醫(yī)療器械無(wú)菌檢查培訓(xùn)課件

1、醫(yī)療器械無(wú)菌檢查醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2 主要內(nèi)容無(wú)菌定義及無(wú)菌檢查定義 無(wú)菌檢驗(yàn)依據(jù)試驗(yàn)主要設(shè)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件及人員要求培養(yǎng)基種類及配制要求培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn)菌種及菌液制備無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證供試品無(wú)菌檢查及結(jié)果判斷 2醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2 主要內(nèi)容2醫(yī)療器械無(wú)菌檢查3 無(wú)菌定義:無(wú)活微生物的狀態(tài)。無(wú)菌檢查定義 ： 無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。（1）無(wú)菌定義3醫(yī)療器械無(wú)菌檢查3 無(wú)菌定義:無(wú)活微生物的狀態(tài)。（1）無(wú)菌定義3醫(yī)療器械無(wú)菌4 （2）無(wú)菌檢驗(yàn)依據(jù)本規(guī)范選用于中國(guó)藥典2

2、010年版二部附錄XI H無(wú)菌檢查法。GB/T 14233.2-2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 ，第二部分：生物試驗(yàn)方法中規(guī)定的無(wú)菌試驗(yàn)方法。4醫(yī)療器械無(wú)菌檢查4 （2）無(wú)菌檢驗(yàn)依據(jù)4醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5 （3）試驗(yàn)主要設(shè)備超凈工作臺(tái)細(xì)菌培養(yǎng)箱霉菌培養(yǎng)箱立式高壓蒸汽滅菌器臺(tái)式高壓蒸汽滅菌器顯微鏡生物安全柜電熱恒溫干燥箱集菌儀5醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5 （3）試驗(yàn)主要設(shè)備超凈工作臺(tái)5醫(yī)療器械無(wú)菌檢查6試驗(yàn)儀器（1） - 超凈工作臺(tái)6醫(yī)療器械無(wú)菌檢查6試驗(yàn)儀器（1） - 超凈工作臺(tái)6醫(yī)療器械無(wú)菌檢查7試驗(yàn)設(shè)備（2）-隔水式恒溫培養(yǎng)箱7醫(yī)療器械無(wú)菌檢查7試驗(yàn)設(shè)備（2）-隔水式恒溫培養(yǎng)箱7醫(yī)療器械

3、無(wú)菌檢查8試驗(yàn)設(shè)備（3）-霉菌培養(yǎng)箱8醫(yī)療器械無(wú)菌檢查8試驗(yàn)設(shè)備（3）-霉菌培養(yǎng)箱8醫(yī)療器械無(wú)菌檢查9試驗(yàn)設(shè)備（4）-立式高壓蒸汽滅菌器9醫(yī)療器械無(wú)菌檢查9試驗(yàn)設(shè)備（4）-立式高壓蒸汽滅菌器9醫(yī)療器械無(wú)菌檢查10試驗(yàn)設(shè)備（5）-臺(tái)式蒸汽滅菌器10醫(yī)療器械無(wú)菌檢查10試驗(yàn)設(shè)備（5）-臺(tái)式蒸汽滅菌器10醫(yī)療器械無(wú)菌檢查11試驗(yàn)設(shè)備（6）- 顯 微 鏡11醫(yī)療器械無(wú)菌檢查11試驗(yàn)設(shè)備（6）- 顯 微 鏡11醫(yī)療器械無(wú)菌檢查12試驗(yàn)設(shè)備（7）-生物安全柜12醫(yī)療器械無(wú)菌檢查12試驗(yàn)設(shè)備（7）-生物安全柜12醫(yī)療器械無(wú)菌檢查13試驗(yàn)設(shè)備（8）Equinox 全自動(dòng)無(wú)菌檢驗(yàn)系統(tǒng)13醫(yī)療器械無(wú)菌檢查13試驗(yàn)

4、設(shè)備（8）Equinox 全自動(dòng)無(wú)菌檢驗(yàn)系統(tǒng)13醫(yī)療14（4）實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件要求： 無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。14醫(yī)療器械無(wú)菌檢查14（4）實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件要求： 無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔15 （4）實(shí)驗(yàn)人員要求： 菌檢人員必須具備微生物專業(yè)知識(shí)，并 經(jīng)過(guò)無(wú)菌技術(shù)培訓(xùn)。 15醫(yī)療器械無(wú)菌檢查15 （4）實(shí)驗(yàn)

