動物實驗基本技術(shù)操作

1、關(guān)于動物實驗的基本技術(shù)操作第1頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 動物實驗的操作技術(shù)方法已成為醫(yī)學科研和教學工作不可缺少的手段，動物實驗方法多種多樣，在不同的研究領(lǐng)域有其不同的目的和應(yīng)用，但是一些基本的操作技術(shù)方法是一樣的，如動物的抓取、固定、標號、脫毛、麻醉、給藥、采集血及尿樣、處死、尸檢等，對于實驗研究者來說無論從事哪一類研究的項目，都會不同程度地應(yīng)用這些技術(shù)，動物實驗操作的正確與否，會直接影響實驗結(jié)果，這是科學實驗工作者必須熟練掌握的基本功。 2022/10/62第2頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四一、實驗動物的抓取和固定 1、小鼠的抓取

2、與固定 實驗時從籠盒將小鼠尾部抓住并提起，放在籠蓋(或表面粗糙的物體)上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時，用左手(熟練者也可用同一只手)拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動物在手中的姿勢。這類抓取方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。 2022/10/63第3頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-1 小鼠的抓取方法2022/10/64第4頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-2 小鼠固定架固定方法2022/10/65第5頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2、大鼠的抓取

3、與固定 大鼠抓取方法基本同小鼠，抓大鼠時若操作者不熟練，或者大鼠特別兇猛，操作者最好戴上防護手套(帆布或硬皮質(zhì)均可)，如若是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射時，可采用與小鼠相同的手法，即拇、食指捏住鼠的耳朵及頭頸皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心中，調(diào)整大鼠在手中的姿勢后即可操作。 大鼠的尾靜脈采血和手術(shù)操作就需固定大鼠。麻醉后置于大鼠實驗板上(仰臥位)，先用線固定好四肢，然后用棉線將大鼠兩上門齒固定于實驗板上。如做大鼠尾靜脈注射，可將大鼠置于固定器內(nèi)，使鼠尾留在外面進行操作。 2022/10/66第6頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-3 大鼠的抓取方法2022

4、/10/67第7頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-4 固定板固定大鼠2022/10/68第8頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3、豚鼠的抓取與固定 豚鼠性情溫和，膽小易驚，一般不易傷人，抓取時，先用手掌扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，拇、食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部。 如果在實驗時豚鼠頻繁掙扎，不宜采用此方法，因為操作者的拇、食指會隨動物的掙扎越抓越緊而引起豚鼠窒息。 另外，有時可用紗布將豚鼠頭部輕輕蓋住，操作人員輕扶住其背部或者讓其頭部鉆到實驗人員的臂下，然后進行實驗操作。2022/10/69第9頁，共97頁，2022年，5月20日，1

5、4點40分，星期四圖1-5 豚鼠的抓取方法2022/10/610第10頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 4、家兔、貓的抓取與固定 抓取家兔時，輕輕打開兔籠門，勿使兔受驚，然后將手伸入籠內(nèi)，從兔頭前部把兩耳輕輕壓于手掌內(nèi)，兔便臥伏不動，此時將頸背部的被毛和皮膚一起抓住提起，再以另一手托住臀部，使兔身的重量大部分落在該手掌上。 家兔的固定方法可根據(jù)需要而采用：盒式固定，常用作兔耳血管注射、采血或觀察兔耳血管變化，兔腦內(nèi)接種等操作固定；臺式固定，常用作兔靜脈采血或測量血壓、呼吸等實驗和技術(shù)操作時的固定；架式固定，常用于作熱原試驗時固定。 貓的抓取方法、固定方法基本同家兔。

6、2022/10/611第11頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-6 家兔的抓取方法圖1-8 馬蹄形兔頭固定法圖1-7 筒形兔頭固定器2022/10/612第12頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-9 固定臺固定兔方法2022/10/613第13頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 5、犬的抓取與固定 經(jīng)過馴服的犬抓取是很方便的，而未經(jīng)馴服的犬抓取時，要用特制的鉗式長柄犬夾夾住頸部，使犬頭向上，頸部拉直，再套上犬鏈。急性實驗用犬，可用犬夾夾住犬頸部后,將它壓倒在地，由助手將其四肢固定好。 實驗需要麻醉時，把麻醉完善后的

7、犬固定在手術(shù)臺或?qū)嶒炁_上，固定的姿勢，依手術(shù)或?qū)嶒灥姆N類而定。一般采用仰臥位或俯臥位，前者便于進行頸、胸、腹、股等部位的實驗，后者便于進行背、腦、脊髓實驗。用犬頭固定器固定犬頭。 2022/10/614第14頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-10 犬嘴的捆綁方法2022/10/615第15頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 抓取豬時，一人從背后緊抓豬的兩耳將其提起，使其臀部著地，兩腿膝部合攏將其軀干夾住。 實驗中如需分離豬股靜脈取血、注射或輸液時，或要在豬腹部或頸部操作時，可將豬仰放在“v字型槽內(nèi)進行固定，也可用木制三角固定架和帆布吊兜來固

8、定小型豬。 6、豬的抓取固定方法2022/10/616第16頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖1-11 豬的三角架固定圖1-12 豬的固定帶懸吊固定圖1-13 豬固定帶2022/10/617第17頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四二、實驗動物的編號、標記、 分組和去毛方法 （一）編號和標記方法 在動物實驗中，為了使實驗動物個體間或組間區(qū)別開來，便于對每個實驗動物的反應(yīng)情況進行觀察，必須對實驗動物進行編號、標記。標記的方法很多，但基本原則是： 號碼清楚、耐久、簡便、易認和適用。下面介紹幾種常見標記方法：2022/10/618第18頁，共97頁，2

