體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍培訓(xùn)課件

1、體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍本指南的目的旨在提供一種定量測(cè)量程序線性評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。確定一種方法的非線性濃度范圍，及在每個(gè)濃度水平上非線性的程度。23體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍本指南的目的旨在提供一種定量測(cè)量程序線性評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。確體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估過(guò)程0102030405060701020304050607確定線性范圍數(shù)據(jù)修正基本原則樣本要求數(shù)據(jù)收集數(shù)據(jù)檢查數(shù)據(jù)分析24體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估過(guò)程0102030405060701（1）實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對(duì)樣本進(jìn)行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正

2、常，采用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。 （2）儀器的各項(xiàng)性能指標(biāo)（如精密度）合格，不存在明顯的攜帶污染等。（3）應(yīng)使用同批號(hào)試劑及校準(zhǔn)品。線性范圍評(píng)估的基本原則25體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍（1）實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對(duì)樣本進(jìn)行正確處理確定樣本類型：為避免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響，進(jìn)行線性評(píng)價(jià)時(shí)所選用的樣本應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似，但不可采用含有對(duì)測(cè)定方法具有明確干擾作用的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。理想樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的病人混合血清，可用其他病人樣本將其稀釋為預(yù)定濃度。EP6-A中建議應(yīng)盡可能按以下順序進(jìn)行樣本種類的選擇：病人混合血清；用適當(dāng)稀

3、釋液稀釋的病人血清；添加分析物的病人樣本；用處理過(guò)的低濃度物質(zhì)或處理過(guò)的血清物質(zhì)稀釋的病人血清；商業(yè)質(zhì)控品/校準(zhǔn)品/線性物質(zhì)；使用生理鹽水稀釋的樣本；稀釋不足或過(guò)度稀釋的商業(yè)質(zhì)控品；水溶液；其他溶劑的溶液。實(shí)驗(yàn)樣本的基本要求和制備方法：26體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍確定樣本類型：為避免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響，進(jìn)行線性評(píng)價(jià)時(shí)所選建立線性范圍：建議9至11個(gè)濃度，每個(gè)濃度下重復(fù)2至4次；驗(yàn)證內(nèi)部方法或修正方法：建議7至9個(gè)點(diǎn)，每個(gè)濃度重復(fù)2至3次；驗(yàn)證線性范圍在實(shí)驗(yàn)室有效：建議5至7個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)2次；注意：當(dāng)建立方法的線性范圍時(shí)，應(yīng)有20%到30%的樣本的濃度范圍超出預(yù)期的測(cè)量范圍，但

4、在可接受的線性響應(yīng)范圍內(nèi)。樣本數(shù)量的要求：27體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍建立線性范圍：建議9至11個(gè)濃度，每個(gè)濃度下重復(fù)2至樣本數(shù)量不同濃度水平樣本制備表：28體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍不同濃度水平樣本制備表：28體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍實(shí)驗(yàn)過(guò)程：所有樣本應(yīng)在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測(cè)定，最好在一天之內(nèi)完成。29體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍實(shí)驗(yàn)過(guò)程：29體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍數(shù)據(jù)分析方法：確定自己所要求的測(cè)量誤差、偏倚、隨機(jī)誤差（不精密度）、非特異性（干擾）的大小。初步數(shù)據(jù)檢查：檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異（或錯(cuò)誤）？無(wú)？有？目視每組數(shù)據(jù)點(diǎn)內(nèi)有無(wú)離

5、群點(diǎn)？無(wú)？有？一個(gè)？一個(gè)以上？如果需要，將每一組的檢測(cè)數(shù)據(jù)按檢測(cè)時(shí)間次序排列，檢查是否有漂移或趨勢(shì)性變化。觀察每個(gè)濃度水平的響應(yīng)值之間的差異。目視檢查XY散點(diǎn)圖對(duì)于后續(xù)的線性評(píng)估是非常重要的，它可以很容易的發(fā)現(xiàn)非線性， 或測(cè)量范圍是否太窄或太寬，也可以為后續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析選擇更合適的統(tǒng)計(jì)分析方法。設(shè)定偏差標(biāo)準(zhǔn)：30體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍數(shù)據(jù)分析方法：確定自己所要求的測(cè)量誤差、偏倚、隨機(jī)誤差（不精確定線性范圍：多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行一次、二次、三次多項(xiàng)式回歸分析。具體的評(píng)價(jià)方法包括兩部分：第一部分：檢驗(yàn)非線性多項(xiàng)式是否較線性多項(xiàng)式與數(shù)據(jù)更 為相符。第二部分：當(dāng)非線性多項(xiàng)式擬合數(shù)據(jù)點(diǎn)

6、比線性好時(shí)，判斷 最適非線性模型與線性擬合之間的差值是否小 于預(yù)先設(shè)定的該方法的允許偏差。31體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍確定線性范圍：多項(xiàng)式線性評(píng)價(jià)：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行一次、二次、三次樣品重復(fù)檢測(cè)的隨機(jī)誤差評(píng)估：R：為重復(fù)測(cè)定的次數(shù)（j=1,2,3R）L：樣本數(shù)ri：樣本i處的平均值。L：樣本數(shù)ri：樣本i處的平均值。32體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍樣品重復(fù)檢測(cè)的隨機(jī)誤差評(píng)估：R：為重復(fù)測(cè)定的次數(shù)（j=1,2體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍培訓(xùn)課件非線性系數(shù)b2，b3的t檢驗(yàn)：t=bi/SEi自由度計(jì)算公式：df=LR-Rdf，L：不同濃度樣本數(shù)，R：重復(fù)檢測(cè)次數(shù)，Rdf：回歸自由度例：

