液相色譜儀日常維護辦法

1、液相色譜儀日常維護辦法一、介紹怎樣確定和解決故障解決 HPLC 存在的故障應該從判斷故障所在開始。本手冊將從五個方面幫助您快速找到故障所在。壓力異常漏液譜圖問題進樣閥問題其它由氣味、現(xiàn)象和聲音可以判斷的問題。將問題解決后，請將方法記錄下來，以備將來參考。前期維護許多液相色譜的故障通過日常維護一般都是可以避免的。例如：定期的更換柱塞桿密封可以避免柱塞桿密封的磨損以及由此產(chǎn)生的相關的故障。第七部分列出了很多液相色譜的常見故障以及預防措施及建議。針對特定品牌的液相色譜，這些建議需要靈活運用，這樣它就可以成為實驗室日常維護工作中的一部分。其它參考資料參考儀器的操作手冊和用戶服務手冊。其內(nèi)容包括詳細的圖

2、解、維修步驟以及需要更換的零部件的部件號。與有豐富維修經(jīng)驗的實驗室工作人員聯(lián)系，從他們那里得到幫助。與儀器廠商直接聯(lián)系。大部分的儀器生產(chǎn)商為用戶提供免費的技術支持。Phenomenex 擁有經(jīng)驗豐富的技術顧問，可以幫助您解決所遇到的問題。歡迎您來電或傳真垂詢。Phenomenex 還提供與 HPLC 故障排除有關的計算機培訓軟件、音像資料及一套完整的 HPLC 用戶手冊。以下參考文獻，也可以幫助您解決一些問題：J. W. Dolan and L. R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, HumanaPress, NJ(1989). Phonomenex O

3、rder No.: AA0-1717L. R. Snyder and J. J. Kirkland, Introduction to Mordern LiquidChromatography , 2nd ed., Wiley, NY (1979). Phenomenex Order No.:AA0-1700D. J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems A User sGuide, Wiley, NY (1981)J. W. Dolan, “Troubleshooting” , LC/GC Magazine. This is

4、 a monthlydiscussion.1二、壓 力 異 常操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應的解決方法。A、沒有壓力顯示，沒有流動相流動解決方法接通電源，開機a、采取恰當?shù)脑O定b、修理或更換控制器更換柱塞桿漏液擰緊或更換手緊接頭B、流動相流動正常，但沒有壓力顯示原 因儀表損壞解決方法更換儀表壓力傳感器損壞、壓力持續(xù)偏高原 因更換壓力傳感器解決方法調(diào)整流速設定a、在允許情況下反沖色譜柱b、更換篩板a、使用恰當?shù)牧鲃酉郻、沖洗色譜柱控制器失常保護柱阻塞在線過濾器阻塞D、壓力持續(xù)偏低原 因修理或更換控制器清洗或更換保護柱清洗或更換在線過濾器解決方

5、法調(diào)整流速確定漏液位置并維修選擇恰當?shù)纳V柱降低溫度控制器失常E、壓力不斷上升原 因維修或更換控制器見列表 C見列表 CF、壓力降為零原 因解決方法2見列表 A、BG、壓力不斷下降，但不回零原 因見列表 A、B見列表 D解決方法解決方法見列表 DH、壓力波動原 因a、溶劑脫氣a、溶劑脫氣改變脫氣方法(使用在線脫氣法等)確定漏液位置并維修由于流動相粘度的變化引起的壓力波動使用梯度洗脫三、漏 液通常可以通過擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會導致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞(例如，卡套損壞、密封表面有

6、雜質(zhì))；損壞的接頭應該更換掉。A、接頭處漏液a、擰松，再重新擰緊b、更換a、拆下清洗b、更換使用同一品牌的配件部件不匹配B、泵漏液擰緊接頭(不必擰的過緊)a、更換混合器密封b、更換混合器壓力傳感器損壞脈沖阻尼器損壞比例閥損壞a、檢查隔膜，如果漏液立即更換b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換a、擰緊放空閥b、更換放空閥C、進樣閥漏液轉(zhuǎn)子密封損壞重新安裝或更換進樣閥3進樣口密封松動進樣針頭尺寸不合適廢液管中產(chǎn)生虹吸廢液管阻塞使用恰當?shù)倪M樣針保持廢液管高于廢液液面更換或疏通廢液管D、色譜柱漏液原 因解決方法擰緊接頭尾端接頭松動卡套內(nèi)有填料篩板厚度不合適篩板選擇指導物質(zhì)粒徑拆下、清洗卡套、重新安裝使用合適

7、的篩板(參考下表)3-4u5-20u0.5u2uE、檢測器漏液原 因流通池阻塞重新安裝或更換四、譜 圖 問 題液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。A、峰拖尾解決方法a、反沖色譜柱b、更換進口篩板a、使用更長的色譜柱b、改變流動相或更換色譜柱調(diào)整 PH 值。對于堿性化合物，低 PH值更有利于得到對稱峰a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑流動相 PH 選擇錯誤b、更改色譜柱B、峰前延原 因解決方法升高柱溫樣品溶劑選擇不恰當樣品過載色譜柱損壞見 A1、A24

8、C、峰分叉保護柱或分析柱污染圖取下保護柱再進行分析 果必要更換保護柱 果分析柱阻塞 下來清洗。如果問題仍然存在 能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。改變樣品溶劑 果可能采取流動相作為樣品溶劑。D、峰變形原 因樣品過載減少樣品載量E、早出的峰變形原 因解決方法a、減少進樣體積樣品溶劑選擇不恰當b、運用低極性樣品溶劑F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰解決方法a、調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路)b、使用小體積的流通池G、K增加時，脫尾更嚴重原 因解決方法a、加入三乙胺(或堿性樣品)b、加入乙酸(或酸性樣品)c、加入鹽或緩沖劑(或