9、022年，5月20日，14點40分，星期四 染色法是用化學劑在動物身體明顯部位如被毛、四肢等處進行涂染，或用不同顏色等來區(qū)別各組動物，是實驗室最常用、最容易掌握的方法。 常用的標記溶液有：3-5苦味酸溶液（黃色）；0.5中性紅或品紅溶液（紅色）；2硝酸銀溶液，(咖啡色，涂后需光照10min)；煤焦油酒精溶液（黑色）；龍膽紫溶液（紫色）。 1.臨時性標記 1）染色法 2022/10/619第19頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 標記時，用標記筆蘸取上述溶液，在動物體表不同部位涂上斑點，以示不同號碼。編號的原則是：先左后右，從前到后。 一般把涂在左前肢上的記為1號，左側(cè)腹

10、部為2號，左后肢為3號，頭頂部為4號，腰背部為5號，尾基部為6號，右前肢為7號，右側(cè)腰部為8號，右后肢為9號。若動物編號超過10或更大數(shù)字時，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個位數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)。這種交互使用可編到99號。例如把紅色的記為十位數(shù)，黃色記為個位數(shù)，那么右后腿黃斑，頭頂紅斑，則表示是49號鼠，以此類推。 第20頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖2-1小鼠和大鼠標號圖式2022/10/621第21頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 染色法多用于實驗周期較短，動物數(shù)量不多的情況。這種方法標號簡單，動物無疼痛和損傷，

11、但由于動物之間互相摩擦、舔毛，尿、水浸漬被毛或脫毛，或因日久顏色自行消退等原因，不宜用于長期的實驗。此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白色家兔。 2）涂漆或貼膠布 用油漆在動物角或體表涂漆進行標記，或用膠布貼在動物腿或翅上進行標記，也都是效果較好的臨時性標記方法。 2022/10/622第22頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2.半永久性標記 1) 掛牌法 掛牌法可用來標記多種動物，并多數(shù)將塑料、鋁或鋼片制成的牌固定在實驗動物耳朵內(nèi)側(cè)面上作為標記。一般用于兔、豚鼠標記。犬、猴、貓等動物有時可掛在頸部或籠箱或鏈條上。 2) 戴項圈法 先將號碼沖壓在圓形或方形鋁或不銹鋼制作的金

12、屬牌上，長期使用不生銹。然后，將標有號碼的金屬薄片固定在拴動物的皮帶圈上，將此圈固定在動物頸部。 2022/10/623第23頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3.永久性標記 1烙印法 烙印法是用刺號鉗或燒紅的鐵烙將號碼烙壓在動物無體毛或明顯部位，如耳、面鼻部和四肢部位等。然后用以酒精為溶劑的染料涂布。此類方法應(yīng)注意烙號部位的污染和預(yù)防感染。 2打耳孔法 打耳孔法是專用于動物編號而直接在動物耳朵上打孔或打成缺口編號的方法，用剪刀將耳緣剪缺口也可代替此方法。由打孔的位置和孔的數(shù)量來標記。打孔法應(yīng)注意防止孔口愈合，可使用滑石粉涂抹在打孔局部。 2022/10/624第24

13、頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖2-2 打耳孔標記法2022/10/625第25頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3針刺法 人工針刺號常用于兔的標記，先用手拔去兔耳的被毛，人工針刺號碼，刺后涂以酒精黑墨即可。目前有市售的兔用打號器，原理與此相同，附帶有不同數(shù)字和符號的針刺字號。可根據(jù)需要選用。字號安裝在打號器上打號后，用黑墨涂在打號局部，數(shù)天后黑墨浸入皮下，顯示出藍黑色字號。 一般來說，小型動物適宜用打耳孔法和染色法，中型動物適用掛牌法、針刺法和烙印法。 2022/10/626第26頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四

14、 （二）實驗動物被毛的去除方法 動物被毛常影響實驗操作和結(jié)果的觀察，因此實驗中常需去除或剪短動物的被毛。方法有四種： 1剪毛法 動物急性實驗中常用此法。 2拔毛法 兔耳緣靜脈注射或取血時以及給大、小白鼠作尾靜脈注射時常用此法（液體石蠟,凡士林 ） 3剃毛法 大動物作慢性手術(shù)時常用此法。 4脫毛法 一般大動物作無菌手術(shù)的術(shù)野準備或觀察動物皮膚血液循環(huán)和病理變化時常采用此法。 2022/10/627第27頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四常用的脫毛劑配方： 硫化鈉3g、肥皂粉1g，淀粉7g，加水適量調(diào)成糊狀； 硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、甘油5g、硼砂1g，加水75ml，

15、調(diào)成稀糊狀； 硫化鈉8g、溶于100ml水中； 以上脫毛劑配方適用于家兔、大、小白鼠等小動物的脫毛。 硫化鈉l0g、生石灰15g，溶于100ml水內(nèi)，此配方適用于犬等大動物的脫毛。 2022/10/628第28頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四三、 實驗動物的麻醉方法 在一些動物實驗，特別是手術(shù)等實驗，為了實驗的順利進行，減少動物的掙扎和保持安靜，便于操作，常對動物采用必要的麻醉。此外，從人道主義角度，麻醉也是動物保護所必須采取的措施。由于動物種屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和選用麻醉劑亦有不同。 2022/10/629第29頁，共97頁，2022年，5月20日，1

