hiv感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)生化pbl課件

1、生化PBL組員： 12021/6/10生化PBL組員： 12021/6/10HIV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù) 1.HIV分離及培養(yǎng)2.HIV抗體檢測(cè) 3. HIV抗原檢測(cè)4.HIV核酸檢測(cè) 5.流式細(xì)胞檢測(cè)22021/6/10HIV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù) 1.HIV分離及培養(yǎng)22021.HIV分離及培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：病毒培養(yǎng)是檢測(cè)HIV感染最精確的方法，特異性強(qiáng)，不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。通過(guò)培養(yǎng)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行HIV診斷，對(duì)于確認(rèn)抗原/抗體檢測(cè)不確定的個(gè)體和陽(yáng)性母親的新生兒是否感染HIV有重要意義。缺點(diǎn)：敏感性差，很少用于窗口期檢測(cè)。32021/6/101.HIV分離及培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：病毒培養(yǎng)是檢測(cè)HIV感染最精確的方

2、2.HIV抗體檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）顆粒凝集試驗(yàn)(PA）快速試劑(rapid test，RT)42021/6/102.HIV抗體檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）42021酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）固相血清標(biāo)本酶標(biāo)記物固相血清標(biāo)本YYYYYYYYYYYYYYYY第一、二代第三代第四代52021/6/10酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）固相血清標(biāo)本酶標(biāo)記物固相血清顆粒凝集試驗(yàn)(PA）原理為將純化的HIV抗原連接到紅色明膠顆粒上制成致敏顆粒，當(dāng)加入的檢測(cè)標(biāo)本中含有HIV抗體時(shí)，即可發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。優(yōu)點(diǎn)操作簡(jiǎn)便，適合于小型實(shí)驗(yàn)室的HIV日常篩查工作，也可與ELISA方法配合用于

3、篩查陽(yáng)性標(biāo)本的復(fù)檢試驗(yàn)。62021/6/10顆粒凝集試驗(yàn)(PA）原理62021/6/103. HIV抗原檢測(cè)用ELISA檢測(cè)P24抗原，在HIV感染早期尚未出現(xiàn)抗體時(shí)，血中就有該抗原存在。由于P24量太少，陽(yáng)性率通常較低?，F(xiàn)有用解離免疫復(fù)合物法或濃縮P24抗原，來(lái)提高敏感性。 HIV-lp24抗原的陽(yáng)性結(jié)果只能作為感染的輔助診斷，必須經(jīng)確認(rèn)試驗(yàn)確診，p24抗原陰性也不能排除HIV感染的可能性。72021/6/103. HIV抗原檢測(cè)用ELISA檢測(cè)P24抗原，在HIV感4.HIV核酸檢測(cè) HIV核酸的定性檢測(cè) HIV核酸的定量檢測(cè) 生物芯片檢測(cè)82021/6/104.HIV核酸檢測(cè) HIV核酸

4、的定性檢測(cè)方法原位雜交、RNA印跡、DNA印跡、多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)等，以PCR和RT-PCR最為常用。92021/6/10HIV核酸的定性檢測(cè)方法92021/6/10HIV核酸的定量檢測(cè)1.RT-PCR2核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)3.分枝DNA信號(hào)擴(kuò)大系統(tǒng)(bDNA)為4熒光實(shí)時(shí)PCR102021/6/10HIV核酸的定量檢測(cè)1.RT-PCR102021/6/10多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)主要用于檢測(cè)血漿中HIV的RNA含量，目前主要用于預(yù)測(cè)母親將HIV傳染給胎兒的可能性以及新生兒的HIV感染狀況。此外，尚可用于判斷病人的預(yù)后及監(jiān)測(cè)抗病毒治療的效果。R

