分子診斷在移植配型中的應(yīng)用課件

1、分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在移植配型中的應(yīng)用分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在移植配型中的應(yīng)用第一節(jié) 分子生物學(xué)檢驗(yàn)在移植配型中的應(yīng)用 的分子生物學(xué)分型 第一節(jié) 分子生物學(xué)檢驗(yàn)在移植配型中的應(yīng)用 有兩位在某醫(yī)院進(jìn)行了腎臟移植手術(shù)的患者：一位是張某，女，歲，另一位是李某，男，歲，手術(shù)前均為經(jīng)透析治療且身體狀況良好的尿毒癥病人，張某的移植腎來(lái)自尸腎，李某的移植腎來(lái)自其母親，移植術(shù)前兩人都抽血進(jìn)行了一系列組織配型項(xiàng)目檢驗(yàn)，其中一項(xiàng)基因分型檢測(cè)結(jié)果顯示，張某與供者配型不符，血型一致；李某與其母親配型四點(diǎn)相合，兩點(diǎn)錯(cuò)配，血型一致。但由于腎源缺乏，且張某家屬移植手術(shù)意愿強(qiáng)烈，張某和李某一樣都進(jìn)行了移植手術(shù)； 有兩位在某醫(yī)院進(jìn)行

2、了腎臟移植手術(shù)的患者：一位是張某， 張某術(shù)后周出現(xiàn)移植區(qū)脹痛、少尿，血液中尿素氮升高、補(bǔ)體水平下降、血小板減少，經(jīng)醫(yī)生給予適當(dāng)?shù)拿庖咭种苿┲委熀缶徑?；李某術(shù)后植入腎功能良好，沒(méi)有出現(xiàn)上述類(lèi)似張某的情況。一年后，張某因多次發(fā)生上述移植排斥反應(yīng)導(dǎo)致腎功能完全喪失而死亡，李某植入腎功能正常，身體狀況良好。 張某術(shù)后周出現(xiàn)移植區(qū)脹痛、少尿，血液中尿素氮升高、補(bǔ) 以上介紹了一個(gè)在器官移植中供受者的基因配型是否符合對(duì)術(shù)后移植排斥反應(yīng)是否發(fā)生及受者存活率影響的典型例子，幫助醫(yī)生在進(jìn)行器官移植手術(shù)前一定要依據(jù)供受是否匹配謹(jǐn)慎決定移植手術(shù)是否進(jìn)行。供受雙方配型良好且受者為直系來(lái)源，移植手術(shù)成功率高，排斥反應(yīng)輕或

3、不發(fā)生，受者存活率高。 以上介紹了一個(gè)在器官移植中供受者的基因配型是否符合對(duì)移植(): 指用自體或異體的正常細(xì)胞、組織或器官置換病變的或功能缺損的細(xì)胞、組織與器官，以維持和重建機(jī)體生理功能的治療方法。移植物（）供者（）受者（）移植排斥反應(yīng)（ ）一、移植相關(guān)概念移植(): 指用自體或異體的正常細(xì)胞、組織或器官置換病變的或被移植的細(xì)胞、組織、器官稱(chēng)為移植物（）,移植物的提供者稱(chēng)為供者（）。移植物的接受者稱(chēng)為受者或宿主（ ）。所植入的移植物能否被受者接受，與供、受者的遺傳背景密切相關(guān)。如果二者之間的遺傳背景存在差異，植入的移植物一般都會(huì)發(fā)生炎癥反應(yīng)甚至壞死，稱(chēng)為移植排斥反應(yīng)（ ）。被移植的細(xì)胞、組織

4、、器官稱(chēng)為移植物（）,移植物的提供者稱(chēng)為供 目的： 救治末期器官衰竭、惡性血液病、腫瘤以及某些遺傳病。 要求： 盡可能讓移植物能在受體體內(nèi)生存或暫存常時(shí)間。 問(wèn)題： 排斥反應(yīng)。移植的目的和要求 目的：移植的目的和要求早期有關(guān)器官移植的嘗試和研究早期有關(guān)器官移植的嘗試和研究自體移植異種移植同種異型移植同種同型移植移植的類(lèi)型自體移植異種移植同種異型移植同種同型移植移植的類(lèi)型自體移植：指移植物取自受者自身。同種同型移植：指遺傳基因型完全相同或基本近似個(gè)體間的移植。同種異型移植：也稱(chēng)同種異基因移植（ ）指同種內(nèi)遺傳基因不同的個(gè)體間進(jìn)行的器官移植，臨床移植多屬此類(lèi)型。異種移植：指不同種屬個(gè)體間的移植。