16、4點40分，星期四（一）動物麻醉前的準備與處理 1麻醉前的準備 實驗前動物禁食，一般在麻醉前12h禁食較好； 大動物(犬、羊、豬、猴)實驗前，必要時可給予一定量的安定劑和阿托品類藥物，以減輕動物的過度緊張和減少唾液的分泌，利于氣管插管的操作； 需要時，在試驗的部位進行備皮等。 2022/10/630第30頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2麻醉方法的選擇 (1) 動物種類與麻醉方法的選擇： 動物的種類不同，選擇麻醉方法也不盡相同，比如鼠類動物一般都選擇腹腔麻醉、吸入性麻醉；而兔、犬、羊、猴等都比較適合靜脈麻醉。 (2) 實驗類型與麻醉方法的選擇： 實驗時間短，就可以考

17、慮給予吸入性麻醉或短效靜脈麻醉等。如果實驗時間較長，就要選擇麻醉藥物和麻醉方法都比較長的辦法。如果實驗時間很長，選擇靜脈輸液連續(xù)麻醉比選擇肌肉和腹腔注射麻醉更好。因為靜脈麻醉可以根據(jù)實驗時間的長短繼續(xù)給藥，延長麻醉時間。2022/10/631第31頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（二）常用的麻醉劑 動物實驗中常用的麻醉劑分為三類，即揮發(fā)性麻醉劑、非揮發(fā)性麻醉劑和中藥麻醉劑。 1. 揮發(fā)性麻醉劑 這類麻藥包括乙醚、氯仿等。乙醚是常用的吸入麻醉劑，乙醚揮發(fā)性很強，有特殊的氣味，為易燃品，適用于各種動物(雞除外)，乙醚的作用是抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。2022/10/632第32頁

18、，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 乙醚的特點是安全范圍大，肌肉能完全松弛，對肝和腎的毒性較小，麻醉的誘導(dǎo)期和蘇醒較短，動物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后蘇醒較快。其副作用是對呼吸道和結(jié)膜刺激性強，胃腸道反應(yīng)強，局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，易發(fā)生呼吸道阻塞，使用時應(yīng)小心。 2022/10/633第33頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2.非揮發(fā)性麻醉劑 這類麻醉劑種類較多，分為全身麻醉劑和局部麻醉劑。全身麻醉劑包括苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，氨基甲酸乙酯和水合氯醛。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的

19、麻醉時間，麻醉過程較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。 2022/10/634第34頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 1）全身麻醉劑 (1) 戊巴比妥鈉： 為中效巴比妥類藥物。戊巴比妥鈉是最常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產(chǎn)品，使用時應(yīng)注意藥品質(zhì)量。 (2) 硫噴妥鈉： 硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓿中保存。其水溶液不穩(wěn)定，故必須臨時配制，常配濃度為15，在4冰箱中保存，在室溫中則只能保存24h。 該藥麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時間短，一次用藥僅可維持數(shù)分鐘。因此，一般用作為誘導(dǎo)麻醉或基礎(chǔ)麻醉。其副作用：對呼吸系統(tǒng)有明顯的抑制作用，

20、不宜與嗎啡合用。 2022/10/635第35頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 (3) 氯胺酮： 為中效巴比妥類藥物，常用其鹽酸鹽。靜脈或肌肉給藥后起效快，但維持時間較短，一般僅1020min。為了延長時間，可重復(fù)給藥。其副作用是心率加快，血壓升高，有時還可引起動物嘔吐等。 (4) 水合氯醛： 此藥為無色透明棱柱狀結(jié)晶，有穿透性的臭氣及腐蝕性苦味。其溶解度較小，常配濃度為5-10。配制后的溶液易沉淀，用時先在水浴鍋中適量加熱，促其溶解。 作用特點與巴比妥類藥物相似，是一種安全有效的鎮(zhèn)靜催眠藥，能起到全身麻醉作用，其麻醉量與中毒量很接近，故安全范圍小，使用時應(yīng)注意。其副

21、作用為對皮膚和粘膜有較強的刺激作用。2022/10/636第36頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 (5) 氨基甲酸乙酯(烏拉坦)： 此藥是比較溫和的麻醉藥，安全度大。多數(shù)實驗動物都可使用，更適用于小動物。一般用作基礎(chǔ)麻醉，如實驗全部過程都用此藥麻醉時，動物保溫尤為重要。使用時常配成20-25水溶液。 犬、貓、兔直腸灌注1.5gkg體重；皮下、靜脈、腹腔注射0.75-1gkg體重。 當與水合氯醛按11比例合并麻醉時，效果更好。但在作靜脈注射時必須溶在生理鹽水中，配成5或10的溶液，即每kg體重注射10-20ml。 蛙類：2gkg體重，由背部淋巴囊注射。鳥類：1.25gk

22、g體重，由肌肉注入。鼠：1.5-2gkg體重，由腹腔注射。 2022/10/637第37頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 (6)異戊巴比妥鈉： 常配成510的水溶液，作用和戊巴比妥鈉相似。使用劑量和方法： 犬、貓、兔腹腔和肌肉注射80-100mgkg體重；靜脈注射40-50mgkg體重；直腸灌注100mgkg體重。 鼠：腹腔注射100mgkg體重。 2022/10/638第38頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2） 局部麻醉劑 (1) 普魯卡因： 為對氨苯甲酸酯，是無刺激性的快速局部麻醉藥。皮下注射后1-3min內(nèi)產(chǎn)生麻醉，可維持30-45m