5、人員要求： 15醫(yī)療器械無(wú)菌檢查16（5）培養(yǎng)基種類及要求 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基16醫(yī)療器械無(wú)菌檢查16（5）培養(yǎng)基種類及要求 16醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2012年12月1717（5）培養(yǎng)基種類及要求 無(wú)菌檢查：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基17醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2012年12月1717（5）培養(yǎng)基種類及要求 無(wú)菌檢查：硫2012年12月1818（5）培養(yǎng)基種類及要求 無(wú)菌檢查 ：改良馬丁培養(yǎng)基：18醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2012年12月1818（5）培養(yǎng)基種類及要求 無(wú)菌檢查19（5）培養(yǎng)基種類及要求 保存時(shí)間： 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在：2 25、避光 非密閉容器中：一般在三周內(nèi)使用 密閉容器中：一般

6、可在一年內(nèi)使用19醫(yī)療器械無(wú)菌檢查19（5）培養(yǎng)基種類及要求 保存時(shí)間：19醫(yī)療器械無(wú)菌20（5）培養(yǎng)基種類及要求 一般采用商品脫水培養(yǎng)基，臨用時(shí)按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，配制時(shí)須迅速，以免吸潮影響稱量的準(zhǔn)確性，同時(shí)需注意滅菌后培養(yǎng)基的pH值應(yīng)符合規(guī)定，否則必須校正后滅菌使用。新鮮配制的培養(yǎng)基，應(yīng)符合中國(guó)藥典規(guī)定的配方，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行挑選。20醫(yī)療器械無(wú)菌檢查20（5）培養(yǎng)基種類及要求 一般采用商品脫水培養(yǎng)基，臨用時(shí)按21（5）培養(yǎng)基種類及要求 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基：屬于流體培養(yǎng)基，即在液體培養(yǎng)基中加入0.05%0.07%的瓊脂，增加了培養(yǎng)基的粘度，降低培養(yǎng)基中的含氧量，使培養(yǎng)基在一段時(shí)間內(nèi)保持厭氧的

7、條件，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)。硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基分裝在適宜的容器中，其粉紅色的氧化層適合需氣菌的生長(zhǎng)，在供試品接種前，培養(yǎng)基的氧化層的顏色不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的15，調(diào)PH值滅菌后為7.10.2，分裝，滅菌。硫乙醇酸鹽培養(yǎng)管置：3035培養(yǎng)14天。21醫(yī)療器械無(wú)菌檢查21（5）培養(yǎng)基種類及要求 硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基：屬于流體培養(yǎng)基22（5）培養(yǎng)基種類及要求 改良馬丁培養(yǎng)基：取培養(yǎng)基成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)PH值約為6.8，煮沸，搖勻，調(diào)PH值滅菌后為6.40.2，分裝，滅菌。 改良馬丁培養(yǎng)基：置2328培養(yǎng)14天。22醫(yī)療器械無(wú)菌檢查22（5）培養(yǎng)基種類及要求 22醫(yī)療器械無(wú)菌檢查23（5）培養(yǎng)基種類及要

8、求 培養(yǎng)基裝量：對(duì)于采用直接接種法檢查的液體樣品，培養(yǎng)基的裝量與供試品裝量相關(guān)，應(yīng)根據(jù)供試品接種量確定培養(yǎng)基的裝量，使供試品接種體積不大于培養(yǎng)基的10%。對(duì)于采用直接接種法檢查的固體樣品，培養(yǎng)基的裝量均為100ml；一次性醫(yī)用材料及醫(yī)療器具，若醫(yī)療器具體積過(guò)大，培養(yǎng)基的裝量可2000ml以上，已將其完全浸沒(méi)為準(zhǔn)。對(duì)于采用薄膜過(guò)濾法檢查的樣品，封閉式薄膜濾器的培養(yǎng)基裝量為100ml 。23醫(yī)療器械無(wú)菌檢查23（5）培養(yǎng)基種類及要求 培養(yǎng)基裝量：23醫(yī)療器械無(wú)菌檢24 （6）培養(yǎng)基適用性檢查新購(gòu)的培養(yǎng)基或自配的新鮮培養(yǎng)基要求：無(wú)菌性檢查：每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶），培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。靈

9、敏度檢查：其質(zhì)量均應(yīng)符合靈敏度檢查要求。用于培養(yǎng)基靈敏度檢查的菌種如下：菌種的傳代的次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0代）。24醫(yī)療器械無(wú)菌檢查24 （6）培養(yǎng)基適用性檢查新購(gòu)的培養(yǎng)基或自配的新鮮培養(yǎng)基25（6）培養(yǎng)基適用性檢查菌種：試驗(yàn)用菌株及菌液制備：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003銅綠色假單胞菌CMCC(B)10104 大腸埃希菌CMCC(B)44102枯草桿菌CMCC(B)63501 生孢梭菌CMCC(B)64941 白色念珠菌CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F)98003 菌種的要求： 不得超過(guò)5代。采用適宜的方法保存；并以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性

