細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講培訓(xùn)課件

1、細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講2細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講2細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講3細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講3一、外膜孔蛋白減少或丟失細(xì)胞內(nèi)抗生素濃度降低膜孔蛋白(OprD): 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講4一、外膜孔蛋白減少或丟失細(xì)胞內(nèi)抗生素濃度降低細(xì)菌耐藥機(jī)制專題細(xì)胞外膜上的某些特殊蛋白是一種非特異性的、跨越細(xì)胞膜的水溶性物質(zhì)擴(kuò)散通道。膜 孔 蛋 白細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講5細(xì)胞外膜上的某些特殊蛋白是一種非特異性的、跨越細(xì)胞膜的水溶性革 蘭 陰 性 細(xì) 菌 細(xì) 胞 膜細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講6革 蘭 陰 性 細(xì) 菌

2、細(xì) 胞 膜細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣某些細(xì)菌本身存在的膜孔蛋白較少或蛋白通道較小，使一些抗菌藥物不能進(jìn)入菌體內(nèi)部，稱為“內(nèi)在性耐藥”或“固有性耐藥”（intrinsically resistant），即這種耐藥并非是由于任何染色體的突變或是耐藥質(zhì)粒的獲得所致。如銅綠假單胞菌的細(xì)胞外膜上沒(méi)有大多數(shù)革蘭陰性細(xì)菌所具有的典型的高滲透性孔蛋白，它的孔蛋白通道對(duì)小分子物質(zhì)的滲透速度僅為典型孔蛋白通道的1%。 “先天不足”細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講7某些細(xì)菌本身存在的膜孔蛋白較少或蛋白通道較小，使一些抗菌藥物一些具有高滲透性外膜且對(duì)抗菌藥物敏感的細(xì)菌可以通過(guò)降低外膜的滲透性而發(fā)展成為耐藥菌，即原有的孔蛋

3、白通道由于細(xì)菌發(fā)生突變而使該孔蛋白通道關(guān)閉或消失，則細(xì)菌就會(huì)對(duì)該抗菌藥物產(chǎn)生很高的耐藥性。 亞胺培南是一種非典型的-內(nèi)酰胺類抗菌藥物，主要是通過(guò)一個(gè)特殊的孔蛋白通道OprD2的擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)菌的，一旦這一孔蛋白通道消失，則產(chǎn)生耐藥性。 “后天獲得”細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講8一些具有高滲透性外膜且對(duì)抗菌藥物敏感的細(xì)菌可以通過(guò)降低外膜的產(chǎn)氣腸桿菌從亞胺培能敏感株變?yōu)槟退幹昙?xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講9產(chǎn)氣腸桿菌從亞胺培能敏感株變?yōu)槟退幹昙?xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)亞胺培南敏感及耐藥的產(chǎn)氣腸桿菌PFGE圖C1 C2:亞胺培南敏感C3 C4:亞胺培南耐藥細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講10亞胺培南敏感及耐藥的

4、產(chǎn)氣腸桿菌PFGE圖C1 C2:亞胺培南亞胺培南敏感及耐藥的產(chǎn)氣腸桿菌SDS圖C1 C2:亞胺培南敏感C3 C4:亞胺培南耐藥細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講11亞胺培南敏感及耐藥的產(chǎn)氣腸桿菌SDS圖C1 C2:亞胺培南敏PCR擴(kuò)增Omp36全長(zhǎng)及序列分析IS903 98%（約1000bp)細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講12PCR擴(kuò)增Omp36全長(zhǎng)及序列分析IS903 98%（約1插入序列引起OprD2缺失（銅綠）ISPa1328約2000bpOprD2細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講13插入序列引起OprD2缺失（銅綠）ISPa1328約2000細(xì)菌產(chǎn)生一種或多種水解酶或鈍化酶來(lái)水解或修飾進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的