23、in。它可使血管輕度舒張，易被吸收入血而失去藥效。在溶液中加入少量腎上腺素(每100ml加入0.1腎上腺素0.2-0.5ml) 能使局麻醉時間延長至1-2h。常用1-2鹽酸普魯卡因溶液阻斷神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，劑量應(yīng)根據(jù)手術(shù)范圍和麻醉深度而定， 其副作用：在大量藥物被吸收后，表現(xiàn)出中樞神經(jīng)系統(tǒng)先興奮后抑制。此作用可用巴比妥類藥物預(yù)防。 2022/10/639第39頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 (2) 利多卡因： 常用于表面、浸潤、傳導(dǎo)麻醉和硬脊膜外腔麻醉。利多卡因的化學結(jié)構(gòu)與普魯卡因不同，其作用效力和穿透力均比普魯卡因強兩倍，作用時間也較長。阻斷神經(jīng)纖維傳導(dǎo)及粘膜表面麻醉

24、濃度為12。通常用0.51的濃度。 (3) 的卡因： 的卡因的化學結(jié)構(gòu)與普魯卡因相似，能穿透粘膜，作用迅速，1-3min生效，持續(xù)60-90min。其局麻作用比普魯卡因強10倍，吸收后的毒性作用也相應(yīng)加強， 2022/10/640第40頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3. 中藥麻醉劑 動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。 （三）常用麻醉藥物的用法與用量 常用實驗動物全身麻醉藥的用法與用量見下表。 2022/10/641第4

25、1頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四常用麻醉藥的用法與用量麻醉藥名 適用動物 給藥途徑 劑量 (mg/kg) 常配濃度(%) 用藥量(ml/kg) 麻醉維持時間 戊巴比 犬,貓,兔 靜脈 30 3 1.0 24h,中途加 妥鈉 腹腔 4050 3 1.41.7 1/5量，可多 豚鼠 腹腔 40 50 2 2.02.5 維持1h以上 大小鼠 腹腔 45 2 2.3 鳥類 肌肉 50100 2 2.55.0 氨基甲 犬,貓,兔 腹腔,靜脈 7501000 25 34 24h,主要適 酸乙酯 豚鼠 肌肉 1350 20 7.0 用于小動物。(烏拉坦) 大,小鼠 肌肉 1350

26、 20 7.0 有時可降低血 鳥類 肌肉 1250 20 6.3 壓 蛙類 皮下淋巴囊 2000mg/kg 20 23ml/只 或400600mg/只 異戊 犬,貓,兔 靜脈 4050 5 0.81.0 巴比妥 肌肉,腹腔 80100 10 0.81.0 鼠類 直腸 100 10 1.0 4-6h 腹腔 100 10 1.0 硫噴妥鈉 犬,貓,兔 靜脈,腹腔 2550 2 1.32.5 1530分,效力 大白鼠 靜脈,腹腔 50100 1 5.010 強,宜慢注射 氯仿 各種動物 吸入 *實驗過程中一直要吸入麻醉藥維持，毒性大 乙醚 各種動物 氣管內(nèi)插管吸入 *實驗中一直要吸入麻醉藥維持第42

27、頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（四）麻醉深度的判定和麻醉后動物護理 麻醉深度常用判定指標 輕度麻醉 中度麻醉（最佳麻醉） 深度麻醉呼吸表現(xiàn) 不規(guī)則，由痛反射 規(guī)則的胸腹式呼吸,呼吸 腹式呼吸,換氣量 可致呼吸數(shù) 數(shù)、換氣量 明顯循環(huán)表現(xiàn) 心率，血壓 血壓、心率一定 心率，血壓 由痛反射可致心率眼的表現(xiàn) 有眼球運動,眼瞼,對光 眼球置中央或靠近中央, 眼瞼對光,角膜反射 反射眼球向內(nèi)下方,瞳 眼瞼反射遲鈍,對光反射 消失瞳孔散大,角膜 孔收縮,結(jié)膜露出,流淚 亦遲鈍，瞳孔稍開大 干燥口腔反射 尚有咽下、喉頭反射 無 無肌松弛 有 腹肌明顯 腹肌異常運動其他表現(xiàn) 流涎、

28、出汗，分泌多， 內(nèi)臟牽引引起的迷走神 排便、排尿 經(jīng)反射，收縮反射消失 2022/10/643第43頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四四、實驗動物的給藥方法 在動物實驗中，需將藥物通過一定的途徑給入到動物體內(nèi)，才能觀察實驗動物對藥物的反應(yīng)。給藥的途徑和方法是多種多樣的，可以根據(jù)實驗?zāi)康?，實驗動物種類、敏感途徑和藥物類型等情況而定。 2022/10/644第44頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（一）皮內(nèi)注射法 兔、豚鼠和大鼠的皮內(nèi)注射部位均為背部脊柱兩側(cè)的皮膚。注射前一天，將動物被毛用脫毛法脫凈。注射時，皮內(nèi)注射針頭的孔朝上與皮膚平行刺入皮內(nèi)(表

29、皮與真皮之間)，然后推液。表皮與真皮之間結(jié)構(gòu)致密，當溶液注入皮內(nèi)時，可見到皮膚表面馬上會鼓起一小鼓泡，形成皮丘(白色、橘皮樣)，同時因注射部位局部皮膚缺血呈蒼白色，皮膚上的毛孔極為明顯。此小泡如不很快消失，則證明注射液確實注入皮內(nèi)，若很快消失，就可能注在皮下，應(yīng)重換部位注射。 注射量：小鼠最多不得超過0.05ml；豚鼠、大鼠、兔一般為0.1ml。 2022/10/645第45頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（二）皮下注射法 注射針頭進入皮下(真皮下)，若針頭能自由撥動無牽阻，注入注射液后形成小泡，則皮下無誤。由于皮下組織較松，注射液很快擴散，一定時間小泡可消失。皮下注

