大腸桿菌檢測(cè)方法之歐陽(yáng)德創(chuàng)編

1、2022.03.07歐陽(yáng)德創(chuàng)編2022.03.07歐陽(yáng)德創(chuàng)編2022.03.07歐陽(yáng)德創(chuàng)編2022.03.07歐陽(yáng)德創(chuàng)編大腸菌群及檢驗(yàn)時(shí)間：2022.03.07時(shí)間：2022.03.07創(chuàng)作：歐陽(yáng)德一、大腸菌群介紹大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全全都，其定義為：需氧及兼性厭氧、在 37能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。泛存在。調(diào)查爭(zhēng)辯說(shuō)明，大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)

2、?；顒?dòng)的場(chǎng)所以及有糞便污染的地方，人、畜糞便對(duì)外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要緣由。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。是以該菌群的檢出狀況來(lái)表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的凹凸，說(shuō)明白糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體安康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄 物，其中有安康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在如沙門氏菌、志賀氏菌等，因而食品中有糞便污染，則可以推想該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，埋伏著食物中毒和流行病的威逼，必需看作對(duì)人體安康具有潛在的危急性。目前已被國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作

3、中。二、大腸菌群檢驗(yàn)方法：由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即：需氧及兼性厭氧、在能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測(cè)一般都是依據(jù)它的定義進(jìn)展。要有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和原國(guó)家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測(cè)程序上略有不同。酵試驗(yàn)、分別培育和證明試驗(yàn)。每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。361培育482h，觀看是否產(chǎn)氣。瓊脂平板上，36118-24h，觀看菌落形態(tài)。證明試驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)展革蘭氏染色觀看。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管361培育242h，觀看產(chǎn)氣狀況。報(bào)告：依據(jù)證明為大腸桿菌陽(yáng)性的管數(shù)，查 MPN100mlgMPN 值。具體操作參見 G

4、B4789.3-94 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群測(cè)定二原國(guó)家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效承受美國(guó)FDA 的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸桿菌進(jìn)展檢測(cè)。本方法承受兩步法：推想試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管 LST 肉湯。361培育 482h，觀看是否產(chǎn)氣。證明試驗(yàn)：將產(chǎn)氣管培育物接種煌綠乳糖膽鹽BGLB肉湯管中，361培育 482h，觀看是否產(chǎn)氣。以 BGLB 產(chǎn)氣為陽(yáng)性。查 MPN 表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的 MPN 值。具體操作參見 SN0169-92 中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法三、說(shuō)明： 1MP

5、NMPN 為最大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡(jiǎn)稱。這種方法，對(duì)樣品進(jìn)展連續(xù)系列進(jìn)展稀釋，參加培育基進(jìn)展培育，從規(guī)定的反響呈陽(yáng)性管數(shù)的消滅率，用概率論來(lái)推算樣品中菌數(shù)最近似的數(shù)值。MPN 檢索表只給了三個(gè)稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加 10 倍。留意國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所附 MPN 表所用稀釋度是不同的，而且結(jié)果報(bào)告單位也不一樣。初發(fā)酵和證明試驗(yàn)：無(wú)論是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的三步法還是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的兩步 法，都利用了乳糖發(fā)酵管進(jìn)展了兩次發(fā)酵試驗(yàn)，培育基的配制略有不同，但都是為了證明培育物是否符合37分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。過(guò)證明試驗(yàn)后，有時(shí)可能成為陰性。有數(shù)據(jù)說(shuō)明，食

6、品中大腸菌群檢驗(yàn)步驟的符合率，初發(fā)酵與證明試驗(yàn)相差較大。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中，證明試驗(yàn)是必需的。產(chǎn)氣量與倒管：管內(nèi)極微少的氣泡有時(shí)比小米粒還小，有時(shí)可以能有氣體產(chǎn)生，而應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。選擇菌落：美藍(lán)平板分別，對(duì)典型和可疑菌落進(jìn)展觀看和證明試驗(yàn)。由于大腸菌群是一群細(xì)菌的總稱，在平板大腸菌群菌落的色澤、形態(tài)等方面較大腸菌更為簡(jiǎn)單和多 樣，而且與大腸菌群的檢出率親熱相關(guān)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定伊紅美藍(lán)平板為分別培育基，在該平板上，大腸菌群菌落呈黑紫色有光澤或無(wú)光澤時(shí)，檢出率最 高；紅色、粉紅色菌落檢出率較低。系，只挑取一個(gè)菌落，由于機(jī)率問(wèn)題，尤其當(dāng)菌落不典型時(shí)，很難避開假陰性的消滅。所以挑菌落肯定要挑取典型菌落，如無(wú)典型菌落則應(yīng)多挑幾個(gè)，以免出現(xiàn)假陰性。硫酸鈉、洗衣粉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑的主要作用是抑制其它雜菌，特別是革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中乳糖膽鹽發(fā)酵管利用膽鹽作為抑菌劑，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中LST 肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB 肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。腸菌群細(xì)菌的生長(zhǎng)和選擇，但對(duì)大