5、分子診斷在移植配型中的應(yīng)用課件二、移植排斥反應(yīng)發(fā)生的機(jī)制移植排斥反應(yīng)的本質(zhì)屬于特異性免疫應(yīng)答，引起移植排斥反應(yīng)的抗原稱(chēng)為移植抗原或組織相容性抗原。在實(shí)質(zhì)器官移植中，宿主對(duì)供者器官產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)稱(chēng)為宿主抗移植物反應(yīng)（ , ）,而在骨髓、造血干細(xì)胞移植中，移植物中的淋巴細(xì)胞可識(shí)別宿主抗原，進(jìn)而攻擊宿主靶組織產(chǎn)生排斥反應(yīng)，稱(chēng)為移植物抗宿主反應(yīng)（ , ）。二、移植排斥反應(yīng)發(fā)生的機(jī)制異種之間的移植無(wú)一例外地要失??；同一種系內(nèi)不相關(guān)的個(gè)體之間的移植常常要失??；自體移植總是能成功；同種異體的受體對(duì)首次移植物排斥時(shí)間較長(zhǎng)，但再次接受同一供體的移植物，則迅速被排斥；受體與供體間的血緣關(guān)系愈近，移植愈可能成功

6、。 （一）移植排斥反應(yīng)的規(guī)律異種之間的移植無(wú)一例外地要失??；（一）移植排斥反應(yīng)的規(guī)律有關(guān)排斥反應(yīng)的研究有關(guān)排斥反應(yīng)的研究 首次植皮第天 首次植皮第天 再次植皮第天 首次植皮第天 首次植皮第天 再次植皮第天宿主抗移植物反應(yīng)( , ) ，見(jiàn)于一般器官移植，包括超急性、急性、慢性排斥反應(yīng)移植物抗宿主反應(yīng)( , )，主要發(fā)生在骨髓移植和其他免疫細(xì)胞移植（二）同種異型移植排斥的分類(lèi)及效應(yīng)機(jī)制宿主抗移植物反應(yīng)( , ) ，見(jiàn)于一般器官移植，包括超急性、超急性排斥反應(yīng)（ ）指移植器官與受者的血管接通后立即或天內(nèi)發(fā)生的排斥反應(yīng) 發(fā)生時(shí)間 移植器官與受者血管接通后數(shù)分鐘至天內(nèi)發(fā)生.超急性排斥反應(yīng)超急性排斥反應(yīng)（

7、 ）指移植器官與受者的血管接通后立即或天內(nèi)病理變化 血管內(nèi)凝血缺血、變性和壞死發(fā)生機(jī)制 以體液免疫為主，受者體內(nèi)預(yù)存供者的抗體 抗血型抗原的抗體 抗抗原的抗體 抗(血管內(nèi)皮細(xì)胞)抗原的抗體病理變化 急性排斥反應(yīng)（ ）指在移植后數(shù)天至兩周左右出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng)，一旦發(fā)生進(jìn)展迅速 發(fā)生時(shí)間 移植后數(shù)天至周左右出現(xiàn)，發(fā)生于移植后一個(gè)月內(nèi).急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng)（ ）指在移植后數(shù)天至兩周左右出現(xiàn)的免疫排斥反應(yīng)病理變化 急性體液性排斥反應(yīng) 血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷為主要表現(xiàn)的急性血管炎急性細(xì)胞性排斥反應(yīng) 實(shí)質(zhì)細(xì)胞的壞死并伴有大量淋巴細(xì)胞、浸潤(rùn)病理變化 發(fā)生機(jī)制：以細(xì)胞免疫為主移植物血管損傷針對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面