30、射進針方法： 通過腹中線，進入對側(cè)皮下注射，因腹中線皮膚致密，較緊，注射液不易隨針頭拔出時由針孔逸出，注射完畢可明顯見到注射后形成的小包到腹中線即阻住。 通過后腿肌肉進入皮下注射法：此法小鼠常用。將針頭由鼠蹊部刺入大腿肌肉內(nèi)平行上翹至皮下，然后推液。此法注射液也不易滲出。 2022/10/646第46頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 （三）腹腔注射法 注射液注入腹腔內(nèi)即擴散。此法注射液也不易滲出。 通過腹中線，先至對側(cè)皮下，然后慢慢刺入腹腔，不得過深，使針頭緊靠腹壁，避免刺傷內(nèi)臟，然后推液。 由會陰處通過腹最下端肌肉刺入后進入腹腔，此法小鼠常用，注射液不易逸出。 注射

31、量：小鼠一般為0.51ml，豚鼠、兔一般為5m1。 2022/10/647第47頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四4-14-22022/10/648第48頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（四）肌肉注射法 肌肉注射較皮下和腹腔注射用得少，但當給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，常采用肌肉注射。肌肉注射部位一般采用臀部。注射時，將臀部注射部位被毛剪去(小動物可不剪毛)。注射器連6號半針頭，由皮膚表面垂直刺入肌肉，回抽一下無回血，即可注射。一般犬等大動物均采用此法。給小鼠、大鼠等小動物作肌肉注射時，用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚，右手取連有

32、5號半針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將藥液注入。 2022/10/649第49頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（五）靜脈注射法 1小鼠、大鼠尾靜脈注射方法 將鼠裝入固定架內(nèi)，使鼠尾外露。用酒精棉球擦拭尾巴，可見到兩側(cè)靜脈，注射前應(yīng)確認注射針筒內(nèi)無氣泡，針頭由尾尖端開始，順血管方向刺入。當針頭進入靜脈有滑潤感，試推液體順利無阻，則證明正確刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)把針頭和鼠尾一起固定好，不要晃動，緩緩?fù)埔?。如果針芯推不動，尾部膨脹發(fā)白，拔出針頭時無血流出，說明針頭沒有刺入靜脈內(nèi)；或拔出針頭時有血流出，而尾部膨脹發(fā)白，針芯推不動，則說明針頭刺穿靜脈又進入皮下，均應(yīng)重新注射。注

33、射量：一般為0.5ml為宜。 2022/10/650第50頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖4-3 小鼠、大鼠尾靜脈注射方法 2022/10/651第51頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2兔耳靜脈注射方法 將兔置固定盒內(nèi)或由助手固定好動物，操作者將注射部位的毛拔去并用酒精棉輕輕擦拭耳部外緣，靜脈即明顯可見。先由耳尖部靜脈注射，若失敗，再逐步向耳根移動重新注射。注射完畢抽出針頭時，應(yīng)壓迫針孔，避免出血。 3豚鼠靜脈注射方法 腿部靜脈注射：由助手抓握固定好動物，操作者左手握住后腿，右手用手術(shù)彎剪，在后小腿根部水平方向剪一缺口，揭起皮膚，靜脈外露

34、，即可進行注射； 趾間靜脈注射：以酒精棉輕擦豚鼠腳趾，使趾間靜脈顯露，即可進行注射。 2022/10/652第52頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖4-5 兔耳靜脈注射方法 圖4-4 家兔耳部血管分布第53頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 圖4-6 犬后肢外側(cè) 小隱靜脈注射方法 圖4-7 犬后肢外側(cè)小隱靜脈血管走行圖4-8 犬前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈注射方法 第54頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（六）胃內(nèi)灌注法 1大鼠與小鼠的胃內(nèi)灌注法 用左手拇指和食指抓住鼠兩耳和頭部皮膚，其他3指抓住背部皮膚，將鼠握持在左手掌內(nèi)，大鼠

35、用左手拇指和食指固定頭部和一側(cè)前肢，中指和無名指固定另一肢，小鼠用拇指和食指固定頭部，中指固定一側(cè)前肢，無名指和小指固定住一側(cè)后肢。使動物腹部朝上，頭部向上有一個傾斜度。固定好動物后，右手持注射器，使灌胃針頭沿著鼠嘴側(cè)角通過食管進入胃內(nèi)，即可灌注，如很通暢，則說明針頭確已進入胃內(nèi)；如果不通暢，動物掙扎或者發(fā)生嘔吐，則表示針頭沒有進入胃內(nèi)，應(yīng)將針頭拔出重操作。 2022/10/655第55頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖4-9 小鼠灌胃方法 圖4-10 大鼠灌胃方法第56頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2兔與貓的胃內(nèi)灌注法 助手將動物固定好

36、，用開口器放人上下腭之間，動物即咬住開口器。實驗者用左手抓住動物嘴部，固定好開口器，然后用右手取適宜粗細的導(dǎo)管，由開口器中央小孔處插入，導(dǎo)管經(jīng)口沿頜后壁慢慢送入食管內(nèi)再進入胃內(nèi)。導(dǎo)管插入時動作要輕、慢，防止插入氣管。插入后，可用一根動物毛在導(dǎo)管口外試一下，觀看動物呼吸時，毛有沒有擺動現(xiàn)象，如果沒有，即說明導(dǎo)管插入正確。即可在導(dǎo)管口處連接注射器，慢慢將藥液推灌入胃。 2022/10/657第57頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖4-11 兔的灌 胃方法 圖4-12 兔、貓灌胃用 張口器與灌胃管2022/10/658第58頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分

