實(shí)驗(yàn)三.細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色課件

1、實(shí) 驗(yàn) 三細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色目的要求染色劑和染色的原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序思考題一.目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片掌握細(xì)菌的簡單染色法和革蘭氏染色法 進(jìn)一步熟練掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù) 二.染色劑和染色原理微生物染色的基本原理，是借助物理和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。 化學(xué)因素如：正負(fù)離子之間的相互吸引等染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型： 1. 酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅等。 2. 堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。 3. 中性（復(fù)合）染料

2、：如Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。實(shí)驗(yàn)材料涂片染色用的細(xì)菌培養(yǎng)物 1.金黃葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 24h的斜面培養(yǎng)物2.大腸桿菌（Escherichia coli) 24h的斜面培養(yǎng)物。 3.枯草桿菌（Bacillus subtilis) 1216h的斜面培養(yǎng)物。載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。實(shí)驗(yàn)程序 （細(xì)菌染色的方法和步驟）細(xì)菌染色的方法: .單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的

3、特殊構(gòu)造等。 .復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。染色技術(shù)的一般過程 涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染 水洗干燥鏡檢 實(shí)驗(yàn)程序 （革蘭氏染色的方法和步驟）革蘭氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，水洗。 4. 脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。 5. 復(fù)染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后晾干或吸水紙吸干。 6. 鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。簡單染色注意事項(xiàng)：1.注意掌握供試驗(yàn)菌種的培養(yǎng)時(shí)間。2.固定時(shí)注意溫度，不可過熱，否則引起菌體變形3.水洗時(shí)用細(xì)流，既要沖凈染料，又不可將菌體沖走4.徹底晾干 否則鏡檢時(shí)不清楚革蘭氏染色注意事項(xiàng)1.注意掌握供試驗(yàn)菌種的培養(yǎng)時(shí)間。2.脫色