5、抗菌藥物，使之到達(dá)靶位之前失去活性細(xì)菌產(chǎn)生的滅活酶主要有： -內(nèi)酰胺酶 氨基糖苷類鈍化酶 氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶 MLS鈍化酶二、 產(chǎn)生滅活酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講14細(xì)菌產(chǎn)生一種或多種水解酶或鈍化酶來(lái)水解或修飾進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的抗菌超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）高產(chǎn)AmpC酶碳青霉烯酶最主要的耐藥因素對(duì)-內(nèi)酰胺抗生素造成威脅-內(nèi)酰胺酶臨床上最重要的-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講15超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）最主要的耐藥因素-內(nèi)酰胺酶是質(zhì)粒介導(dǎo)的能夠水解頭孢他啶、頭孢噻肟等亞氨基-內(nèi)酰胺類及氨曲南等單環(huán)酰胺類抗生素，并可被克拉維酸等-內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制的一類-內(nèi)酰胺酶。ESBLs在分子

6、生物學(xué)分類中屬于A類酶，在Bush分類中屬于2be類酶。超廣譜-內(nèi)酰胺酶（extended-spectrum -lactamases，ESBLs）細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講16是質(zhì)粒介導(dǎo)的能夠水解頭孢他啶、頭孢噻肟等亞氨基-內(nèi)酰胺類及ESBLs的分類根據(jù)基因同源性不同分為：TEM型 80SHV型 46CTX-M型 37OXA型 18其它型 20/studies/webt.htm.CTX-M-1組CTX-M-2組CTX-M-8組CTX-M-9組細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講17ESBLs的分類根據(jù)基因同源性不同分為：http:/www中國(guó)400株大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型分布細(xì)菌耐藥機(jī)制專

7、題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講18中國(guó)400株大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型分布細(xì)菌耐藥機(jī)制32家醫(yī)院 1994-2003年大腸桿菌及肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs百分率細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講1932家醫(yī)院 1994-2003年大腸桿菌及肺炎克雷伯菌產(chǎn)頭孢菌素酶 大部分腸桿菌科細(xì)菌如腸桿菌屬菌種、弗勞地枸櫞酸桿菌、摩根摩根菌、普魯菲登菌屬菌種粘質(zhì)沙雷菌等都能產(chǎn)生染色體介導(dǎo)的AmpC酶。細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講20頭孢菌素酶 大部分腸桿菌科細(xì)菌如腸桿菌屬 陰溝腸桿菌細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講21 陰溝腸桿菌細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講21ACT-1,DHA-1,CMY (Peking)DHA-1,CIT

8、,ACT-1 (Shanghai) DHA-1 (Zhejiang)DHA-1,ACT-1 (GuangZhou)DHA-1 is The Predominant Type in ChinaMap of China細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講22ACT-1,DHA-1,CMYDHA-1,CIT,ACT-1克隆片段PCR產(chǎn)物1100bp共6432bp ORF1ORF2ORF3ORF4ORF5ORF6IS26orf-1 DHA-1 ampR qacE1 sul15232 bp細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講23克隆片段PCR產(chǎn)物1100bp共6432bp ORF1ORF指所有能明顯水解亞胺培南或美羅培

9、南等碳青霉烯類抗生素的一類內(nèi)酰胺酶分別屬于Ambler分子分類中的A類、B類、D類酶 。 碳青霉烯酶 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講24指所有能明顯水解亞胺培南或美羅培南等碳青霉烯類抗生素的一類天然來(lái)源碳青霉烯酶嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的L1酶獲得性碳青霉烯酶（Ambler分子分類）B類酶（金屬酶）：IMP、VIM類及SPM-1A類酶：NMC-A、KPC-1、GES-2等D類酶：OXA-23至OXA-27、40、48、54碳青霉烯酶按其來(lái)源可分為細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講25天然來(lái)源碳青霉烯酶碳青霉烯酶按其來(lái)源可分為細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)金屬酶染色體編碼的金屬酶：BC ，L1,TUS-1,MUS-1,Sf