37、，星期四3犬的胃內(nèi)灌注法 將犬固定好，用紗帶綁住犬嘴，左手握住犬嘴部，右手持灌胃管，用溫水濕潤胃管后用右手中指將犬右側(cè)的嘴角輕輕翻開，摸到最后一對大臼齒，齒后有一空隙，中指固定在這空隙處，然后用右手拇指和食指將灌胃管插入此空隙，并經(jīng)口順食管方向送人胃內(nèi)。如果胃管送入順利，則將胃管送入約20cm時，即可進入胃內(nèi)，不必繼續(xù)往里插送。先用裝有溫水的注射器由灌胃管口試灌注一些，如果水不從犬嘴流出，灌注很通暢，說明進入胃內(nèi)，即可將藥液用注射器由灌胃口慢慢灌注入胃。一次灌液量不能超過200ml。 2022/10/659第59頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖4-13 犬的灌胃方法

38、2022/10/660第60頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四五、實驗動物各種體液的采集方法 實驗動物需要采集各種體液有血液、淋巴液、消化液、腦脊髓液、尿液、精液、陰道內(nèi)液體等。下面是幾種主要體液的采集方法。 （一）血液采集 1. 大、小鼠的采血方法 1）鼠尾靜脈采血法 將鼠置于固定盒內(nèi)，固定好，露出鼠尾用手輕揉或用溫水(45左右)加溫，也可用二甲苯涂擦鼠尾，使尾靜脈充血后，用剪刀剪去尾尖，尾靜脈血即可流出，用手輕輕的從尾根部向尾尖部推擠，即可收集到少量血液。第61頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 實驗時如果需要間隔一定時間，反復(fù)采集少量血液，

39、則每次采血時,可將鼠尾剪去一小段；取血后，用棉球壓迫止血，并用液體火棉膠涂于傷口處保護傷口。 也可采用切割尾靜脈取血,其方法是用鋒利刀片在尾靜脈上切開一小口，每次取少量血液，兩側(cè)尾靜脈可交替切割。切割后用棉球壓迫止血，傷口短時間內(nèi)即可結(jié)痂痊愈。這種方法比較適合大鼠的采集血液。2022/10/662第62頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2）眼眶動脈和靜脈采血法 用左手抓住鼠，拇指和食指將鼠頭部皮膚捏緊，使鼠眼球突出。右手取一彎小鑷子在鼠右側(cè)眼球根部將眼球摘去，并立即將鼠倒置，頭朝下，此時眼眶內(nèi)動、靜脈很快流血，將血滴入預(yù)先加有抗凝劑的玻璃器皿內(nèi)，直至動、靜脈不再流血為

40、止。此種采血法在采血過程中動物沒有死，心臟跳動在繼續(xù)，因此采集到的血量比其他方法要多，若實驗時需多量血液，此種方法最好。 2022/10/663第63頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四3）后眼眶靜脈叢采血法 取血時，徒手抓取動物，即左手從背部抓住動物，用左手的拇指和食指、中指握住動物頸部，利用對頸部所加的輕壓力，使頭部靜脈淤血，在突出的眼球旁分辨出后眼眶靜脈。 穿刺部位是在眼球和眼眶后界之間的后眼眶靜脈叢。用10可卡因局部麻醉，右手持消毒過的毛細吸管吸取抗凝劑濕潤其內(nèi)壁，從內(nèi)側(cè)眼角將吸管轉(zhuǎn)向前，并輕壓刺入Tenon筋膜，然后由鼻側(cè)眼眶平行地對喉頭方向推進，深約4-5mm

41、，到達后眼眶靜脈叢，血液自然進入吸管內(nèi)。采集到所需要的血液量后，即除去加于頸部的壓力，同時抽出毛細吸管。 此種采血方法可以采集較多量的血液，動物休息數(shù)分鐘后，可繼續(xù)在同一穿刺孔重復(fù)采集血液。 第64頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖5-1 鼠尾靜脈采血法 圖5-2 大鼠后眼眶靜脈叢采血法 2022/10/665第65頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 4）心臟采血法 固定板法：將鼠仰臥固定在固定板上，左側(cè)心區(qū)部位剪毛，碘酒、酒精消毒。左手在鼠左側(cè)3-4肋間摸到心搏，或手持裝有小號針頭的注射器，選擇心搏最強處穿刺，當針頭正確刺入心臟，血液依靠心搏

42、的力量自然進入注射器，即可采集血液。 徒手法：在熟練情況下，一人徒手即可采血，即左手拇指和食指握住頸部，小拇指壓住鼠尾使之仰臥在左手心內(nèi)，右手持注射器在左心區(qū)經(jīng)消毒處理的部位，心搏最強處刺入心臟，即可采集血液，此法最適合小白鼠的心臟采血。 2022/10/666第66頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖5-3 小鼠心內(nèi)取血方法2022/10/667第67頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 5）斷頭采血法 操作者左手拇指和食指握住大、小白鼠頸部，頭部朝下，用利剪在鼠頸頭間12處剪斷，提起動物，將血液滴入放有抗凝劑的容器內(nèi)。小鼠可采血1ml左右，大鼠