5、T-PCR112021/6/10多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)主要用于檢測(cè)血漿中HIV的RNA含量這種實(shí)驗(yàn)過(guò)程是在溫度控制下進(jìn)行的，一個(gè)變性-復(fù)性-延伸的過(guò)程就是一個(gè)PCR循環(huán)。PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)；延伸的產(chǎn)物經(jīng)第二循環(huán)變性，亦與引物互補(bǔ)，作為引物引導(dǎo)DNA合成的新模板；因此，第二循環(huán)后延伸的模板由第一循環(huán)的4條增為8條，依此類推，以后每一個(gè)循環(huán)后的模板均比前一個(gè)循環(huán)增加1倍。特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、快速、簡(jiǎn)便、對(duì)起始材料質(zhì)量要求低等特點(diǎn)。122021/6/10這種實(shí)驗(yàn)過(guò)程是在溫度控制下進(jìn)行的，一個(gè)變性-復(fù)性-延伸的 優(yōu)點(diǎn)1.與傳統(tǒng)檢測(cè)抗體的方法相比，其靈敏度和特異性更高，從

6、而對(duì)HIV的定量檢測(cè)提供了有效的手段；2.不依賴于宿主的免疫反應(yīng)，無(wú)須等到免疫系統(tǒng)對(duì)HIV產(chǎn)生抗體后才能檢定宿主受HIV感染的狀態(tài)，這有利于對(duì)血清陽(yáng)轉(zhuǎn)以前標(biāo)本的檢測(cè)和對(duì)陽(yáng)性母親所生嬰兒的HIV感染的調(diào)查；3.對(duì)潛伏狀態(tài)的HIV的檢測(cè)不依賴于HIV在宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)活性。132021/6/10 優(yōu)點(diǎn)1.與傳統(tǒng)檢測(cè)抗體的方法相比，其靈敏度和特異性更高，從核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)(NASBA)也屬目標(biāo)核酸擴(kuò)增法，是一種等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)。原理是通過(guò)系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)(包括逆轉(zhuǎn)錄酶、核糖核酸酶H和T7RNA聚合酶)體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程。優(yōu)點(diǎn)：該方法對(duì)AG各亞型均有較好反應(yīng)性，能測(cè)定各種生

7、物樣品，對(duì)各種抗凝劑均適用缺點(diǎn)：樣品提取和測(cè)定反應(yīng)時(shí)要進(jìn)行大量手工操作，實(shí)驗(yàn)內(nèi)、外誤差也相對(duì)較大。142021/6/10核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)(NASBA)也屬目標(biāo)核酸擴(kuò)增152021/6/10152021/6/10為什么艾滋病不可治愈？162021/6/10為什么艾滋病不可治愈？162021/6/101.艾滋病病毒進(jìn)入人體后，會(huì)攻擊一類免疫細(xì)胞T細(xì)胞，導(dǎo)致它們?cè)獾酵耆茐模庖呦到y(tǒng)出現(xiàn)了問(wèn)題，自然就難以清除病毒了。2.如果艾滋病病毒進(jìn)入潛伏期，病毒潛伏在免疫細(xì)胞中， HIV前病毒整合入宿主細(xì)胞基因組中，不發(fā)生復(fù)制作用，免疫會(huì)把HIV忽略不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，自身免疫無(wú)法清除。這也可能導(dǎo)致

8、藥物對(duì)其無(wú)效。172021/6/101.艾滋病病毒進(jìn)入人體后，會(huì)攻擊一類免疫細(xì)胞T細(xì)胞，導(dǎo)致它們而艾滋病病毒可以通過(guò)被感染的供體細(xì)胞作為媒介在細(xì)胞間傳播。一旦發(fā)現(xiàn)未受感染的靶細(xì)胞，供體細(xì)胞便將病毒傳染給該細(xì)胞。182021/6/10而艾滋病病毒可以通過(guò)被感染的供體細(xì)胞作為媒介在細(xì)胞間傳播。一 雞尾酒療法原指“高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療”（HAART），是通過(guò)三種或三種以上的抗病毒藥物聯(lián)合使用來(lái)治療艾滋病。該療法把蛋白質(zhì)抑制劑與多種抗病毒的藥物混合使用，從而使艾滋病得到有效的控制。 192021/6/10 雞尾酒療法原指“高效抗 雞尾酒治療方案1.基于蛋白酶抑制劑的雞尾酒 療法：1個(gè)蛋白酶抑制劑聯(lián)合2個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。 2.基于非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞尾酒療法：1個(gè)非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑， 聯(lián)合2個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。 3.三個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞 尾酒療法 202021/6/10 雞尾酒治療方案1.基于蛋白酶抑制劑的212021/6/10212021/6/10雞尾酒的局限性主要表現(xiàn)在： 對(duì)早期艾滋病病