10、h-1,Mbl1b，大多來(lái)源于環(huán)境寄生菌。獲得性金屬酶：IMP VIM SPM GIM-1 SIM-1，位于可轉(zhuǎn)移的基因元件上，造成區(qū)域性傳播。細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講26金屬酶染色體編碼的金屬酶：BC ，L1,TUS-1,MUSIMP型金屬酶IMP型金屬酶GenBank上已公布21種，比較它們相互之間的序列表明：IMP型金屬酶大致可以分為兩組： 1）IMP-1、IMP3-7、IMP911、IMP-16 2）IMP-2和IMP-8、12、13、19、20 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講27IMP型金屬酶IMP型金屬酶GenBank上已公布21種，比中國(guó)IMP-4 2001年香港 鮑曼 200

11、1年廣州 楊格枸櫞酸桿菌 、銅綠IMP-1 2004年12月 江蘇無(wú)錫 銅綠IMP-8 2001 臺(tái)灣 銅綠細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講28中國(guó)IMP-4 2001年香港 鮑曼細(xì)菌耐藥機(jī)制專題VIM型金屬酶VIM型金屬酶 與IMP類金屬酶同源性40，但兩類金屬酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)相似，編碼基因都位于整合子上。 目前VIM型金屬酶GenBank上已公布12種，比較它們相互之間的序列可將VIM金屬酶大致分為三組： 1）VIM-1、4、5、11a 2）VIM-2、3、6、8、9、10、11b 3）VIM-7細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講29VIM型金屬酶VIM型金屬酶 與IMP類金屬酶同源性40VIM型金屬

12、酶分布VIM-1 1999年 意大利 銅綠 氧化木糖產(chǎn)堿桿菌 惡臭假單胞 20032004希臘 大腸 肺克 法國(guó) 肺克VIM-2 2000 法國(guó) 銅綠 意大利 希臘 日本 韓國(guó) 葡萄牙 西班牙 波蘭 克羅地亞 智利 阿根廷 美國(guó) 中國(guó)VIM-3 2001年 臺(tái)灣地區(qū) 銅綠VIM-4 2002年 希臘 銅綠 2003 瑞典 銅綠 2004 意大利 肺克 陰溝 2004 波蘭 銅綠細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講30VIM型金屬酶分布VIM-1 1999年 意大利 銅綠 氧化VIM-5 2004 土耳其 肺克 銅綠VIM-6 2004 新加坡 惡臭假單胞VIM-7 2004 美國(guó) 銅綠VIM-8 哥倫

13、比亞 銅綠VIM-9，10 英國(guó)VIM-11 阿根廷 意大利VIM型金屬酶分布細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講31VIM-5 2004 土耳其 肺克 銅綠VIM型金屬酶分布細(xì)亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌金屬酶檢測(cè)結(jié)果北京（27）上海（32）杭州（27）廣州（32）成都（22）金屬酶表型陽(yáng)性菌株數(shù)35310百分率11.115.6金屬酶基因型陽(yáng)性菌株數(shù)36410百分率11.118.8細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講32亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌金屬酶檢測(cè)結(jié)果北京上海杭州廣州成都金 VIM-2基因整合子結(jié)構(gòu)圖A： B2， B3， B28， H19， H26， H54， G4

14、 結(jié)構(gòu)同In72B： S5， S9， S10， S11， S12（S15、H22除外） intI1 attI1 aacA4 59-b VIM-2 59-be aadB 59-be 3-CS intI1 attI1 aacA4 59-be VIM-2 59-be 3-CSAB細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講33 VIM-2基因整合子結(jié)構(gòu)圖A： B2， B3， H22H26 g4 s5 s9 s10 s11 s12 s15 b2 b3 b28 w19w54Marker50kbAB H22H26 g4 s5 s9 s10 s11 s12 s15 b2 b3 b28 w19w54MarkerPFGE譜分析