43、可采血10ml左右。 2022/10/668第68頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四2. 豚鼠的采血方法 1）心腔穿刺采血法 將豚鼠仰臥固定于小手術(shù)臺上，左側(cè)心區(qū)部的剪毛、消毒。觸摸心跳最明顯處進針穿刺。進針角度與胸部垂直，當針頭接近心臟時，就會感到心臟的跳動，再向里穿刺就可進人心室。將注射器抽成負壓，血不斷地自動流入注射器內(nèi)。采血時動作要迅速，縮短留針時間，以防血凝。隔周可重復(fù)進行心腔穿刺采血，此法也適用于兔。 2）耳緣剪口采血法 消毒耳緣后，用二甲苯反復(fù)擦拭使血管充分充盈，然后用刀片割破耳緣血管，血液會從血管中流出，此法采血0.5m1左右。 2022/10/669第

44、69頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3. 兔的采血法 1）耳(中央)動脈采血法 將兔置于固定器內(nèi)固定好，用手輕揉或用加熱的方法使兔耳充血，可發(fā)現(xiàn)在其中央有一條較粗、顏色較鮮紅的血管，即為耳中央動脈，左手固定兔耳，右手持注射器在中央動脈末端，使針頭沿動脈平行方向穿刺入動脈，血液即可進入注射器內(nèi)。取血后作壓迫止血。 另一方法是：待耳中央動脈充血后，在靠耳尖中央動脈分支處，用鋒利的手術(shù)刀片輕輕切一小口，血液就會從切破的血管中流出，立即取加有抗凝劑的容器在血管破口處采血，然后壓迫止血。 2022/10/670第70頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四

45、2）兔耳緣靜脈采血法 將動物固定好后，用手輕揉動物耳緣，待耳緣靜脈充血后，在靠耳尖部的靜脈處，用針頭刺破靜脈，血液即可流出，也可用5號半針頭沿耳緣靜脈遠端(末梢)刺入血管，抽取血液，取血后壓迫止血。一次可采血5-10ml。此法也適用于豚鼠， 2022/10/671第71頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖5-4 兔耳中央動脈取血方法圖5-5兔耳緣靜脈取血方法2022/10/672第72頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3）兔頸動(靜)脈采血法 首先做頸動(靜)脈分離手術(shù)。采血前將動物麻醉固定后，暴露頸部皮膚，按局部無菌法要求做頸側(cè)皮膚切開，分離

46、出頸動(靜)脈。根據(jù)所需血量可用連有6號針頭的注射器，與血管平行方向向心端將刺入血管即可見到動脈血流入注射器，也可在動脈上作一切口；用細橡皮管把血液引流到試管里。動脈采血時要注意止血，可用紗布或動脈夾止血。 從頸靜脈采血時，將注射器針頭由近心端沿血管平行方向刺入，使注射針頭一直引深至頸靜脈分叉處，即可取血。取血后壓迫止血。 2022/10/673第73頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 4.犬和貓的采血法 1）前、后肢皮下靜脈采血法 此種方法主要是前肢的橈側(cè)皮靜脈和后肢外側(cè)的隱靜脈為采血部位。橈側(cè)皮靜脈位于前肢前部，在下13處向內(nèi)側(cè)走行，犬可側(cè)臥或站立固定，助手從犬的后

47、側(cè)握住肘部。使皮膚向上牽拉和靜脈怒張，也可用橡皮條結(jié)扎使靜脈怒張。操作者位于犬的前面，注射器針頭由前腕的上13處刺入靜脈，直接抽取血液。抽時速度要稍慢，速度快針口容易吸著血管內(nèi)壁，血液不能進入注射器。抽血液時應(yīng)解除靜脈加壓的手或橡皮管；采血后注意止血。 2022/10/674第74頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2）股動脈采血 本法為采集犬動脈血最常用的方法。操作也較簡便。稍加訓練的犬，在清醒狀態(tài)下將犬臥位固定于犬解剖臺上。伸展后肢向外伸直，暴露腹股溝三角動脈搏動的部位，剪去毛。用碘酒、酒精消毒。左手中指、食指探摸股動脈跳動部位，并固定好血管，右手取連有5號半針頭的

48、注射器，針頭由動脈跳動處直接刺入血管，若刺入動脈一般可見鮮紅血液流入注射器，有時還需微微轉(zhuǎn)動一下針頭或上下移動一下針頭，方見鮮血流入。有時往往刺入靜脈，必須重抽之，待抽血完畢，迅速拔出針，用干藥棉壓迫止血2-3min。 2022/10/675第75頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3）心臟采血 本法最好在麻醉下進行，馴服的犬不麻醉也行。將犬固定在手術(shù)臺上，前肢向背側(cè)方向固定，暴露胸部，將左側(cè)第35肋間的被毛剪去，用碘酒、酒精消毒皮膚。采血者用左手觸摸左側(cè)35肋間處，選擇心跳最明顯處穿刺。一般選擇背側(cè)方向垂直刺入心臟。采血者取連有6號半針頭的注射器，由上述部位進針，并向

49、動物胸骨左緣外1cm第4肋間處。可隨針接觸心跳的感覺，隨時調(diào)整刺入方向和深度，擺動的角度盡量小，避免損傷心肌過重，或造成胸腔大出血。當針頭正確刺入心臟時，血即可進入注射器，可抽取多量血液。 2022/10/676第76頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 4）頸靜脈采血法 將犬麻醉后固定，取側(cè)臥位，剪去頸部被毛，用碘酒、酒精消毒皮膚。將犬頸部拉直，頭盡量后仰。用左手拇指壓住頸靜脈入胸部的皮膚，使頸靜脈怒張，右手持注射器，針頭沿血管平行方向向心端刺入血管。采血后注意止血。采用這種方法可取較多量的血。 5）耳緣靜脈采血法 將犬在采血臺上固定，剪去耳尖部短毛，即可見到耳緣靜脈。