9、離子化樣品)d、更換一支柱子a、加入三乙胺(或堿性樣品)b、加入乙酸(或酸性樣品)c、加入水(或多官能團化合物)d、試用另一種方法二級保留效應，離子對H、酸性或堿性化合物的峰拖尾原 因加入三乙胺(或堿性樣品)解決方法a、使用濃度 50-100mM 的緩沖液b、使用 Pka 等于流動相 PH 值的緩沖液I、額外的峰原 因解決方法正常樣品中有其他組份前一次進樣的洗脫峰a、增加運行時間或梯度斜率b、提高流速a、檢查流動相是否純凈b、使用流動相作為樣品溶劑c、減少進樣體積5J、保留時間波動原 因防止變化(蒸發(fā)、反應等)在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱K、保留時間不斷變化原 因解決方法重新設定流

10、速a、更換合適的流動相b、選擇合適的混合流動相L、基線漂移柱溫波動(即使是很小的溫度變化都 控制好柱子和流動相的溫度 檢測器會引起基線的波動。通 常影響示差檢 之前使用熱交換器測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫 圖流動相不均勻(流動相條件變化引起 使用 HPLC 級的溶劑 純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用 1N 的硝酸。(不要用鹽酸)檢測器出口阻塞(高壓造成流通池窗 取出阻塞物或更換管子 考檢測器手更改配比或流速 避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。柱平衡慢，特 別是流動相發(fā)生變化時 用中等強度的溶劑進行沖洗 改流動

11、相時 分析前用 10-20 倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。流動相污染、變 質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配 檢查流動相的組成 用高品質(zhì)的化學成 試劑及 HPLC 級的溶劑樣品中有強保留的物質(zhì)(高 K值)以饅 使用保護柱，如有必要，在進樣之間或頭峰樣被洗脫出，從 而表現(xiàn)出一個逐 在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱重新設定基線 檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。檢測器沒有設定在最大吸收波長處。 將波長調(diào)整至最大吸收波長處M、基線噪音(規(guī)則的)原 因流動相脫氣 洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液 否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。6用手搖動使混合均

12、勻或使用低粘度的溶劑斷開 LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器泵振動N、基線噪音(不規(guī)則的)原 因見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。流動相各溶劑不相溶斷開檢測器和記錄儀的電源 查并更正。用強極性溶液清洗系統(tǒng)清洗檢測器 檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器用 1N 的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池檢測器燈能量不足色譜柱填料流失或阻塞流動相混合不均勻或混合器工作不正常維修或更換混合器 流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置O、寬峰解決方法重新制備新的流動相見 section3 。檢查接頭是

13、否松動、泵是否漏液 否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。調(diào)整設定a、小體積進樣(例如:10ul 而不是b、檢測器對反應時間或池體積響應 100ul) 以 1:10 或 1:100 的比例稀釋樣過大c、柱子與檢測器之間的管路太長或 b、減少響應時間或使用更小的流通池c、使用內(nèi)徑為 0.007-0.01 的短管路d、減少響應時間更換同樣類型的色譜柱 果新柱子可以提供對稱的色譜峰 用強溶劑沖洗舊柱子。7打開柱入口，填補塌陷或更換柱子選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過 75使用較小的時間常數(shù)檢測器時間常數(shù)太大P、分離度降低保護柱或分析柱阻塞圖去掉保護柱進行

14、分析 果必要則更換保護柱 果分析柱阻塞 進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞 議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、所有的峰面積都太小原 因解決方法減少衰減的設定設定較小的時間常數(shù)增大進樣量記錄儀連接不當R、所有的峰面積都太大原 因使用正確的連接解決方法采取較大的衰減減少進樣量檢測器衰減設定過低進樣過多記錄儀連接不正確正確連接記錄儀五、進樣閥的問題以下問題在使用進樣閥過程中有可能發(fā)生。進樣閥漏液問題及其解決方法已經(jīng)在 section3 中介紹過。A、手動進樣閥，轉(zhuǎn)動不靈解決方法更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度轉(zhuǎn)子密封損壞

15、轉(zhuǎn)子太緊B、手動進樣閥，載樣困難原 因清洗或更換定量環(huán)清洗或更換進樣器清洗或更換管路管路阻塞C、自動進樣閥，不能轉(zhuǎn)動原 因無壓力(或電源)轉(zhuǎn)子太緊提供恰當?shù)膲毫?電源)調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度8進樣閥安裝不當D、自動進樣閥，其它問題原 因重新安裝清洗或更換阻塞部件見隨機維修手冊控制器故障維修或更換控制器六、由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題你需要運用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你最好養(yǎng)成習慣，每天花上幾分鐘運用你的感官(除了味覺)來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。A、溶劑的氣味原 因原 因原 因a、檢查廢液瓶是否已滿b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味解決方法a、檢查并調(diào)節(jié)通風設施b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設定c、關掉儀器，查找維修手冊C、讀數(shù)不正常解決方法見 section 2a、檢查并調(diào)節(jié)設定b、參照用戶手冊更換燈檢測器燈失效D、燈警告b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設定見用戶手冊其它警示燈E、警告音解決方法找到并解決溶劑泄漏/濺出其它警告音F、刺耳的短音或長音原 因見用戶手冊解決方法見用戶手冊軸承失效進行恰當?shù)臐櫥娪脩羰謨詸C械故障六、常見故障及日常維護下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側(cè)中則列出的日常維護的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號中的數(shù)字是建議進行維護的時間間隔