15、結(jié)果：共有七種類型，來(lái)自上海的六株為同一類型，來(lái)自北京的三株分兩個(gè)類型，來(lái)自杭州的四株同樣也分兩個(gè)類型。各地區(qū)之間的類型各不相同。反復(fù)嘗試通過(guò)接合試驗(yàn)及質(zhì)粒抽提物電轉(zhuǎn)化傳遞金屬酶基因均未獲成功。經(jīng)XbaI內(nèi)切酶消化的染色體PFGE與VIM-2探針雜交顯示其中10株銅綠假單胞菌50-kb大小的酶切片段雜交陽(yáng)性，而其余3株（H22、H26、B2）沒(méi)有陽(yáng)性片段。細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講34 H22H26 g4 s5 s9 s10 s11 類酶包括陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌中由染色體介導(dǎo)的NMC-A、Sme-1Sme-3、IMI-1酶，以及肺炎克雷伯菌中質(zhì)粒介導(dǎo)的KPC-1-4酶、銅綠假單胞菌中質(zhì)粒介

16、導(dǎo)的GES-2酶。碳青霉烯類抗生素水解酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講35類酶碳青霉烯類抗生素水解酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講35二株產(chǎn)IMI-1陰溝腸桿菌PFGE結(jié)果細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講36二株產(chǎn)IMI-1陰溝腸桿菌PFGE結(jié)果細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知AntibioticsMIC(mg/l)E cloacaeE C600 E.coli C600E8 E.coli DH5E.coli pT103Imipenem320.38320.2532Ciprofloxacin0.0606008Amikacin4220.250.38Cefepime20.0640.0640.12

17、50.047Ceftazidime160.50.380.50.25Cefotaxime120.050.1250.0940.047Cefoperazone25474Cefoperazone/Sulbactam1280.25262Piperacillin/Tazobactam2562424Ticarcilliin/ClavulanicAcid2561232432Ampicillin/Sulbactam2568641.5NDE cloacae 8, E C600, E.coli C600E8，E.coli pT103和E.coli DH5對(duì)抗菌藥物的體外抗菌活性細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)

18、學(xué)知識(shí)宣講37MIC(mg/l)E cloacaeE C600 E.陰溝腸桿菌、接合菌質(zhì)粒電泳圖譜 M1A B M2 54kb 15kb細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講38陰溝腸桿菌、接合菌質(zhì)粒電泳圖譜 M1Schematic representation of the cloned E.coRfragmentIS903IMI-2Imi-2RIS903IS2903bp 921bp 882bp 876bp 921bp10629bp(GenBank accession number : AY780889 )Imi-R與ImiR同源性為97%。IMI-2與IMI-1同源性99%，僅在37位由天冬氨酸天冬

19、酰胺，106位由組氨酸酪氨酸 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講39Schematic representation of th抗菌藥物肺炎克雷伯菌亞胺培南32亞胺培南/克拉維酸16美羅培南32美羅培南/克拉維酸16厄他培南256頭孢他啶256頭孢他啶/克拉維酸256頭孢噻肟256頭孢噻肟/克拉維酸256頭孢吡肟256頭孢曲松256頭孢西丁256氨曲南256頭孢哌酮/舒巴坦256哌拉西林/三唑巴坦256環(huán)丙沙星32阿米卡星256多重耐藥肺炎克雷伯菌細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講40抗菌藥物肺炎克雷伯菌亞胺培南32亞胺培南/克拉維酸16美羅轉(zhuǎn)化試驗(yàn)抽提亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH5，在含1g/