10、。 25醫(yī)療器械無(wú)菌檢查25（6）培養(yǎng)基適用性檢查25醫(yī)療器械無(wú)菌檢查26（6）培養(yǎng)基適用性檢查 菌液制備 一般當(dāng)日使用。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌，少許接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯基中，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)18 24h；白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種改良馬丁培養(yǎng)基中， 2328培養(yǎng)24 48h，上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成含菌量小于100cfu/ml菌懸液；黑曲霉 菌斜面的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 2328培養(yǎng)5 7天，使大量的孢子成熟。加入3 5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢

11、子洗脫。然后用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成小于100cfu/ml 的孢子懸液。（見(jiàn)表）26醫(yī)療器械無(wú)菌檢查26（6）培養(yǎng)基適用性檢查 菌液制備 26醫(yī)療器械無(wú)菌檢27 （6）培養(yǎng)基適用性檢查 中國(guó)藥典2010年無(wú)菌檢查驗(yàn)證試驗(yàn)中使用7株菌見(jiàn)下表菌 種 接種培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時(shí)間金黃色葡萄球菌 營(yíng)養(yǎng)肉湯或者普通斜面 3035 1824h銅綠假單孢菌 枯草芽孢桿菌 大腸埃希菌 （無(wú)）生孢梭菌硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基白色念珠菌 改良馬丁或者普通斜面 2328 2448h黑曲霉 改良馬丁斜面 232857d 27醫(yī)療器械無(wú)菌檢查2

12、7菌 種 接種培養(yǎng)基 培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時(shí)間金黃色葡萄球菌28（6）培養(yǎng)基適用性檢查 培養(yǎng)基接種 金黃色葡萄球菌2支 銅綠假單胞菌2支硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 枯草芽孢桿菌2支 生孢梭菌2支 9支培養(yǎng)基裝量12ml，空白對(duì)照1支。 分別接種小于100cfu/ml金葡、銅綠、枯草、生孢各2管，另1支不接種做空白對(duì)照，培養(yǎng)3天，逐日觀察結(jié)果。28醫(yī)療器械無(wú)菌檢查28（6）培養(yǎng)基適用性檢查28醫(yī)療器械無(wú)菌檢查29（5）培養(yǎng)基適用性檢查 培養(yǎng)基接種 白色念株菌2支改良馬丁培養(yǎng) 黑曲霉2支 （5支培養(yǎng)基裝量9ml，其中1支做空白對(duì)照） 分別接種小于100cfu/ml白色、黑曲各兩支，另1支不接種做空白對(duì)照。培養(yǎng)

13、5天，逐日觀察結(jié)果。29醫(yī)療器械無(wú)菌檢查29（5）培養(yǎng)基適用性檢查 培養(yǎng)基接種29醫(yī)療器械無(wú)菌30（6）培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果判斷 空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。30醫(yī)療器械無(wú)菌檢查30（6）培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果判斷 30醫(yī)療器械無(wú)菌檢31（7）試驗(yàn)(驗(yàn)證)菌種及菌液制備菌種：試驗(yàn)用菌株及菌液制備：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003大腸埃希菌CMCC(B)44102枯草桿菌CMCC(B)63501 生孢梭菌CMCC(B)64941 白色念珠菌CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F)98003 31醫(yī)療器械無(wú)菌檢查31（7）試驗(yàn)(驗(yàn)證)菌

14、種及菌液制備菌種：試驗(yàn)用菌株及菌液制32（6）試驗(yàn)菌種及菌液制備10倍梯度稀釋選擇適宜的3個(gè)稀釋級(jí)別要求100cfu/ml32醫(yī)療器械無(wú)菌檢查32（6）試驗(yàn)菌種及菌液制備10倍梯度稀釋32醫(yī)療器械無(wú)菌檢33（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證驗(yàn)證準(zhǔn)備條件： 稀釋液、沖洗液及其制備方法 0.1蛋白胨水溶液 pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液 制備的菌液，應(yīng)當(dāng)日使用。33醫(yī)療器械無(wú)菌檢查33（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證驗(yàn)證準(zhǔn)備條件： 33醫(yī)療器械無(wú)菌檢34（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證 目的:證明所采用的方法適合于該供試品的無(wú)菌檢查確認(rèn)供試品在該實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)。確保在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，該供試品的無(wú)菌檢查

