxxxx青蒿琥酯抗腫瘤作用研究39致 謝感謝xxxxxxxx青蒿琥酯抗腫瘤作用研究3謝 謝 ！青蒿琥酯抗腫瘤作用研究40謝 謝 ！青蒿琥酯抗腫瘤作用研究40細胞學實驗-技術路線培養(yǎng)HCT-8、K562、MCF-7腫瘤細胞株青蒿琥酯 空白對照全鐵轉鐵蛋白 計算生長的抑制率全鐵轉鐵蛋白測定OD值加入DMSO加入MMT氟尿嘧啶青蒿琥酯只有細胞沒有藥物本底孔測試孔OD需減去本底OD4h，使用96孔板培養(yǎng)3h終濃度1mg/ml終濃度1mg/ml培養(yǎng)96h培養(yǎng)4h5mg/ml的MTT 10ul150ul震蕩3分鐘用全自動酶標儀于550nm波長青蒿