20、ml的亞胺培南的MH平板上篩選成功篩選到亞胺培南耐藥的轉(zhuǎn)化菌（轉(zhuǎn)化質(zhì)粒約60kb）染色體帶61kb細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講41轉(zhuǎn)化試驗(yàn)抽提亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌質(zhì)粒染色體帶61kb細(xì)PCRPCR篩選內(nèi)酰胺酶耐藥基因包括TEM-1、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9、OXA-48、VIM 、 OXA-10和KPC-1以肺炎克雷伯菌質(zhì)粒DNA為模板PCR陽(yáng)性為T(mén)EM、SHV和KPC轉(zhuǎn)化菌和克隆菌只有KPC陽(yáng)性PCR產(chǎn)物測(cè)序分別為T(mén)EM-1、SHV-12和KPC-2細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講42PCRPCR篩選內(nèi)酰胺酶耐藥基因包括TEM-1、SHV、C轉(zhuǎn)化菌質(zhì)粒（亞胺培南耐藥基因克?。?/p>

21、EcoR, Hind，Nhe等酶切NhepTeasy VectorpTeasy Vector1.5kb在含亞胺培南1g/ml MH平板篩選細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講43轉(zhuǎn)化菌質(zhì)粒（亞胺培南耐藥基因克?。〦coR, Hind，克隆片段測(cè)序?qū)χ亟M質(zhì)粒的插入片段進(jìn)行步移測(cè)序，獲得1554bp核苷酸 DNAssist軟件分析，1個(gè)開(kāi)放讀碼框(ORF)經(jīng)GenBank Blast程序分析，該ORF與KPC-2 (GenBank注冊(cè)號(hào):AY210886) 的核苷酸序列同源性為100% 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講44克隆片段測(cè)序?qū)χ亟M質(zhì)粒的插入片段進(jìn)行步移測(cè)序，獲得1554bD類酶 （OXA酶）在Bus

22、h分群中屬于2d類，對(duì)苯唑西林的水解活性很強(qiáng)。OXA型碳青霉烯酶對(duì)亞胺培南的水解活性較低，對(duì)頭孢他啶、頭孢噻肟、氨曲南水解活性也很弱。除OXA-23外，其它酶能被三唑巴坦、克拉維酸抑制。OXA型碳青霉烯酶編碼基因可位于質(zhì)?；蛉旧w上，或定位在I型整合子基因盒中，具備向其他菌種轉(zhuǎn)移的能力 碳青霉烯類抗生素水解酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講45D類酶 （OXA酶）碳青霉烯類抗生素水解酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)blaOXA-23-like,blaOXA-51-like是我國(guó)鮑曼不動(dòng)桿菌最主要的碳青霉烯酶，ISAba1與OXA基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)342株亞胺培南耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中339株檢測(cè)到至少一種O

23、XA基因，303株檢測(cè)到OXA-23-like和OXA-51-like基因，22株只檢測(cè)到OXA-23-like基因，17株只檢測(cè)到OXA-51-like基因；其中在313株菌株的OXA-23-like基因上游34bp處檢測(cè)到ISAba1，在13株菌株的OXA-51-like基因上游7bp處檢測(cè)到ISAba1。細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講46blaOXA-23-like,blaOXA-51-like是氨基糖苷類鈍化酶分為： 磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH） 乙酰轉(zhuǎn)移酶（AAC） 核苷轉(zhuǎn)移酶（ANT）氨基糖苷類鈍化酶作用機(jī)制： 三者分別使抗生素的羥基磷酸化、氨基乙?；土u基核苷化，使之不能再與細(xì)菌核糖體結(jié)合

24、。氨基糖苷類耐藥細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講47氨基糖苷類鈍化酶分為：氨基糖苷類耐藥細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)慶大霉素高水平耐藥（HLGR ） 主要的耐藥機(jī)制 氨基糖苷類修飾酶 耐藥基因 百分率 AAC(6)-Ie-APH(2)-Ia aac(6)-Ie-aph(2)-Ia 90% APH(2)-Ic aph(2)-Ic APH(2)-Id aph(2)-Id APH(2)-Ib aph(2)-Ib 10%氨基糖苷類耐藥細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講48慶大霉素高水平耐藥（HLGR ）10%氨基糖苷類耐藥細(xì)菌耐8,724bpORF1ORF2ORF4ORF353ISEcp1 (tnpA) aph-I