15、法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。 驗(yàn)證時(shí)，按“供試品的無(wú)菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。34醫(yī)療器械無(wú)菌檢查34（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證 目的:34醫(yī)療器械無(wú)菌檢35（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證菌種及菌液制備 ：除大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC(B) 4 4102外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。 方法驗(yàn)證試驗(yàn)與靈敏度檢驗(yàn)所有菌種區(qū)別：大腸埃希菌代替銅綠假單胞菌。35醫(yī)療器械無(wú)菌檢查35（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證菌種及菌液制備 ：除大腸埃希菌（E36（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證

16、菌液制備： 金黃色葡萄球菌（大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌) 接種營(yíng)養(yǎng)肉湯（或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）生孢梭菌接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 3035培養(yǎng)1824小時(shí)；白色念珠菌接種改良馬丁培養(yǎng)基（或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基）2328培養(yǎng)2448小時(shí)上述培養(yǎng)物 用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于l00cfu(菌落形成單位)的菌懸液。 黑曲霉接種改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2328培養(yǎng)57天，加入35ml 0.9無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗 吸出孢子懸液(用管口帶有薄的無(wú)菌棉花或紗布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管)至無(wú)菌試管內(nèi)用0.9無(wú)菌氯化鈉溶液制成每lml含孢子數(shù)小于l00cfu的孢子懸液。36醫(yī)療器械無(wú)菌檢查36（7

17、）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證菌液制備： 36醫(yī)療器械無(wú)菌檢查37（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證薄膜過(guò)濾法將規(guī)定量的供試品按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入試驗(yàn)菌（小于100cfu），過(guò)濾。取出濾膜接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基加至濾筒內(nèi)。另取一濾桶，不過(guò)濾供試品，其它操作同上，作為對(duì)照.將含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定溫度培養(yǎng)35天。 各試驗(yàn)菌及相應(yīng)的培養(yǎng)基逐一進(jìn)行驗(yàn)證。（如下圖示）37醫(yī)療器械無(wú)菌檢查37（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證薄膜過(guò)濾法37醫(yī)療器械無(wú)菌檢查38（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證薄膜過(guò)濾法 規(guī)定量的供試品 過(guò)濾 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 濾膜 接種 改良馬丁培養(yǎng)基沖洗 每種菌均作1管不含供試品管作為對(duì)照加

18、入試驗(yàn)菌過(guò)濾38醫(yī)療器械無(wú)菌檢查38（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證薄膜過(guò)濾法 38醫(yī)療器械無(wú)菌檢39（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證 直接接種法 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8管，分別接人小于l00cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的改良馬丁培養(yǎng)基4管，分別接入小于l00cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接人規(guī)定量的供試品，另1管作為對(duì)照，按規(guī)定的溫度培養(yǎng)35天。（如下表）39醫(yī)療器械無(wú)菌檢查39（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證 直接接種法 39醫(yī)療器械無(wú)菌檢查40（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證-直接接種法方法驗(yàn)證所用菌種（藥典201

19、0版規(guī)定）金黃色葡萄球菌分別接種各菌種新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成菌懸液，濃度小100cfu/mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8支：分別接種小于100cfu的金葡、大腸、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)3天。大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)基4支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)5天。黑曲霉40醫(yī)療器械無(wú)菌檢查40（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證-直接接種法方法驗(yàn)證所用菌種（藥典41（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果判斷 與對(duì)照管比較，如含

20、供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查法和檢驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中微生物生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用?？刹捎茫?)增加沖洗量，或增加培養(yǎng)基的用量；2)使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。41醫(yī)療器械無(wú)菌檢查41（7）無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果判斷 41醫(yī)療器械無(wú)菌檢查42（8）供試品無(wú)菌檢查在100級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)，應(yīng)在酒精燈火焰周圍，以無(wú)菌操作法將規(guī)定量的供試品分別接種至含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（不少于15ml/管）和改良馬

21、丁培養(yǎng)基（不少于10ml/管）的容器中。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格遵守?zé)o菌技術(shù)操作，切勿人為造成污染；試驗(yàn)器具溫度不可過(guò)高以免將可能存在的菌燙死。42醫(yī)療器械無(wú)菌檢查42（8）供試品無(wú)菌檢查在100級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)，應(yīng)在酒精燈火焰周43（8）供試品無(wú)菌檢查供試品包裝須完好無(wú)損，尤其是只有一層包裝的樣品。供試品若有兩層（或兩層以上）包裝的，進(jìn)入無(wú)菌檢驗(yàn)室需將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實(shí)驗(yàn)室。開(kāi)啟潔凈區(qū)紫外燈和空氣過(guò)濾裝置并其工作1小時(shí)以上。 操作人員準(zhǔn)備：帶口罩、帽子、穿專用無(wú)菌服、鞋進(jìn)入無(wú)菌室。每次試驗(yàn)中所用物品必須計(jì)劃好，并有備用43醫(yī)療器械無(wú)菌檢查43（8）供試品無(wú)菌檢查供試品包裝須完好無(wú)損，尤