7、三次多項(xiàng)式回歸時(shí)，L=5，R=2，Rdf=4，df=5*2-4=6。查t值表（附錄B)（雙側(cè)=0.05）。如非線性系數(shù)b2、b3與0比較，經(jīng)t檢驗(yàn)（p0.05），存在線性關(guān)系，不精密度滿足條件時(shí)，則分析完成。如二次多項(xiàng)式模型的非線性系數(shù)b2，或三次多項(xiàng)式模型的b2或b3中任一個(gè)與0比較，有顯著差異（p2.365，DF=7），三次多項(xiàng)式模型的b2和b3無(wú)顯著意義。標(biāo)準(zhǔn)差的大小也顯示二次多項(xiàng)式模型較一次多項(xiàng)式和三次多項(xiàng)式模型更適合該組數(shù)據(jù)。一次多項(xiàng)式和二次多項(xiàng)式模型的差值都沒(méi)有超過(guò)實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的0.2mg/dl，所以該方法在該范（4.6515.4mg/mL）內(nèi)呈線性。線性偏倚分析：40體外診斷試劑分

8、析性能評(píng)估線性范圍測(cè)量均值預(yù)測(cè)值1st預(yù)測(cè)值2nd2nd-1st% 差值4.6圖C1：Ca線性實(shí)驗(yàn)1-6稀釋圖C2：Ca線性評(píng)價(jià)差值點(diǎn)圖1-6稀釋圖C3：Ca線性實(shí)驗(yàn)1-5稀釋圖C4：Ca線性評(píng)價(jià)差值點(diǎn)圖1-5稀釋41體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍圖C1：Ca線性實(shí)驗(yàn)1-6稀釋圖C2：Ca線性評(píng)價(jià)差值點(diǎn)圖舉例標(biāo)本號(hào)測(cè)量結(jié)果#1測(cè)量結(jié)果#2均 值126.526.226.352139138138.53269273271.04337343340.05409404406.5在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)準(zhǔn)備五個(gè)等距濃度的標(biāo)本測(cè)定IgM，每標(biāo)本重復(fù)測(cè)定兩次。假定實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的重復(fù)性和線性的允許誤差范圍分別為2%和5%。隨機(jī)

9、順序測(cè)試結(jié)果如下：標(biāo)本號(hào)均值差值DiffDiff 2/2% Diff%Diff 2/2126.350.3.0451.140.6482138.51.00.50.720.2613271.04.08.01.481.0894341.06.018.01.761.5485406.55.012.51.230.756 從表中數(shù)據(jù)可以看出，沒(méi)有明顯的離群值，但在低水平濃度處重復(fù)性較好，而在高濃度水平處兩次測(cè)量結(jié)果差異較大。重復(fù)性差異檢測(cè)如下：42體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍舉例標(biāo)本號(hào)測(cè)量結(jié)果#1測(cè)量結(jié)果#2均 值126.526.2階別回歸系數(shù)結(jié)果系數(shù)（SEi）t檢驗(yàn)自由度回歸標(biāo)準(zhǔn)誤(Sy,x)一次b0-52

10、.0716.923.1一次b196.185.1018.8822.8二次b0-129.4715.628.3二次b1162.5211.9113.6二次b2-11.061.955.7 (*)710.3三次b0-97.4835.88-2.7三次b1117.5846.912.5三次b26.0817.410.3三次b3-1.901.92-1.0610.3表：回歸分析的結(jié)果從表中可知，二次多項(xiàng)式模型比一次多項(xiàng)式線性要好，有統(tǒng)計(jì)意義的顯著性系數(shù)（t=5.7，超過(guò)查表的2.365），該組數(shù)據(jù)存在非線性。43體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍階別回歸系數(shù)結(jié)果系數(shù)（SEi）t檢驗(yàn)自由度回歸標(biāo)準(zhǔn)誤(Sy,線性偏倚分析：

11、實(shí)測(cè)均值預(yù)測(cè)值（1st）預(yù)測(cè)值（2nd）差值（2nd -1st）% 差值26.444.122.0-22.1-50.2138.5140.3151.311.07.8271.0236.5258.622.19.3340.0332.7343.711.03.3406.5428.8406.7-22.1-5.2從一次多項(xiàng)式和二次多項(xiàng)式模型的對(duì)比分析結(jié)果來(lái)看，在低和中濃度處有較大的差別，而在高濃度水平處有較好的一致性。高中低濃度水平處差值的百分?jǐn)?shù)大小超過(guò)了實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的誤差范圍，因而認(rèn)為本方法不具有線性。44體外診斷試劑分析性能評(píng)估線性范圍線性偏倚分析：實(shí)測(cè)均值預(yù)測(cè)值（1st）預(yù)測(cè)值（2nd）差值（樣本測(cè)量時(shí)要按什么順序？分析順序應(yīng)是隨機(jī)的，但如果存在明顯攜帶污染或漂移，則可妥協(xié)。重復(fù)測(cè)量的次數(shù)有具體要求嗎？為了得到可靠的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)于某些分析物，或在某個(gè)濃度水平，需重復(fù)測(cè)量3-5次。用戶要能準(zhǔn)確地判斷重復(fù)測(cè)量的次數(shù)，本指南不反對(duì)在不同的濃度水平重復(fù)不同的次數(shù)。評(píng)價(jià)線性范圍時(shí)，最好要包含幾個(gè)重要的濃度： a. 最低分析濃度或線性范圍的下限； b. 不同的醫(yī)學(xué)決定