免疫組化檢查在病理診斷中的應(yīng)用及其意義

1、免疫組化檢查在病理診斷中的應(yīng)用及其意義免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)。免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)。免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯抗體。實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切

2、片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧

3、甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC 染色時(shí)，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是 壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是 pH6.0 的 0.01 mol/L 的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化液。免疫組化常用的染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同

4、分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素抗生物素染色法最常用。法最常用。一、病理外檢中常用抗體標(biāo)記上皮類標(biāo)記AE1/AE3 最常用，胞漿陽性著色，細(xì)絲狀，與低、中分子量角蛋白反應(yīng)，肝細(xì)胞為陰性，CK8 和CK18CAM5.2 Pagets Mallory 小體；EMA 細(xì)胞膜/細(xì)胞漿陽性著色，上皮標(biāo)記的替代品， 漿細(xì)胞陽性，很好的內(nèi)對照，用于染滑膜肉瘤

5、 、大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤 、L&H 富于淋巴細(xì)胞的結(jié)節(jié)狀何杰金、腦膜瘤EMA（+）AE1/AE3（）、漿細(xì)胞瘤；CK7 和 CK20CK7常常在胃腸道的癌為陰性，CK20 只有胃腸道癌和Merkel 間皮細(xì)胞標(biāo)記Calretinin 和肥大細(xì)胞陽性，用于鑒別間皮瘤和腺癌常加 CEA，鑒別梭形細(xì)胞間皮肉瘤和其他的漿膜腔肉瘤鑒別胸、腹水中的癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞，確定為間皮細(xì)胞，如大網(wǎng)膜 內(nèi)陷。白細(xì)胞標(biāo)記非何杰金淋巴瘤大致分類懷疑T 細(xì)胞淋巴瘤者加LCA B 幾乎所有的白細(xì)胞T 細(xì)胞淋巴瘤（- ），經(jīng)典Hodgkin 的R-S 細(xì)胞以往漿細(xì)胞瘤現(xiàn)（+），HE 下明確的淋巴瘤不必要染。B 細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記C

6、D20（L26）胞膜陽性著色，漿陽者不可判為陽性，各階段B 細(xì)胞陽性，除了原始的前B 和非常成熟的漿母、漿細(xì)胞 ，用于染B 細(xì)胞淋巴瘤，除了小細(xì)胞、淋巴母細(xì)胞（不恒定）和漿細(xì)胞瘤常 ，梭形細(xì)胞胸腺瘤 B 細(xì)胞標(biāo)記，包括漿母和漿細(xì)胞，標(biāo)記濾泡中心比mantle 和濾泡間B 要弱，比CD20 貴/B /白血病，漿細(xì)胞瘤常CD20而CD79a 50% 。T 細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記T CD43 不同，髓系細(xì)胞和組織細(xì)胞不著色，極好的T 細(xì)胞和NK 淋巴瘤標(biāo)記，雖然有些T （MT1） T 細(xì)胞淋巴瘤、真性組織細(xì)胞腫瘤、粒細(xì)胞肉瘤陽性，一部分漿細(xì)胞瘤陽性，小B 細(xì)胞淋巴瘤陽 B 細(xì)胞陽性；UCHL-1（CD45RO

7、）細(xì)胞膜陽性著色，有時(shí) Golgi 陽性，彌漫性胞漿陽性者非真陽性 ，陽性：正常/ 反應(yīng)性的T T B 細(xì)胞淋巴瘤 細(xì)胞陽性，但極少B 性白血病和Mantle 淋巴瘤，而MALToma Marginal Zone 淋巴瘤陰性，用于鑒別胸腺癌（CD5+）和其他癌瘤。與激活相關(guān)的標(biāo)記只有膜染色和Golgi Kikuchi 淋巴結(jié)炎等、漿細(xì)胞也陽性，用于大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤、一些傳統(tǒng)的大細(xì)胞淋巴瘤、外周T 和B 細(xì)胞淋巴瘤中的一些單個(gè)大細(xì)胞、經(jīng)典何杰金病中的R-S 細(xì)胞，但非L&H 細(xì)胞、淋巴瘤樣丘疹病等皮CD30+的淋巴增生疾病、一些漿細(xì)胞瘤、胚胎性癌。組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1）胞漿內(nèi)顆粒

8、狀陽性著色，較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括漿樣單核細(xì) 胞）瘤樣惡纖組等，髓系細(xì)胞標(biāo)記；Myeloperoxidase 胞漿陽性著色，常呈顆粒狀，髓系細(xì)胞及其腫瘤的高度特異且敏感的標(biāo)記，奇怪的是在Kikuchi 淋巴結(jié)炎和狼瘡性壞死性淋巴結(jié)炎中，其中的組織細(xì)胞myeloperoxidase 也為 陽性。與淋巴瘤相關(guān)的標(biāo)記ALK-1(Anaplastic lymphoma 胞核+ 胞漿陽性著色用于大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤ALK1+ B 陽性而陰性，但I(xiàn)gA 在核周圍區(qū)陽性著色，在正常淋巴結(jié)，生發(fā)中心陰性，但和濾泡間細(xì)胞強(qiáng)陽性，在濾泡性淋巴瘤，（80% 病例）生發(fā)中心強(qiáng)陽性，陰性不能排除濾泡性淋巴瘤，

9、也用于鑒別單核樣B 細(xì)胞增生（-）和單核樣B 細(xì)胞淋巴瘤（+），有人用于診斷孤立性纖維性腫瘤；Cyclin-D1 核陽性著色，主要用于Mantle 區(qū)淋巴瘤，幾乎所有病例均為陽性，有些可能為弱陽性。與分化階段相關(guān)的標(biāo)記Tdt 細(xì)胞核陽性著色，不成熟的T 或B 淋巴細(xì)胞標(biāo)記，前T 前B / 白血病，診斷胸腺瘤（富于不成熟的T 細(xì)胞）。肌原性標(biāo)記Desmin / ,desmoplastic small cell tumor；MSA（Muscle-specific 血管原性標(biāo)記CD31 / / 漿細(xì)胞瘤陽性病 ；CD34 +/-/血小板 +但特異性差，多種腫瘤CD34 陽性。血管原性標(biāo)記Factor

10、 VIII related antigen (F-VIII) / 血 細(xì)胞漿陽性著色，是神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞很好的標(biāo)記，特異性和敏感性均好，包括： ParagangliomaPheochromocytomaNeuroblastomaOlfactory neuroblastomaGanglioneuroma、GanglioneuroblastomaPNET 等；CgA 胞漿內(nèi)顆粒狀著色，染神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的分泌小泡， Merkel 細(xì)胞癌、甲狀旁腺腺瘤fibrillary acidic 胞漿陽性著色， 星+/-細(xì)胞漿陽性著色，核陽性著色為必 胞漿內(nèi)顆粒狀著色，惡性黑色素瘤和交界痣，而正常的痣細(xì)胞常為胞漿內(nèi)顆粒狀著色，陽性表達(dá)的細(xì)胞包括：黑色素細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)、性索gra