8、同種異型抗原的抗體補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用實(shí)質(zhì)細(xì)胞損害介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)直接殺傷表達(dá)同種異型抗原的移植物細(xì)胞發(fā)生機(jī)制：以細(xì)胞免疫為主慢性排斥反應(yīng)（ ）指發(fā)生于移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年的免疫排斥反應(yīng) 發(fā)生時(shí)間 移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年發(fā)生病理變化 間質(zhì)纖維化，移植物內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞增生，血管硬化.慢性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng)（ ）指發(fā)生于移植后數(shù)周、數(shù)月、甚至數(shù)年的免疫排發(fā)生機(jī)制：體液免疫和細(xì)胞免疫共同作用（具體尚不完全清楚） 急性排斥反應(yīng)細(xì)胞壞死的延續(xù)和結(jié)果 炎癥性細(xì)胞相關(guān)的慢性炎癥 非免疫學(xué)因素誘發(fā)組織器官的退行性變發(fā)生機(jī)制：體液免疫和細(xì)胞免疫共同作用移植排斥反應(yīng)的分類(lèi)和特點(diǎn)類(lèi)型反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)機(jī)

9、制超急性術(shù)后數(shù)分鐘至幾小時(shí)受者體內(nèi)事先存在的天然抗體加急性天淋巴細(xì)胞急性天淋巴細(xì)胞慢性數(shù)月至數(shù)年抗體、補(bǔ)體、內(nèi)皮細(xì)胞增生移植排斥反應(yīng)的分類(lèi)和特點(diǎn)類(lèi)型反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)機(jī)制超急性術(shù)后數(shù)分鐘 移植物抗宿主反應(yīng)（ ，）是由移植物中的抗原特異性淋巴細(xì)胞識(shí)別宿主組織抗原而發(fā)生的一種排斥反應(yīng) 發(fā)生條件宿主與移植物之間組織相容性不合移植物中含有足夠數(shù)量的免疫細(xì)胞宿主處于免疫無(wú)能或免疫功能?chē)?yán)重缺陷狀態(tài)移植物抗宿主病.移植物抗宿主反應(yīng) 移植物抗宿主反應(yīng)（ ，）是由移植物中的抗原特異性淋巴細(xì)胞識(shí)移植物抗宿主病移植物抗宿主病移植物抗宿主病移植物抗宿主病發(fā)生情況一旦發(fā)生一般難以逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致移植失敗，嚴(yán)重?fù)p傷患者，甚至死亡 主

10、要見(jiàn)于：骨髓移植（主要）、胸腺移植、脾移 植、新生兒接受大量輸血 發(fā)生情況 ()配型與移植排斥反應(yīng)02040608010012006122436術(shù)后時(shí)間存活率供者與受者相差一個(gè)HLA基因供者與受者相差兩個(gè)HLA基因返回章目錄 ()配型與移植排斥反應(yīng)02040608010012006移植配型的基本原理 移植配型(又稱(chēng)為配型組織配型):指在器官移植中檢驗(yàn)供受者之間移植抗原（）是否相配的一系列措施。目前主要檢測(cè)的是抗原系統(tǒng)和抗原系統(tǒng)。凡是由供、受者之間的等位基因差異而形成的多態(tài)性產(chǎn)物，均有可能作為組織相容性抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答以清除“外來(lái)”的移植器官，引起移植排斥反應(yīng)。因此，移植術(shù)前必須進(jìn)行一

11、系列檢測(cè)，以盡可能選擇與受者組織相容性一致的供者。移植配型的基本原理 移植配型(又稱(chēng)為配型組織配型):指在器官 能引起移植排斥反應(yīng)的抗原主要有人類(lèi)主要組織相容性抗原（ ）、次要組織相容性抗原、血型抗原和組織特異性抗原。目前主要檢測(cè)的是抗原系統(tǒng)和抗原系統(tǒng)。 人類(lèi)白細(xì)胞分化抗原（ ）是最重要的人類(lèi)主要組織相容性抗原，本質(zhì)上，供、受者間型別差異是發(fā)生急性移植排斥反應(yīng)的主要原因。 因此，在供體選擇上科學(xué)運(yùn)用移植配型技術(shù)提高供、受者間位點(diǎn)匹配率是提高受者長(zhǎng)期存活率的重要因素。 能引起移植排斥反應(yīng)的抗原主要有人類(lèi)主要組織相容性抗原第二節(jié) 分子生物學(xué)檢驗(yàn)在移植配型中的應(yīng)用的分子生物學(xué)分型 一、遺傳學(xué)基礎(chǔ) 人