25、e repD str部分序列 一種新的質(zhì)粒介導(dǎo)的腸球菌氨基糖苷類耐藥基因aph(2”)-Ie細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講498,724bpORF1ORF2ORF4ORF353ISE三、靶位改變細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講50三、靶位改變細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講50主要抗菌藥物作用靶位-內(nèi)酰胺類 青霉素結(jié)合蛋白（PBP）氨基糖苷類 核糖體30S亞基大環(huán)內(nèi)酯類 核糖體50S亞基氟喹諾酮類 DNA旋轉(zhuǎn)酶（拓?fù)洚悩?gòu)酶 ）、拓?fù)洚悩?gòu)酶糖肽類 D-丙氨酰D-丙氨酸四環(huán)素類 核糖體50S亞基 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講51主要抗菌藥物作用靶位-內(nèi)酰胺類 青霉素結(jié)合蛋白（PPBP2a的作用PBP2a與-

26、內(nèi)酰胺抗生素親和力低，替代正常PBP功能 87KdaPBP1 80 PBP2 78 PBP2a 75 PBP3 70 PBP3 41 PBP4細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講52PBP2a的作用PBP2a與-內(nèi)酰胺抗生素親和力低，替代正細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講53細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講53細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講54細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講54DRIRIRDRSCCmecccrAccrBmecImecR1mecAorfXJ1J3J2SCCmec細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講55DRIRIRDRSCCmecccrAccrBmecImecR細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講56細(xì)菌耐藥機(jī)制專

27、題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講56IV型細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講57IV型細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講57VSHA-MRSACA-MRSA 高 耐藥性 較低 陰性 PVL 陽(yáng)性I、II、III SCCmec IV、V細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講58VSHA-MRSACA-MRSA 高 金葡菌耐藥性的發(fā)展歷程S. aureusPenicillin-resistantS. aureusMethicillin-resistantS. aureus (MRSA)PenicillinMethicillinVancomycin-resistantenterococcus (VRE)Vancomycin (glycop

28、eptide)-Intermediate-ResistantS. Aureus （VISA、GISA）Vancomycin-ResistantS. Aureus（VRSA）Vancomycin19401960s1990s1996Superbugs2002細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講59金葡菌耐藥性的發(fā)展歷程S. aureusPenicillin氟喹喏酮的耐藥機(jī)理拓?fù)洚悩?gòu)酶 IV(parC, parE)拓?fù)洚悩?gòu)酶 II (gyrA, gyrB)左氧氟沙星氟喹喏酮細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講60氟喹喏酮的耐藥機(jī)理拓?fù)洚悩?gòu)酶 IV拓?fù)洚悩?gòu)酶 II (gyr糖肽類抗生素包括萬(wàn)古霉素、替考拉寧等，是高分

29、子量的疏水性化合物。主要耐藥機(jī)制： VRE的細(xì)胞壁肽糖前體末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸發(fā)生了改變，萬(wàn)古霉素不能與之相結(jié)合，因此不能抑制VRE的細(xì)胞壁合成。 耐萬(wàn)古霉素的腸球菌（VRE）細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講61糖肽類抗生素包括萬(wàn)古霉素、替考拉寧等，是高分子量的疏水性化合transposaseresolvasevanRvanSvanHvanAvanX6590bp (ZY02, HS3 )表示PCR擴(kuò)增vanYvanZ10Kb （ZY01）轉(zhuǎn)座功能（轉(zhuǎn)座酶transposase基因和解離酶revolsase基因，分別編碼產(chǎn)生轉(zhuǎn)座酶和解離酶在轉(zhuǎn)座過(guò)程中發(fā)揮作用）調(diào)控耐藥基因（VanR和VanS