50、揉擦耳朵待靜脈充血后，皮膚涂少許凡士林，在靠耳尖部的靜脈叢，用針頭刺破靜脈，血液即可流出，或持注射器用針頭刺入耳靜脈抽取血液。 第77頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四圖5-7 犬頸靜脈取血方法圖5-8 犬股動脈取血方法2022/10/678第78頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四不同動物采血部位與血量的關(guān)系 采血量 采血部位 動 物 少量 尾靜脈 大鼠、小鼠 耳靜脈 兔、犬、貓、豬、山羊、綿羊 眼底靜脈叢 兔、大鼠、小鼠 舌下靜脈 犬 腹壁靜脈 青蛙、蟾蜍 冠、腳蹼皮下靜脈 雞、鴨、鵝 中量 前或后肢皮下靜脈 犬、猴、貓 耳中央動脈 兔 頸靜脈

51、 犬、貓、兔 心臟 豚鼠、大鼠、小鼠 斷頭 大鼠、小鼠 翼下靜脈 雞、鴨、鵝、鴿 頸動脈 雞、鴨、鵝、鴿 大量 股動脈頸動脈 犬、貓、猴、兔 心臟 犬、猴、貓、兔、大鼠、小鼠 頸靜脈 馬、牛、山羊、綿羊 摘眼球 大鼠、小鼠第79頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四（二）消化液采集 1胃液 將灌胃管按胃內(nèi)注入方法進行胃液采集，其方法是灌胃管由動物口內(nèi)正確插入食管再進入胃內(nèi)，胃液可自行流出，也可在灌胃管的出口端連接注射器，輕輕抽取，采集胃液，這種方法最適用于犬等大的實驗動物。 2胰液 將實驗動物（犬）的十二指腸及與十二指腸連接的胰腺取出，并把胰腺向上翻過來，仔細分離到胰大管或

52、胰小管。一般從胰大管采集胰液，在胰大管上插入適當粗細的塑料管，就可采集到胰液。 2022/10/680第80頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3膽汁 一般采取手術(shù)收集。將實驗動物腹部剃毛消毒后，沿腹中線在劍突和臍之間作一切口，由于膽囊位置隱藏在肝的右外側(cè)葉和中央葉之間，應(yīng)將肝的右、中葉向外側(cè)推開，使膽囊完全暴露，然后分離輸膽總管。由輸膽總管向膽囊方向插入一根細塑料管，輕輕壓迫膽囊，膽汁就會自然流出。也可做膽囊瘺管，這樣就可以長期的采集膽汁。 2022/10/681第81頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 4腸液和腹腔液 (1)腸液采集方法： 采

53、用無菌手術(shù)，在實驗動物的小腸上作造瘺手術(shù)，把腸瘺管縫到腹壁肌上，瘺管口伸出到動物腹部的皮膚外面。待傷口愈合后，即可從腸瘺管中采集腸液。 (2)腹腔液采集方法： 小實驗動物無菌腹腔細胞的采集(ChambersTR法)可用輸入無菌鹽水再回收腹腔無菌液方法采集，用該法可采集8090的腹腔液。采集方法為： 第82頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 動物麻醉后腹部剃毛消毒皮膚，用消毒巾擦干； 用無菌血管鉗小心提起皮膚，用注射器刺入腹腔下部，分別從三個方向注入無菌鹽水或培養(yǎng)液； 將動物從頸部提起，如兔在兔固定架上則可以豎起在頸部用紗布條保護系好； 用無菌血管鉗將針頭夾住,拔去注射器

54、,無菌鹽水洗液由針頭流出到消毒容器內(nèi)。 2022/10/683第83頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 3. 尿液采集 常用尿液采集的方法有3種： 用代謝籠收集采尿，但易為糞便污染和尿蒸發(fā)，尿量不準確； 強制排尿法，按壓兩側(cè)腰背部或輕壓膀胱，如不成功可用細小導(dǎo)尿管或塑料管緩慢插入尿道至膀胱進行導(dǎo)尿； 采用無菌手術(shù)法，制造輸尿管瘺和膀胱瘺，可長期采集尿液。 2022/10/684第84頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 1) 代謝籠采尿法 將動物放在特制的籠內(nèi)飼養(yǎng)，動物排便時，可通過籠子底部的大小便分離漏斗，將尿液與糞便分開，達到采集尿液的目的。目

55、前國內(nèi)常用的幾種大、小白鼠代謝籠，市場均有成品供應(yīng)，并有封閉式和開放式之分。 2022/10/685第85頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四2022/10/686第86頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 2) 強制排尿法 (1)壓迫膀胱法： 在實驗研究中，有時為了某種實驗?zāi)康?，要求每間隔一定的時間收集一次尿，如每2h收集一次，以觀察藥物的排出等情況。此時用代謝籠分離器采集尿液，可能有時無尿，可采用人工從體外壓迫膀胱的方法來采集尿液。如在急性實驗時，實驗中已暴露動物的膀胱，則采用此法更為簡便有效。這樣可以保證每段時間將尿排空。此種采集尿液的方法，適用于兔、貓、犬等較大的動物。 2022/10/687第87頁，共97頁，2022年，5月20日，14點40分，星期四 (2) 膀胱導(dǎo)尿法： 在急性實驗研究中，直接從動物尿道插管到膀胱的方法來收集尿液，效果很好，實驗動物避免了膀胱造瘺手術(shù)和創(chuàng)傷刺激。 以犬為例，一般雄犬插管導(dǎo)尿很容易,雌犬導(dǎo)尿比雄犬難度大一些。 2022/10/688第88頁，共97頁，2022年，5月2