12、類(lèi)白血病抗原第二節(jié) 分子生物學(xué)檢驗(yàn)在移植配型中的應(yīng)用的分子生物學(xué)分型一、與器官移植 基本概念 組織相容性（） 器官或組織移植時(shí)供者與受者相互接受的程度，不相容就會(huì)出現(xiàn)排斥反應(yīng)（） ，誘導(dǎo)排斥反應(yīng)的抗原稱(chēng)為組織相容性抗原，也稱(chēng)為移植抗原。 一、與器官移植 基本概念 主要組織相容性抗原（） 主要組織相容性抗原 次要組織相容性抗原人類(lèi)白細(xì)胞抗原 其中與移植排斥有關(guān)的主要為類(lèi)和類(lèi)抗原。 主要組織相容性抗原（） 主要組織相容性復(fù)合體（） 編碼(在人為)的基因是一組呈高度多態(tài)性的基因群，集中分布于染色體上的特定區(qū)域，稱(chēng)為主要組織相容性復(fù)合體（ ，），編碼的產(chǎn)物稱(chēng)為分子。主要組織相容性復(fù)合體（） 抗原 免疫

13、系統(tǒng) 抗原肽分子復(fù)合物 免疫應(yīng)答 細(xì)胞（細(xì)胞免疫、體液免疫） 抗原性異物排除 分子為細(xì)胞分化發(fā)育所必需 分子為免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)所必需 抗原(一) 的基因組成 人類(lèi)的又稱(chēng)為基因復(fù)合體，位于第對(duì)染色體的短臂區(qū)帶小帶（）上，約。根據(jù)編碼分子的功能和分布的不同，可將整個(gè)復(fù)合體的基因分成三類(lèi)：類(lèi)、類(lèi)和類(lèi)基因。 (一) 的基因組成 基因的分類(lèi) 分類(lèi) 基因座位 類(lèi)基因 類(lèi)基因 類(lèi)基因 位于和類(lèi)基因之間主 要編碼某些補(bǔ)體和炎癥因 子（如：， ， ，等補(bǔ)體組分）基因的分類(lèi) 分類(lèi) 抗原分布類(lèi)抗原分布于有核細(xì)胞表面；類(lèi)抗原主要表達(dá)在活化的、細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞及活化的細(xì)胞表面。主要是一些

14、補(bǔ)體成分：如、等。 抗原分布類(lèi)抗原分布于有核細(xì)胞表面；分子診斷在移植配型中的應(yīng)用課件分子診斷在移植配型中的應(yīng)用課件HLA抗原命名（第12屆國(guó)際會(huì)議）HLA-AHLA-BHLA-CHLA-DRHLA-DQHLA-DPA1B5B78Cw1DR1DQ1DPw1A2B7B47Cw2DR103DQ2DPw2A203B703B48Cw3DR2DQ3DPw3A210B8B49(21)Cw4DR3DQ4DPw4A3B12B50(21)Cw5DR4DQ5(1)DPw5A9B13B51(5)Cw6DR5DQ6(1)DPw6A10B14B5102Cw7DR6DQ7(3)A11B15B5103Cw8DR7DQ8(3)

15、A19B16B52(5)Cw9(w3)DR8DQ9(3)A23(9)B17B53Cw10(w3)DR9A24(9)B18B54(22)DR10A2403B21B55(22)DR11(5)A25(10)B22B56(22)DR12(5)A26(10)B27B57(17)DR13(6)A28B2708B58(17)DR14(6)A29(19)B35B59DR1403A30(19)B37B60(40)DR1404A31(19)B38(16)B61(40)DR15(2)A32(19)B39(16)B62(15)DR16(2)A33(19)B3901B63(15)DR17(3)A34(10)B3902B