30、）產(chǎn)生耐糖肽類的縮肽（VanH脫氫酶、VanA連接酶和VanX二肽酶）輔助蛋白（VanY和VanZ）含VanA基因簇的轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座入各種質(zhì)粒，或通過(guò)接合轉(zhuǎn)座導(dǎo)致VRE耐藥性的傳播 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講62transposaseresolvasevanRvanSva大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥機(jī)制核糖體靶位點(diǎn)的改變: erm 編碼，高耐; 法國(guó)、西班牙、中國(guó)主動(dòng)外排泵: mef 編碼，低耐 ，加拿大、美國(guó)、修飾酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講63大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥機(jī)制核糖體靶位點(diǎn)的改變: erm 編碼，高耐16S rRNA甲基化酶氨基糖苷類抗生素作用位點(diǎn)：細(xì)菌16S rRNA以往認(rèn)為最重要的氨基糖苷類抗生

31、素耐藥機(jī)制：修飾酶，作用位點(diǎn)在藥物，引起一種或幾種藥物耐藥2002最新發(fā)現(xiàn)一類新的氨基糖苷類抗生素耐藥機(jī)制： 16S rRNA甲基化酶，引起藥物作用位點(diǎn)的甲基化，導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)所有氨基糖苷類抗生素高水平耐藥，目前發(fā)現(xiàn)4種：armA、rmtA、rmtB、rmtC多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌在我國(guó)各省市廣泛流行，該菌對(duì)氨基糖苷類抗生素耐藥率和耐藥水平高16S rRNA甲基化酶是否在介導(dǎo)該菌對(duì)氨基糖苷類抗生素耐藥中發(fā)揮作用需要系統(tǒng)研究細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講6416S rRNA甲基化酶氨基糖苷類抗生素作用位點(diǎn)：細(xì)菌16S700株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)5種氨基糖苷類抗生素體外抗菌活性5種氨基糖苷類抗生素耐藥率均大于6

32、0；377株（53.9）菌株對(duì)5種氨基糖苷類抗生素均耐藥；334株（47.7）菌株armA陽(yáng)性；armA陽(yáng)性菌株對(duì)上述所有氨基糖苷類抗生素均高水平耐藥,MIC256mg/L 反復(fù)進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn)、質(zhì)粒抽提、電轉(zhuǎn)化均未成功 Southern-blot雜交證實(shí)armA基因位于克隆A、B、C約220kb、300kb、220kb大小的染色體ApaI酶切條帶上armA基因定位于鮑曼不動(dòng)桿菌染色體細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講65700株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)5種氨基糖苷類抗生素體外抗菌活性5四、主動(dòng)外運(yùn) 有些抗菌藥物（常見(jiàn)的如四環(huán)素類及喹諾酮類）能誘導(dǎo)細(xì)菌的主動(dòng)外運(yùn)，抗菌藥物難以在細(xì)菌內(nèi)積累到有效濃度，造成對(duì)抗菌藥物

33、耐藥程度的普遍提高。細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講66四、主動(dòng)外運(yùn) 有些抗菌藥物（常見(jiàn)的如四環(huán)素類外排泵的結(jié)構(gòu)外排系統(tǒng)由3個(gè)部分組成：位于內(nèi)膜的腫瘤耐藥分化家族(resistantnodulationdivision family，RND)的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)外膜之間的膜周連接蛋白或膜融合蛋白(MFP)位于外膜的孔道形成蛋白(0EP) 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講67外排泵的結(jié)構(gòu)外排系統(tǒng)由3個(gè)部分組成：細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講培訓(xùn)課件 是指細(xì)菌粘附于固體或有機(jī)腔道表面，形成微菌落，并分泌細(xì)胞外多糖蛋白復(fù)合物將自身包裹其中而形成的膜狀物。其生化組成為藻酸鹽多糖和蛋白復(fù)合物。菌