22、其是只有一層44（8）供試品無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查法包括：薄膜過(guò)濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。進(jìn)行供試品無(wú)菌檢查時(shí)，所采用的檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。 44醫(yī)療器械無(wú)菌檢查44（8）供試品無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查法包括：44醫(yī)療器械無(wú)菌檢查45（8）供試品無(wú)菌檢查細(xì)菌檢測(cè)管：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基+供試品真菌檢測(cè)管：改良馬丁培養(yǎng)基+供試品陽(yáng)性對(duì)照管：對(duì)應(yīng)陽(yáng)性菌+對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基+供試品陰性對(duì)照管：應(yīng)取相應(yīng)的溶劑和稀釋液或沖洗液 +培養(yǎng)基 45醫(yī)療器械無(wú)菌檢查45（8）供試品無(wú)菌檢查細(xì)菌檢測(cè)管：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基+供46（8）供試品無(wú)菌檢查 檢驗(yàn)數(shù)量： 是指一次試驗(yàn)所用供試品最

23、小包裝容器的數(shù)量。 一般情況下，供試品無(wú)菌檢查若采用薄膜過(guò)濾法，應(yīng)增加最小檢驗(yàn)數(shù)量的1/2作陽(yáng)性對(duì)照用；若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品無(wú)菌檢查時(shí)每個(gè)培養(yǎng)基容器接種的樣品量做陽(yáng)性對(duì)照用。 46醫(yī)療器械無(wú)菌檢查46（8）供試品無(wú)菌檢查 檢驗(yàn)數(shù)量：46醫(yī)療器械無(wú)菌檢查醫(yī)療器械無(wú)菌檢查培訓(xùn)課件48（8）供試品無(wú)菌檢查 直接接種法： 每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10，同時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證試驗(yàn)；每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。48醫(yī)療器械無(wú)菌檢查48（8）供試品無(wú)菌檢查

24、48醫(yī)療器械無(wú)菌檢查4949（8）供試品無(wú)菌檢查 陰性對(duì)照：供試品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液同法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。 陰性對(duì)照：目的是驗(yàn)證相應(yīng)溶劑和稀釋液本身是否存在污染，防止假陽(yáng)性。49醫(yī)療器械無(wú)菌檢查4949（8）供試品無(wú)菌檢查 49醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5050（8）供試品無(wú)菌檢查陽(yáng)性對(duì)照：應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌；無(wú)抑菌作用供試品以金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法驗(yàn)證試驗(yàn)，加菌量小于100cfu/ml，供試品用量同供試品無(wú)菌檢查每份接種量相同。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)48 72小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好。陽(yáng)性對(duì)照：目的是驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可靠性，防止假陰性。50

25、醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5050（8）供試品無(wú)菌檢查陽(yáng)性對(duì)照：應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)5151（8）供試品無(wú)菌檢查 薄膜過(guò)濾法：2010年版中國(guó)藥典規(guī)定:只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。供試品無(wú)菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。在蠕動(dòng)泵的作用下，被測(cè)產(chǎn)品通過(guò)裝有帶空氣過(guò)濾器的針頭及無(wú)菌管路直接從樣品容器中進(jìn)入濾筒中，免去了通常膜轉(zhuǎn)移過(guò)程中易產(chǎn)生的污染。無(wú)菌檢查法中薄膜過(guò)濾法所用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45m，直徑約為50mm。51醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5151（8）供試品無(wú)菌檢查 薄膜過(guò)濾法：51醫(yī)療器械5252（8）供試品無(wú)菌檢查水溶液供試品取規(guī)定量的供試液，直接過(guò)濾，或混合至適量稀釋液的無(wú)菌容器內(nèi)，混勻，立即過(guò)濾。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，總沖洗量不得超過(guò)1000mL，以免濾膜上微生物受損傷。沖洗后分別將100mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)，進(jìn)行培養(yǎng)。52醫(yī)療器械無(wú)菌檢查5252（8）供試品無(wú)菌檢查水溶液供試品取規(guī)定量的供試液，直5353（8）供試品無(wú)菌