16、64(14)DR18(3)A36B40B65(14)DR51A43B4005B67DR52A66(10)B41B70DR53A68(28)B42B71(70)A69(28)B44(12)B72(70)A74(19)B45(12)B73A80B46B75(15)B76(15)B81B77(15)Bw4Bw6 注：括號(hào)中為寬型抗原HLA抗原命名（第12屆國(guó)際會(huì)議）HLA-AHLA-BHLA基因命名方法為：連字符（）基因所屬座位名星號(hào)（*） 數(shù)字編號(hào)。如，*代表 座位基因，*代表座位基因。命名方法基因命名方法為：連字符（）基因所屬座位名星號(hào)（*） 數(shù)字編血清學(xué)命名方法為：連字符（）基因所屬座位名數(shù)字

17、編號(hào)。如，。血清學(xué)命名中的數(shù)字編號(hào)與基因命名法數(shù)字編號(hào)的前兩位相對(duì)應(yīng)，例如，的數(shù)字編號(hào)相對(duì)應(yīng)的基因命名中的數(shù)字，凡是 座位基因的前兩位數(shù)字是者，其表達(dá)的產(chǎn)物都是抗原，都能夠與抗體結(jié)合。因此，血清學(xué)分型是同一分子的，它們的編碼基因不一定相同。例如至少有個(gè)基因（*）的編碼產(chǎn)物為抗原。 血清學(xué)命名方法為：連字符（）基因所屬座位名數(shù)字編號(hào)。如，。命名命名歷年發(fā)現(xiàn)抗原和基因的情況歷年發(fā)現(xiàn)抗原和基因的情況（二）的遺傳特點(diǎn)單倍型遺傳 由于一條染色體上各位點(diǎn)的距離非常近，很少發(fā)生同源染色體之間的交換，因此親代的以單倍型為單位將遺傳信息傳給子代。 （）（）（）（）全國(guó)高等醫(yī)藥院校教材分子診斷學(xué)（二）的遺傳特點(diǎn)單

18、倍型遺傳 （）（）（）（）全國(guó)高等醫(yī)藥院分子診斷在移植配型中的應(yīng)用課件共顯性遺傳 共顯性（）是指某位點(diǎn)的等位基因均能同等表達(dá)，二者的編碼產(chǎn)物都可在細(xì)胞表面檢測(cè)到。 多數(shù)個(gè)體的位點(diǎn)都是雜合子，但當(dāng)父親和母親在某位點(diǎn)上具有相同的等位基因時(shí)，其子代的這個(gè)位點(diǎn)就成為純合子。 共顯性遺傳 復(fù)合體中每一個(gè)等位基因均為共顯性，從而大大增加了人群中的表型的多樣性，達(dá)到數(shù)量級(jí)。因此除了同卵雙生者外，無(wú)關(guān)個(gè)體間型別完全相同的可能性極小。A2A10B40B16A1A2B8B35 ：， ， ， 甲甲乙乙 ：， ， ， 共顯性表達(dá) 復(fù)合體中每一個(gè)等位基因均為共顯性，從而大大增連鎖不平衡 理論上，一個(gè)位點(diǎn)的等位基因與另一個(gè)或幾個(gè)位點(diǎn)的等位基因在某一單倍型出現(xiàn)的頻率應(yīng)等于各自頻率的乘積。然而實(shí)際情況是，在不同的地區(qū)或不同的人群，某些基因相伴出現(xiàn)的頻率特別高，這種現(xiàn)象稱(chēng)為連鎖不平衡。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些疾病的發(fā)生與復(fù)合體中某些特定的等位基因密切相關(guān)。 連鎖不平衡 器官移植配型標(biāo)準(zhǔn)最新的命名已包括種以上的類(lèi)和種以上的類(lèi)等位基因，其中經(jīng)典的、和抗原由于與造血干細(xì)胞移植和器官移植的效果密切相關(guān)而被稱(chēng)為“移植抗原”。目前國(guó)際上通用的器官移植配型標(biāo)準(zhǔn)是、和六抗原無(wú)錯(cuò)配標(biāo)準(zhǔn)（ , , ）。最佳的配型為、和六抗原分型全相合。器官移植配型標(biāo)準(zhǔn)最新的命名已包括種以上的類(lèi)和種以上的類(lèi)等在腎移植中，類(lèi)抗原主要影響受者長(zhǎng)期存活率，尤