34、膜可阻止巨噬細(xì)胞、抗體、藥物作用于菌體五、細(xì)菌生物被膜（Biofilm）細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講69 是指細(xì)菌粘附于固體或有機(jī)腔道表面，形成微菌落，并分生 物 被 膜細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講70生 物 被 膜細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講70 細(xì)菌形成生物被膜后，往往對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生高度耐藥性，原因有細(xì)菌生物被膜可減少抗菌藥物滲透吸附抗菌藥物鈍化酶，促進(jìn)抗菌藥物水解細(xì)菌生物被膜下細(xì)菌代謝低下，對(duì)抗菌藥物不敏感生物被膜的存在阻止了機(jī)體對(duì)細(xì)菌的免疫力，產(chǎn)生免疫逃逸現(xiàn)象，減弱機(jī)體免疫力與抗菌藥物的協(xié)同殺菌作用細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講71 細(xì)菌形成生物被膜后，往往對(duì)抗菌藥物產(chǎn)生高度耐藥性其他耐

35、藥機(jī)制缺乏自溶酶替代途徑酶的過(guò)量產(chǎn)生等靶位保護(hù)機(jī)制細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講72其他耐藥機(jī)制缺乏自溶酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講72質(zhì)粒介導(dǎo)的喹喏酮耐藥 1998年George.A.Jacoby等從一株肺炎克雷伯菌（UAB1）中發(fā)現(xiàn)能介導(dǎo)多種抗生素耐藥的質(zhì)粒pMG252，經(jīng)接合傳遞后其接合子對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥性增加近30倍(MIC 0.0080.25g /mL)。 在該質(zhì)粒內(nèi)發(fā)現(xiàn)了喹諾酮耐藥（quinolone resistance）基因，命名為qnr (Lancet1998; 351: 79799) 細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講73質(zhì)粒介導(dǎo)的喹喏酮耐藥 1998年George.A.作用機(jī)制

36、保護(hù)DNA旋轉(zhuǎn)酶Qnr通過(guò)與旋轉(zhuǎn)酶特異地結(jié)合從而影響酶的內(nèi)在活性,降低了酶與DNA的結(jié)合,導(dǎo)致喹諾酮類藥物的作用靶位數(shù)量減少Q(mào)nr與旋轉(zhuǎn)酶的結(jié)合,改變了藥物結(jié)合區(qū)域的構(gòu)象,從而降低了藥物識(shí)別靶位的效率保護(hù)拓?fù)洚悩?gòu)酶細(xì)菌對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶的保護(hù)作用與DNA旋轉(zhuǎn)酶類似Hegde, S.S. et al. Science 308:1480, 2005QnrDNA旋轉(zhuǎn)酶細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講74作用機(jī)制保護(hù)DNA旋轉(zhuǎn)酶Hegde, S.S. et al.表 5株qnrA陽(yáng)性大腸埃希菌及其接合菌的MIC值菌株CIPNOROFXMOXCTXCAZSGENAKAMP631282566432256162122

37、56Tc631410.52564414256140642566432322888256Tc1401421162884256142484162564424256Tc1420.50.511322882256Z8161616321284256256256256TcZ80.060.060.1250.06128464256256256Z11326416321284256256256256TcZ110.060.060.1250.0664464256256256J53 0.015 0.125 0.125 0.03 0.06 0.1254 1 1 2 J53為受體菌細(xì)菌耐藥機(jī)制專題醫(yī)學(xué)知識(shí)宣講75表 5株qn

38、rA陽(yáng)性大腸埃希菌及其接合菌的MIC值菌株CI表3 8株qnrA陽(yáng)性肺炎克雷伯菌及其接合菌的MIC值菌株CIPNOROFXMOXCTXCAZSGENAKAMP14-26412864128322111256Tc14-20.250.510.251622212562564256643225616422256Tc2518121284414256316425612812825616212256Tc31181225684122569628221282428256Tc961812256841425615181684644428256Tc1511110.25321212256152864441282428256Tc1520.520.50.564141425615332128161632